专利名称：一种测定亚硫酸钠含量的高效液相色谱分析方法
技术领域：
本发明涉及药物的检测方法，具体地说涉及一种测定亚硫酸钠含量的高效液相色谱分析方法。
背景技术：
亚硫酸钠具有还原性，可作为抗氧剂被广泛地应用于注射液中。由于亚硫酸钠对人体有一定的毒副作用，近年来，对注射剂中此类抗氧剂用量的控制越来越严格，不只是限度的要求，而是要求准确测定其含量。目前测定亚硫酸钠含量的方法有以下三类:(1)通常利用其还原性，用碘滴定液和硫代硫酸钠进行滴定；如用此方法测定亚硫酸钠，则样品中其它成分必须不具有还原性。(2)利用亚硫酸钠与酸反应，生成的二氧化硫能使酸性的品红褪色的性质对亚硫酸钠进行定量，但此方法的灵敏度不高。(3)利用其与络合剂络合显色，以紫外-可见分光光度法测定；如以此方法测定亚硫酸钠，其它成分必须不与络合剂络合显色，并且络合物显色的溶液稳定性差。这三类方法的不足体现在:(1)灵敏度低；(2)专属性差，当产品中存在与其性质相近的物质时，无法测定亚硫酸钠的含量。如硫代硫酸钠具有与亚硫酸钠相似的性质。现有的方法不能够准确快速的测定硫代硫酸钠注射液中亚硫酸钠的含量。因此，需要寻找一种新的分析方法来测定亚硫酸钠的含量。高效液相色谱法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等优点，用高效液相色谱分析法可以弥补上述方法的不足。但是亚硫酸根离子在C18、C8色谱柱上基本无保留，与硫代硫酸根离子等其他离子无法分开，用高效液相色谱分析法测定亚硫酸钠含量的方法目前尚未见有公开的报道，因此需要建立一种可以快速准确测定亚硫酸钠含量的方法。
发明内容
本发明的目的在于建立一种可以快速准确的测定亚硫酸钠含量的高效液相色谱分析方法，特别是样品中含有与亚硫酸钠相似的物质时测定亚硫酸钠的含量的方法。以弥补现有技术的不足。为了达到上述目的，本发明的技术方案如下:
一种测定亚硫酸钠含量的高效液相色谱分析方法，采用反相高效液相色谱法，其具体色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱填料粒径为3.5 μ m 5 μ m，柱长为15Ctam 25Ctam。流动相:甲醇-水相(750ml水相中含2.0g 2.5g磷酸氢二钠及0.50g 1.0g四丁基硫酸氢铵，用lmol/L氢氧化钠溶液调pH至8.5 9.5)，甲醇-水相的体积比为10:90 30:70o流速:0.5ml/min 1.2ml/min。柱温:20°C 30°C。
检测波长:214±5nm。进样量:5μI 20μ I。优选色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以甲醇-水相(750ml水相中含2.2g 2.5g磷酸氢二钠及0.70g 0.85g四丁基硫酸氢铵,用lmol/L氢氧化钠溶液调PH至9.0)为流动相，甲醇-水相的体积比为25:75 ;流速为1.0ml/min ;检测波长为21411111;进样量为5 4 1。样品溶液的制备:精密称取无水亚硫酸钠适量，置一定体积的量瓶中，加流动相溶解并稀释成为含亚硫酸纳约0.28mg/ml的溶液，作为对照品溶液。另精S量取硫代硫Ife纳注射液1ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。在一般条件下，亚硫酸根离子在C18色谱柱上基本无保留，与其他离子无法分开。在流动相中加入阳离子对试剂，可增加亚硫酸根离子在C18色谱柱上的保留，经研究发现，流动相中加入四丁基硫酸氢铵可以使亚硫酸根在色谱柱上有一定保留，能与其他离子如硫代硫酸根离子分离开，但是峰形不好，而且亚硫酸根离子在此溶液中的稳定性差；如果加入磷酸盐，并且将PH值调至8.5 9.5，可改善峰形并能增加亚硫酸根离子在溶液中的稳定性，可以满足测定亚硫酸盐含量的要求。当甲醇的比例大于30%时，亚硫酸根与硫代硫酸根的分离度不好，而甲醇的比例低于10%时，分析时间延长；甲醇比例在10% 30%时，既能满足分离的要求，分析时间也合理。采用本发明所述的高效液相色谱分析的色谱条件，实现了亚硫酸根在C18色谱柱上的保留，使其可以与其性质相近、电荷量相同的硫代硫酸根有效分离，亚硫酸钠与硫代硫酸钠的分离度大于1.5。同样，此方法也适用于其他含亚硫酸钠产品中亚硫酸钠含量的测定。采用本发明测定亚硫酸钠的高效液相色谱分析方法，亚硫酸钠的保留时间约为4.5分钟，分析时间短，峰形对称性好。本方法的回收率高，平均回收率为99.5%，灵敏度高，定量限达3.5ng ;溶液的稳定性能达到8小时。采用本发明的方法能快速准确测定亚硫酸钠的含量。
图1为亚硫酸钠与硫代硫酸钠混合后的液相色谱图，亚硫酸钠的保留时间为4.7分钟；硫代硫酸钠的保留时间为5.2分钟(采用实施例1中方案3所得的色谱图)。图2为亚硫酸钠液相色谱图。图3为亚硫酸纳标准品的工作曲线图。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明作进一步的说明，但实施例并不限制本发明的保护范围。主要仪器及色谱条件:
安捷伦1200系列高效液相色谱仪；配VWD紫外检测器，自动进样器，安捷伦色谱工作站。
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。试剂与药品:
无水亚硫酸钠、磷酸氢二钠、四丁基硫酸氢铵、氢氧化钠、甲醇(HPLC级)、硫代硫酸钠注射液。实验中用水均为自制的纯化水。实施例1色谱条件的选择
1.1波长的选择
取标准品溶液，以流动相为空白校正液，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录IV A)于190nm 400nm处进行扫描。结果显示,供试品溶液在214nm处有最大吸收峰。因此将214nm±5nm确定为检测波长。1.2方法的筛选试验
本试验通过调整流动 相的组成及比例和pH值、流速、柱温等，来筛选本试验的色谱方法。具体方案见表1。表1方法的筛选方案
权利要求
1.一种采用高效液相色谱法测定亚硫酸钠含量的方法，其特征在于:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水相为流动相，其中所述水相为750ml水相中含2.0g 2.5g磷酸氢二钠及0.50g 1.0g四丁基硫酸氢铵，其pH值为8.5 9.5,甲醇-水相的体积比为10:90 30:70 ;检测波长为214±5nm ;流速为0.5ml/min 1.2ml/min ;进样量为5 μ I 20 μ I。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于水相为750ml水相中含2.2g 2.5g磷酸氢二钠及0.70g 0.85g四丁基硫酸氢铵，其pH值为9.0。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于甲醇与水相的体积比为25:75。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于流速为1.0ml/min。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于柱温为20°C 30°C。
全文摘要
本发明公开了一种采用高效液相色谱法测定亚硫酸钠含量的方法，所述方法包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以添加有四丁基硫酸氢铵的磷酸缓冲液-甲醇为流动相，缓冲液-甲醇的体积比为9010～7030；检测波长为214±5nm；流速为0.5ml/min～1.2ml/min。采用该方法可以将亚硫酸根离子与其他相似的离子进行有效分离并能准确定量。本方法的专属性强，精密度好，准确度高，可快速准确地测定亚硫酸钠的含量。
文档编号G01N30/60GK103175930SQ20111043254
公开日2013年6月26日 申请日期2011年12月21日 优先权日2011年12月21日
发明者陈剑锋, 李睿 申请人:重庆药友制药有限责任公司
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