专利名称：一种测定泡腾制剂中维生素d含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定泡腾制剂中维生素D含量的方法。
背景技术：
维生素D和钙盐，或者单独地或者结合地，在各种疾病的治疗(其中有涉及钙代谢的疾病如骨质疏松)或者预防(其中有小儿佝偻病的预防)方面的应用，在现有技术中已有大量的文献记载。例如，在法国专利FR 272 4844中，声称维生素D和钙盐之间在对抗骨质疏松症方面存在治疗综合作用。
在各种含维生素D和钙盐的制剂中，除了常见的口服液、普通片剂、胶囊和颗粒剂外，还有泡腾型的制剂，包括泡腾片和泡腾颗粒。这种泡腾制剂，相对于口服具有运输、携带和使用方便的优点，又具有清新爽口的特点，特别受儿童的欢迎。更重要的是，钙剂良好的吸收依赖于钙的存在形式，溶解状态的钙，利于机体吸收。泡腾型制剂在服用前泡腾后转化为可溶型的钙盐的口服液，因而不消耗胃酸，利于吸收。
然而，现今还存在一些问题使得该种泡腾制剂不能完全被接受。
现有的文献记载中，对药物制剂中维生素D的测定方法除了较少采用的比色法和旋光法之外，基本上以高效液相色谱法(HPLC)为主，高效液相色谱有正相色谱法，也有反相色谱法。在这方面已有大量的文献报道和应用实例。
但无论哪种方法，样品一般都需配置成溶液再进行测定。由于维生素D对光和氧化剂都很敏感，因此测定一般应在半暗室和避免氧化的情况下进行。在避免氧化的做法中，一般采取下面的措施来达到目的1)超声溶解以避免加热，和2)供试液充氮保存以排除氧气。
这些做法对于一般的药物制剂可以达到避免维生素D被氧化破坏的目的。但对于含有维生素D的泡腾制剂来说，需要特别注意的是如果不采取特别措施，直接配制其供试液，则样品首先会发生泡腾反应，而在泡腾的同时由于与空气的大面积充分接触，可使维生素D少部分被氧化破坏，或者使其转化为其他形式的维生素D。这样测得的结果就会偏低并且同一样品测定的平行性往往很差。
以自制的泡腾颗粒(含维生素D和碳酸钙)为例，对同一批次产品中维生素D含量测定结果如表1(直接泡腾测定)所示。
表1直接泡腾测定的测定结果
从以上结果可见，回收率偏低(平均87％)，且平行性较差(RSD为4.54％)。
由于实际生产中多采取增大投料量的方法，以抵消存放过程中含量的下降以及检验过程造成的损失，保证制剂中维生素D的含量满足要求。但这样做既增加了成本，又不能保证患者精确的维生素D服用量。
发明内容
本发明提供了针对含维生素D的泡腾制剂的检验方法，特别是其样品前期处理的方法。
其中，泡腾制剂是指处方中含有酸源(有机酸)和碱源(碳酸氢钠)，遇水可放出大量二氧化碳而呈泡腾状的制剂。
其中，维生素D，应当包含但不限于以下的存在形式维生素D2(骨化醇，麦角甾醇，Ergocaliciferol)，维生素D3(胆钙化醇，Cholecalciferol)，1α，25-二羟维生素D2，1α，25-二羟维生素D3，1α-羟基维生素D2或，1α-羟基维生素D3，1α，24-二羟维生素D2，1α，24-二羟维生素D3或阿尔法骨化醇等。
现有技术表明，在维生素D的含量测定方法中，均采用高效液相(HPLC)方法。对于泡腾制剂的前处理步骤，并没有任何文献报道。
本发明旨在解决这一步骤存在的问题，使得最终测定的准确度和精密度均能很好地满足分析测定的要求，使得测定方法可以达到控制产品质量的目的。
典型的前处理步骤如下(I)在测定过程中，固体样品泡腾之前，向供试固体样品中或向溶剂中先加入适量的抗氧化剂；(II)将溶剂(水或者稀矿酸)与供试样品混合，使泡腾；(III)泡腾完毕，以有机溶剂萃�。喜⒂谢啵�(IV)有机相减压蒸干，加适量溶剂(流动相)转移溶出，取定量体积，注入液相色谱仪测定。
上述处理过程中的抗氧化剂可以包括多种可选择的抗氧化剂，如维生素C、维生素E、糖醇类、BHT、BHA、鼠尾草酚、迷迭香酚、茶多酚等，优选是维生素C；加入量一般为0.05％～1％(按最终溶液浓度计)。
抗氧化剂的加入可有两种形式一是以固态粉末形式混合加入到供试固体样品中，注意固体混合应采取等量递加的方式以保证混合均匀；另外也可以以溶液形式加入，即先配制成适当浓度的水溶液或稀酸溶液，酸可为盐酸或硫酸或醋酸等。
以下实施例旨在于说明本专利而不是限制本专利。
实施例11)精密称量一定量的待测泡腾颗粒；2)量取适量的去离子水，加入维生素C适量，配制成0.1％的溶液；3)将上述溶液适量倾倒到盛有已称好的颗粒的烧杯中，使之泡腾；4)待泡腾完毕，将溶液转移至分液漏斗中，以适量正己烷萃取2-3次，合并有机相；5)有机相减压蒸干，加适量溶剂(流动相)转移溶出，取定量体积，注入液相色谱仪测定。
实施例21)取适当数量的泡腾片，粉碎，精密称量一定量的片粉；2)量取适量的0.5M的盐酸水溶液，加入维生素C适量，配制成0.1％的溶液；
3)将上述溶液适量倾倒到盛有已称好的片粉的烧杯中，使之泡腾；4)待泡腾完毕，将溶液转移至分液漏斗中，以适量乙醚(预先重蒸处理过，不含过氧化物)萃取2-3次，合并有机相；5)有机相减压蒸干，加适量溶剂(流动相)转移溶出，取定量体积，注入液相色谱仪测定。
实施例31)精密称量一定量的待测泡腾颗粒；2)量取适量的水溶液，加入BHT适量，配制成0.1％的溶液；3)将上述溶液适量倾倒到盛有已称好的颗粒的烧杯中，使之泡腾；4)待泡腾完毕，将溶液转移至分液漏斗中，以适量正己烷萃取2-3次，合并有机相；5)有机相减压蒸干，加适量溶剂(流动相)转移溶出，取定量体积，注入液相色谱仪测定。
权利要求
1.一种测定泡腾制剂中维生素D含量的方法。
2.权利要求1所述的测定方法，其特征在于它含有以下前处理步骤(I)在测定过程中，固体样品泡腾之前，向供试样品或泡腾溶剂中先加入特定量的抗氧化剂；(II)供试样品加入溶剂泡腾后，以有机溶剂萃取转移；(III)有机相经过浓缩等处理后，通过液相色谱法测定维生素D的含量。
3.权利要求1的测定方法中，提到的制剂中除维生素D外，还可以包含其他各种含有钙元素的化合物，包括各种无机钙如碳酸钙，氯化钙，硫酸钙等，有机钙如葡萄糖酸钙，柠檬酸钙，草酸钙，L-苏糖酸钙，乳酸钙等。
4.权利要求1的测定方法中，所提及的维生素D，应当包含但不限于以下的存在形式维生素D2(骨化醇，麦角甾醇，Ergocaliciferol)，维生素D3(胆钙化醇，Cholecalciferol)，1α，25-二羟维生素D2，1α，25-二羟维生素D3，1α-羟基维生素D2或，1α-羟基维生素D3，1α，24-二羟维生素D2，1α，24-二羟维生素D3或阿尔法骨化醇等。
5.权利要求2中的前处理步骤中，所提及的抗氧化剂可以包括多种可选择的天然的或合成的抗氧化剂，如维生素C、维生素E、糖醇类、BHT、BHA、鼠尾草酚、迷迭香酚、茶多酚等，优选是维生素C；加入量一般为0.05％～1％(按最终溶液浓度计)。
6.权利要求2的前处理步骤中，抗氧化剂的加入可以以溶液形式加入，也可以以固态粉末形式混合加入；可以预先与固体供试样品混合，也可以先配成溶液，再加入到供试样品中。
全文摘要
本发明公开了一种测定泡腾制剂中维生素D含量的方法。其特征在于它含有以下前处理步骤(I)在测定过程中，固体样品泡腾之前，向供试样品或泡腾溶剂中先加入特定量的抗氧化剂；(II)供试样品加入溶剂泡腾后，以有机溶剂萃取转移；(III)有机相经过浓缩等处理后，通过液相色谱法测定维生素D的含量。该前处理方法可有效解决由于测定时泡腾所造成的维生素D氧化损失和转型所带来的结果偏低，能够很好地保证测定方法的准确性和精密度。
文档编号G01N30/06GK1837813SQ200610078648
公开日2006年9月27日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者韩宏星, 贾建锋, 岳嗣水, 岳德仁, 刘靖民, 杨杰, 张少伟 申请人:山东达因海洋生物制药股份有限公司
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