专利名称：一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒的制作方法
技术领域：
—种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒技术领域[0001]本实用新型涉及一种试剂盒，尤其涉及一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒。
背景技术：
[0002]沙丁胺醇是一种水杨醇类药物，属于β 2-兴奋剂。近年来，沙丁胺醇被添加到饲料中以提高动物的瘦肉率和加速动物生长，作为“瘦肉精”的替代品，效果好、经济回报高、 使用普遍；临床上，被用于治疗支气管炎等引起的支气管痉挛。但人累计摄入剂量超过一定值，或使用沙丁胺醇残留量高的组织时，会出现中毒反应，症状表现为肌肉颤动、肌痛、头痛、晕眩、神经过敏、心悸、心动过速，甚至恶心、呕吐等，甚至引发心跳过速、心肌梗死、心律失常等。因此，我国明令禁止在饲料和动物饮水中使用沙丁胺醇药物。由此，检测动物源食品中沙丁胺醇残留量是非常必要的。目前，国内外有关食品中沙丁胺醇的残留检测大多采用高效液相色谱法和气相色谱法等方法 进行检测，但这些检测方法所使用的设备价格昂贵，且检测过程繁琐，不适合现场监控以及大量样本的筛查。实用新型内容[0003]本实用新型的目的在于针对上述问题，提供一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，以解决原有检测沙丁胺醇所使用的设备价格昂贵，且检测过程繁琐，不适合现场监控以及大量样本的筛查的问题。[0004]本实用新型的目的是通过以下技术方案来实现[0005]一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，包括盒体，所述盒体内设置有I 块酶标板、I张封板膜和13瓶试剂，所述酶标板的微孔中预包被有抗沙丁胺醇抗体，13瓶试剂分别为6瓶沙丁胺醇标准溶液、I瓶高浓度标准品、I瓶IOX浓缩洗涤液、I瓶IOX浓缩提取剂、I瓶沙丁胺醇标记HRP溶液、I瓶底物溶液Α、I瓶底物溶液B、I瓶终止液。[0006]所述的酶标板为96孔酶标板，其由聚苯乙烯制成，置于铝箔袋中，酶标板由支撑架与设置在支撑架上的可拆卸式的12条微孔条构成，每条微孔条上均有8个微孔。[0007]进一步的，6瓶沙丁胺醇标准溶液浓度分别为O μ g/L、0.1 μ g/L、0. 3 μ g/L、 0.9yg/L、2.7yg/L、8. lyg/L，每瓶为1. OmL ;高浓度标准品的浓度为100 μ g/L ;1瓶IOX 浓缩洗涤液，50mL ;1瓶IOX浓缩提取剂，30mL ；1瓶沙丁胺醇标记HRP溶液，7mL ；1瓶底物溶液A，7mL ; I瓶底物溶液B，7mL ; I瓶终止液，7mL。[0008]所述的盒体内设置有用于装载试剂瓶的泡沫垫，所述泡沫垫上开有下凹瓶位，试剂瓶设置于下凹瓶位内，所述泡沫垫包括3层塑料泡沫层，且泡沫垫上还设置有预留下凹瓶位。[0009]所述的盒体为硬纸盒体，其内还设置有一份说明书和一份质检报告，所述封板膜为塑料硬膜，其大小与酶标板横切面的大小一致。[0010]本实用新型的有益效果为，所述沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒成本低、结构简单，能快速、简便、灵敏、准确地用于动物尿液及动物组织等样品中沙丁胺醇残留量的检测。
[0011]图1为本实用新型盒体与固定泡沫模具的侧视示意图；[0012]图2为本实用新型酶标板的俯视示意图；[0013]图3a为IOX浓缩洗涤液、10 X浓缩提取剂的试剂瓶结构示意图；[0014]图3b为一种试剂瓶的结构示意图；[0015]图3c为沙丁胺醇标准溶液、高浓度标准品的试剂瓶结构示意图；[0016]图4为本实用新型泡沫垫的俯视图；[0017]图5为本实用新型泡沫垫在A-A处的剖视示意图[0018]图6为本实用新型泡沫垫在B-B处的剖视示意图[0019]图7为本实用新型泡沫垫在C-C处的剖视示意图[0020]图8为本实用新型泡沫垫在D-D处的剖视示意图[0021]图中[0022]1、盒体；2、下凹瓶位；3、泡沫垫；4、支撑架；5、微孔；6、微孔条；7、PE塑料瓶；8、玻璃瓶体； 9、茶色玻璃瓶；10、内塞；11、垫片；12、预留下凹瓶位。
具体实施方式
[0023]
以下结合附图并通过具体实施方式
来进一步说明本实用新型的技术方案。[0024]于本实施例中，一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，包括盒体1，所述盒体I内设置有I块酶标板、I张封板膜和13瓶试剂，所述封板膜为塑料硬膜，其大小与酶标板横切面的大小一致，所述酶标板的微孔5中预包被有抗沙丁胺醇抗体，13瓶试剂分别为6瓶沙丁胺醇标准溶液、I瓶高浓度标准品、I瓶10 X浓缩洗涤液、I瓶10 X浓缩提取剂、 I瓶沙丁胺醇标记HRP溶液、I瓶底物溶液A、I瓶底物溶液B、I瓶终止液。[0025]进一步的，6瓶沙丁胺醇标准溶液浓度分别为O μ g/L、0.1 μ g/L、0. 3 μ g/L、0.9yg/L、2.7yg/L、8. lyg/L，每瓶为1. OmL ;高浓度标准品的浓度为100 μ g/L ;1瓶IOX 浓缩洗涤液，50mL ;1瓶IOX浓缩提取剂，30mL ；1瓶沙丁胺醇标记HRP溶液，7mL ；1瓶底物溶液A，7mL ; I瓶底物溶液B，7mL ; I瓶终止液，7mL。[0026]如图1所示，所述盒体I为硬纸盒体，其内设置有一份说明书和一份质检报告及用于装载试剂瓶的泡沫垫3，泡沫垫3置于试剂盒盒体I的底部，并开有三种不同尺寸的下凹瓶位2，试剂盒所有试剂瓶分别插入泡沫垫3相应的下凹瓶位2中，泡沫垫3起到缓冲抗震的作用。[0027]如图2所示，酶标板为96孔酶标板，其由聚苯乙烯制成，置于铝箔袋内，酶标板由支撑架4与微孔条6构成,微孔条6固定于支撑架4上,微孔条6可随要求拆卸；一块96孔酶标板共有12条微孔条6，每条微孔条6有8个微孔5，微孔5中预包被有沙丁胺醇抗体。[0028]如图3c所示，沙丁胺醇标准溶液和高浓度标准品均用黑色塑料瓶盖配3mL茶色玻璃瓶9盛装，一般情况下，黑色塑料瓶盖内设置垫片11密封即可，若是长远距离运输，则需再加入内塞10 ;如图3a所示，IOX浓缩洗涤液、IOX浓缩提取剂均用半透明瓶盖配半透明50mL的PE塑料瓶7 ;如图3b所示，玻璃瓶体8容量为10mL，有茶色、透明两种，其中茶色玻璃瓶体的配黑色塑料盖，用于盛装沙丁胺醇标记HRP溶液、底物溶液A、底物溶液B ;透明玻璃瓶体配白色塑料瓶盖，用于盛装终止液；[0029]如图4-8所示，泡沫垫3由三层泡沫塑料垫构成，开有三种不同尺寸的下凹瓶位， 下凹瓶位共13个，并设置有三种不同尺寸的预留下凹瓶位12，预留下凹瓶位12为6个，泡沫垫3的规格为16cmX 14cmX4cm ;根据试剂瓶的高度来预切下凹瓶位2，A-A处为泡沫预切到底处为泡沫预切两层；C-C处IOmL瓶位的为泡沫预切两层，3mL瓶位的为泡沫预切一层；D-D处为泡沫预切一层。采用本实用新型一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒检测沙丁胺醇残留量的操作步骤为[0030]一、样本前处理[0031]配液1X提取剂将IOX浓缩提取剂和蒸馏水或去离子水按1: 9体积比充分混匀用于组织样本的提�。�1X洗涤液将IOX浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1: 9 充分混匀用于酶标板的洗涤。[0032]二、样本处理步骤1、尿液样本处理[0034]取澄清尿液50 μ L直接进行检测，如果尿液混浊，必须进行过滤或在15°C温度下， 进行3000g以上的离心至清亮。[0035]2、组织样本[0036]称取1±0. 05g已均质组织样品于IOmL离心管中，加入3mL提取工作液，用振荡器充分震荡均匀3分钟，确保震荡至样本没有明显结块后，在20 25°C温度下进行3000g以上的离心10分钟，取50 μ L上层用于分析。[0037]三、检测步骤[0038]使用之前，将样品及所需试剂的温度平衡至20 25°C，时间至少在30min以上，每种液体试剂使用前充分混匀。[0039]取出板架及所需数量的微孔5，将不用的微孔5放入铝箔袋中，保存于2 8°C;实验结束后将剩余的试剂保存于2 8 C。[0040]编号将沙丁胺醇标准溶液和待测样品对应微孔5按序编号，每个标准溶液和待测样品均做重复孔。[0041]加样每个微孔5分别加入标准溶液或样品50 μ L，然后每个微孔5分别加入沙丁胺醇标记HRP溶液50 μ L。[0042]温育轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置于20 25°C的温度下避光反应40分钟。[0043]洗涤小心揭开封板膜，每个微孔5加入IX洗涤液250μ L洗涤酶标板，连续洗涤 3次，用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头戳破。[0044]显色底物溶液A和底物溶液B以1:1混合，每个微孔5加入底物混合液100 μ L， 轻轻振荡混匀，在20 25°C温度下避光静置15分钟。[0045]测定每个微孔5加入终止液50 μ L,轻轻振荡混勻，5分钟内测定450nm处吸光度值。[0046]结果判定[0047]计算B/B。[0048]所获得的标准溶液或待测样品的吸光度值除以O号标准溶液的吸光度值Btl再乘以100%，即百分吸光度值。[0049]标准曲线的绘制与计算[0050]以沙丁胺醇标准溶液浓度为X轴，对应的百分吸光度值为Y轴，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出，为获得样品中沙丁胺醇的实际含量，从标准曲线上读出的浓度值应当乘以相应的稀释倍数；也可以用回归方程法， 计算出样品中沙丁胺醇的浓度。[0051]沙丁胺醇实际含量(μ g/kg) = CXD[0052]式中C :稀释后样品提取液中沙丁胺醇含量(μ g/L) ；D :样品稀释倍数[0053]本实用新型一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒使用时还需以下事项[0054]1、试剂盒保存于2 8°C，不能冷冻，未用的酶标板放回原铝箔袋密封后2 8V 存放，并尽快使用，底物溶液要避光保存。[0055]2、使用之前，将样品及所需试剂的温度平衡至20 25°C，否则可能导致后面检测吸光度值偏低，试剂使用完后应立即放回2 8°C冰箱。[0056]3、不要使用过期的试剂盒，不同批号试剂不能混用；[0057]4、洗板拍干后应立即进行下一步操作，如果洗板后出现板孔干燥，会导致标准曲线线性不好。[0058]5、反应终止液为2mol/l硫酸，应避免与皮肤和衣物接触。6、底物溶液如果变蓝表示已经变质，不能使用。[0060]7、0号标准溶液的吸光值< O. 6时，表示试剂盒已经变质，不能使用。[0061]以上实施例只是阐述了本实用新型的基本原理和特性，本实用新型不受上述实施例限制，在不脱离本实用新型精神和范围的前提下，本实用新型还有各种变化和改变，这些变化和改变都落入要求保护的本实用新型范围内。本实用新型要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求1.一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，包括盒体，其特征在于所述盒体内设置有I块酶标板、I张封板膜和13瓶试剂，所述酶标板的微孔中预包被有抗沙丁胺醇抗体，13瓶试剂分别为6瓶沙丁胺醇标准溶液、I瓶高浓度标准品、I瓶IOX浓缩洗涤液、I瓶10 X浓缩提取剂、I瓶沙丁胺醇标记HRP溶液、I瓶底物溶液A、I瓶底物溶液B、I瓶终止液。
2.根据权利要求1所述的一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述酶标板为96孔酶标板，其由聚苯乙烯制成，置于铝箔袋中，酶标板由支撑架与设置在支撑架上的可拆卸式的12条微孔条构成，每条微孔条上均有8个微孔。
3.根据权利要求1所述的一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于6瓶沙丁胺醇标准溶液浓度分别为O μ g/L、0.1 μ g/L、0. 3 μ g/L、0. 9 μ g/L、2. 7 μ g/L、8.1 μ g/L,每瓶为1. OmL ;高浓度标准品的浓度为100 μ g/L ;1瓶IOX浓缩洗涤液，50mL ；1瓶10 X浓缩提取剂，30mL ；I瓶沙丁胺醇标记HRP溶液，7mL ； I瓶底物溶液A，7mL ； I瓶底物溶液B，7mL;l瓶终止液，7mL。
4.根据权利要求1所述的一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述盒体内设置有用于装载试剂瓶的泡沫垫，所述泡沫垫上开有下凹瓶位，试剂瓶设置于下凹瓶位内。
5.根据权利要求4所述的一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述泡沫垫包括3层塑料泡沫层，且泡沫垫上还设置有预留下凹瓶位。
6.根据权利要求1或4所述的一种用于沙丁胺醇残留检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述盒体为硬纸盒体，其内还设置有一份说明书和一份质检报告，所述封板膜为塑料硬膜，其大小与酶标板横切面的大小一致。
专利摘要本实用新型公开了一种沙丁胺醇残留量的酶联免疫试剂盒。该试剂盒包括96孔酶标板、沙丁胺醇标记HRP溶液、6个浓度的沙丁胺醇标准溶液、底物溶液A、底物溶液B、终止液、10×浓缩洗涤液、10×浓缩提取剂、高浓度标准品、封板膜、说明书、质检报告。本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被抗沙丁胺醇抗体，样本或标准品中的沙丁胺醇将和HRP标记的沙丁胺醇溶液竞争结合微孔条上预包被的抗体，洗涤后用H2O2-TMB底物系统显色，样本吸光度值与其所含沙丁胺醇量成负相关，与标准曲线比较再乘以对应的稀释倍数即可得出样品中沙丁胺醇残留量。本实用新型操作方便、灵敏度高、成本低，可实现样本的高通量检测。
文档编号G01N33/543GK202837300SQ20122030684
公开日2013年3月27日 申请日期2012年6月28日 优先权日2012年6月28日
发明者伦丽丽, 孙少民, 游冬, 刘春梅, 卞禹卜, 杨万春 申请人:无锡中德伯尔生物技术有限公司
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
