Ò»ÖÖͬʱ²â¶¨ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄ·½·¨
¡¾×¨ÀûÕªÒª¡¿±¾·¢Ã÷¹«¿ªÁËÒ»ÖÖͬʱ²â¶¨ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄÒºÏàÉ«Æ×·½·¨£¬²½Öè°üÀ¨£ºa.Ñ¡ÓÃÉ«Æ×Öù¹æ¸ñΪ4.6¡Á250mmi.d,5¦ÌmµÄwatersC18Öù£»b.ÒÔ15%¼×´¼-85%Á×ËáÑÎÈÜҺΪÁ÷¶¯Ï࣬Á÷¶¯ÏàÁ÷ËÙΪ0.9mL/min£¬´ý²âÑùÆ·¾2%µÄ¸ßÂÈËáÈ¥µ°°×ºó£¬²ÉÓó¬ÉùÌáÈ¡£¬ÀëÐĺóµ÷½ÚpHΪ6.0£¬È¡30΢ÉýÉÏÇåÒºÖ±½Ó½øÑù²â¶¨£¬Íâ±ê·¨¶¨Á¿£»c.ÀûÓöþ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷¶ÔÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄ½øÐмì²â£¬Ò»´Î½øÑù¿ÉÒÔͬʱµÃµ½ÕâÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄÈ«²¨¶ÎɨÃèͼÆ×£¬²É¼¯µ½ÈýÖÖ°±»ùËáÔÚÿһ¸ö˲¼äµÄ¹âÆ×ͼ£¬Ö±¹ÛµØ¼ø¶¨É«Æ×·åµÄ´¿¶È£¬¶Ô±È±ê׼ƷºÍ´ý²âÑùÆ·µÄÈ«²¨¶ÎɨÃèͼÆ×½øÐж¨ÐÔ¡£±¾·¢Ã÷²Ù×÷¼ò±ã¡¢ÁéÃô¶È¸ß£¬¶¨ÐÔ׼ȷ¡£
¡¾×¨Àû˵Ã÷¡¿ Ò»ÖÖͬʱ²â¶¨ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄ·½·¨
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[0001]±¾·¢Ã÷ÊôÓÚ·ÖÎö»¯Ñ§ÁìÓò£¬Éæ¼°¼ì²âÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄ·½·¨£¬ÌرðÉæ¼°ÓøßЧҺÏàÉ«Æ×·¨Ò»¶þ¼«¹ÜÕóÁз¨Í¬Ê±²â¶¨Ë®²úÆ·ÖÐÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄ·½·¨¡£
¡¾±³¾°¼¼Êõ¡¿
[0002]·¼Ïã×å°±»ùËáΪº¬Óз¼Ïã»·²àÁ´µÄ°±»ùËá,°üÀ¨±½±û°±Ëá(Phenylalanine, Phe)>ÀÒ°±Ëá(Tyrosine, Tyr)¡¢É«°±Ëá(Tryptophane, Trp)µÈÈýÖÖ°±»ùËá,ÆäÖÐPheºÍTrpÊôÓÚ±ØÐè°±»ùËᣬTyrÔòÊôÓÚ°ë±ØÐè°±»ùËá¡£·¼Ïã×å°±»ùËáÔڸΡ¢Éö¡¢Éñ¾µÈ¼²²¡Õï¶ÏÖÐÓкÜÖØÒªµÄ×÷Óã¬ÇÒËüÃǶÔË®²úʳƷµÄÓªÑø·çζҲÓÐÖØÒªµÄ¹±Ïס£Òò´Ë£¬×¼È·²â¶¨·¼Ïã×å°±»ùËáÔÚµ°°×ÖÊ»¯Ñ§Ñо¿ÖÐÓзdz£ÖØÒªµÄÒâÒå¡£
[0003]Ŀǰ¹úÄÚÍâ²â¶¨·¼Ïã×å°±»ùËáµÄ·½·¨Ö÷ÒªÓиßЧҺÏàÉ«Æ×·¨¡¢Ó«¹â·Ö¹â¹â¶È¼Æ·¨¡¢Ã«Ï¸¹ÜµçÓ¾·¨¡¢ÖÊÆ×·¨µÈ¡£Èç:ÌÕÓñ¹óµÈÓÃëϸ¹ÜµçÓ¾·¨²â¶¨·¢½ÍÒºÖÐL-É«°±ËáµÄº¬Á¿(ʳƷÓë·¢½Í¹¤Òµ£¬2008£¬34 (9):140-143)£¬Ìư®¹ú·¢Ã÷ÁËÒ»ÖÖ¸ßЧҺÏàÉ«Æ×-Ó«¹â·¨Í¬Ê±²â¶¨ÑªÇåÖз¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄ·½·¨(רÀûºÅ:CN 102128893 A)£¬³Â˴ʤµÈÓÃHPLC·¨¿ìËÙ²âË®²úÆ·ÖÐÓÎÀë·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄÑо¿(ÉϺ£º£Ñó´óѧѧ±¨2013£¬22 (4):629-633)µÈ£»ÆäÖÐÒÔHPLCÑÜÉú·¨ÎªÖ÷£¬ÒòÆäÁéÃô¶È¸ß¡¢É豸ҪÇóÊÊÖÐÒÔ¼°²Ù×÷¼ò±ã¡£ÓÉÓÚPhe¡¢Tyr¼°TrpµÄÓ«¹âÌØÐÔ²»Ò»Ö£¬ÓÃÓ«¹â·Ö¹â¹â¶È¼Æ·¨²»ÄÜÔÚͬһ²¨³¤ÏÂͬʱ¶ÔÆä²â¶¨£»Ã«Ï¸¹ÜµçÓ¾·¨ºÍÖÊÆ×·¨µÄ·Ö±æÂʽϸߣ¬µ«Ò²ÓÐÒÇÆ÷°º¹ó¡¢Öظ´ÐԽϲîµÈ²»×ãÖ®´¦¡£
[0004]±¾·¢Ã÷ÀûÓÃTyr¡¢PheºÍTrpº¬Óв»±¥ºÍ¹²éî»·×´½á¹¹£¬¿ÉÓöþ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷(Photo D1dearray, PDA)¶Ô±»²âÎïÖʽøÐвⶨ²¢È«²¨³¤É¨Ãè,Ò»´Î½øÑù¿ÉÒԵõ½ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄÈ«²¨¶ÎɨÃèͼÆ×£¬°üÀ¨ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËá¸÷×ÔµÄ×î´óÎüÊÕ²¨³¤½øÐмì²â£¬±È³£¹æ×ÏÍâ¿É¼ûÎüÊÕ¼ì²âÆ÷µÄÁéÃô¶È¸ü¸ß£¬¶¨Á¿¸ü׼ȷ¡£ÓÉÓÚPDA¼ì²âÆ÷¾ß±¸Ëæ·å¿ìËÙɨÃèµÄÌØÐÔ£¬ÔÚÉ«Æ×·ÖÎöͬʱÄܹ»²É¼¯É«Æ×Á÷³öÎïÔÚÿһ¸ö˲¼äµÄ¹âÆ×ͼ£¬Òò¶ø¿ÉÒÔÖ±¹ÛµØ¼ø¶¨É«Æ×·åµÄ´¿¶È£¬´Ó¶ø¶Ô¼ì²âÊý¾Ý×÷³öºÏÀíÈ¡Éᣬ±£Ö¤½á¹û¸ü׼ȷ£¬¶¨ÐÔ¸ü¿É¿¿¡£
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[0005]±¾·¢Ã÷Ä¿µÄÊÇÕë¶ÔÒÔÉÏÏÖÓм¼ÊõµÄǰ´¦Àí¸´ÔÓ¡¢ÁéÃô¶ÈµÍ¡¢»ØÊÕÂʲ»¸ß¡¢¶¨ÐÔ²»×¼È·µÈ²»×㣬ÌṩһÖÖ²Ù×÷¼òµ¥£¬ÁéÃô¶È¸ß¡¢·ÖÀëËÙ¶È¿ìÇÒ¶¨Á¿¶¨ÐÔ׼ȷ£¬Äܹ»Í¬Ê±²â¶¨Ë®²úÆ·ÖÐÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄHPLC-PDA·¨£¬
ΪʵÏÖÉÏÊöÄ¿µÄ£¬±¾·¢Ã÷²ÉÓõļ¼Êõ·½°¸Îª:
Ò»ÖÖÓøßЧҺÏàÉ«Æ×Ò»¶þ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷ͬʱ²â¶¨Ë®²úÆ·ÖÐÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄ·½·¨£¬°üÀ¨ÒÔϲ½Öè:
Á÷¶¯ÏàΪA:B = 15:85£¬AΪ¼×´¼ÈÜÒº£¬BΪ0.05 mol/LÁ×ËáÇâ¶þ¼ØºÍÁ×Ëá¶þÇâ¼ØÈÜÒº£¬ÓÃÁ×Ëáµ÷pHÖÁ6.0 ;µÈ¶ÈÏ´ÍÑ£»Á÷ËÙ:0.9 mL/min ;½øÑùÁ¿Îª30΢Éý£»ÖùÎÂΪ40¡ãC¡£
[0006]Á÷¶¯ÏàʹÓÃǰÓÃ0.45 ¦Ì mµÄË®Ïà΢¿×ÂËĤ¹ýÂ˺󣬳¬ÉùÍÑÆø10·ÖÖÓ¡£
[0007]É«Æ×ÖùÑ¡ÓÃWaters Atlantis T3 C18 (4.6 X 250mm, 5 ¦Ì m)×÷ΪɫÆ×¹Ì¶¨Ïà¡£
[0008]Óöþ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷ɨÃèÈ·¶¨¼ì²âÈýÖÖ°±»ùËáµÄ×î¼Ñ¼ì²â²¨³¤,È·¶¨Tyr¡¢PheºÍTrpµÄ×î¼Ñ×ÏÍâ¼ì²â²¨³¤·Ö±ðΪ274.5nm¡¢256.7nmºÍ279.3nm¡£
[0009]Tyr¡¢PheºÍTrpµÄ±ê×¼ÈÜÒºÊÇÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒºÈܽ⡢»ìÔÈ£»·Ö±ðÅä֯ō¶È1000 ¦Ì g/mL¡¢500 ¦Ì g/mL¡¢250 ¦Ì g/mL¡£
[0010]ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒºÌáÈ¡ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËá¡£
[0011]ÖÆ×÷±ê×¼¹¤×÷ÇúÏߣ¬¶¨ÐÔ¶¨Á¿·½·¨¡¢ÆÀ¼Û¾«ÃܶȺͿ¼²ì»ØÊÕÂÊ¡£
[0012]±¾·¢Ã÷µÄÓÅÑ¡¼¼Êõ·½°¸Îª:
ÅäÖÆÁ÷¶¯Ï࣬ÓÉ15%µÄ¼×´¼ºÍ85%Á×ËáÑÎÈÜÒº×é³É£¬Á×ËáÑÎÈÜÒºÓÉ0.05 mol/LÁ×Ëá¶þÇâ¼Ø¼°Á×Ëá¶þÇâ¼Ø(1:1)×é³É£¬PH·¶Î§Îª6.0?6.3¡£Òò²ÉÓÃ15%µÄ¼×´¼ºÍ85%Á×ËáÑÎÈÜÒº·ÖÀë³öµÄÈýÖÖ´ý²â°±»ùËá·åÐͺã¬ÇÒÖùѹҲ²»¸ß£¬·ÖÀëËٶȿ졢ЧÂʸߣ»PH·¶Î§Îª6.0?
6.3¶ÔÈýÖÖ°±»ùËáµÄ·ÖÀëЧ¹ûºÃ¡£
[0013]ÒÔ¹æ¸ñΪ4.6X250_ 1.d, 5 ¦Ì mµÄwaters C18É«Æ×ÖùΪ¹Ì¶¨Ïà¡£
[0014]ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒºÅäÖÆÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËá±ê×¼»ìºÏ´¢±¸Òº¡£
[0015]È¡ÐÂÏÊË®²úÆ·È⣬ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒºÔȽ¬¡¢³¬Éù¡¢ÀëÐÄÌáÈ¡£¬²ÉÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒº×÷ΪÌáÈ¡¼Á£¬¶ÔÌáȡˮ²úÆ·ÖеÄÈýÖÖ°±»ùËá»ØÊÕÂʸߣ¬Ìرð¶ÔÉ«°±ËáÌáȡЧ¹ûºÃ¡£
[0016]ÉèÖÃÁ÷¶¯ÏàÁ÷ËÙΪ1.0mL/min,½øÑùÁ¿Îª30΢Éý¡£
[0017]½«·¼Ïã×å°±»ùËá¾É«Æ×Öù·ÖÀëºó£¬Óöþ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷½øÐзÖÎö£¬Ñ¡ÔñTyr¡¢PheºÍTrpµÄ×î¼Ñ×ÏÍâ¼ì²â²¨³¤½øÐвⶨ¡£
[0018]ͨ¹ýÍâ±ê·¨½øÐж¨Á¿£¬²¢Í¨¹ý¶Ô±ÈÑùÆ·ºÍ±ê׼ƷÖÐÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄÈ«²¨¶ÎÉ«Æ×ɨÃèͼÆ×µÄÏàËÆ³Ì¶È£¬¼ø¶¨É«Æ×·åµÄ´¿¶È¡£
[0019]Á÷¶¯ÏàµÄ¾ßÌåÅäÖÆ·½°¸Îª:µ÷½ÚÁ÷¶¯ÏàÖеÄÁ×ËáÑÎÈÜÒºpHΪ6.0,¼×´¼ºÍÁ×ËáÑÎÈÜҺʹÓÃǰÓÃ0.45 ¦Ì mµÄ΢¿×ÂËĤ¹ýÂË,³¬ÉùÍÑÆølOmin¡£
[0020]±ê×¼ÈÜÒºµÄ¾ßÌåÅäÖÆ·½°¸Îª:ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒºÅäÖÆÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËá±ê×¼»ìºÏ´¢±¸Òº£¬Ê¹Phe¡¢Tyr¼°TrpµÄŨ¶È·Ö±ðΪ1000 ¦Ì g/mL,500 ¦Ì g/mL,250 ¦Ì g/mL,²¢ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒº½«°±»ùËá±ê×¼»ìºÏ´¢±¸ÒºÒÀ´ÎÏ¡ÊÍ2¡¢5¡¢10¡¢20¡¢50±¶¡£
[0021]ÑùƷǰ´¦ÀíµÄ¾ßÌå·½°¸Îª:È¡ÐÂÏÊË®²úÆ·Èâ5.0gÓÚÀëÐĹÜÖУ¬¼ÓÈë1mLÔ¤Àä5%µÄ¸ßÂÈËá„òÐ\2min,Óò£Á§°ô½Á°è¾ù„ò£¬³¬ÉùÌáÈ¡5minºó,ÔÚÀä¶³ÀëÐÄ»ú4¡ãCÏÂ1000rpmÀëÐÄ20min£¬È¡ÉÏÇåÒº¹ýÂË£¬¹ýÂ˺óËùÊ£µÄ³ÁµíÎï¼ÓÈëÔ¤ÀäµÄ2% PCAÈÜÒºÔÙ½øÐнþÌá¡¢ÀëÐÄ£¬Öظ´2´ÎºóºÏ²¢ÉÏÇåÒº¡£ÓÃKOHÈÜÒºÖкÍÉÏÇåÒºÖÁpHΪ6.0¡£ÖкÍʱÏȼÓ5mol/LµÄKOHÈÜÒºµ÷½Ú£¬´ý½Ó½üÖÁËùÐèpH=6.0ʱ£¬¸ÄÓÃlmol/LµÄKOHÈÜÒºµ÷½Ú¡£
[0022]·¼Ïã×å°±»ùËá¾Waters Atlantis T3 C18·ÖÀëºó£¬½øÈë¶þ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷¼ì²â£¬Tyr¡¢Phe¼°TrpÈýÖÖÎïÖʵļì²â²¨³¤É趨·Ö±ðΪ274.5,256.7ºÍ279.3nm¡£
[0023]±¾·¢Ã÷µÄ´´ÐÂÔÚÓÚ¿ÉÒÔͬʱ²â¶¨Ë®²úÆ·Öз¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿£¬ÇÒ±¾·½·¨¾ßÓвÙ×÷¼ò±ã¡¢ÁéÃô¶È¸ß¡¢ÎÞÐèÖùǰÑÜÉúµÈÓŵ㡣
[0024]±¾·¢Ã÷ÇÉÃîÀûÓ÷¼Ïã×å°±»ùËẬÓв»±¥ºÍ¹²éî»·×´½á¹¹£¬½¨Á¢ÁËÒ»ÖÖͬʱ²â¶¨Ë®²úÆ·Öз¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄHPLC-PAD·¨¡£Ë®²úÆ·È¥µ°°×ºóÈ¡ÉÏÇåÒºÖ±½Ó½øÑù£¬Tyr¡¢PheºÍTrpͨ¹ýÉ«Æ×Öù·ÖÀëºó£¬²ÉÓÃPAD¼ì²âÆ÷½øÐмì²â£¬±¾·¢Ã÷Ã÷ÏÔÓÅÓÚÒѹ«¿ªµÄ¼¼Êõ£¬²Ù×÷¿ìËÙ¡¢¼ò±ã¡¢ÁéÃô¶È¸ß£¬ÓÖÄܴﵽͬʱ²â¶¨Ë®²úÆ·ÖÐÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿µÄÒªÇó£¬Òò´ËÊÇÒ»Ïî·Ç³£ÖµµÃ¹ã·ºÓ¦ÓúÍÍÆ¹ãµÄ¼¼Êõ¡£
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[0025]ͼ1ΪTyr¡¢Phe¼°TrpµÄ×ÏÍâ210?400nmµÄɨÃè¹âÆ×ͼ¡£
[0026]ͼ2Ϊ»ìºÏ±ê׼Ʒ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄÉ«Æ×ͼ¡£
[0027]ͼ3ΪϺÈâÑùÆ·µÄÒºÏàÉ«Æ×ͼ¡£
[0028]ͼ4Ϊ±ê×¼Ìí¼ÓºóµÄÒºÏàÉ«Æ×ͼ¡£
[0029]
¡¾¾ßÌåʵʩ·½Ê½¡¿
[0030]ÒÔϽáºÏʵʩÀýÖ¼ÔÚ½øÒ»²½ËµÃ÷±¾·¢Ã÷£¬¶ø·ÇÏÞÖÆ±¾·¢Ã÷¡£
[0031]ʵʩÀý1
ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒºÅäÖÆÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËá±ê×¼»ìºÏ´¢±¸Òº£¬Ê¹Phe¡¢Tyr¼°TrpµÄŨ¶È·Ö±ðΪ1000 ¦Ì g/mL¡¢500 ¦Ì g/mL¡¢250 ¦Ì g/mL,²¢ÓÃ2%µÄ¸ßÂÈËáÈÜÒº½«°±»ùËá±ê×¼»ìºÏ´¢±¸ÒºÒÀ´ÎÏ¡ÊÍ2¡¢5¡¢10¡¢20¡¢50±¶£¬·Ö±ðÈ¡ÉÏÊö30 ¦Ì L»ìºÏ±ê×¼ÈÜÒº½øÐÐÉÏ»ú²â¶¨£¬¸ù¾Ý±£Áôʱ¼ä¶¨ÐÔ£¬ÒÔËù²â·åÃæ»ýÓëÆäÏàÓ¦µÄŨ¶È×÷ͼ£¬²¢»æÖƱê×¼ÇúÏß¡£
[0032]È¡ÐÂÏÊϺÈâ5.0gÓÚÀëÐĹÜÖУ¬¼ÓÈë1mLÔ¤Àä2%µÄ¸ßÂÈËáÔȽ¬2min£¬Óò£Á§°ô½Á°è¾ùÔÈ£¬³¬Éù5minºó£¬ÔÚÀä¶³ÀëÐÄ»ú4¡ãCÏÂ1000rpmÀëÐÄ20min£¬È¡ÉÏÇåÒº¹ýÂË£¬¹ýÂ˺óËùÊ£µÄ³ÁµíÎï¼ÓÈëÔ¤ÀäµÄ2%¸ßÂÈËáÈÜÒºÔÙ½øÐнþÌá¡¢ÀëÐÄ£¬Öظ´2´ÎºóºÏ²¢ÉÏÇåÒº£¬ÓÃKOHÈÜÒºÖкÍÉÏÇåÒºÖÁPHΪ6.0¡£ÖкÍʱÏȼÓ5mol/LµÄKOHÈÜÒºµ÷½Ú£¬´ý½Ó½üÖÁËùÐèpH=6.0ʱ£¬¸ÄÓÃlmol/LµÄKOHÈÜÒºµ÷½Ú¡£Óó¬´¿Ë®¶¨ÈÝÖÁ50 mLÈÝÁ¿Æ¿ÖС£È¡ÉÏÊöÑùÒº2mL£¬¾¿×¾¶Îª0.45 ¦Ì mµÄË®Ïà΢¿×ÂËĤ¹ýÂ˺ó£¬ÉÏ»ú½øÑù·ÖÎö£¬Íê³ÉÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄ·ÖÀëÓë²â¶¨¡£
[0033]¹¤×÷ÔÀíºÍ¹¤×÷¹ý³Ì:
ÓÃ×Ô¶¯½øÑùÆ÷ÎüÈ¡30 ¦Ì L´ý²âÎïÖʽøÈëÁ÷¶¯ÏàÖУ¬´ý²âÎïÖÊËæ×ÅÁ÷¶¯Ïà¼×´¼ºÍÁ×ËáÑλº³åÒºÒ»ÆðÁ÷ÈëÉ«Æ×ÖùÖУ¬Waters Atlantis T3 C18É«Æ×Öù½«Tyr¡¢Phe¼°Trp·ÖÀë,ʹTyr¡¢Phe¼°TrpÒÀ´Îµ½´ï¶þ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷½øÐмì²â¡£
[0034]ͨ¹ý¶þ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷ɨÃèÈ·¶¨Tyr¡¢PheºÍTrpµÄ×î¼Ñ×ÏÍâ¼ì²â²¨³¤·Ö±ðΪ274.5nm¡¢256.7nmºÍ279.3nm¡£±¾·¢Ã÷ÑùÆ·´¦Àí¼òµ¥£¬ÔÚ½øÑù12minÄÚ¼´¿ÉÍê³É¼ì²â¡£
[0035]±¾·¢Ã÷·½·¨µÄ½¨Á¢¹ý³Ì:
IÒÇÆ÷ºÍÊÔ¼Á
ÒÇÆ÷:Waters e2695¸ßЧҺÏàÉ«Æ×ÒÇ(ÃÀ¹úWaters),ÅäÓÐWaters 2996 ¶þ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷¼°EmpowerfÉ«Æ×Èí¼þ£»0.45 ¦Ì mÂËĤ¼°Æä³éÂËÆ÷¡£
[0036]ÊÔ¼Á:Phe¡¢Tyr¡¢Trp±ê׼Ʒ¹ºÓÚSigma¹«Ë¾£»¼×´¼ÎªÉ«Æ×¼¶£¬Á×ËáÇâ¶þ¼Ø£»Á×Ëá¶þÇâ¼Ø£¬ÇâÑõ»¯¼Ø£¬Á×ËáµÈΪÓż¶´¿£»ÊµÑéÓÃˮΪ³¬´¿Ë®¡£
[0037]2ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿²â¶¨Ìõ¼þµÄÑ¡Ôñ
2.1¼ì²â²¨³¤µÄÑ¡Ôñ:
2.2 ·Ö±ðȡŨ¶ÈΪ 500 ¦Ì g/mL¡¢1000 ¦Ì g/mL,250 ¦Ì g/mL µÄ L_Tyr¡¢L-Phe ¼° L-Trp ±ê×¼ÈÜÒº½øÐÐ210?400nmµÄ×ÏÍⲨ¶ÎɨÃ裬Òò¹¹³Éµ°°×ÖʵÄ20¶àÖÖ°±»ùËáÔÚÔ¶×ÏÍâÇø(²¨³¤Ð¡ÓÚ220nm)¾ùÓÐ×ÏÍâ¹âÎüÊÕ£¬ÆäËû°±»ùËá¶Ô·¼Ïã×å°±»ùËáµÄ²â¶¨»áÓиÉÈÅ£¬¶øÔÚ½ü×ÏÍâÇø(220?320nm)Ö»Óз¼Ïã×å°±»ùËáÓÐ×ÏÍâ¹âÎüÊÕ£¬¹ÊÔÚ½ü×ÏÍâÇøÑ¡Ôñ×î¼Ñ¼ì²â²¨³¤¡£ÊµÑé·¢ÏÖTyr¡¢Phe¼°TrpÈýÖÖÎïÖÊÔÚ½ü×ÏÍâÇøµÄ×î´óÎüÊÕ²¨³¤·Ö±ðΪ274.5,256.7ºÍ279.3nm£¬Èçͼ1Ëùʾ¡£Òò´ËÑ¡Ôñ256.7nmΪ¼ì²â²¨³¤¡£
[0038]2.3Á÷¶¯ÏàÖлº³åÈÜÒºµÄÑ¡Ôñ:
2.4±¾·¢Ã÷·Ö±ð±È½ÏÁËÒÒËá狀ÍÁ×ËáÑÎÁ½ÖÖ»º³åÈÜÒº¶Ô·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿²â¶¨µÄÓ°Ï죬ͨ¹ýÊÔÑé·¢ÏÖ£¬ÓÃÒÒËáï§»º³åÒº×÷Á÷¶¯Ï࣬»ùÏß²¨¶¯½Ï´ó£¬Îȶ¨Ê±¼ä½Ï³¤£¬ÇÒÉ«Æ×·åÐͲ»ºÃ¡£¶øÑ¡ÓÃ0.05 mol/LµÄÁ×ËáÑλº³åÒº²»µ«¿É½«Ä¿±êÎïÍêÈ«·ÖÀ룬ÇÒÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËáµÄ·åÐͺܺã¬Èçͼ2£¬ÄÜÂú×ã·¼Ïã×å°±»ùËá·ÖÎöµÄÒªÇó¡£
[0039]2.5Á÷¶¯ÏàÖм״¼Å¨¶ÈµÄÑ¡Ôñ:
ÒòÉ«°±ËáÔÚ²¨³¤Îª256.7nm´¦²â¶¨Ê±±£Áôʱ¼ä½Ï³¤£¬ÓÐÎÄÏ×±¨µÀÓÃÒÒ¾¦À´Ëõ¶Ì£¬µ«ÒÒëæµÄ¼Û¸ñ°º¹ó¶øÇÒ¶¾ÐԴ󣬱¾·¢Ã÷Óü״¼Ìæ´ú¡£½á¹û±íÃ÷£¬Êʵ±Å¨¶ÈµÄ¼×´¼ÍêÈ«ÄÜ´ïµ½ÒÒ¾¦ËùµÃµ½µÄÀíÏë½á¹û¡£±¾·¢Ã÷·Ö±ð±È½ÏÁ˱ÈÀýΪ5:95¡¢10:90¡¢15:85¡¢20:80µÄ¼×´¼ÓëÁ×ËáÑλº³åÒº£¬¶ÔÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËẬÁ¿²â¶¨µÄÓ°Ïì¡£½á¹û·¢ÏÖ£¬Ëæ×ż״¼±ÈÀýµÄÔö¼Ó£¬°±»ùËáµÄ±£Áôʱ¼äԽС£¬µ«Í¬Ê±ÒÇÆ÷ϵͳµÄѹÁ¦Ò²»áÏàÓ¦Éý¸ß¡£Òò´Ë¿¼Âǵ½¼ì²âµÄЧÂʼ°·ÀÖ¹ÒÇÆ÷µÄѹÁ¦¹ý¸ß£¬±¾ÊµÑéÑ¡Ôñ¼×´¼Óë0.05 mol/LÁ×Ëá¶þÇâ¼Ø¼°Á×Ëá¶þÇâ¼Ø(1:1)µÄÌå»ý±ÈÀýΪ15:85£¬ÈýÖÖ·¼Ïã×å°±»ùËá³ö·åʱ¼ä¿ì£¬ÖùѹÊÊÖУ¬Í¬Ê±·ÖÀë¶È¼°·åÐÍÒ²Âú×ãÒªÇó¡£
[0040]2.5Á÷¶¯ÏàÖÐpHµÄÑ¡Ôñ:
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[0043]±í1»Ø¹é·½³Ì¡¢ÏßÐÔÏà¹ØÏµÊýºÍ¼ì²âÏÞ
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4.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó1ËùÊöµÄ·½·¨£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚ:È¡ÐÂÏÊË®²úÆ·Èâ5.0gÓÚÀëÐĹÜÖУ¬¼ÓÈë1mLÔ¤Àä5%µÄ¸ßÂÈËáÔȽ¬2min£¬Óò£Á§°ô½Á°è¾ùÔÈ£¬³¬ÉùÌáÈ¡5minºó£¬ÔÚÀä¶³ÀëÐÄ»ú4¡ãCÏÂ1000rpmÀëÐÄ20min£¬È¡ÉÏÇåÒº¹ýÂË£¬¹ýÂ˺óËùÊ£µÄ³ÁµíÎï¼ÓÈëÔ¤ÀäµÄ2% PCAÈÜÒºÔÙ½øÐнþÌá¡¢ÀëÐÄ£¬Öظ´2´ÎºóºÏ²¢ÉÏÇåÒº£»ÓÃKOHÈÜÒºÖкÍÉÏÇåÒºÖÁpHΪ6.0 ;ÖкÍʱÏȼÓ5mol/LµÄKOHÈÜÒºµ÷½Ú£¬´ý½Ó½üÖÁËùÐè¦Ñ¦§=6.0ʱ£¬¸ÄÓÃlmol/LµÄKOHÈÜÒºµ÷½Ú¡£
5.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó1ËùÊöµÄ·½·¨£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚ:·¼Ïã×å°±»ùËá¾WatersAtlantis T3C18·ÖÀëºó£¬½øÈë¶þ¼«¹ÜÕóÁмì²âÆ÷¼ì²â£¬Tyr, Phe¼°TrpÈýÖÖÎïÖʵļì²â²¨³¤É趨·Ö±ðΪ274.5,256.7 ºÍ 279.3nm¡£
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