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专利名称：一种超氧化物歧化酶快速检测卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种超氧化物歧化酶快速检测卡，是一种检测超氧化物歧化酶的 检测器具，属于酶检测技术领域。
背景技术：
超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称SOD)广泛存在于生物体内含Cu、 Zn.Mn.Fe的金属类酶。它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴 离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子(O2- _)是人体氧代谢产物，它在体内 过量积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超氧阴离子与生物体内许多疾病的发 生和形成有关。SOD的活力测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法 应用最普遍，化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和02_ -，利用SOD分解而间接推算酶活力。在化学方法中，最常用的有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚 法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等。尽管测定SOD的酶活的方法很多，但由于测定方法不同和具体测定条件不同，不 同实验室测定同一样品的酶活相差很大，有的甚至相差近千倍，甚至同一人采用不同方法 测定同一样品所得数据相差也较大。为此，本发明拟发明一种基于超氧化物歧化酶蛋白质抗原性的免疫学检测方法， 采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂， 可快速特异地检测样品中的超氧化物歧化酶。根据检测卡样品检测线⑴和质控线(C)的 有无显色来判定样品中的超氧化物歧化酶含量。反应是利用超氧化物歧化酶抗原性而建立 的一种蛋白检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问 题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在超市、家 庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
发明内容本实用新型的目的在于提供一种能检测超氧化物歧化酶的检测器具，直接应用免 疫学的方法直接检测食品、保健品和化妆品样品超氧化物歧化酶的含量，克服现有超氧化 物歧化酶活性检测方法的缺陷，建立基于免疫学特异性的检测方法。本实用新型的技术方案一种超氧化物歧化酶快速检测卡，在长条扁平薄壳状的 检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4 ；测试条2是由支 承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9 所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端 叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝 酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7 ；胶体金膜为含抗超氧化物歧化 酶抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含超氧化物歧化酶的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳 内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。应用免疫学的方法直接检测样品中超氧化物歧化酶的含量，检测样品为超氧化物 歧化酶SOD食品、SOD保健品及SOD化妆品，对于各种不同的检测样品用不同的处理方法称取1. OOg超氧化物歧化酶SOD食品、SOD保健品或SOD化妆品固体样品置于玻璃 乳钵中，加入9. OmL蒸馏水研磨5min ；若样品液澄清，则直接取原液测定；若样品液浑浊，则 移入IOmL离心管，用少量蒸馏水冲洗乳钵，洗涤并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000r/ min离心15min，取上清液测定。当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样 品中超氧化物歧化酶含量未超标；当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示 被检测样品中超氧化物歧化酶含量超标；当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。本实用新型的优点是能检测SOD食品、SOD保健品、SOD化妆品等样品中含有的超 氧化物歧化酶，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

图1超氧化物歧化酶快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测 试条，3、检测窗孔，4、加样孔。图2检测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带， 11、质控带。图3超氧化物歧化酶快速检测卡的检测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤 维素膜，7、胶体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施方式
本实用新型结合具体实施例参见附图进一步说明如下实施例1一种超氧化物歧化酶快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外 壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm， 宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构 成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座 内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2. 5mm。测试 条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长60mm，宽4mm ；支 承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm,长20_25mm，宽4mm。硝酸 纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检 测带10，含超氧化物歧化酶；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5 — 端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品 垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6 —端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7，胶体金膜7是含抗超氧化物歧化酶单克隆抗体或多克隆 抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0. 5-0. 8mm，长5mm，宽4mm。样品垫8厚 0. 5-0. 8mm,长 20mm，宽 4mm。吸水膜 9 厚 0. 5-0. 8mm,长 16_20mm，宽 4mm。胶体金膜 7、样品 垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为l_2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料 是吸水玻璃纤维膜。本实用新型超氧化物歧化酶检测卡用于检测SOD食品、SOD保健品、SOD化妆品等 样品中的超氧化物歧化酶的检测。实施例2样品的处理方法是检测样品为超氧化物歧化酶SOD食品、SOD保健品及SOD化妆品，对于各种不同的 检测样品用不同的处理方法称取1. OOg超氧化物歧化酶SOD食品、SOD保健品或SOD化妆品固体样品置于玻 璃乳钵中，加入9. OmL蒸馏水研磨5min ；若样品液澄清，则直接取澄清液测定；若样品液浑 浊，则移入IOmL离心管，用少量蒸馏水冲洗乳钵，洗涤并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经 4000r/min离心15min，取上清液测定。使用超氧化物歧化酶快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中 滴注入超氧化物歧化酶快速检测卡2的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品 液及胶体金膜7所含的抗超氧化物歧化酶单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物一起向 硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金 标记的抗体，在测试带上分别与含超氧化物歧化酶，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应， 形成棕红色条带。若样品中有待检超氧化物歧化酶存在，当样品加入后即与抗体发生反应， 而不会与检测带所含的超氧化物歧化酶反应，从而不显色。主要反应的结果有以下3种情 况1、当显示检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，说明被检测样品中超氧 化物歧化酶含量未超标。2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说 明被检测样品中超氧化物歧化酶含量超标。3、当检测带10和质控带12均不显色，则表明检测试条已失效。
权利要求1. 一种超氧化物歧化酶快速检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳 (1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4);测试条(2)是由支承 背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、和吸 水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜 (9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接， 在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜(7);胶体金膜为含抗 超氧化物歧化酶抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控 带，依次是含超氧化物歧化酶的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11 )，测试 条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
专利摘要一种超氧化物歧化酶快速检测卡，属于酶检测技术领域。本实用新型超氧化物歧化酶(SOD)快速检测卡外壳内有测试条，测试条由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗超氧化物歧化酶抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条显示印记带，一条为含超氧化物歧化酶的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本实用新型优点是应用免疫学的方法直接检测SOD食品、SOD保健品和SOD化妆品样品中超氧化物歧化酶的含量。本实用新型超氧化物歧化酶快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N33/558GK201926661SQ20102067586
公开日2011年8月10日 申请日期2010年12月23日 优先权日2010年12月23日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司