专利名称：一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法及其使用的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明公开一种检测方法，具体的说，是一种利用化学试剂检测祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，属于医药检测技术领域。
背景技术：
风湿痛，风湿骨痛，坐骨神经痛，关节炎等是一类常见�。殉晌跋熳畲蟮娜蛐约膊�。2001年据世界卫生组织报道全世界此类患者超过3. 5亿，在亚洲地区，每6人中就有1人患此类疾�。泄笤颊�1亿人，而且人数还不断增加；更为严重的是此类疾病致残性强，严重影响人类健康。此类疾病中医均归在祛风湿药的治疗范筹中。由于病程长， 难于根治，所以患者需要反复用药；而中成药往往止痛效果差，不能起到立竿见影的作用， 为此，不法厂家为了达到快速的止痛效果，非法添加一些止痛作用较强的化学药，使患者在不知情的情况下长期服用添加有一定量的副作用较大的化学药，造成极大的�：Γ鱿盅现夭涣挤从�。近年来，中成药非法添加化学药品的事件屡禁不止，严重影响患者身心健康，甚至对中药健康发展造成极大�：�。常见的化学止痛药有吡罗昔康、保泰松、芬布芬、曲马多等。其中吡罗昔康是非甾体类抗炎药，其不良反应为中性粒细胞减少，嗜酸性粒细胞增多， 头晕，肝功能异常，血小板减少，中毒性上皮坏死等。因此在中成药中严禁使用。申请人:在日常监督检查中发现，许多标示为纯中药的制剂其内容物有白色粉末状物质，申请人认为该药不是纯中药制剂。针对这个问题，申请人对其进行追踪分析，通过紫外扫描、高效液相色谱法、薄层色谱等方法对这些药品进行试验，发现其含有吡罗昔康成份，但是，紫外扫描、高效液相色谱、薄层色谱等仪器分析法所使用的仪器价格昂贵，成本高，而且需要专门培训的专业人员才能操作，这给日常监督检查带来了一定的困难。为此， 对祛风湿中成药中非法添加吡罗昔康建立一种快速检测的方法，以适应监管的需要，显得尤为必要。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种简单、易操作，专属性强，准确可行的快速检测祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法及其使用的试剂盒。本发明的前一技术方案是这样的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，依次包括下述步骤1)取1份量供试品置于具塞试管中，加有机溶剂5ml，振摇得到供试品粗提液；幻用有机系微孔滤膜滤过粗提液得到供试液，取供试液Iml置试管中；幻沿装有供试液的试管管壁滴加FeCl3试液1-2滴；4)观察试管内的颜色变化；所述的1份量供试品为胶囊1粒或者片剂1片或者丸剂一次服用量1/10或者液体制剂一次服用量1/2 ；所述的有剂溶剂为丙酮或三氯甲烷。上述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，所述的片剂和丸剂先研细，再置于具塞试管中。上述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，所述的有色包衣片剂用水洗去色衣层再研细，然后置于具塞试管中。上述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，所述的有剂溶剂为丙酮。上述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，步骤4)所述的试管内的颜色与空白溶液对照比较。本发明的后一技术方案是这样的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法所使用的试剂盒，包括盒体，盒体内设有至少一个盛有5ml丙酮的具塞试管，一个带滴头的盛有 5ml FeCl3的试液瓶，至少一个5ml的一次性注射器，至少两个反应试管以及有机系微孔滤膜。本发明的试验原理吡罗昔康结构式参阅附图1，分子式=C15H13N3O4S由于吡罗昔康结构中有-0H，其他解热镇痛药和甾体类激素药中除-COOH结构外， 仅水杨酸含-0H，但该成分遇三氯化铁试液呈紫堇色，而吡罗昔康显红色，为此，申请人对布洛芬、芬布芬、萘普生、阿司匹林、对乙酰氨基酚、地塞米松、泼尼松等含-COOH或-OH成分药物进行试验，均不呈红色，仅吡罗昔康呈红色反应，为此选用三氯化铁试液作快筛试剂。且吡罗昔康在丙酮、三氯甲烷中溶解性较好，可以把中药成份中大部分极性成份排除，而三氯甲烷由于毒性较大，因此优选用丙酮作溶剂试验。样品中部分中药的丙酮溶液颜色较深，影响结果的观察，必要时可取相应的空白溶液进行对照比较加以判断结果。本发明对32批样品所用药材种进行检索，在所用药材中白芷、威灵仙、独活、补骨脂、香加皮等五种药材能与三氯化铁试液反应，但其用量�。也怀屎焐从Γ什桓扇沤峁Ｆ溆嗑从杏肴然砸撼屎焐从Ρǖ�。与现有技术相比，本发明具有如下优点①操作简便本方法仅用一种溶剂，通过振摇提取滤过，然后加入反应试剂，即可观察，这对于即使仅有初中化学水平的人员均能完成整个操作。②时间短具有初步试验水平的人员，在2分钟内均能完成全部实验。③反应灵敏、无干扰经薄层色谱法和高效液相色谱法(DAD)验证，检测限为 0. ang，低于吡罗昔康临床使用量的10mg，对32种祛风湿药检测品种中所用113种中药成分进行检索，其中报导白芷、威灵仙、独活、补骨脂、香加皮等五种药材成分与三氯化铁试液反应，但均产生紫堇色，所以对检测无干扰。④试剂配制简便、易得、且对环境影响�。看谓鲇�1 5ml丙酮，所用器械经过简
单处理可重复使用。⑤该方法阳性准确率达100%，漏检率、误检率为0%，为药品监督提供了一个方便、快捷、准确、灵敏度高的检测方法。⑥试剂盒携带方便，适应于外出对药品的抽检筛查。
图1是本发明吡罗昔康结构式。
具体实施方式
实验方法1供试液的制备取胶囊1粒或者片剂1片或者丸剂一次服用量的1/10或者液体制剂一次服用量的1/2，片剂(色衣片用水洗去色衣层)和丸剂先研细或剪细，置具塞试管中，加丙酮5ml， 振摇1分钟，得到供试品粗提液；用有机系微孔滤膜滤过供试品粗提液得到供试液，取供试液Iml置试管中，作为供试品溶液。2显色反应沿盛有供试液的试管管壁滴加FeCl3试液1_2滴。3 结果观察试管内的颜色，若供试液显红色，则可初步判定样品中含有吡罗昔康，否则为阴性结果。对于样品中部分中药的丙酮溶液颜色较深，影响结果的观察，应配制相应的空白溶液进行对照比较以判断结果，即另取一试管加入供试液lml，与供试液加入!^eCl3试液 1-2滴的反应管颜色进行比较。其次由于白芷、威灵仙、独活、补骨脂、香加皮等五种药材成分可与三氯化铁试液反应产生紫堇色，因此在滴加FeCl3试液时，沿试管壁缓慢加入，观察试剂与样品接触面的颜色变化，不要马上振摇。实施例1取秘方风湿王胶囊1粒加入到盛有5ml丙酮的具塞试管中，振摇1分钟，用5ml的一次性注射器吸取适量，用有机系微孔滤膜滤过，取滤液Iml置反应试管中，用带滴头的盛有5ml FeCl3试液瓶滴加1_2滴!^eCl3，结果呈红色，表明样品含吡罗昔康，该结果与实际相符。实施例2取特效风湿王胶囊1粒加入到盛有5ml丙酮的具塞试管中，振摇1分钟，用5ml的一次性注射器吸取适量，用有机系微孔滤膜滤过，取滤液Iml置反应试管中，用带滴头的盛有5mlFeCl3试液瓶滴加1_2滴!^eCl3,结果呈红色，表明样品含吡罗昔康，该结果与实际相符。实施例3取麝香风湿胶囊1粒加入到盛有5ml丙酮的具塞试管中，振摇1分钟，用5ml的一次性注射器吸取适量，用有机系微孔滤膜滤过，取滤液Iml置反应试管中，用带滴头的盛有 5mlFeCl3试液瓶滴加1-2滴狗(13，结果不呈红色，表明样品不含吡罗昔康，该结果与实际相符。以丙酮作为溶剂，对不同品种、生产厂家和批号的祛风湿中成药添加吡罗昔康检测筛查试验实例见表1。三氯甲烷作为溶剂，对不同品名、生产厂家和批号的祛风湿中成药添加吡罗昔康检筛查试验实例见表2。结果判断如反应试管内试液呈红色，可初步判定为含吡罗昔康；否则，为阴性结^ ο样品测定对32批样品进行试验，结果五批样品呈红色反应，其余均不发生颜色变化，此结果与确证结果一致。
4快筛方法达到的技术指标根据“中成药和保健食品中擅自添加化学成分的快速检测方法指导原则与技术要求”的要求，对快速检测方法技术参数见表3。5方法专属性及加样试验5. 1用本方法对32批样品进行试验，除“特效风湿王胶囊”、“秘方风湿王胶囊”“复方风湿灵胶囊”、“风湿骨康灵胶囊”，“骨痛宁胶囊”等五批呈阳性外，其余27批样品均呈阴性，并用紫外分光光度法、薄层层析法和液相色谱法三种不同方法对样品进行验证，均与筛
查结果一致。5. 2并对32批样品所用药材m种进行检索，在所用药材中白芷、威灵仙、独活、补骨脂、香加皮等五种药材会与三氯化铁试液反应，但其用量�。也怀屎焐从Γ什桓扇沤峁�。其余均未有与三氯化铁试液呈红色反应报导。5. 3据报导在化学药中，醇类、羧酸及其盐类物质可与三氯化铁试液显色，但均为紫色或棕色，故对本方法无干扰。5. 4取胶囊剂、丸剂、片剂三种剂型阴性样品，按最低检测限加入吡罗昔康对照品后，按试验方法试验，结果显阳性反应。以上结果表明，本发明专属性高，无干扰。6结果验证本筛查结果经广东省药品检验所验证，结果均符合筛查结果。验证方法有三种。6. 1紫外分光光度法取样品1粒(或1片或1丸，包衣片除去包衣，色衣片用水洗去色衣层，研细)置IOOml量瓶中，加0. lmol/L盐酸甲醇溶液适量，振摇溶解，并稀释至刻度，摇勻，滤过，滤液按紫外分光光度法测定与本发明所述的方法检测结果一致。6. 2薄层色谱法
取样品1粒(或1片或1丸，包衣片除去包衣，色衣片用水洗去色衣层，研细)加丙酮5ml溶解，滤过作供试品溶液。另取吡罗昔康对照品适量，加丙酮稀释成每Iml含0. 2mg 吡罗昔康的对照品溶液，按薄层色谱法，吸取上述两种溶液5 μ 1，点于同一硅胶GF254薄层板，以甲苯-冰醋酸(95 5)为展开剂，展开后，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。结果与本发明所述的方法检测结果一致。6. 3HPLC法二极管阵列检测验证用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0. 025mol/L磷酸溶液(三乙胺调 PH3.0)-乙腈(50 35 15)为流动相，检测波长334nm，取样品1粒(或1片或1丸)，置 IOOml量瓶中，加0. 9%盐酸的75%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇勻，滤过，精密量取滤液 5ml，置50ml量瓶中，加上述溶液稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液。另取吡罗昔康对照品适量，精密称定，加上述溶液稀释成每Iml含吡罗昔康1 μ g溶液作对照品溶液，照高效液相色谱法，分别精密量取上述溶液20 μ 1注入色谱仪，记录色谱图。结果与本发明所述的方法检测结果一致。从上可以看出，上述快速筛查方法及试剂盒操作简单、专属性强、灵敏度高、准确度高、不需要专门的设备、避免了使用毒性较大的或强腐蚀性的试剂，适合于现场操作，能够满足基层的药品监督检查需要。本发明一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法所使用的试剂盒，包括盒体，盒
6体内设有至少一个盛有5ml丙酮的具塞试管，一个带滴头的盛有5ml的!^eCl3试液瓶，至少一个5ml的一次性注射器，至少两个反应试管以及有机系微孔滤膜；这种组合的试剂盒携带方便，适应于外出对药品的抽检筛查。表 权利要求
1.一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，其特征在于，依次包括下述步骤1)取1 份量供试品置于具塞试管中，加有机溶剂5ml，振摇得到供试品粗提液；幻用有机系微孔滤膜滤过粗提液得到供试液，取供试液Iml置试管中；幻沿盛有供试液的试管管壁滴加狗(13 试液1-2滴；4)观察试管内的颜色变化；所述的1份量供试品为胶囊1粒或者片剂1片或者丸剂一次服用量1/10或者液体制剂一次服用量1/2 ；所述的有剂溶剂为丙酮或三氯甲烷。
2.根据权利要1所述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，其特征在于，所述的片剂和丸剂先研细，再置于具塞试管中。
3.根据权利要2所述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，其特征在于，所述的有色包衣片剂用水洗去色衣层再研细，然后置于具塞试管中。
4.根据权利要1所述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，其特征在于，所述的有机溶剂为丙酮。
5.根据权利要求1所述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法，其特征在于，步骤4)所述的试管内的颜色与空白溶液对照比较。
6.权利要求1所述的一种祛风湿中成药中吡罗昔康的筛查方法所使用的试剂盒，包括盒体，其特征在于，盒体内设有至少一个盛有5ml丙酮的具塞试管，一个带滴头的盛有 5mlFeCl3的试液瓶，至少一个5ml的一次性注射器，至少两个反应试管以及有机系微孔滤膜。
全文摘要
本发明公开一种检测祛风湿中成药中吡罗昔康的方法及其使用的试剂盒；旨在提供一种方便、快捷、准确、灵敏度高的检测方法；其技术要点是依次包括下述步骤1)取1份量供试品置于具塞试管中，加有机溶剂5ml，振摇，得到供试品粗提液，2)用有机系微孔滤膜滤过供试品粗提液得到供试液，取供试液1ml置试管中；3)沿盛有供试液的试管管壁滴加FeCl3试液1-2滴；4)观察试管内的颜色变化；属于医药检测技术领域。
文档编号G01N1/28GK102288469SQ20111023389
公开日2011年12月21日 申请日期2011年8月16日 优先权日2011年8月16日
发明者丘桂贤, 刘志辉, 宋新康, 曾玉梅, 蔡宇君, 谢强, 陈彬 申请人:广东省梅州市药品检验所
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