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一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法
【专利摘要】本发明提供一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，涉及中药材及制剂的含量测定方法【技术领域】，该含量测定方法包括：包括取山药0.5g或取含山药制剂(以山药计)0.5g，作为试品，向试品中加入30％乙醇水溶液50ml处理至少10分钟，滤过，得到供试品溶液；称取尿囊素对照品，加水溶解并稀释制成浓度为0.05mg/ml，即得；采用HPLC进行测定，吸取对照品溶液和供试品溶液注入HPLC进行测定，按照外标方法进行计算，即得尿囊素的含量。本发明提供的中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，该方法能够更为科学的简便的控制中药山药及各种制剂的产品质量，该方法用来测定山药及含山药制剂中尿囊素的含量，弥补了现有技术的不足。
【专利说明】一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药材及制剂的含量测定方法【技术领域】，尤其涉及一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法。
【背景技术】
[0002]目前文献报道检测尿囊素含量的高效液相色谱法很多。用高效液相色谱法测定尿囊素的含量，特别是中药材或中成药中尿囊素的含量，其最大的难处在于出峰时间靠前，分离不好。
[0003]郑琴、胡鹏翼等人在2013年6月第25卷第3期〈〈江西中医学院报 >> 中曾发表过=HPLC法测定不同产地山药饮片中尿囊素和腺苷的含量(简称文献1)，采用高效液相色谱(HPLC)法测定健脑补肾丸中绿原酸含量的方法，具体色谱条件如下:
[0004]色谱柱:C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流动相:甲醇-水(80: 20);流速 1.0ml/min，柱温30°C，检测波长224nm。
[0005]结果尿囊素的出峰时间为4.8分钟左右。
[0006]刁全平、侯冬岩等人在2013年4月第15卷第2期〈〈鞍山师范学院学报 >> 中曾发表过:HPLC法测定玉米须中尿囊素的含量(简称文献2)，具体色谱条件如下:
[0007]色谱柱:C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流动相:甲醇-水(10: 90);流速0.51111/min,柱温为室温,检测波长224nm。
[0008]结果尿囊素的出峰时间也为4.8分钟左右。
[0009]反相色谱法，从原理上来说，有机相(如甲醇)比例越高，各种物质出峰越靠前。然文献I与文献2，两种流动相比例相差甚远，且流速相差一倍，其尿囊素的出峰时间确基本—致。
[0010]李厚洋、蔡其辉等人在2013年9月第11卷第27期〈〈中国医药指南 >> 中曾发表过:HPLC法测定缩泉胶囊中尿囊素的含量(简称文献3)，具体色谱条件如下:
[0011]色谱柱:C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流动相:乙腈-0.01mol/L 磷酸 二氢钾(10: 90);流速l.0ml/min，柱温为室温，检测波长224nm。
[0012]结果尿囊素的出峰时间为9.5分钟左右。
[0013]回瑞华、刁全平等人在2012年12月第14卷第6期〈〈鞍山师范学院学报 >> 中曾发表过:小麦中尿囊素的高效液相色谱-串联质谱法分(简称文献4)，具体色谱条件如下:
[0014]色谱柱:C18柱(2.1mmX 250mm, 1.8 μ m)；流动相:乙腈-磷酸盐缓冲溶液(30: 70);流速 1.5ml/min，柱温 40°C。
[0015]结果尿囊素的出峰时间约为11分钟左右。
[0016]本领域技术人员公知:用于含量测定的色谱峰如果出峰时间过早，势必会造成其与溶剂峰重合从而无法准确量取色谱峰的峰面积，直接导致含量测定结果不准确。
[0017]文献4能给本领域技术人员提供一些参考价值，文献作者采用了特殊柱子，色谱柱内径由4.6mm改为2.1mm,充填粒径由5 μ m改为L 8 μ m,大大延长了尿囊素的出峰时间，且文献作者考虑到了分离的不容易，采用了质谱检测方法，去除了其他峰的干扰。
[0018]然这样的实验设备配置，不是一般的试验单位能够作到。药品生产企业更难做到。
[0019]目前在国家大力倡导提高中药制剂质量，控制有效的检测成分，提高中药药材质量和控制质量的药材检测标准的现实条件下，作为国家控制药品质量的最后屏障的国家药品标准，中国药典中至今也没有山药的含量测定方法，这也反应了目前山药中含量测定方法至今也无法解决的现实难题。
[0020]因此，本领域技术人员迫切地希望开发出能够准确的测定中药山药及含山药制剂含量的测定方法，以便于更为科学的简便的控制中药山药及各种制剂的产品质量。

【发明内容】

[0021]本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术的缺陷，进一步提出一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法。
[0022]本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现。
[0023]一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，其特征在于:该含量测定方法包括:
[0024](I)供试品的前处理，包括取山药0.5g或取含山药制剂(以山药计)0.5g，作为试品，向试品中加入30%乙醇水溶液50ml处理至少10分钟，滤过，得到供试品溶液；
[0025](2)对照品溶液的制备，称取尿囊素对照品，加水溶解并稀释制成浓度为0.05mg/ml,即得；
[0026](3)采用HPLC进行测定，该HPLC的色谱条件包括，流动相为甲醇的水溶液；色谱柱为:十八烷基硅烷键合硅胶柱与苯基硅烷键合硅胶柱串连而成；检测波长为224nm ；
[0027](4)吸取对照品溶液和供试品溶液注入HPLC进行测定，按照外标方法进行计算，即得尿囊素的含量。
[0028]所述流动相为甲醇的水溶液，浓度为5% -20%甲醇。
[0029]步骤(3)色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱与苯基硅烷键合硅胶柱串连而成，顺序依次为十八烷基硅烷键合硅胶柱、苯基硅烷键合硅胶柱。
[0030]其最大的特点是把十八烷基硅烷键合硅胶柱与苯基硅烷键合硅胶柱串连使用。在检测过程中达到了纯化，使色谱峰达到最大限度的分离。试验中采用了低浓度的甲醇作为流动相，在通过十八烷基硅烷键合硅胶柱时，极性较小成分由于吸附力强，出峰时间相当长，甚至强保留，而极性比较大的成分与尿囊素一起进入苯基硅烷键合硅胶柱，进行了二次分离，结果保留时间明显延长，且分离良好。
[0031]本发明以尿囊素做为含量测定指标，而如何对尿囊素进行含量测定方法的文献报导很多，都是关于流动相如何选择的文章；对于尿囊素这种成分，其难点不在流动相的选择，因为就算选择纯水作为流动相，尿囊素保留时间依然在5分钟左右。
[0032]试验中发明人选用C18柱(250 X 4.6_，5 μ m)串连苯基柱(250 X 4.6_，5 μ m)；流动相采用甲醇-水10: 90(体积比)；检测波长为:224nm，获得很好的测试结果。
[0033]在前处理方面，为了能得到更好的分离，本发明的筛选实验的过程中也考虑了净化处理,如:
[0034]尿囊素在水中的溶解度较好，易溶。但直接提取后，按常规法无法进样测定，杂质多，容易损坏柱子，另外杂质多也干扰测定。因此选用中性氧化铝柱纯化(中性氧化铝柱对酸物质有一定的吸附作用)，用50%乙醇洗脱。
[0035]精密称取供试品适量，精密加入水50ml，称重，回流30分钟，放冷，称重，用水补足损失的量，过滤，精密量取25ml，过中性氧化铝柱(内径lcm，5g，100-200目，湿法装柱)，先用水30ml洗脱，弃去洗脱液，然后用50%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液备用；接着用80%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液备用；最后用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，备用。
[0036]取上述各备用液，进样分析得:50%乙醇中含有尿囊素最多。发明人在原来提取的基础上，把洗脱液用量加大，洗脱后用水浴加热浓缩，然后再定容到25ml量瓶中，摇匀，进样，发现尿囊素的峰形发生变化，即长时间加热浓缩会使其结构发生变化。
[0037]在本发明的优选实施例中，提供了一种中药山药的含量测定方法，其为测定该山药中的尿囊素的含量，该含量测定方法包括:
[0038]供试品溶液的制备:取山药细粉适量，精密称取约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇溶液50ml，称重，超声处理30分钟，放冷，称重,用水补足损失的量,摇匀，滤过，即得；
[0039]对照品溶液的制备:精密称取尿囊素对照品适量置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成浓度约为0.05mg/ml的溶液，即得；
[0040]测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪测定，按照中国药典2010版中规定的外标方法进行计算即得尿囊素的含量。
[0041]附:参麦颗粒中尿囊素的含量测定。
[0042]本发明的有益效果为:
[0043]本发明提供的中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，该方法能够更为科学的简便的控制中药山药及各种制剂的产品质量，该方法用来测定山药及含山药制剂中尿囊素的含量，弥补了现有技术的不足。
【具体实施方式】
[0044]为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
[0045]实施例1
[0046]参麦颗粒的组成和配比:
[0047]红参2份、南沙参27份、麦冬45份、黄精27份、山药34份、枸杞子14份。
[0048]颗粒剂的制备方法:
[0049]以上六味，红参切成薄片，加6倍量乙醇加热回流提取2次，滤过，滤液回收乙醇，药渣和其余麦冬等五味加8倍量水煎煮两次，每次2小时(第一次考虑吸水因素加入9.5倍量水，先浸泡2小时)，合并煎液，滤过，滤液浓缩至1.08?1.10(50°C )，加等量乙醇，搅匀，静置，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.35(80?85°C )的清膏，加入上述红参提取液和蔗糖920克，混匀，制成颗粒，干燥，约制成1000克，既得。
[0050]含量测定方法:
[0051](I)供试品溶液的制备:取参麦颗粒的内容物适量，研细，精密称取约15g，置具塞锥形瓶中，精密加入30 %乙醇50ml，称重，超声处理30分钟，放冷，称重，用该30 %乙醇补足损失的量，摇匀，滤过，即得；
[0052](2)制备对照品溶液，称取尿囊素作为对照品，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释，制成约为0.05mg/ml的溶液，即得；
[0053](3)采用HPLC对供试品溶液和对照品溶液进行测定，该HPLC的流动相为10 %甲醇溶液；检测波长为224nm ;色谱柱为:十八烷基硅烷键合硅胶柱与苯基硅烷键合硅胶柱串连而成；
[0054](3)测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪测定，按照中国药典2010版中规定的外标方法进行计算即得尿囊素的含量。
[0055]以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
【权利要求】
1.一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，其特征在于:该含量测定方法包括: (1)供试品的前处理，包括取山药0.5g或取含山药制剂(以山药计)0.5g，作为试品，向试品中加入30%乙醇水溶液50ml处理至少10分钟，滤过，得到供试品溶液； (2)对照品溶液的制备，称取尿囊素对照品，加水溶解并稀释制成浓度为0.05mg/ml,即得； (3)采用HPLC进行测定，该HPLC的色谱条件包括，流动相为甲醇的水溶液；色谱柱为:十八烷基硅烷键合硅胶柱与苯基硅烷键合硅胶柱串连而成；检测波长为224nm ； (4)吸取对照品溶液和供试品溶液注入HPLC进行测定，按照外标方法进行计算，即得尿囊素的含量。
2.根据权利要求1所述的中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，其特征在于:所述流动相为甲醇的水溶液，浓度为5% -20%甲醇。
3.根据权利要求1所述的中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法，其特征在于:步骤(3)色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱与苯基硅烷键合硅胶柱串连而成，顺序依次为十八烷基硅烷键合硅胶柱、苯基硅烷键合硅胶柱。
【文档编号】G01N30/02GK103954705SQ201410192519
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月4日 优先权日:2014年5月4日
【发明者】赵栋磊 申请人:赵栋磊