专利名称：糖化血红素的侦测芯片及其侦测方法
技术领域：
本发明是关于一种糖化血红素的侦测芯片及其侦测方法，尤其指一种适用于反映平均血糖浓度的侦测芯片。
背景技术：
根据中国台湾卫生署的统计结果显示，糖尿病已成为高居国人十大死因的第四位，是一种危险性极高的疾病。由于糖尿病会引发如视网膜病变、心血管病变、肾脏病变、或神经病变等疾�。鸹荡竽杂胙废低�。因此，如何有效地控制血糖便成为一项极为重要的课题。为了控制糖尿病的严重性，维持良好的饮食习惯或再搭配药物治疗，即可慢慢地将血糖浓度调控到正常的范围，降低糖尿病引发上述各种并发症的可能性。因此，为了能够 及早发现是否罹患糖尿病或是了解血糖控制情形，血糖值的检测成为重要的判断之一。传统检测血糖时并须分别检测空腹与/或餐后的血糖值，然而，以此种方式得到的血糖值容易受到每日饮食的影响而有明显的波动，难以得到精准的血糖检测结果。经研究证实,糖化血红素(Glycosylated hemoglobin, HbAIc)的浓度不会因为当下的血糖浓度而发生明显变化。当血液中的葡萄糖与HbAlc反应后，会慢慢结合形成糖化血红素，由于两者的结合后会长时间累积在体内，即便是饭后进行检测也不会立即改变糖化血红素的浓度。因此，HbAlc已被视为临床上评估血糖控制好坏的重要依据，甚至用于筛检糖尿病有无的最新利器之一。因此，本发明为了提升HbAlc的检测方便性，发展一种适合检测HbAlc的侦测芯片与侦测方法，以提升糖尿病患者实行居家照护的便利性。虽然三明治免疫侦测法是目前临床检测最具专一性、灵敏性、以及稳定再现性的方法，然而目前临床上糖化血红素的侦测仍以液相层析仪或单一抗体为主，主要原因的一包括难以合成两株针对糖化血红素不同抗原决定基(epitope)的专一抗体。本发明突破以往的限制，利用血红素共通抗体为第一抗体，再利用血红素与糖化血红素专一抗体为分子侦测层来区分血红素与糖化血红素，此三明治免疫侦测方法不但可达到专一性、灵敏性、以及稳定再现性，更可在一片芯片上准确侦测糖化血红素对总血红素的比值(％ )，此比值乃临床检测平均血糖值的重要参考指标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种糖化血红素的侦测芯片及其侦测方法，以能侦测血液中糖化血红素相对于总血红素的含量，提升民众进行血糖检测的可靠性与方便性。为实现上述目的，本发明提供的糖化血红素侦测芯片，包括一基材；以及一生物分子层，该生物分子层设置于该基材上，且该生物分子层包含一第一抗血红素抗体。
所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该基材包括一基板及一修饰层，且该修饰层设置于该基板及该生物分子层之间。所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该基板为一硬质基板或一软性基板。所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该硬质基板为一玻璃基板。所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该软性基板为一 PDMS基板。本发明提供的糖化血红素的侦测方法，包括(a)提供一糖化血红素侦测芯片，该糖化血红素侦测芯片包括一基材；以及一生物分子层，该生物分子层设置于该基材上，且该生物分子层包含一第一抗血红素抗体；
(b)于该糖化血红素侦测芯片上加入一血液样品，使该血液样品的血红素及/或糖化血红素与该糖化血红素侦测芯片结合；(c)加入一抗糖化血红素抗体或一第二抗血红素抗体至步骤(b)的糖化血红素检测芯片，使该抗糖化血红素抗体与该血液样品的糖化血红素结合，或使该第二抗血红素抗体与该血液样品的血红素结合；(d)加入一二级抗体至步骤(C)的糖化血红素检测芯片，使该二级抗体分别与该抗糖化血红素抗体或该第二抗血红素抗体结合，其中，该二级抗体连接一放光分子；(e)提供一光源，该光源照射至步骤(d)的糖化血红素侦测芯片上，使该放光分子释放一放射光；(f)通过一侦测装置侦测步骤(e)中该糖化血红素检测芯片上该放光分子的放射光强度。所述的侦测方法，其中，包括步骤(g):分别计算于步骤(C)中加入该抗糖化血红素抗体得到的放射光强度，以及于步骤(C)中加入该第二抗血红素抗体得到的放射光强度，以计算该糖化血红素相对于血红素的含量百分比。所述的侦测方法，其中，该放光分子为一酵素分子。所述的侦测方法，其中，该酵素分子为辣根过氧化物酶(HRP)。所述的侦测方法，其中，该第一抗血红素抗体与该第二抗血红素抗体为相互不同物种的抗体。所述的侦测方法，其中，该第一抗血红素抗体与该抗糖化血红素抗体为相互不同物种的抗体。所述的侦测方法，其中，该二级抗体、该抗糖化血红素抗体及该第二抗血红素抗体为相同物种的抗体。所述的侦测方法，其中，该侦测装置为一电荷耦合侦测器(CCD)或一光侦测仪。所述的侦测方法，其中，该基材包括一基板及一修饰层，且该修饰层设置于该基板及该生物分子层之间。所述的侦测方法，其中，该基板为一硬质基板或一软性基板。所述的侦测方法，其中，该硬质基板为一玻璃基板。所述的侦测方法，其中，该软性基板为一 PDMS基板。所述的侦测方法，其中，于该步骤(b)前包括一步骤(b’ ):过滤该血液样品。所述的侦测方法，其中，于步骤(b)中，是通过虹吸法或沾覆法，将该血液样品加入该糖化血红素侦测芯片。
所述的侦测方法，其中，于步骤(d)后包括一步骤(d’ ):加入一放光检验试剂。本发明提供的糖化血红素的侦测芯片及其侦测方法，能侦测血液中糖化血红素相对于总血红素的含量，提升民众进行血糖检测的可靠性与方便性。
图I是本发明糖化血红素侦测芯片的示意图。图2是包含本发明糖化血红素侦测芯片的检测装置图。图3是本发明糖化血红素侦测芯片辨识血液样品中糖化血红素或血红素分子的示意图。附图中主要组件符号说明
I糖化血红素侦测芯片；11基材；111基板；112修饰层；12生物分子层；121第一抗血红素抗体；31针头；32糖化血红素侦测芯片；411第一侦测芯片；412第二侦测芯片；421第一抗血红素抗体；431血红素分子；432糖化血红素分子；441第二抗血红素抗体；442抗糖化血红素抗体；451非专一性二级抗体；452放光分子。
具体实施例方式本发明提供一种糖化血红素侦测芯片，包括一种糖化血红素侦测芯片，包括一基材；以及一生物分子层，该生物分子层是设置于该基材上，且该生物分子层包含一第一抗血红素抗体。于本发明的糖化血红素侦测芯片中，该基材可包括一基板及一修饰层。其中，该基板较佳为一硬质基板或一软性基板。于此，硬质基板较佳为玻璃基板或硅基板；软性基板可为二甲基系氧烷聚合物(PDMS)、聚苯乙烯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚异丙烯、或其组合，软性基板较佳为二甲基系氧烷聚合物(PDMS)。于本发明的糖化血红素侦测芯片中，设置于基板及生物分子层之间的修饰层的材料可为聚赖胺酸(poly-lysine)或其他修饰材料，且设置修饰层的主要目的是在抗非特异性吸附。于本发明中，所使用的修饰层为多电层的氟化物，且修饰层的合成步骤可参考Anal. Chem. 82，7804-7813，2010中所述。更具体而言，本发明的修饰层由下至上包含一两性分子层，设置于该基板上，该两性分子层具一亲水端及一疏水端，且该疏水端与该基板连接；一交联迭层，设置于该两性分子层的亲水端的上方，且该交联迭层包含至少一正电层及至少一负电层；一连接层，设置于该交联迭层上；以及一蛋白质固定层，设置于该连接层上。于本发明的糖化血红素侦测芯片中，生物分子层除了第一抗血红素抗体外，亦可包含其他类型可同时辩识血红素与糖化血红素的抗体、抗原配体、受体、或胜肽。本发明通过第一抗血红素抗体使血液样品中的糖化血红素及血红素与侦测芯片结合，再依续加入生物分子侦测层以侦测血液样品中血红素及糖化血红素的浓度。于此，生物分子侦测层可包含抗糖化血红素抗体、第二抗血红素抗体或其他可分辨血红素与糖化血红素的分子，再利用连接有放光分子的非专一性的二级抗体，由侦测放光分子的光强度，以计算血液样品中糖化血红素的相对浓度。此外，本发明提供一种糖化血红素侦测芯片，包括(a)提供一糖化血红素侦测芯片，该糖化血红素侦测芯片包括一基材；以及一生物分子层，该生物分子层设置于该基材上，且该生物分子层包含一第一抗血红素抗体；(b)于该糖化血红素侦测芯片上加入一血液样品，使该血液样品的血红素及/或糖化血红素与该糖化血红素侦测芯片结合；(C)加入一抗糖化血红素抗体或一第二抗血红素抗体至步骤(b)的糖化血红素检测芯片，使该抗糖化血红素抗体与该血液样品的糖化血红素结合，或使该第二抗血红素抗体与该血液样品的血红素结合；(d)加入一非专一性二级抗体至步骤(C)的糖化血红素检测芯片，使该非专一性二级抗体分别与该抗糖化血红素抗体或该第二抗血红素抗体结合，其中，该非专一性二级抗体连接一放光分子；(e)提供一光源，该光源照射至步骤(d)的糖化血红素侦测芯片上，使该放光分子释放一放射光；(f)通过一侦测装置侦测步骤(e)中该糖化血红素检测芯片上该放光分子的放射光强度。于本发明糖化血红素的侦测方法中，步骤(b)可通过虹吸法或沾覆法，将该血液 样品加入该糖化血红素侦测芯片。此外，于加入血液样品至侦测芯片前，亦可先通过步骤(b’ )过滤收集的血液样品，例如离心或通过层析管柱等，将血液进行初步的过滤，以利样品与芯片结合进行后续分析。于本发明糖化血红素的侦测方法中，步骤(C)可分别在两个不同的糖化血红素侦测芯片(侦测芯片上已包含血液样品)上分别加入抗糖化血红素抗体或第二抗血红素抗体，或者，可于同一侦测芯片(侦测芯片上已包含血液样品)的不同区域上分别加入抗糖化血红素抗体或第二抗血红素抗体，使抗糖化血红素抗体与血液样品中的糖化血红素结合，并且，第二抗血红素抗体可与血液样品中的血红素结合。于本发明糖化血红素的侦测方法中，步骤(d)是加入一个连结有放光分子的非专一性二级抗体，通过非专一性二级抗体与上述的抗糖化血红素抗体或第二抗血红素抗体的良好键结力，再利用放光分子的光强度分别计算糖化血红素与血红素的分子数目。由于非专一性二级抗体连结有一放光分子，当提供一激发光照射于糖化血红素侦测芯片上，放光分子会受到光激发而释放一放射光。于此，较佳还加入一放光检验试剂，如化学放光检验试剂，以大幅增加放光分子的放光强度。于此，放光分子可为一种可与非专一性二级抗体产生良好键结的酵素分子，如辣根过氧化物酶(HRP)。于本发明糖化血红素的侦测方法中，为了确保糖化血红素的侦测准确性，设置于侦测芯片上的第一抗血红素抗体与步骤(c)中加入的抗糖化血红素抗体及第二抗血红素抗体为相互不同物种的抗体。例如第一抗血红素抗体可为山羊抗血红素抗体；而第二抗血红素抗体可为老鼠抗血红素抗体，抗糖化血红素抗体可为老鼠抗糖化血红素抗体；而非专一性二级抗体可为老鼠二级抗体。当步骤(d)加入与抗糖化血红素抗体及第二抗血红素抗体相同物种的非专一性二级抗体时，非专一性二级抗体仅分别与相同物种的抗糖化血红素抗体及第二抗血红素抗体结合，而不会与不同物种的第一抗血红素抗体结合，因而可避免连接放光分子的非专一性二级抗体与第一抗血红素抗体结合的可能性，由此确保糖化血红素的侦测准确性。于本发明的糖化血红素侦测方法中，步骤(f)是通过一侦测装置侦测同一侦测芯片不同区域或不同侦测芯片上步骤(e)中的放射光强度。于此，选用的侦测装置，例如电荷耦合侦测器(CCD)或光侦测仪，通过侦测装置分别侦测不同区域或不同侦测芯片上放光分子的放射光强度，由此推算血液中糖化血红素的含量百分比。因此，本发明的糖化血红素侦测芯片可通过生物分子层的第一抗血红素抗体将血红素及糖化血红素分子与本发明的侦测芯片结合，再通过生物分子侦测层的第二抗血红素抗体及抗糖化血红素抗体辨识血红素中的糖化血红素，由此测得血液中糖化血红素的含量。据此，本发明提供一种检测糖化血红素的侦测芯片，利用生物分子侦测层与连接放光分子的非专一性二级抗体计算血液中糖化血红素的含量，以此浓度反映近期三个月内的平均血糖值，取得更为精准的平均血糖浓度。以下是由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明亦可由其他不同的具体实施例加以施行或应用，本说明书中的各项细节亦可针对不同观点与应用，在不悖离本发明的精神下进行各种修饰与变更。制备例I-制备PDMS软性基板的糖化血红素侦测芯片本发明用以侦测血液中糖化血红素的侦测芯片，可提高血糖侦测的准确性与可靠性，其侦测芯片是通过下列步骤制作首先，将PDMS经上述多电层的氟化物修饰(参考Anal. Chem. 82,7804-7813，·2010)，其主要步骤是先将经氧电浆活化后的基材分别涂布0. 25% (w/v)PEI与0. 5% (w/v)的PAA，并且反复重复4次，以形成设置于交联迭层。于涂布PEI与PAA的过程中间，每次利用20ml的去离子水清洗基板，再涂布下一层。其中，还加入30mg/ml的EDC与10mg/ml的NHS (交联试剂)，使正电层与负电层之间产生酰胺键结。于反复涂布PEI与PAA达4次后，再于最上层涂布PEI层，形成包含交错堆栈正电层(PEI)与负电层(PAA)的交联迭层。而后，加入pH 7. 4、1000 U g/ml丙酰酸-聚乙二醇_N_羟基琥珀酰亚胺(ACRL-PEG-NHS)，使ACRL-PEG-NHS与PEI的胺基反应，于交联迭层上形成一用以连接蛋白质固定层的连接层。接着，加入15% (v/v)溶于乙醇的FD、1% (v/v)溶于乙醇的AA、以及I % (w/v)的DPA光起始剂，于室温下以365nm的光持续照射40分钟，再利用乙醇清洗芯片表面，并且置于氮气环境中干燥。之后，利用30mg/ml的EDC及10mg/ml的NHS混合溶液持续培养芯片表面2小时。于清洗过后，活化的芯片可置于20 u g/ml的蛋白质G溶液中培养4小时，使蛋白质G与AA形成良好的键结。最后，将包含蛋白质G的侦测芯片浸泡于Iy g/ml的山羊抗血红素抗体(溶于PBST缓冲溶液)中持续2小时，再以PBST缓冲溶液冲洗侦测芯片的表面，以移除未附着于侦测芯片的第一抗血红素抗体，制得含有第一抗血红素抗体的糖化血红素侦测芯片。据此，本发明通过上述方法制作一种用以检测糖化血红素的侦测芯片。如图I所示，该侦测芯片I包括一软性基板111设置于最底部，及一修饰层112设置于软性基板111的上方；以及一生物分子层12设置于基材11上，其中，该生物分子层12包含一第一抗血红素抗体121，用以结合血样品中的糖化血红素或血红素分子。制备例2-制备玻璃基板的糖化血红素侦测芯片本实施例大致的制备方式如同制备例I所述，其不同之处仅在于，本制备例是使用玻璃基板取代制备例I的PDMS基板。据此，本制备例所制得的糖化血红素侦测芯片与制备例I所制得的糖化血红素侦测芯片具有相同结构，其不同之处仅在于基板的材质。实施例I-使用两个糖化血红素PDMS侦测芯片使用本发明制备例I所制作的糖化血红素侦测芯片，通过生物分子层的第一抗血红素抗体，可将血液样品中的糖化血红素及血红素结合至侦测芯片上。之后，分别于两个侦测芯片上加入不同的抗体(第一抗血红素抗体及抗糖化血红素抗体)，由此于不同的侦测芯片上分别计算血液样品中血红素及糖化血红素的数目。利用照光及侦测装置侦测不同侦测芯片上结合的糖化血红素与血红素的数目多寡，以推算血液中糖化血红素的浓度)。本实施例详细的糖化血红素的侦测方法包括下列步骤首先，利用本发明制备例I所制作的糖化血红素侦测芯片进行侦测，由于侦测芯片包含第一抗血红素抗体，通过此抗体可将血液样品中的糖化血红素及血红素分子停留于侦测芯片上。因此，本发明的糖化血红素 侦测芯片可用于侦测血液中糖化血红素的相对于总血红素的浓度。然后，收集受测者的血液样品，并通过一般常用的过滤方式，例如离心或通过层析管柱等，将血液进行初步的过滤，以利血液样品进行后续分析。之后，通过虹吸法使血液样品吸附至侦测芯片上。如图2所示，细针头31可戳破皮肤，使4iU的血液样品通过虹吸法吸附在侦测芯片32上。此时，血液样品中的血红素与糖化血红素将与侦测芯片上的山羊抗血红素抗体(即，第一抗血红素抗体)产生良好的键结。如图3所示，当血红素431及糖化血红素432通过第一抗血红素抗体421与侦测芯片411、412结合后，分别在不同侦测芯片411、412上加入0. g/ml溶于PBST缓冲溶液的老鼠抗血红素抗体441 (即，第二抗血红素抗体)及老鼠抗糖化血红素抗体442 (即，抗糖化血红素抗体)，使老鼠抗血红素抗体441于第一侦测芯片411上仅与血红素431产生专一性键结；并且，老鼠抗糖化血红素抗体442于第二侦测芯片412上仅与糖化血红素432产生专一丨I"生键结。接着，待血红素431与糖化血红素432分别与其抗体441、442产生良好的键结后，分别于侦测芯片411、412上加入0. 4 ii g/ml溶于PBST缓冲溶液的老鼠非专一性二级抗体451，该老鼠非专一性二级抗体451上连接有辣根过氧化物酶(HRP)的放光分子452，以作为发光的酵素分子。由于芯片411上仅加入老鼠抗血红素抗体441，以辨识血液中的血红素431，通过计算侦测芯片411上放光分子452的放光强度可推知血液样品中血红素的分子数目；而芯片412上仅加入老鼠抗糖化血红素抗体442，以辨识血液中的糖化血红素432，通过计算侦测芯片412上放光分子452的放光强度可推知血液样品中糖化血红素的分子数目。于此，老鼠非专一性二级抗体451应与第二抗血红素抗体441及抗糖化血红素抗体442为同一物种的抗体，故该老鼠非专一性二级抗体451仅与上述两种老鼠抗体441、442产生良好键结，而不会与不同物种的第一抗血红素抗体421键结，由此确保本发明的侦测准确性。之后，于侦测芯片上加入化学放光增强试剂，使辣根过氧化物酶受到光的激发而化学放光。当两个侦测芯片上照射特定波长的激发光，会使老鼠非专一性二级抗体上的辣根过氧化物酶受到光激发后释放出一放射光。之后，利用CO)(UVP, Bio-Imaging Systems, CA, USA)撷取画面影像,通过两个侦测芯片上的光强度推算血液样品中糖化血红素与血红素的数目，以下列式I计算血液中糖化血红素的含量百分比HbAlc (% ) = HbAlc 浓度 / 总血红素浓度 X 100% [式 I]
其中，HbAlc浓度可代入连接在HbAlc上放光分子的放光强度平均值，而总血红素浓度则可代入连接在血红素上放光分子的放光强度平均值。实验组I-使用两个糖化血红素PDMS侦测芯片侦测第一样品实验组I是通过上述试验方法侦测血液样品中血红素的浓度，于本实验组中，是使用两个糖化血红素侦测芯片(即，第一侦测芯片及第二侦测芯片)进行检测，但亦可在同一芯片但不同抗原决定基进行检测。其中，在侦测芯片上加入血液样品后，分别加入第二抗血红素抗体及抗糖化血红素抗体至第一侦测芯片及第二侦测芯片。而后，通过连结有放光分子的非专一性二级抗体与第二抗血红素抗体产生良好的键结，计算侦测芯片上的放光强度。由于第二抗血红素抗体仅辨识侦测芯片上的血红素分子，因此，计算侦测芯片上的放光强度可得知血红素的总量。在此，共进行三次重复实验，以分别取得并计算出ffiAlcc及血红素的放光强度的平均值。
实验组2-使用两个糖化血红素PDMS侦测芯片侦测第二样品本实验组的实验方法与实验组I相同，除了本实验组所使用的另一血液样品。经由实验组I及2的实验结果所得的芯片上放光强度如下表I所示，且通过前述式1，则可分别计算出实验组I及2其所使用的血液样品中糖化血红素(HbAlc)相对浓度)。表I
HbAlc放光强度平均血红素放光强度平HbAlc相对浓度
值均值(％)----
实验组 I丨 365476597626623
实验组23023474512453359实施例2-使用单一糖化血红素PDMS侦测芯片本实施例是使用本发明制备例I所制作的糖化血红素PDMS侦测芯片，且检测方法与实施例I相同，除了实施例I是使用两个侦测芯片，以分别侦测糖化血红素及血红素的含量；而本实施例则是使用单一芯片，但在同一芯片但不同抗原决定基进行检测，即将此单一芯片分成两个区域，以分别侦测糖化血红素及血红素的含量。实施例3-使用两个糖化血红素玻璃侦测芯片实验组3-使用两个糖化血红素玻璃侦测芯片侦测第一样品本实施例是使用本发明制备例2所制作的糖化血红素玻璃侦测芯片，且检测方法与实施例I相同。经由在两个侦测芯片上加入血液样品后，再分别加入第二抗血红素抗体及抗糖化血红素抗体至两个侦测芯片上，并添加连接有连结有放光分子的非专一性二级抗体，以通过计算侦测芯片上的放光强度，而可取得并计算出血液样品中ffiAlc及血红素的放光强度的平均值。结果如下表2所示。表 权利要求
1.一种糖化血红素侦测芯片，包括 一基材；以及 一生物分子层，该生物分子层设置于该基材上，且该生物分子层包含一第一抗血红素抗体。
2.如权利要求I所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该基材包括一基板及一修饰层，且该修饰层设置于该基板及该生物分子层之间。
3.如权利要求2所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该基板为一硬质基板或一软性基板。
4.如权利要求3所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该硬质基板为一玻璃基板。
5.如权利要求3所述的糖化血红素侦测芯片，其中，该软性基板为一PDMS基板。
6.一种糖化血红素的侦测方法，包括 (a)提供一糖化血红素侦测芯片，该糖化血红素侦测芯片包括一基材；以及一生物分子层，该生物分子层设置于该基材上，且该生物分子层包含一第一抗血红素抗体； (b)于该糖化血红素侦测芯片上加入一血液样品，使该血液样品的血红素及/或糖化血红素与该糖化血红素侦测芯片结合； (C)加入一抗糖化血红素抗体或一第二抗血红素抗体至步骤(b)的糖化血红素检测芯片，使该抗糖化血红素抗体与该血液样品的糖化血红素结合，或使该第二抗血红素抗体与该血液样品的血红素结合； (d)加入一二级抗体至步骤(C)的糖化血红素检测芯片，使该二级抗体分别与该抗糖化血红素抗体或该第二抗血红素抗体结合，其中，该二级抗体连接一放光分子； (e)提供一光源，该光源照射至步骤(d)的糖化血红素侦测芯片上，使该放光分子释放一放射光； (f)通过一侦测装置侦测步骤(e)中该糖化血红素检测芯片上该放光分子的放射光强度。
7.如权利要求6所述的侦测方法，其中，包括步骤(g):分别计算于步骤(c)中加入该抗糖化血红素抗体得到的放射光强度，以及于步骤(C)中加入该第二抗血红素抗体得到的放射光强度，以计算该糖化血红素相对于血红素的含量百分比。
8.如权利要求6所述的侦测方法，其中，该放光分子为一酵素分子。
9.如权利要求8所述的侦测方法，其中，该酵素分子为辣根过氧化物酶。
10.如权利要求6所述的侦测方法，其中，该第一抗血红素抗体与该第二抗血红素抗体为相互不同物种的抗体。
11.如权利要求6所述的侦测方法，其中，该第一抗血红素抗体与该抗糖化血红素抗体为相互不同物种的抗体。
12.如权利要求6所述的侦测方法，其中，该二级抗体、该抗糖化血红素抗体及该第二抗血红素抗体为相同物种的抗体。
13.如权利要求6所述的侦测方法，其中，该侦测装置为一电荷耦合侦测器或一光侦测仪。
14.如权利要求6所述的侦测方法,其中，该基材包括一基板及一修饰层,且该修饰层设置于该基板及该生物分子层之间。
15.如权利要求14所述的侦测方法，其中，该基板为一硬质基板或一软性基板。
16.如权利要求15所述的侦测方法，其中，该硬质基板为一玻璃基板。
17.如权利要求15所述的侦测方法，其中，该软性基板为一PDMS基板。
18.如权利要求6所述的侦测方法，其中，于该步骤(b)前包括一步骤(b’)过滤该血液样品。
19.如权利要求6所述的侦测方法，其中，于步骤(b)中，是通过虹吸法或沾覆法，将该血液样品加入该糖化血红素侦测芯片。
20.如权利要求6所述的侦测方法，其中，于步骤(d)后包括一步骤(d’)加入一放光检验试剂。
全文摘要
一种糖化血红素的侦测芯片及其侦测方法，该侦测芯片包括一基材；以及一生物分子层，设置于该基材上；其中，该生物分子层可为一第一抗血红素抗体。该生物分子层可与血液样品中的糖化血红素与血红素结合。之后，加入生物分子侦测层。其中，该生物分子侦测层包含抗糖化血红素抗体以及第二抗血红素抗体可由结合不同的抗原决定基以分辨血红素中的糖化血红素。通过本发明糖化血红素的侦测芯片及侦测方法，可侦测糖化血红素相对于总血红素的含量。
文档编号G01N33/66GK102955034SQ201210289540
公开日2013年3月6日 申请日期2012年8月15日 优先权日2011年8月15日
发明者吴至行, 陈皇翰, 陈淑慧, 蔡美玲, 欧弘毅 申请人:吴至行
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