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专利名称：无甲醛组织标本固定液的制作方法
技术领域：
本发明涉及体外诊断试剂，具体涉及一种环保型无甲醛组织标本固定液及其应用，属于病理学实验技术领域。
背景技术：
组织病理学的诞生已有150多年的历史，在所有的医院，手术切除的病理标本及各种活体检查组织，均由医院病理科对手术组织样本作出组织病理学诊断。常规石蜡包埋HE染色制片是当前用以处理组织样本的最基本技术，它是病理诊断方法学的基础，也是许多新方法、新技术优劣的评定参照标准。传统的方法是将组织样本放置处理液的缸中，依次倒入或调入不同处理液，样本依次在每个试剂中按规定浸泡不同时间完成处理切片、染色、封片等，全程需要30多个步骤。整个过程大量使用甲醛、二甲苯、 氧化汞、氨水有毒害化学试剂，病理技术人员长期置身于有毒环境，且试剂排放严重污染环境。并且所用的试剂宽容度差，操作复杂，试剂消耗量大，病理制片优质片低(全国统计在 40 70%)，影响诊断。同时绝大数医院自行配试剂，缺乏统一标准。因此病理行业组织标本处理液用品的标准化生产、无毒化、社会化供求，是行业发展的必然趋势。例如申请号为200810136961. X的专利申请公开了一种生物组织样本常规石蜡制片HE染色无二甲苯全程处理液。然而这种基于传统组织固定的处理液仍旧采用了严重污染环境的毒害试剂甲醛。使用不同浓度的甲醛_福尔马林，固定人体及动植物组织标本进行人体病理学和动植物病理学研究已有160年以上的历史。甲醛是公认的有毒有害化学品具有潜在的致癌性，其是一种单纯固定液，其固定机理是通过在蛋白质亚单位氨基酸分子间的铰链反应，形成亚甲基桥完成固定作用。然而铰链反应会出现收缩硬化等现象，对组织细胞的抗原分子结构、酶类、核酸分子保存不佳。因此，研发甲醛的替代品替代甲醛用于病理学实验具有重要的意义。

发明内容
本发明的目的在于提供一种无甲醛组织标本固定液，可满足常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术要求，处理的组织效果优于传统技术，以完全替代甲醛应用于相关的病理学实验。本发明所述各试剂的浓度均为质量百分浓度。为了达到本发明的目的，采用如下技术方案本发明提供一种无甲醛组织标本固定液，其包括如下体积份数的组分乙醇710-790份、冰乙酸20_40份、丙酮10_30份、多元醇40_60份、三氯乙酸40-60 份、表面活性剂40-60份、增溶剂40-60份。在本发明优选的实施方式中，所述无甲醛组织标本固定液包括如下体积份数的组分乙醇750份、冰乙酸30份、丙酮20份、多元醇50份、三氯乙酸50份、表面活性剂50份、 增溶剂50份。其中所述乙醇为浓度75-95%乙醇，优选为95%乙醇。
其中所述多元醇选自二甘醇、三甘醇、聚乙二醇，优选为二甘醇。其中所述表面活性剂选自季铵盐类表面活性剂或氟类表面活性剂，优选自辛基_癸基_ 二甲基氯化铵、二辛基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、二癸基二甲基溴化铵，更优选辛基-癸基-二甲基氯化铵。所述表面活性剂的浓度为0. 5-2%，优选1%。所述增溶剂选自3-甲氧基-3-甲基丁醇或3-甲氧基-3-甲基-1-醋酸丁酯，优选3-甲氧基-3-甲基丁醇；其浓度为0. 5-2%，优选1%。由于本发明不使用甲醛，因此既避免了甲醛的毒害作用，又消除了甲醛对抗原物质的遮盖，能够很好的保存抗原。而且本发明使用多元醇例如二甘醇或聚乙二醇来促进分子的渗透作用以促进细胞蛋白质沉淀作用完成固定过程，此过程抑制了铰链反应的收缩硬化等现象有利于组织细胞形态的保存。本发明提供的无甲醛组织标本固定液的配制，是将各组分在常温下按所述比例混勻即可。本发明提供的无甲醛组织标本固定液采用复合成分配方，其全部组分为无毒无害的化学试剂，经细胞形态学实验、免疫组织化学实验、分子病理学实验及核酸提取实验证明，无醛固定液具有较为全面的固定效果，完全可以替代甲醛应用于相关的病理学实验，以完成对组织标本的固定作用。


图1为采用本发明的无甲醛组织标本固定液处理的家兔肾脏组织后染色图 (LEICA DM4000B 显微摄影 200 倍)。图2为采用本发明的无甲醛组织标本固定液处理的人肾脏组织后染色图(LEICA DM4000B显微摄影200倍)。图3A为采用本发明的无甲醛组织标本固定液处理的子宫内膜腺癌雌激素受体免疫组织化学染色图(LEICA DM4000B显微摄影200倍)。图3B为采用本发明的无甲醛组织标本固定液处理的子宫内膜增生孕激素受体免疫组织化学染色图(LEICA DM4000B显微摄影200倍)。图4为采用本发明的无甲醛组织标本固定液处理的人乳腺癌c-erbB-2基因表达蛋白免疫组织化学染色图(LEICA DM4000B显微摄影200倍)。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。实施例195% 乙醇--------------------------------750ml冰乙酸------------------------------------30ml丙酮--------------------------------------20ml二甘醇------------------------------------50ml三氯乙酸(2%)-----------------------------50ml 辛基-癸基-二甲基氯化铵(1 % ) -—50ml
3-甲氧基-3-甲基丁醇(1 % )--------50ml将上述组分在常温下混溶即得。实施例290% 乙醇------------------------------710ml冰乙酸---------------------------------20ml丙酮-----------------------------------30ml二甘醇---------------------------------60ml三氯乙酸--------------------------60ml二辛基二甲基氯化铵(0.5%) -—60ml3-甲氧基-3-甲基丁醇(1 % )---------60ml将上述组分在常温下混溶即得。实施例375% 乙醇------------------------------790ml冰乙酸---------------------------------40ml丙酮------------------------------------IOml聚乙二醇--------------------------------40ml三氯乙酸--------------------------40ml二癸基二甲基氯化铵O % )------40ml3-甲氧基-3-甲基丁醇(0. 5% )------40ml将上述组分在常温下混溶即得。实施例480% 乙醇------------------------------750ml冰乙酸-------------------------------30ml丙酮---------------------------------20ml三甘醇-------------------------------50ml三氯乙酸(2%)-----------------------50ml二癸基二甲基溴化铵(1 % )---------50ml3-甲氧基-3-甲基-1-醋酸丁酯O% ) —50ml将上述组分在常温下混溶即得。试验效果采用本发明提供的无甲醛组织标本固定液，在样本处理上杜绝了传统技术对组织样本处理经常出现的使组织样本缩、硬、裂、脆现象，使细胞及组织结构更接近原生形态，对组织结构固定完好，脱水彻底。在分子生物学实验和研究方面，实验证明采用实施例1提供的无甲醛组织标本固定液处理的家兔肾脏组织后染色，见图1 (LEICA DM4000B显微摄影200倍)，显示组织固定良好、结构清晰、细胞核-浆-膜结构保存完好。。采用实施例2提供的无甲醛组织标本固定液处理的人肾脏组织后染色，见图 2(LEICA DM4000B显微摄影200倍)，显示组织固定良好、肾小球基底膜(黑)和新月体中纤维(篮)结构清晰。
采用实施例3提供的无甲醛组织标本固定液处理的子宫内膜腺癌雌激素受体免疫组织化学染色见图3A，子宫内膜增生孕激素受体免疫组织化学染色见图3B，以及人乳腺癌c-erbB-2基因表达蛋白免疫组织化学染色见图4 (均为LEICADM4000B显微摄影200倍)， 显示组织细胞的免疫原性保存良好，能够良好的显示抗原的分布和正确定位。以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变， 修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。
权利要求
1.一种无甲醛组织标本固定液，其包括如下体积份数的组分乙醇710-790份、冰乙酸 20-40份、丙酮10-30份、多元醇40-60份、三氯乙酸40-60份、表面活性剂40-60份、增溶剂 40-60 份。
2.根据权利要求1所述的无甲醛组织标本固定液，其包括如下体积份数的组分乙醇 750份、冰乙酸30份、丙酮20份、多元醇50份、三氯乙酸50份、表面活性剂50份、增溶剂 50份。
3.根据权利要求1或2所述的无甲醛组织标本固定液，其中所述乙醇为浓度75-95% 乙醇，优选为95%乙醇。
4.根据权利要求1或2所述的无甲醛组织标本固定液，其中所述多元醇选自二甘醇、三甘醇、聚乙二醇，优选为二甘醇。
5.根据权利要求1或2所述的无甲醛组织标本固定液，其中所述表面活性剂选自季铵盐类表面活性剂或氟类表面活性剂，其浓度为0. 5-2%，优选1%。
6.根据权利要求5所述的无甲醛组织标本固定液，其中所述季铵盐类表面活性剂是选自辛基_癸基_ 二甲基氯化铵、二辛基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、二癸基二甲基溴化铵，优选辛基-癸基-二甲基氯化铵。
7.根据权利要求1或2所述的无甲醛组织标本固定液，其中所述增溶剂选自3-甲氧基-3-甲基丁醇或3-甲氧基-3-甲基-1-醋酸丁酯，优选3-甲氧基-3-甲基丁醇；其浓度为 0. 5-2%，优选 1%。
8.权利要求1-7任一项所述的无甲醛组织标本固定液的应用，是用于病理组织学及动植物标本制作，用于常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术。
全文摘要
本发明提供一种无甲醛组织标本固定液，其包括如下体积份数的组分乙醇710-790份、冰乙酸20-40份、丙酮10-30份、多元醇40-60份、三氯乙酸40-60份、表面活性剂40-60份、增溶剂40-60份。该无甲醛组织标本固定液采用无毒无害的化学试剂，经细胞形态学实验、免疫组织化学实验、分子病理学实验及核酸提取实验证明，无醛固定液具有较为全面的固定效果，完全可以替代甲醛应用于相关的病理学实验，以完成对组织标本的固定作用。
文档编号G01N1/30GK102175496SQ201110023748
公开日2011年9月7日 申请日期2011年1月21日 优先权日2011年1月21日
发明者李明, 王德田, 董建强 申请人:哈尔滨格林标本技术开发有限公司