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专利名称：Hplc法测定维生素c泡腾片中维生素c含量的方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，涉及定量测定制剂中维生素C含量的方法，具体地说是一种高效液相色谱法(HPLC法)测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法。
背景技术：
国内对用HPLC法测定药品、果汁、食品等中的维生素C的含量的研究较多，但对泡腾片中维生素C含量测定的液相方法研究较少。测定维生素C泡腾片中维生素C的含量的常用方法为中和滴定法，中华人民共和国药典2005版有详细的描述。但是对于添加了一些特定的辅料的维生素C泡腾片，由于这些特定辅料如维生素 B2、香精，酒石酸、糖、碳酸氢钠等的存在，在采用滴定法测定过程中会因颜色和维生素B2的干扰，不能准确地确定滴定终点，从而造成测定误差；另外，试剂中碘离子易被氧化，也会造成滴定终点有误差，因此，对于添加了上述特定辅料的维生素C泡腾片，不适合采用中和滴定法来测定维生素C的含量。还有，中和滴定法中所使用的碘滴定液容易挥发，易对人体造成损害。

发明内容
本发明要解决的技术问题，针对添加有维生素B2、香精、糖等辅料的维生素C泡腾片，因无法使用中国药典所规定的测定方法进行维生素C的含量测定的情况，提供一种 HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，本方法具有简便、准确、重复性好、专属性强等特点，适用于对维生素C泡腾片中的维生素C含量进行测定。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是
一种HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其色谱条件为
(1)色谱柱岛津VP-ODS (250 mm X4. 6 mm,5um)；
(2)流动相为混合比例为298的甲醇和O. 03mol/L磷酸盐缓冲液；
(3)紫外检测器的检测波长为254nm。作为本发明的一种限定，所述的磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾和磷酸二氢钠溶液中的一种。作为上述限定的进一步限定，所述的磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾溶液。作为上述限定的再次限定，所述的磷酸二氢钾溶液的pH值为2. 4。作为上述限定的最后限定，所述的磷酸二氢钾溶液使用磷酸调节pH值。作为本发明的另一种限定，该HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其色谱条件为所用流动相的流速为O. 8mL/min,进样体积为20 μ L，柱温为30°C。通过上述方法的建立过程，本方法测定维生素C泡腾片中维生素C的含量能够达到真实和准确地分析的要求。由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于采用HPLC法检测维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，操作简单，提高了检测的灵敏度和准确度，并可以适用于有颜色干扰的样品；另外本发明避免使用传统检测方法中存在的使用碘试剂的情况，提高了操作的安全性。本发明适于对维生素C泡腾片中维生素C的含量进行测定。


图I为本发明实施例溶剂干扰性试验的HPLC图2为本发明实施例空白辅料干扰性试验的HPLC图3为本发明实施例样品批号为100312的HPLC4为本发明实施例样品批号为100420的HPLC5为本发明实施例样品批号为100520的HPLC6为本发明实施例对照品浓度为10 μ L和20 μ L线性范围测定的HPLC7为本发明实施例对照品浓度为25 μ L和30 μ L线性范围测定的HPLC8为本发明实施例对照品浓度为35 μ L和40 μ L线性范围测定的HPLC9为本发明实施例对照品精密度试验连续进样第1-3次测定的HPLC图10为本发明实施例对照品精密度试验连续进样第4-6次测定的HPLC图11为本发明实施例对照品稳定性试验标准品Oh测定的HPLC12为本发明实施例对照品稳定性试验标准品2h测定的HPLC13为本发明实施例对照品稳定性试验标准品4h测定的HPLC14为本发明实施例对照品稳定性试验标准品6h测定的HPLC15为本发明实施例样品稳定性试验样品Oh测定的HPLC图16为本发明实施例样品稳定性试验样品2h测定的HPLC图17为本发明实施例样品稳定性试验样品4h测定的HPLC图18为本发明实施例样品稳定性试验样品6h测定的HPLC图。本发明下面将结合说明书附图与具体实施例作进一步详细说明，但是本发明的保
护范围并不限于下述的实施例。
具体实施例方式以下实施例只用于说明本发明，并不限定本发明。实施例一种测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法
本测量方法是利用HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量。该方法的色谱条件
为
(1)色谱柱岛津VP-ODS (250 mm X4. 6 mm,5um)；
(2)流动相为混合比例为298的甲醇和O. 03mol/L磷酸盐缓冲液，混合比例为体积
比；
其中0. 03mol/L的磷酸盐缓冲液溶液为磷酸二氢钾(也可以用磷酸二氢钠溶液替代)， 用磷酸调节PH值至2.4;
(3)紫外检测器的检测波长为254nm。一、本发明方法的建立过程
I、仪器与试剂仪器岛津LC-2010A高效液相色谱仪(LC-2010型号检测器、LC-2010型号泵，LC-2010 柱温箱，LC-2010自动进样器)，LCsolution色谱工作站；
试剂甲醇(色谱纯)，磷酸二氢钾(优级纯)，乙二胺四乙酸二钠即EDTA-2Na (优级纯)， 磷酸(优级纯)，水(二次去离子水)，维生素C泡腾片(样品，河北科星药业有限公司生产)，维生素C对照品(美国ChemService公司生产，批号为418-10B，含量为99. 5%)。2、含量测定方法的建立
2.I、波长的选择
根据维生素C紫外光吸收具有的特性，测定了它的O. 02%EDTA-2Na水溶液在紫外光下的吸收图谱，维生素C的检测波长选用254nm。2. 2、溶液的配制
溶剂的配制取4. 08g磷酸二氢钾，置于IOOOml的棕色容量瓶中，用二次去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，配制得O. 03mol/L磷酸二氢钾溶液A ；
取O. 2g EDTA-2Na,置于IOOOml的棕色容量瓶中用二次去离子水溶解并稀释至刻度， 摇匀，配制得O. 02%EDTA-2Na溶液B。对照品溶液的配制取维生素C对照品50mg精密称定置IOOml的棕色容量瓶中用溶液B溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置IOOml棕色容量瓶中，用溶液A稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液M。样品溶液的配制取样品10片，精密称定，研细，取细粉O. 56g (约相当于维生素C 50mg)精密称定，置IOOml的棕色容量瓶中再用溶液B溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml置IOOml量瓶中，用溶液A稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液D。2. 3、溶剂、空白辅料的干扰性试验
为排除色谱图中有溶剂和空白辅料干扰维生素C峰的出现，对单独的溶剂和空白辅料进行专属性试验，以增加检测的准确性。溶剂的影响精密量取5ml溶液B置IOOml棕色容量瓶中，加入溶液A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品I。空白辅料的影响按制剂配方规定的比例，除维生素C外，其它组分和辅料称取 10. 0g，混匀，研细，取细粉O. 56g精密称定，置于IOOml的棕色容量瓶中，加入溶液B，溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取滤液5ml置IOOml棕色容量瓶中，加入溶液A稀释至刻度，摇匀，作为样品2。照上述色谱条件进样，分别取样品I和样品2各20μ L，进样，记录色谱图，如图I 和图2所示。结果显示由图I可以看出检测结果接近于基线没有干扰峰出现，表明溶剂对维生素C的测定没有影响。由图2可以看出没有干扰峰出现，表明空白辅料对维生素C测定没有影响。2. 4、样品的测定
取三批样品，依照上述2. 2方法制备样品溶液，每批样品做2个平行，各取20 μ L进样， 记录色谱图，批号为100312的产品测定结果如图3所示，批号为100420的产品测定结果如图4所示，批号为100520的产品测定结果如图5所示，按外标法计算维生素C的含量，结果如表I所示,根据试验测定结果,确定维生素C含量为标示量的90. 0%-110. 0%。
权利要求
1.HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其特征在于该方法的色谱条件为(1)色谱柱岛津VP-ODS (250 mm X4. 6 mm,5um)；(2)流动相为混合比例为298的甲醇和O. 03mol/L磷酸盐缓冲液；(3)紫外检测器的检测波长为254nm。
2.根据权利要求I所述的HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液中的一种。
3.根据权利要求2所述的HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾溶液。
4.根据权利要求3所述的HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸二氢钾溶液的PH值为2. 4。
5.根据权利要求4所述的HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸二氢钾溶液使用磷酸调节PH值。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其特征在于所用流动相的流速为O. 8mL/min，进样体积为20 μ L，柱温为30°C。
全文摘要
本发明公开了HPLC法测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，其色谱条件为(1)色谱柱岛津VP-ODS(250mm×4.6mm，5μm)；(2)流动相为混合比例为2:98的甲醇和0.03mol/L磷酸盐缓冲液；(3)紫外检测器的检测波长为254nm；所用流动相的流速为0.8mL/min，进样体积为20μL，柱温为30℃。本发明采用HPLC法检测维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，操作简单，提高了检测的灵敏度和准确度，并可以适用于有颜色干扰的样品；另外本发明避免使用传统检测方法中使用碘试剂，提高了操作的安全性。本发明适于对维生素C泡腾片中维生素C的含量进行测定。
文档编号G01N30/36GK102608231SQ20121007019
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月16日 优先权日2011年11月30日
发明者付旭东, 吕虎林, 田会彦, 魏桂香 申请人:河北科星药业有限公司