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专利名称：生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法及检测方法
技术领域：
本发明涉及乳制品检测领域，特别涉及一种生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法及检测方法。
背景技术：
优质生牛乳是乳业发展的基础。生牛乳营养丰富，是天然的优良培养基，微生物可在适宜条件下快速生长，使生牛乳变质无法饮用、加工。细菌总数指标的测定是衡量生牛乳品质的重要指标，对乳制品的生产和质量监控有着重要的指导意义。目前在行业中被广泛应用细菌总数测定方法包括标准平板计数法(SPC法)与流式细胞法，这两种方法在实际应用中存在一定缺陷。
SPC法的主要缺陷包括①SPC法对牛乳收集现场条件的要求较高，国内的多数牛乳收集现场条件简陋，无法进行SPC法操作 级SPC法操作繁琐，需要操作人员具有一定的微生物实验技能，这限制了 SPC法的推广使用SPC法检测结果滞后性强，无法在第一时间快速反映生牛乳的细菌总数指标。
流式细胞法的主要缺陷包括检测成本高，每个样品的检测成本为5RMB左右，大量采样将出现成本倒挂的问题。发明内容
本发明的目的在于克服现有的生牛乳细菌总数测定方法所具有的缺陷，从而提供一种快速、有效、方便的细菌总数测定试纸与测定方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，包括
步骤I)、对滤纸进行干燥处理；
步骤2)、对干燥处理后的滤纸做第一次浸泡，在此次浸泡过程中所采用的浸泡液为表面活性剂与缓冲盐的水溶液，该水溶液的PH值在6. 8-8. O之间，所述滤纸在该浸泡液中浸泡I 10分钟；
步骤3)、烘干经过第一次浸泡的滤纸；
步骤4)、对烘干后的滤纸做第二次浸泡，此次浸泡过程中所采用的浸泡液为刃天青溶液与硫酸钙溶液混合而成的反应液，所述刃天青溶液的质量百分比为O. 1 % 1%，所述硫酸钙溶液的质量百分比为O. 8% 3. 8%，所述刃天青溶液与硫酸钙溶液之间的体积比为 1:1 10:1，浸泡时间为I 10分钟；
步骤5)、对经过第二次浸泡后的滤纸再次烘干。
上述技术方案中，在所述的步骤2)中，所述表面活性剂采用非离子表面活性剂。
上述技术方案中，在所述的步骤2)中，所述缓冲盐采用磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液或硼酸缓冲液。
上述技术方案中，在步骤3)中，所述烘干操作的烘干温度为50 90°C，烘干时间在5_40min之间。
上述技术方案中，所述滤纸为中速滤纸。
本发明还提供了一种生牛乳细菌总数检测试纸，
采用所述的制作方法制备而成。
本发明还提供了一种生牛乳细菌总数的检测方法，包括
步骤A)、选取采用所述的制作方法制备而成的试纸；
步骤B)、将待检测样品滴到步骤A)所选取的试纸上；
步骤C)、待5分钟后检测试纸的颜色，若试纸颜色为蓝色，则细菌总数 (^XlO4Cfumr1 ;若试纸颜色为紫色，则细菌总数为30-130X IO4CfumL-1 ;若试纸颜色为粉色，则细菌总数彡200 X IO4Cfumr1 ο
本发明的优点在于
快速、有效、方便的细菌总数测定方法对生牛乳初期的收集过程中对品质的控制有重要意义。


图1是本发明的生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法的流程图。
具体实施方式
现结合附图对本发明作进一步的描述。
鉴于现有的用于生牛乳的细菌总数检测方法所存在的不足，本发明通过试纸检测的方法实现对生牛乳中细菌总数的检测。
本发明的用于测定生牛乳细菌总数的试纸按如下步骤制作
步骤一、对滤纸进行干燥处理。
在后续的步骤中，需要将滤纸浸泡到药液中，为保证浸泡药液后试纸中的药液浓度一致，需对滤纸中的水分进行去除。在本实施例中，所采用的干燥处理方法包括将滤纸在硫酸铜干燥皿中放置20-40min。在其他实施例中，也可采用其他类型的干燥方法，如热风干燥、微波干燥、冷冻干燥等。
作为一种优选实现方式，在本实施例中所述滤纸为中速滤纸，在其他实施例中，也可采用其他类型的滤纸。
步骤二、对干燥处理后的滤纸做第一次浸泡，在此次浸泡过程中所采用的浸泡液为表面活性剂、缓冲盐的水溶液，该水溶液的PH值的大小在6. 8-8. O之间，所述滤纸在该浸泡液中浸泡I 10分钟。
在本实施例中，所述表面活性剂采用非离子表面活性剂,如Tween80或span 80; 所述缓冲盐采用磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液或硼酸缓冲液。
步骤三、对经过第一次浸泡后的滤纸加以烘干。
本实施例中，所述烘干操作的烘干温度为50 90°C，烘干时间在5_40min之间。
步骤四、对烘干后的滤纸做第二次浸泡，此次浸泡过程中所采用的浸泡液为刃天青溶液与硫酸钙溶液混合而成的反应液，浸泡时间约I 10分钟。
在本实施例中，所述刃天青溶液的质量百分比为O. 1% 1%，所述硫酸钙溶液的质量百分比为O. 8% 3. 8%，所述刃天青溶液与硫酸钙溶液之间的体积比为1:1 10:1。
步骤五、对经过第二次浸泡后的滤纸再次烘干。
在本实施例中，所述烘干操作在4 10° C的温度条件下通过自然风干干燥。
在得到经由上述步骤所生成的试纸后，建立试纸与待测样品反应后的颜色与细菌总数之间的对应关系。
在一个实施例中，选取细菌总数彡200X104cfuml_l的样品，用UHT乳以1:1、 1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:19 比例稀释。将待测样品混匀，取 O.1ml 滴在试纸上，于lmin、5min、10min记录颜色变化，并应用标准平板计数法(SPC法)检测样品细菌总数。结果如下
表ISPC法与试纸法检测结果
权利要求
1.一种生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，包括 步骤1)、对滤纸进行干燥处理； 步骤2)、对干燥处理后的滤纸做第一次浸泡，在此次浸泡过程中所采用的浸泡液为表面活性剂与缓冲盐的水溶液，该水溶液的PH值在6. 8-8. O之间，所述滤纸在该浸泡液中浸泡1 10分钟； 步骤3)、烘干经过第一次浸泡的滤纸； 步骤4)、对烘干后的滤纸做第二次浸泡，此次浸泡过程中所采用的浸泡液为刃天青溶液与硫酸钙溶液混合而成的反应液，所述刃天青溶液的质量百分比为0. 1% 1%，所述硫酸钙溶液的质量百分比为0. 8% 3. 8%，所述刃天青溶液与硫酸钙溶液之间的体积比为1:1 10:1，浸泡时间为I 10分钟； 步骤5)、对经过第二次浸泡后的滤纸再次烘干。
2.根据权利要求1所述的生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，其特征在于，在所述的步骤2)中，所述表面活性剂采用非离子表面活性剂。
3.根据权利要求1所述的生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，其特征在于，在所述的步骤2)中，所述缓冲盐采用磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液或硼酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，其特征在于，在步骤3)中，所述烘干操作的烘干温度为50 90°C，烘干时间在5-40min之间。
5.根据权利要求1所述的生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，其特征在于，所述滤纸为中速滤纸。
6.一种生牛乳细菌总数检测试纸，其特征在于， 采用权利要求1-5之一的制作方法制备而成。
7.一种生牛乳细菌总数的检测方法,包括 步骤A)、选取采用权利要求1-5之一的制作方法制备而成的试纸； 步骤B)、将待检测样品滴到步骤A)所选取的试纸上； 步骤C)、待5分钟后检测试纸的颜色，若试纸颜色为蓝色，则细菌总数≤40*104cfumL ;若试纸颜色为紫色，则细菌总数为So-1SoXio4CfumL-1 ;若试纸颜色为粉色，则细菌总数≥200 X104Cfumr1 。
全文摘要
本发明涉及一种生牛乳细菌总数检测试纸的制作方法，包括对滤纸进行干燥处理；对干燥处理后的滤纸做第一次浸泡，在此次浸泡过程中所采用的浸泡液为表面活性剂与缓冲盐的水溶液，该水溶液的pH值在6.8-8.0之间，滤纸在该浸泡液中浸泡1～10分钟；烘干经过第一次浸泡的滤纸；对烘干后的滤纸做第二次浸泡，此次浸泡过程中所采用的浸泡液为刃天青溶液与硫酸钙溶液混合而成的反应液，刃天青溶液的质量百分比为0.1%～1%，硫酸钙溶液的质量百分比为0.8%～3.8%，刃天青溶液与硫酸钙溶液之间的体积比为1:1～10:1，浸泡时间为1～10分钟；对经过第二次浸泡后的滤纸再次烘干。
文档编号G01N21/78GK103048316SQ20121053240
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者富鑫 申请人:内蒙古伊利实业集团股份有限公司