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专利名称：精液液化剂及其制备方法以及液化精液的方法
技术领域：
本发明涉及一种体外诊断试剂，具体适用于液化异常精液的液化。
背景技术：
液化异常精液样本过于粘稠，进行免疫生化等项目检测时，由于精液内各待测物质分布不均而难以混匀及准确加样，往往难以得到准确的检测结果，因此，添加液化剂消化精液检测标本，是液化异常精液进一步检测分析必不可少的前处理程序。
常用的处理不液化样本的方法有酶消化法和机械混合法。酶消化法主要是利用蛋白酶干粉试剂或靡蛋白酶针剂水解精液中的纤维蛋白液化精液。酶消化法存在的缺陷在于干粉试剂不便于使用，并难以广泛应用于临床；靡蛋白针剂为粉状，需要使用前溶解，但是溶解后极不稳定。机械混合法是通过机械振荡，破坏网状纤维丝，达到促进液化的效果，但此方法极易破坏精液内精子或其他细胞，同时导致精子或细胞内物质向精浆释放，造成难以预计的影响。

发明内容
本发明的目的在于提出一种能快速液化异常精液，且不影响精液生化免疫分析，易于临床广泛应用的精液液化剂及其制备方法以及用该液化剂液化精液的方法。
实现上述目的的技术方案一种精液液化剂，所述精液液化剂为含有蛋白质水解酶的酶保存液。
一种精液液化剂的制备方法，包括如下步骤1)将称量的蛋白质水解酶、碳化二亚胺加入酶保存液中，置4℃搅拌4～12小时；2)在步骤1)所述混合液中加入2-氨基乙醇，置室温反应1～4小时；3)在步骤2)所述混合液中加入牛血清白蛋白，置室温反应0.5～1小时；4)在步骤3)所述混合液中加入步骤1)中所述的酶保存液，调整蛋白质水解酶浓度至2～10g/L。
一种精液液化剂液化精液的方法，每1ml精液中加入精液液化剂10～50ul。
采用上述技术方案，结合下面将要详述的实施例，本发明突出的技术效果在于1、液化时，用蛋白质水解酶水解液化异常精液中的纤维蛋白，能将不液化的新鲜精液样本在30分钟内快速液化，便于进一步检测；2、本发明消除了机械混合法对精液内精子或其他细胞的破坏，经过液化处理后的精液样本，其生化免疫分析的结果不受影响；3、进一步的，在酶保存液中采用牛血清白蛋白，对蛋白质水解酶的稳定性有帮助，液化剂稳定性更好，贮存期长，4℃保存可稳定1年以上，完全适合于作为试剂盒使用；4、本发明的液化剂为液体，性能稳定，液化时操作简便，易于临床的广泛应用。
具体实施例方式
下面通过具体的实施例对本发明作进一步详细的描述。
实施例一，一种精液液化剂，为含有菠萝蛋白酶2～10mg/ml的酶保存液，酶保存液为含有10g/L的蔗糖、1.755g/L的NaCl、22g/L的氨基乙酸、2g/L的牛血清白蛋白(BSA)的pH7.4的0.2M/L的磷酸盐(PB)缓冲液。
上述精液液化剂的制备方法，包括如下步骤1)称量蔗糖1.0克，NaCl 0.1755克，氨基乙酸2.2克，BSA0.2克，置于100ml容量瓶中；2)加95ml pH7.4 20mM的PB缓冲液于100ml容量瓶中充分溶解步骤1)中所述的物质。以pH计测定溶液酸碱度，并以NaOH或HCl校正pH至7.4。最后用pH7.420mM的PB缓冲液补充至总体积100ml，制得酶保存液，并于4℃保存；3)称取碳化二亚胺10～50mg溶解于10ml 0.02M PB缓冲液中，加入菠萝蛋白酶液20mg，在4℃下磁力搅拌4～12小时，其中碳化二亚胺起交联作用，使菠萝蛋白酶形成多聚酶；4)加入2mol/L 2-氨基乙醇60ul，置室温反应1～4小时，2-氨基乙醇终止碳化二亚胺的交联作用；5)加入BSA10mg，置室温反应0.5～1小时，BSA用于稳定菠萝蛋白酶；6)以步骤2)制成的酶保存液调整菠萝蛋白酶浓度至4g/l，得到精液液化剂，并于4℃保存。
使用上述精液液化剂液化精液的方法，具体步骤如下1)在液化障碍精液标本中，按每1ml精液中加入25ul精液液化剂的比例，加入液化剂，充分混合；2)将添加有精液液化剂的精液标本置37℃孵育5～10min或至精液液化，其间振荡1～2次。
实施例二，一种精液液化剂，为含有菠萝蛋白酶2～10g/l的酶保存液，酶保存液为含有5～15g/L的葡萄糖，1～5g/L的NaCl，0.5～1.5g/L的明胶，1～5g/L的BSA，pH7.4 0.2M/L的PB缓冲液。
上述精液液化剂的制备方法，包括如下步骤1)称量葡萄糖0.5～1.5克，NaCl 0.1～0.5克，明胶0.05～0.15克，BSA 0.1～0.5克，置于100ml容量瓶中；2)加95ml pH7.4 15～50mM的PB缓冲液于100ml容量瓶中充分溶解步骤1)中的物质。以pH计测定溶液酸碱度，并以NaOH或HCl校正pH至7.4。最后用pH7.415～25mM的PB缓冲液补充至总体积100ml，制得酶保存液，并于4℃保存；3)称取碳化二亚胺10～50mg溶解于10ml 0.02M PB缓冲液中，加入菠萝蛋白酶液15～25mg，在4℃下磁力搅拌4～12小时，其中碳化二亚胺起交联作用，使菠萝蛋白酶形成多聚酶；4)加入2mol/L 2-氨基乙醇60ul，置室温反应1～4小时，2-氨基乙醇终止碳化二亚胺的交联作用；5)加入BSA10mg，置室温反应0.5～1小时，BSA用于稳定菠萝蛋白酶；6)以步骤2)制成的酶保存液调整菠萝蛋白酶浓度至2～10mg/ml，得到精液液化剂，并于4℃保存。
用上述精液液化剂液化精液的方法，具体步骤如下1)在液化障碍精液标本中，按每1ml精液中加入10～50ul精液液化剂的比例，加入液化剂，充分混合；2)将添加有精液液化剂的精液标本置37℃孵育5～10min或至精液液化，其间振荡1～2次。
菠萝蛋白酶的浓度低于2g/l时会使用液化速度减慢，不利于对精液样本的快速分离与进一步检测，菠萝蛋白酶的浓度高于10g/l没有实验应用价值而且还增加了试剂成本；酶保存液中的葡萄糖的浓度低于5g/L、NaCl的浓度低于1g/L、明胶的浓度低于0.5g/L、BSA的浓度低于1g/L时会降低其对菠萝蛋白酶的稳定作用，葡萄糖的浓度高于15g/L、NaCl的浓度高于5g/L、明胶的浓度高于1.5g/L、BSA的浓度高于5g/L时会干扰菠萝蛋白酶对精液的液化作用。
上述实施例中，采用菠萝蛋白酶水解不液化精液中的纤维蛋白的，菠萝蛋白酶还可以用木瓜蛋白酶、靡蛋白酶、胃蛋白酶等其它能水解纤维蛋白的酶替换；采用BSA对蛋白质水解酶起稳定作用；蔗糖或者葡萄糖还可以用其他的单糖替换；NaCl还可以用其余可溶性含氯的无机盐替换，氨基乙酸还可以用低分子量氨酸酶替换。
权利要求
1.一种精液液化剂，其特征是所述精液液化剂为含有蛋白质水解酶的酶保存液。
2.如权利要求1所述的精液液化剂，其特征在于所述蛋白质水解酶在酶保存液中的含量为2～10g/L。
3.如权利要求1或2所述的精液液化剂，其特征在于所述蛋白质水解酶优选菠萝蛋白酶。
4.如权利要求3所述的精液液化剂，其特征在于所述酶保存液是包括单糖、无机盐、明胶、氨基乙酸与牛血清白蛋白的pH值在7.0～8.0 15～50mM的磷酸盐缓冲液。
5.如权利要求4所述的精液液化剂，其特征在于所述单糖的含量为5～15g/L，所述无机盐的含量为1～5g/L，所述明胶的含量为0.5～1.5g/L，所述氨基乙酸的含量为10～30g/L，所述牛血清白蛋白的含量为1～5g/L。
6.一种精液液化剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤1)将称量的蛋白质水解酶、碳化二亚胺加入酶保存液中，置4℃搅拌反应4～12小时；2)在步骤1)所述混合液中加入2-氨基乙醇，置室温反应1～4小时；3)在步骤2)所述混合液中加入牛血清白蛋白，置室温反应0.5～1小时；4)在步骤3)所述混合液中加入步骤1)中所述的酶保存液，调整蛋白质水解酶浓度至2～10g/L。
7.如权利要求6所述的精液液化剂的制备方法，其特征在于所述步骤1)中所述蛋白质水解酶优选菠萝蛋白酶。
8.如权利要求6或7所述的精液液化剂的制备方法，其特征在于所述步骤1)中所述酶保存液是包括单糖、无机盐、明胶、氨基乙酸、牛血清白蛋白的pH值在7.0～8.015～50mM的磷酸盐缓冲液，所述单糖的含量为5～15g/L，所述无机盐的含量为1～5g/L，所述明胶的含量为0.5～1.5g/L，所述氨基乙酸的含量为10～30g/L，所述牛血清白蛋白的含量为1～5g/L。
9.如权利要求6所述精液液化剂的制备方法，其特征在于所述步骤4)混合液中碳化二亚胺的含量为1～5g/L，2-氨基乙醇的含量为12mmol/L。
10.一种权利要求1所述精液液化剂液化精液的方法，其特征在于每1ml精液中加入精液液化剂10～50ul，优选25ul。
全文摘要
本发明公开一种精液液化剂，所述精液液化剂为含有蛋白质水解酶的酶保存液。一种精液液化剂的制备方法，包括如下步骤将称量的蛋白质水解酶、碳化二亚胺加入酶保存液中置4℃搅拌反应4～12小时；加入2－氨基乙醇，置室温反应1～4小时；加入牛血清白蛋白，置室温反应0.5～1小时；以酶保存液调整蛋白质水解酶浓度至2～10g/l。一种精液液化剂液化精液的方法，每1ml精液中加入精液液化剂10～50ul。由于采用了以上的方案，用蛋白质水解酶水解液化异常精液中的纤维蛋白，便于进一步检测，经过液化处理后的精液样本，其生化免疫分析的结果不受影响；且本发明的液化剂为液体，性能稳定，液化时操作简便，易于临床的广泛应用。
文档编号G01N33/531GK1584594SQ20041004003
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月16日 优先权日2004年6月16日
发明者傅剑华, 刘瑜, 胡家纯, 何林, 何小红 申请人:深圳华康生物医学工程有限公司