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专利名称：地榆皂苷i的含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药地榆药材及其提取物和制剂中地榆皂苷I的含量测定方法，属于中药技术领域。
背景技术：
中药地榆为蔷薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或长叶地榆Sanguisorba officinalis L. var. Iongifolia(Bert.)YiietLi 的干燥根。中国药典2005版收载该品种，其中记载了鞣质的含量测定方法，具体含量测定项下内容为“取本品粉末(过四号筛)约0.4g，精密称定，照鞣质含量测定法(附录X B)测定，即得。按干燥品计算，不得少于10.0%。”。中华人民共和国国家药品监督管理局WS-11020(ZD-1020)_2002地榆升白片标准(试行)记载了地榆升白片中的没食子酸的含量的测定方法“照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；甲醇-乙腈-0.05mol/L磷酸溶液(5 6 89)为流动相；检测波长为270nm。理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于6000。对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，加50%甲醇制成每Iml含20 y g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取适量(约相当于10片的重量)，精密称定，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，加热回流I小时，放冷至室温，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 Ul 10iU，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含地榆以没食子酸(C7H5O5)计，不得少于24iig。”以上标准分别公开了地榆药材及地榆制剂——地榆升白片中鞣质和没食子酸的含量测定。而地榆药材应用广泛、适应症较多，而不同的适应症其所发挥作用的有效成分也是不同的，特别是针对地榆在升高白细胞水平的适应症方面，仅通过检测地榆制剂中的鞣质或没食子酸来判定制剂的是否合格是不适宜的，原因为现有研究已证明地榆皂苷是地榆发挥升高白细胞作用的活性成分，特别是地榆皂苷I，而鞣质和没食子酸并不起升高白细胞水平的主要作用高小平等，地榆促造血作用的有效部位筛选.中国天然药物，2006 (2)137-140;成都地奥制药集团有限公司.地榆总皂苷提取物及其制备方法和用途[P].中国专利200310119248. 1，2004-11-25 ;成都地奥制药集团有限公司.乌索烷型三萜皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用[P].中国专利03135776. 8，20030908ZL03135776. 8，因此，通过检测地榆制剂中地榆皂苷I的含量则更为合理，也更能反应产品的质量。然而实践中发现，现有的鞣质和/或没食子酸含量的检测方法并不适于地榆皂苷I的检测。邹盛勤等公开了地榆中的乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱测定法邹盛勤，陈武.地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱测定，时珍国医国药，2006，17(8) :1373 1374；解军波等公开了用HPLC-ELSD法四季青中3种三萜及其皂苷，包括地榆皂苷I的含量测定方法解军波，毕志明，李萍.HPLC-ELSD法测定四季青中三萜及其皂苷的含量，虽然四季青中也含有地榆皂苷I，但是由于四季青与地榆为不同的植物，除地榆皂苷I外，二者含有的其他化学成分不同，因此适用于四季青中地榆皂苷I的含量测定方法并不适用于地榆药材、地榆提取物或地榆制剂中地榆皂苷I的含量测定；沙明等公开了地榆皂苷类成分、黄酮类成分的HPLC指纹图谱，其中地榆皂苷类成分的HPLC色谱条件为色谱柱Shim-pack CLC ODS 柱(6. OmmX 150mm, 5 y m),流动相:乙腈-水(30 : 70)检测波长:206nm，流速:I. Oml/min，柱温:25°C。沙明，张东方，孟宪生等.DNA指纹谱与HPLC指纹谱对中药地榆质量评价研究，中国药学杂志，2002，37 (11) :815 818，但使用该方法出峰时间过长(20min)，分析效率较低，且不能将地榆皂苷I与其结构相近的皂苷类成分有效的分离。以上报道的分析方法均存在出峰时间长达20min，分析效率较低，且不能将地榆皂苷I与其结构相近的皂苷类成分有效分离的技术缺陷因此，到目前为止，国内外尚无能够快速、准确测定地榆药材及其提取物或制剂中地榆阜苷I含量的方法。

发明内容
针对以上技术缺陷，本发明的目的在于提供一种能够快速、准确测定地榆药材、其提取物或制剂中地榆皂苷I的含量的方法，具体地提供一种用高效液相色谱法测定地榆药材、其提取物或制剂中地榆皂苷I的含量的方法。本发明所述方法包括I)分别取地榆皂苷I的标准品和含有地榆皂苷I的供试品溶于乙醇水溶液中，分别制成标准溶液和供试品溶液；2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测量标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中的地榆皂苷I的含量；其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶；流动相为甲醇-水溶液。本发明方法中，作为优选的实施方案，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为< 5i!m ;进一步优选所述碳十八烧基键合娃胶的粒径为5 ii m、4 ii m或3. 5 ii m。本发明所述流动相为甲醇-水的溶液，优选为以体积百分比计，60% 80%甲醇的水溶液的梯度溶液、或为50% 80%甲醇的水溶液的等度溶液。本发明方法中，当所述流动相采用60% 80%甲醇的水溶液的梯度溶液时；优选所述梯度溶液组成为以体积百分比计，O 17min 60%-70%甲醇的水溶液、17 25min70%- 80%甲醇的水溶液、25 35min 80%甲醇的水溶液；或O 7min 60*%—64%甲醇的水溶液、7 12min 64*%—66%甲醇的水溶液、12 17min 66%- 80%甲醇的水溶液，17 25min 80%甲醇的水溶液；或O 7min 60 — 64 甲醇的水溶液、7 15min 64 甲醇的水溶液、15 20min64%- 80%甲醇的水溶液、20 25min 80%甲醇的水溶液；或O 7min 60 — 64 甲醇的水溶液,7 12min 64 甲醇的水溶液，12 、20min64%- 80%甲醇的水溶液，20 27min 80%甲醇的水溶液；或0 7min 60%— 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液。作为优选的实施方案，所述等度溶液为以体积百分比计，64%甲醇的水溶液。作为优选的实施方案，本发明所述乙醇水溶液的浓度为以体积计50% -60%乙醇的水溶液。本发明所述地榆皂苷I的测定方法可以用于医药领域的各个方面，本发明包括但不限于地榆药材中、地榆皂苷提取物中，以及各种药物制剂，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂等各种胃肠道或非胃肠道途径给药的制剂中的地榆皂苷I的含量及纯度的测定。地榆皂苷I标准品可参考现有技术中的方法制备地榆皂苷I :曹爱民，张东方，沙明等，地榆中皂苷类化合物分离、鉴定及其含量测定.中草药，2003，5 (34) :397 399进行制备。
作为优选的实施方案，所述地榆药材中地榆阜苷I的含量测定方法包括I)供试品溶液的制备取地榆药材，粉碎，过四号筛，约0. 4g，精密称定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇的水溶液80ml，摇匀，超声15mi n，放至室温，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样分析或离心取上清液即得；对照品溶液的制备取地榆皂苷I对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，力口60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，摇匀；分别精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀释定容至刻度,摇勻，即制成每Iml含0. Img和0. 5mg的对照品溶液；2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 U 1，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色谱以碳十八烷基键合硅胶为固定相粒径小于或等于5 Pm，流动相为甲醇与水体积为64% 36%的等度洗脱液或为甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水溶液的梯度洗脱液，洗脱程序为0 7min 60%—64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液流速0. 8ml/min,柱温25°C，ELSD漂移管温度为80°C，气体流速2. 5L/min,不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。作为优选的实施方案，所述地榆皂苷提取物中地榆皂苷I的含量测定方法包括I)供试品溶液的制备取地榆总皂苷粉末50mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇的水溶液60ml，摇匀，超声5min，放至室温，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液或离心取上清液进样分析；对照品溶液的制备取地榆皂苷I对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，力口60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，摇匀；分别精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀释定容至刻度,摇勻即制成每Iml含0. Img和0. 5mg的对照品溶液；2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 U 1，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色谱仪用碳十八烷基键合硅胶为固定相粒径小于或等于5 ym，以甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为0 7min 60% — 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. 2ml/min，柱温25°C，ELSD (AlItech2000ES)漂移管温度为100°C，气体流速3. 5L/min,不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X103。作为优选的实施方案，所述地榆片剂中地榆皂苷I的含量测定方法包括I)供试品溶液的制备取地榆升白片20片，精密称定，研细，精密称取相当于2mg地榆皂苷I的量，置150ml具塞锥形瓶中，准确加入50 %乙醇20ml，摇匀，称重，超声lOmin，放至室温，用50%乙醇的水溶液补足减失的重量，摇匀，离心取上清液即得；对照品溶液的制备取在105°C干燥至恒重的地榆皂苷I对照品适量，加50%乙醇的水溶液溶解并定容制成每Iml含0. 05mg和0. 2mg的对照品溶液；
2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20iU，注入液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色谱仪，用粒径小于或等于5 Pm的碳十八烷基键合硅胶为固定相，以甲醇-水体积比为64 36的混合溶液为等度洗脱液，或以甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为O 7min 60%^ 64%甲醇的水溶液,7 13min64%甲醇的水溶液，流速I. Oml/min，柱温25°C，ELSD漂移管温度为85°C，气体流速2. 8L/min,不分流模式,理论塔板数按地榆阜苷I计算应不低于4X 103。作为优选的实施方案，所述地榆皂苷I的纯度测定方法包括I)样品溶液的制备取地榆皂苷I适量,加甲醇溶解并稀释成每Iml含0. 5mg的溶液，即得；2)纯度测量精密吸取样品溶液10 U 1，注入液相色谱仪，测定，按峰面积归一化法计算地榆皂苷I的纯度；其中，所述高效液相色谱仪用碳十八烷基键合硅胶为固定相，粒径小于或等于5 Pm,以甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为O 7min60%—64%甲醇的水溶液，7 12min 64 %甲醇的水溶液，12 20min 64%—80%甲醇的水溶液，20 27min 80%甲醇的水溶液，流速I. Oml/min，柱温25 °C，ELSD (Al Itech2000ES)漂移管温度为85°C，气体(空气)流速2. 8L/min，不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X IO3 ；与现有技术相比，本发明为地榆药材及其提取物或制剂中地榆皂苷I含量的测定提供了快速、准确的方法，能够将地榆皂苷I与其前面紧邻的一色谱峰(结构非常相近的同分异构体3 P -O- a -L-吡喃阿拉伯糖-28- ^ -D吡喃葡萄糖酯_19 a -羟基-齐墩果酸)实现基线分离；且出峰时间短，仅为lOmin。根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用技术手段，在不脱离本发明上述基本技术思想的前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换和变更。


图Ia :实施例 I 等度洗脱，(Synergi Hydro-RP C18 柱(150 X 4. 6mm, 4 ii m),乙腈-水(30 70)，流速I. Oml/min,柱温25°C，检测波长210nm,分析时间30min)；
图lb:实施例 I 梯度洗脱，(Synergi Hydro-RP C18 柱(150 X 4. 6mm, 4 U m),乙腈-水梯度洗脱(洗脱程序0 20min，30%乙腈一50%乙腈；20 25min，50%乙腈—80%乙腈)，流速I. Oml/min,柱温25°C,检测波长210nm,分析时间30min)；图2-1 :实施例 2 色谱柱选择(YMC-Pack proC18 柱(150X4. 6mm，3. 5 u m)；图2_2 :实施例 2 色谱柱选择 Synergi Hydro-RP C18 柱(I5O X 4. 6mm, 4 U m)；
图3-1 :实施例3地榆药材62%甲醇水溶液等度洗脱；图3-2 :实施例3地榆总苷62%甲醇水溶液等度洗脱；图3-3 实施例3地榆药材80 %甲醇水溶液等度洗脱；图3-4 :实施例3地榆总苷80%甲醇水溶液等度洗脱；图3-5 :实施例3地榆总苷50%甲醇水溶液等度洗脱；图3-6 实施例3地榆药材50 %甲醇水溶液等度洗脱；图4-1 :实施例4乙腈-水系统分离地榆药材中地榆皂苷I ;图4-2 :实施例4甲醇-水系统分离地榆药材中地榆皂苷I ;图5-1 :实施例5药材专属性考察(溶剂)；图5-2 :实施例5药材专属性考察(地榆皂苷I对照溶液)；图5-3 :实施例5药材专属性考察(药材提取液)；图6-1 :实施例6地榆升白片专属性考察(空白辅料)；图6-2 :实施例6地榆升白片专属性考察(地榆皂苷I对照溶液)；图6-3:实施例6地榆升白片专属性考察(地榆升白片样品液)；图7:实施例7地榆升白片中地榆皂苷I的含量均匀度测定；图8 :实施例8地榆总苷提取物中地榆皂苷I的含量测定；图9 实施例9地榆皂苷I对照品纯度测定。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明再做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明仅限于以下实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例I高效液相色谱色谱柱、流动相和洗脱程序的选择地榆皂苷属于三萜皂苷，极性较大，实验表明其在C18色谱柱上有保留，因此选用C18分析柱。流动相的选择地榆皂苷I系中性化合物，流动相中无需添加酸碱附加剂或离子对试剂。因此选择甲醇-/K、乙腈-水等流动相系统对比筛选，在紫外检测中乙腈-水系统较甲醇-水系统基线平直，峰形尖锐，但经多次调整分离色谱峰仍然较甲醇-水系统少，且无论采用等度洗脱还是梯度洗脱地榆皂苷I前面紧邻的杂质峰完全无法检出(见图Ia和Ib)，而地榆皂苷I峰面积较甲醇-水系统明显增加，而在甲醇-水系统中两者能得到一定的分离(R= I. 2)，因此选择甲醇-水系统。根据分离度变化趋势，将流动相调整为梯度洗脱，详见表I。表I流动相梯度洗脱程序
权利要求
1.一种地榆皂苷I的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括 1)分别取地榆皂苷I的标准品和含有地榆皂苷I的供试品溶于乙醇水溶液中，分别制成标准溶液和供试品溶液； 2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测量标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中的地榆皂苷I的含量； 其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μπι;流动相为甲醇-水溶液，所述甲醇一水的溶液为以体积百分比计，50-80%甲醇的水溶液的等度溶液。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述的碳十八烷基键合硅胶的粒径为5 μ m、4 μ m $ 3. 5 μ m。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述乙醇的水溶液为以体积计50%-60%乙醇的水溶液。
4.一种利用权利要求1-3任一所述的方法测量地榆药材中地榆皂苷I的含量的方法，其特征在于，所述方法包括 1)供试品溶液的制备取地榆药材，粉碎，过四号筛，约O.4g，精密称定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇的水溶液80ml，摇匀，超声15min，放至室温，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样分析或离心取上清液即得； 对照品溶液的制备取地榆皂苷I对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶解并定容至刻度，摇匀；分别精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀释定容至刻度，摇勻即制成每Iml含O. Img和O. 5mg的对照品溶液； 2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量； 其中，高效液相色谱以碳十八烷基键合硅胶为固定相，粒径小于或等于5 μ m，流动相为体积浓度为509Γ80%的甲醇水等度洗脱液或甲醇体积浓度为60-64%的甲醇水混合溶液的梯度洗脱液，洗脱程序为(T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速O. 8 ml/min，柱温25°C，ELSD漂移管温度为80°C，气体流速2. 5L/min，不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。
5.—种利用权利要求1-3任一所述的方法测量地榆阜苷提取物中地榆阜苷I的含量的方法，其特征在于，所述方法包括 1)供试品溶液的制备取地榆总皂苷粉末50mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇60ml，摇匀，超声5min，放至室温，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液或离心取上清液进样分析； 对照品溶液的制备取地榆皂苷I对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，摇匀；分别精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀释定容至刻度，摇勻即制成每Iml含O. Img和O. 5mg的对照品溶液； 2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色谱仪用碳十八烷基键合硅胶为固定相，粒径小于或等于5 μ m，流动相为体积浓度为509Γ80%的甲醇水等度洗脱液或以甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为(T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. 2 ml/min,柱温25°C，ELSD漂移管温度为100°C，气体流速3. 5L/min,不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括 1)供试品溶液的制备取地榆总皂苷粉末50mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇60ml，摇匀，超声5min，放至室温，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液或离心取上清液进样分析； 对照品溶液的制备取地榆皂苷I对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，摇匀；分别精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀释定容至刻度，摇勻即制成每Iml含O. Img和O. 5mg的对照品溶液； 2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量； 其中，高效液相色谱仪用碳十八烷基键合硅胶为固定相，粒径小于或等于5μπι，以甲醇-水体积比为64 36的混合溶液为等度洗脱液，或以甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为(T7min 60%-64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. 2 ml/min,柱温25°C，ELSD漂移管温度为100°C，气体流速3. 5L/min,不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。
7.一种利用权利要求1-3任一所述的方法测量地榆片剂中地榆皂苷I的含量的方法，其特征在于，所述方法包括 O供试品溶液的制备取地榆升白片20片，精密称定，研细，精密称取相当于2mg地榆皂苷I的量，置150ml具塞锥形瓶中，准确加入50%乙醇的水溶液20ml，摇匀，称重，超声lOmin，放至室温，用50%乙醇的水溶液补足减失的重量，摇匀，离心取上清液即得； 对照品溶液的制备取在105°C干燥至恒重的地榆皂苷I对照品适量，加50%乙醇的水溶液溶解并定容制成每Iml含O. 05mg和O. 2mg的对照品溶液； 2)含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20 μ 1，注入高校液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，将峰面积积分值及浓度分别取常用对数后，按外标两点法计算地榆皂苷I的含量； 其中，高效液相色谱仪，用粒径小于或等于5 μ m的碳十八烷基键合硅胶为固定相，流动相为体积浓度为509Γ80%的甲醇水等度洗脱液或以甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为(T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. O ml/min，柱温25°C，ELSD漂移管温度为85°C，空气流速2. 8L/min，不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。
8.一种地榆皂苷I的纯度测定方法，其特征在于，所述方法包括 1)样品溶液的制备取地榆皂苷I适量，加甲醇溶解并稀释成每Iml含O.5mg的溶液，即得；2)纯度测量精密吸取样品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，按峰面积归一化法计算地榆皂苷I的纯度； 其中，所述高效液相色谱仪用碳十八烷基键合硅胶为固定相，粒径小于或等于5 μ m，流动相为体积浓度为509Γ80%的甲醇水等度洗脱液或甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为(T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 12min 64%甲醇的水溶液，12 20min 64% — 80%甲醇的水溶液，2(T27min 80%甲醇的水溶液，流速I. O ml/min，柱温25V’ ELSD漂移管温度为85°C，气体(空气)流速2. 8L/min，不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括 1)样品溶液的制备取地榆皂苷I适量，加甲醇溶解并稀释成每Iml含O.5mg的溶液，即得； 2)纯度测量精密吸取样品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，按峰面积归一化法计算地榆皂苷I的纯度； 其中，所述高效液相色谱仪用碳十八烷基键合硅胶为固定相，粒径小于或等于5 μ m，以甲醇-水体积比为64 36的混合溶液为等度洗脱液，或甲醇体积浓度为60-64%的甲醇-水 混合溶剂梯度洗脱，洗脱程序为(T7min 60% — 64%甲醇的水溶液，7 12min 64%甲醇的水溶液，12 20min 64% — 80%甲醇的水溶液，2(T27min 80%甲醇的水溶液，流速I. O ml/min，柱温25V’ ELSD漂移管温度为85°C，气体(空气)流速2. 8L/min，不分流模式，理论塔板数按地榆皂苷I计算应不低于4X 103。
全文摘要
本发明公开了一种地榆皂苷Ⅰ的含量测定方法，所述方法包括1)分别取地榆皂苷I的标准品和含有地榆皂苷I的供试品溶于乙醇水溶液中，分别制成标准溶液和供试品溶液；2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测量标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中的地榆皂苷I的含量。本发明为地榆药材及其提取物或制剂中地榆皂苷Ⅰ含量的测定提供了快速、准确的方法。
文档编号G01N30/02GK102721773SQ201110030288
公开日2012年10月10日 申请日期2010年4月30日 优先权日2009年5月26日
发明者刘志勇, 姚华, 姬建新, 王军, 白红艳, 邹文俊, 黎秀丽 申请人:成都地奥制药集团有限公司