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专利名称：高敏膜渗滤蛋白芯片的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物免疫学检测技术领域的蛋白芯片，特别是一种用于待检标本中目标蛋白的检测的高敏膜渗滤蛋白芯片。
背景技术：
膜渗滤免疫法检测标本中某特定的目标分子技术已经比较成熟，因其操作简便，适合快速检测一直广受推崇，但是，其在膜上仅设置一个捕获抗体的检测点，并且没有浓度参照点，因而每次只能检测单指标，并且只能做到定性检测，检测的灵敏度低。
发明内容
本实用新型目的是为了解决上述问题，提供一种结构简单、不仅可以进行定性检测，而且还可实现对多种指标定量检测的高敏膜渗滤蛋白芯片。技术方案包括蛋白芯片主体，还包括有洗液瓶、检测抗体混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主体的上表面开有加样槽，加样槽的底面设有膜，膜下为吸水滤纸层，其中，膜上设置有至少I个待检目标蛋白的浓度参照点和多个待检目标蛋白的检测点，如果设置两个或两个以上的浓度参照点，浓度参照点的参照浓度依次呈梯度分布，。所述洗液瓶内的洗涤液为O. OlM TBST (pH8. 5，O. 05%Tween-20)，所述检测抗体混合液瓶内的检测抗体混合液为膜上固定的抗体对应的配对抗体的酶标记物的混合液；所述底物瓶内的底物为沉淀型TMB底物，所述膜为硝酸纤维素材料或醋酸纤维素材料。所述膜上优选设置有3个以上待检目标蛋白的浓度参照点，浓度参照点依次呈浓度梯度设置。所述膜上的浓度参照点及检测点的设置数量本领域技术人员可根据检测需要进行合理设计，结果判定时，应该将每个检测点分别与浓度参照点进行比较测算。进行检测时，将待检样品加入加样槽，等膜上样品液被膜刚吸干后，再加入洗液瓶内的洗涤液，当膜上洗涤液被膜刚吸干，加入检测抗体混合液瓶内的检测抗体混合液，检测抗体混合液被膜刚吸干，再次加入洗液瓶内的洗涤液，被膜刚吸干，最后加入底物瓶内的沉淀型TMB底物显色，最后根据膜上检测点的灰度值和浓度参照点的灰度值进行比对，测算出待检物(样品)含量值。本实用新型的有益效果为1.利用膜渗滤原理和芯片集成化检测的设计思想设计蛋白芯片组，从而一次可以检测多个指标；2.所需要的检测样品少，只需要100微升；
3.操作简单，5-10分钟出结果；4.灵敏度高，可以做到精确定量；5.结果的读取可以采用仪器设备分析也可以通过目视比对进行。

图I为本实用新型示意图。图2为膜3上浓度参照点和标准点的布置示意图。其中，I 一蛋白芯片主体、2 —加样槽、3 —膜、4 一洗液瓶、5 —检测抗体混合液瓶、6 一底物瓶、7 —滤纸层、8、9、10、11均为浓度参照点(浓度参照点依次呈浓度梯度设置)，12 一检测点(为阵列点分布的16个检测点)。
具体实施方式
参照图1，所述高敏膜渗滤蛋白芯片包括蛋白芯片主体I、洗液瓶4、检测抗体混合液瓶5和底物瓶6，所述蛋白芯片主体I的上表面开有加样槽2，加样槽2的底面设有膜3，膜3下方为吸水滤纸层7，参照图2，其中，膜3上固定有4个待检目标蛋白的浓度参照点8、9、10、11 (浓度参照点的参照浓度依次呈浓度梯度设置)和待检目标蛋白的检测点12 (阵列点分布的16个检测点)。所述洗液瓶内的洗涤液为O. OlM TBST (pH8. 5，O. 05%Tween-20)，所述检测抗体混合液瓶内的检测抗体混合液为膜上固定的抗体对应的配对抗体的酶标记物混合液；所述底物瓶内的底物为沉淀型TMB底物(应避光保存)，所述膜为硝酸纤维素材料或者醋酸纤维素材料。下面以检测人肿瘤标志物16点蛋白芯片为例，介绍本实用新型的操作方法 使用时，取100微升待检样品(待检样品中各个肿瘤标志物的含量已经过ELISA试剂盒测定)加入加样槽2，等膜3上样品液被膜3刚吸干就加入洗涤液200微升，膜3上洗涤液被膜3刚吸干就加入100微升检测抗体混合液，检测抗体混合液刚被膜3吸干就加入200微升洗涤液，洗涤液刚被膜3吸干最后加入沉淀型TMB底物显色，最后根据膜3上检测点的灰度值和参照点的灰度值进行比对，测算出待检物含量值。4个浓度参照点8、9、10、11浓度参照表
指标名称参照点8参照点9 参照点10 参照点11
AFP10 μ g/L5 μ g/L2. 5 μ g/L I. 25 μ g/L
CEA10 μ g/L5 μ g/L2. 5 μ g/L I. 25 μ g/L
POA ToUTl5 u/l2.5 u/l 1.25 u/l
CA15-350000U/L25000U/L12500 U/L~6250 U/L
CA19-950000U/L25000U/L12500 U/L~6250 U/L
CA12550000U/L25000U/L12500 U/L~6250 U/L
AFU100 mg/mL50 mg/mL25 mg/mL 12. 5 mg/mL
alp TooUTl50 u/l 25 u/l 12.5 u/l
CA50 TooUTl50 u/l 25 u/l 12.5 u/l
PSA10 μ g/L5 μ g/L2. 5 μ g/L I. 25 μ g/L
权利要求1.一种高敏膜渗滤蛋白芯片，包括蛋白芯片主体，其特征在于，还包括有洗液瓶、检测抗体混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主体的上表面开有加样槽，加样槽的底面设有膜，膜下方为吸水滤纸层，其中，膜上设置至少I个待检目标蛋白的浓度参照点和多个待检目标蛋白的检测点。
2.如权利要求I所述的高敏膜渗滤蛋白芯片，其特征在于，所述膜上设置有3个以上待检目标蛋白的浓度参照点。
专利摘要本实用新型涉及一种高敏膜渗滤蛋白芯片，解决了现有膜渗滤免疫法每次只能检测单指标，并且只能做到定性检测，检测灵敏度低的问题。技术方案包括蛋白芯片主体、洗液瓶、检测抗体混合液瓶和底物瓶；所述蛋白芯片主体的上表面开有加样槽，加样槽的底面设有膜，膜下方为吸水滤纸层，其中，膜上设置有至少1个待检目标蛋白浓度参照点和多个待检目标蛋白的检测点。本实用新型结构简单、不仅可以进行定性检测，而且还可实现对多种指标定量检测，灵敏度高。
文档编号G01N33/68GK202631548SQ20122028140
公开日2012年12月26日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者费小战, 李学斌, 陈琰, 万慧丹, 代腾飞, 杜蓉 申请人:武汉伊艾博科技有限公司