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专利名称：水体水质检测方法
技术领域：
本发明属于环境检测技术领域，尤其涉及一种水体水质检测方法。
背景技术：
近年来，我国重大水质污染事件频繁发生，对饮用水安全造成了严重威胁。目前水样毒性监测可以划分为两大类一种采用理化分析法监测，它能定量分析污染物中的主要成分，但不能直接、全面地反映各种有毒物质对环境的综合影响。因水中有毒物质的多样性和未知性，实际中不可能对全部物质都分别实施检测，更不可能考虑到各种化学物质之间的拮抗、抑制和协同作用。另一种是生物监测法，它可以综合多种有毒物质的相互作用，判定有毒物质的质量浓度和生物效应之间的直接关系，为水质的监测和综合评价提供科学依据，因而得到了迅速发展。但是，检测方法操作复杂，检测准度不够，阻碍了生物检测法的应用范围。

发明内容
有鉴于此，本发明实施例提供一种水体水质检测方法，解决现有技术中检测方法操作复杂、准确度不高的技术问题。本发明是这样实现的，一种水体水质检测方法，包括如下步骤将费氏弧菌冻干菌加入至复苏缓冲液中，混勻得到费氏弧菌悬液；将体积为4. 5mL的参考水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL该费氏弧菌悬液，调节PH值为6. 0-8. 5，在温度为15-20°C条件下，测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IK5，15分钟反应时间发光强度Ik15 ；将体积为4. 5mL的待测水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL该费氏弧菌悬液，调节PH值为6. 0-8. 5，在温度为15-20°C条件下，测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IS5，15分钟反应时间发光强度Isi5 ；根据上述参数IS5、IK5、IE15,Is15，得出待测水中费氏弧菌发光强度抑制率，判断待测水是否被污染；该测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5步骤中和该测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Is5的步骤中，所加入的费氏弧菌悬液体积相同。本发明实施例水体水质检测方法，通过将费氏弧菌用于检测水体水质，操作简单， 成本低廉，检测结果准确度高，并且不会产生污染环境的物质，对环境友好。


图1是本发明实施例水体水质检测方法流程图；图2是本发明实施例一水体水质检测方法流程图。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。请参阅图1，图1显示本发明实施例水体检测方法流程图，包括如下步骤步骤SOl，制备费氏弧菌悬液将费氏弧菌冻干菌加入至复苏缓冲液中，混勻得到费氏弧菌悬液；步骤S02，测定参考水中费氏弧菌的发光强度将体积为4. 5mL的参考水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合(体积比为9:1)， 加入10-50uL该费氏弧菌悬液，调节pH值为6. 0-8. 5，在温度为15_20°C条件下，测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IK5，15分钟反应时间发光强度Ik15 ；步骤S03，测定待测水中费氏弧菌的发光强度将体积为4. 5mL的待测水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL该费氏弧菌悬液，调节PH值为6. 0-8. 5，在温度为15-20°C条件下，测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IS5，15分钟反应时间发光强度Isi5 ；步骤S04，确定待测水中费氏弧菌发光强度抑制率根据上述参数IS5、IK5、IE15, Is15，得出待测水中费氏弧菌发光强度抑制率，判断待测水是否被污染。具体地，本发明实施例中使用的测光仪为德国BERTH0DLB9509生物测光仪。具体地，该费氏弧菌冻干菌(Vibrio fischeri)为市售产品，一般是指，将处于对数生长期的费氏弧菌制成冻干粉，使菌种保持干燥并快速进入休眠状态。步骤SOl中，该费氏弧菌冻干粉的用量为0. 2g，该复苏缓冲液的体积为IOmL ；将费氏弧菌冻干粉加入至复苏缓冲液中，摇勻，即可实现费氏弧菌活化；然后将活化后的费氏弧菌在0-4°C的细菌室中保藏；该缓冲液的由如下重量百分含量(质量体积比)的组分组成渗透稳定剂(3% -5% )、氯化钠)、乙醇(1.5%)；氯霉素和环己酰亚胺混合物0. 05% -0. 1%，优选为0. 1%;本发明实施例中，该氯霉素和环己酰亚胺作为抗生素而使用。该渗透稳定剂是碳源由氮源及水组成(渗透稳定剂如下组分组成酵母膏；蛋白 0 0. 5% ；葡萄糖 0. 5% ；KCl 0. 1% ；CaCl2 · 2H20 0. 1% ；MgCl2 · 6H20 0. 5% ；MgSO4 · 7H20 0. 3% ；NaHCO3O. 01%o )。进一步，步骤SOl后，还包括对费氏弧菌悬液进行选择的步骤，具体为将体积为9mL的参考水和体积为ImL的氯化钠溶液混合，然后加入10_50uL步骤SOl中得到的费氏弧菌悬液，将使得费氏弧菌悬液被稀释，在温度为15-20°c条件下保存5分钟后将稀释后的费氏弧菌悬液吸入分析室测定费氏弧菌悬液的初始发光强度Itl 值；该氯化钠溶液的浓度没有限制，只要使终浓度小于5 %即可，例如200g/L，经过测定， Itl值在100000RLU以上的费氏弧菌为正常的费氏弧菌，可以被应用于本发明中，Itl值小于 100000RLU的，可能是在运输、储存过程中，该费氏弧菌已经受到损害，或者该费氏弧菌冻干菌复苏状态不是很好，需要再等待一段时间。具体地，步骤S02中，将参考水和氯化钠溶液混合后，加入步骤SOl所制备的费氏弧菌菌液，在15-20°C条件下，首先测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5，然后测定15分钟参考水中费氏弧菌发光强度Ik15 ；具体地，步骤S03中所使用的费氏弧菌悬液的体积和步骤S02中所使用的费氏弧菌悬液的体积相同，例如，步骤S02中使用50uL费氏弧菌悬液，步骤S03中使用的待测水的体积也为50uL费氏弧菌悬液；步骤S03中，该氯化钠溶液的浓度没有限制，只要使终浓度小于5%即可，例如200g/L ；将待测水和氯化钠溶液混合后，加入步骤SOl所制备的费氏弧菌菌液，在温度为15-20°C条件下，首先测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IS5， 然后测定15分钟待测水中费氏弧菌发光强度Isi5 ；进一步，本发明实施例水体检测方法中，还包括测试验证步骤，具体为步骤S05，测定硫酸锌溶液中费氏弧菌发光强度将体积为4. 5mL的硫酸锌和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL该费氏弧菌悬液，在温度为15-20°C条件下保存15分钟，测定费氏弧菌发光强度Iai5，根据公式 (IA15/IK15) · 100%，得出硫酸锌溶液中费氏弧菌相对发光强度，如果硫酸锌测试溶液中费氏弧菌相对发光强度小于50%，则说明设备正常。该硫酸锌溶液的浓度为0. 5mg/L ；经检测， 硫酸锌溶液中费氏弧菌相对发光强度小于50%时，说明本发明所使用的检测设备等具有可靠性。具体地，步骤S04中，将步骤S02、步骤S03所测定的数值进行修正，具体为将参考水中费氏弧菌发光强度Ik15除以参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5，得到参考水中费氏弧菌发光强度修正值；将参考水中费氏弧菌发光强度修正值乘以待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Is5，得到待测水中费氏弧菌发光强度修正值Iei5 ；将待测水中费氏弧菌发光强度修正值Ia5减去待测水中费氏弧菌发光强度 Isi5，再除以待测水中费氏弧菌发光强度修正值Iei5，即可得到待测水中费氏弧菌发光强度抑制率，确定待测水的水质1、确定参考水中费氏弧菌发光强度修正值 ^κ15 将参考水中费氏弧菌发光强度Ik15除以参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5,公式表示为Fe15 = ΙΕ15/ΙΕ5 ；2、确定测水中费氏弧菌发光强度修正值Ia5 ；将参考水中费氏弧菌发光强度修正值Fk15乘以待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Is5，公式表示为Ici5 = Is5 · Fe15 ；3、确定待测水中费氏弧菌发光强度抑制率H15 ；将待测水中费氏弧菌发光强度修正值Ia5减去待测水中费氏弧菌发光强度Isi5，再除以待测水中费氏弧菌发光强度修正值Ia5，公式表示为H15 = (Is5 · Fe15-Is15)/Is5 · Fe15 · 100 %。毒性评价上述测得发光强度抑制率H15大于50%或H15小于-50%时，说明水样中的毒性物质对半数以上的发光菌致死，则该水样被污染；或者水样中存在某种激发细菌发光的物质， 为可疑水样。
本发明实施例水体水质检测方法，操作简单，成本低廉，检测结果准确度高，并且不会产生污染环境的物质，对环境友好。以下结合具体实施例对上述水体检测方法进行详细阐述。实施例一测试某种纯净水第一步，冻干菌活化复苏，制备费氏弧菌悬液将费氏弧菌(Vibrio fischeri)冻干菌粉(0. 2g)用一定体积(IOmL)的复苏缓冲液复苏活化，0°c保存在细菌室中，搅拌使费氏弧菌和复苏缓冲液均勻混合；所述复苏缓冲液成分为渗透稳定剂(3% "5% )；氯化钠)；乙醇(1. 5% )；抗生素(氯霉素和环己酰亚胺 < 0. )。第二步，测定费氏弧菌悬液的发光强度Itl值将9mL去离子水和ImL氯化钠混合于发光菌液存放池中，加入50uL上述费氏弧菌悬液，搅拌混合均勻，得到混合液，将PH值调节至6.5，15°C保持5min后，临时吸入分析室测得初始发光强度Itl值(653346)；该氯化钠溶液为200g/L，确定该费氏弧菌悬液能用；第三步，测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间和15分钟反应时间的发光强度将体积为4. 5mL的参考水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入5mL该费氏弧菌悬液，调整PH值为6. 5，测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5 (325589)，然后在温度为15°C条件下保存15分钟，测定参考水中费氏弧菌发光强度IK15(271937)；第四步，测定待测水中费氏弧菌发光强度将体积为4. 5mL的待测水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入5mL该费氏弧菌悬液，调整PH值为6. 5，测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Is5 (255567)，然后在温度为15°C条件下保存15分钟，测定待测水中费氏弧菌发光强度IS15(145960)；
根据步骤三和步骤四得到的数据，根据公式(Is5 · IE15/IE5-IS15) / (Is5 · Ie15/ Ir5) · 100%计算出确定待测水中费氏弧菌发光强度抑制率H15为31.6%。实施例二测试某水库的水第一步，费氏弧菌冻干菌活化，制备费氏弧菌悬液将费氏弧菌(Vibrio fischeri)冻干菌粉(0. 2)用一定体积(IOmL)的复苏缓冲液复苏活化，0°c保存在细菌室中，搅拌使费氏弧菌和复苏缓冲液均勻混合；所述复苏缓冲液成分为渗透稳定剂(3% "5% )；氯化钠)；乙醇(1. 5% )；抗生素(氯霉素和环己酰亚胺 < 0. )。第二步，测定费氏弧菌悬液的发光强度将9mL去离子水和ImL氯化钠混合于发光菌液存放池中，加入50uL上述费氏弧菌悬液，搅拌混合均勻，得到混合液，将PH值调节至6. 5，15°C保持5分钟后，临时吸入分析室测得初始发光强度I。值(63062 ；该氯化钠溶液为200g/L ；第三步，测定参考水中费氏弧菌发光强度将体积为4. 5mL的参考水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入5mL该费氏弧菌悬液，调整PH值为7. 5，测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5 (325589)，然后在温度为18°C条件下保存15分钟，测定参考水中费氏弧菌发光强度IK15(271937)；
第四步，测定待测水中费氏弧菌发光强度 将体积为4. 5mL的待测水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入5mL该费氏弧菌悬液，调整PH值为7. 5，测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Is5 (332614)，然后在温度为18°C条件下保存15分钟，测定待测水中费氏弧菌发光强度IS15(259960)；根据步骤二、步骤三和步骤四得到的数据，计算出确定待测水中费氏弧菌发光强度抑制率H15为6. 42%。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种水体水质检测方法，包括如下步骤将费氏弧菌冻干菌加入至复苏缓冲液中，混勻得到费氏弧菌悬液； 将体积为4. 5mL的参考水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL所述费氏弧菌悬液，调节PH值为6. 0-8. 5，在温度为15-20°C条件下，测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IK5，15分钟反应时间发光强度Ik15 ；将体积为4. 5mL的待测水和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL所述费氏弧菌悬液，调节PH值为6. 0-8. 5，在温度为15-20°C条件下，测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度IS5，15分钟反应时间发光强度Isi5 ；根据上述参数IS5、IE5>IE15>Isi5，得出待测水中费氏弧菌发光强度抑制率，判断待测水是否被污染；所述测定参考水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Ik5步骤中和所述测定待测水中费氏弧菌5分钟反应时间发光强度Is5的步骤中，所加入的费氏弧菌悬液体积相同。
2.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述待测水中费氏弧菌发光强度抑制率判断公式为(Is5 · WIr5-Is15)/(Is5 · IE15/IE5) · 100%。
3.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述判断待测水是否被污染步骤为如果该测水中费氏弧菌发光强度抑制率大于50%，则待测水被污染。
4.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述费氏弧菌冻干粉的用量为 0. 2g。
5.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述复苏缓冲液包括如下重量百分含量的组分3% -5%的渗透稳定剂、2%的氯化钠、1.5%的乙醇；0. 05% -0. 1 %的氯霉素和环己酰亚胺混合物。
6.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述复苏缓冲液的体积为 10mL。
7.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述氯化钠溶液的浓度为 200g/L。
8.如权利要求1所述的水体水质检测方法，其特征在于，还包括如下测试验证步骤 将体积为4. 5mL的硫酸锌溶液和体积为0. 5mL的氯化钠溶液混合，加入10_50uL该费氏弧菌悬液，在温度为15-20°C条件下保存15分钟，测定硫酸锌溶液中费氏弧菌发光强度Iai5，根据上述参数IK15、ΙΑ15，得出硫酸锌溶液中费氏弧菌相对发光强度，判断设备是否正堂巾ο
9.如权利要求8所述的水体水质检测方法，其特征在于，根据公式(ΙΑ15/ΙΚ15)· 100%, 得出硫酸锌溶液中费氏弧菌相对发光强度。
10.如权利要求8所述的水体水质检测方法，其特征在于，所述判断设备是否正常步骤为如果所述硫酸锌溶液中费氏弧菌相对发光强度小于50%，则设备正常。
全文摘要
本发明适用于水体水质检测技术领域，提供了一种水体水质检测方法及费氏弧菌在水体水质检测中的应用。本发明水体水质检测方法，包括制备费氏弧菌悬液、测定参考水中费氏弧菌的发光强度、测定待测水中费氏弧菌的发光强度、确定待测水中费氏弧菌发光强度抑制率等步骤。本发明水体水质检测方法，操作简单，成本低廉，检测结果准确度高，并且不会产生污染环境的物质，对环境友好。
文档编号G01N21/76GK102364330SQ20111025525
公开日2012年2月29日 申请日期2011年8月31日 优先权日2011年8月31日
发明者江涛, 赵忠欣, 陈继红 申请人:宇星科技发展(深圳)有限公司