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专利名称：一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法
技术领域：
本发明属于氯霉素滴眼液的检测方法，特别属于含有甘草黄酮的氯霉素滴 眼液的检测方法。
背景技术：
氯霉素滴眼液是一种眼部常用的药品，曾经作为OTC甲类药品在巿场上流 通使用，其主要成份为氯霉素、缓冲液、抑菌剂、水，也有在氯霉素滴眼液中 加入玻璃酸钠、甘油以增强粘度，改善在眼部的保留时间。《中国药典》2005年 版二部中第778页公开了氯霉素滴眼液的检测方法，检测项目包括性状项、鉴 别项、检查项、含量测定项、类别项、规格项、贮藏项，在检查项中包括PH值 项、有关物质项、其它项的检测，在鉴别项中所提供的两种鉴别方法均为主药 氯霉素的鉴别方法，方法l为颜色反应，方法2为高效液相色谱法。
药品通常的有效期或保质期为2年，而氯霉素滴眼液的保质期只能达到8 —12个月，这是由于氯霉素滴眼液中氯霉素容易分解成氯霉素二醇物、对硝基 苯甲醛，氯霉素二醇物及对硝基苯甲醛对眼睛有较强的刺激性，影响患者的使 用。通过研究发现，通过对氯霉素滴眼液中物质成份进行调整，可以使氯霉素 滴眼液的保质期提高至2年以上，这些物质成份直接影响氯霉素滴眼液的保质 期，对氯霉素滴眼液的质量起着重要作用，有些物质成份还有一定的辅助治疗 作用，但目前中国药典所记载的氯霉素滴眼液的检测方法中对这些物质没有进 行鉴别或者含量测定，存在着一定的缺陷。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种完整的稳定性好的氯霉素滴眼液检
测方法。
本发明解决技术问题的技术方案为氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国 药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了甘草黄酮的鉴别方法。 所述的甘草黄酮的鉴别方法取氯霉素滴眼液1一5毫升，用60 — 80%乙醇
水溶液(v/v)稀释10 — 20倍，照紫外一可见分光光度法(中国药典附录IV A)， 在276士10nni的波长处有最大吸收。
甘草黄酮在氯霉素滴眼液中的用量一般为总重量0.3-0.5%，为了更加准确 的对氯霉素滴眼液中甘草黄酮进行的用量控制，还可在含量测定项中，增加甘 草黄酮的含量测定方法。
所述的甘草黄酮的含量测定方法即可为紫外分光光度法，也可为高效液相 色谱法，优选的测定方法为高效液相色谱法。
所述的紫外分光光度法为精密称取甘草黄酮对照品，制成每毫升含有0. 05 一0.2mg的溶液，以此作为对照液，在波长为276nm处，制做甘草黄酮标准吸收 曲线，将氯霉素滴眼液的吸收度与标准曲线中相应的吸收度进行比对，从而得 出氯霉素滴眼液中甘草黄酮的含量。
当采用了高效液相色谱法测定甘草黄酮的含量后，还可在氯霉素滴眼液检 测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体为在含量测定项下的甘 草黄酮的测定中，氯霉素滴眼液中甘草黄酮的主峰保留时间应与甘草黄酮对照 品的保留时间一致。
为了避免甘草黄酮鉴别过程中主药氯霉素的干扰，可以在鉴别反应中增加 预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液，加入混合菌种，在30— 35。C保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素滴眼液与混合菌种体积 比为100: 0.5-5。
混合菌种可以选择性针对氯霉素滴眼液中氯霉素产生黄色沉淀，而不影响 氯霉素滴眼液中其它的物质成份。
所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、 粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠i矣希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1432、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 6-10。
申请人认为甘草黄酮作为天然的抗氧化剂，具有很强的清除溶液中自由基 的作用，通过对氯霉素滴眼液中自由基的消除，能够使氯霉素滴眼液有效期达 到2年以上，同时还有一定的保健治疗作用，因此在中国药典的鉴别项中增加 甘草黄酮的鉴别方法，能够更加有效的提高中国药典中氯霉素滴眼液检测的完 整性。
由于在氯霉素滴眼液中增加了甘草黄酮能够提高氯霉素滴眼液的稳定性， 故可以将中国药典中氯霉素的标示量规定为85 —115%，而不是现行规定的标示 量大于85%即为合格产品，从而避免部分生产厂家采用多加主药氯霉素的形式使 氯霉素滴眼液在8 — 12个月的有效期内标示量达标，但导致氯霉素滴眼液的副 作用加大。
由于药品的有效期目前采取备案制度，不同厂家的相同产品的有效期经常 不一致，从而使消费者产生困惑，为此，在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项 中增加有效期项，并将有效期定为2年。
本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的甘草黄酮检 测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴眼 液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做详细的说明。 甘草黄酮对照品均从中检所购买。。 所述的氯霉素滴眼液的样品通过以下方法进行制备。取氯霉素2.5克，硼酸1.5克，硼砂0.5克，氯化钠6.5克，甘草黄酮0.3 克，用水加到IOOO毫升即可。 实施例h
取氯霉素滴眼液1毫升，用60%乙醇水溶液(v/v)稀释10倍，照紫外一可 见分光光度法(药典附录IV A)，在276nm的波长处有最大吸收。 实施例2:
紫外分光光度法测量甘草黄酮的含量
精密称取甘草黄酮对照品，制成每毫升含有0. lmg的溶液，以此作为对照 液，分别吸取对照液2ml、 4ml、 6ml、 8ml、 10ml、 12ml、 16ml、 18ml、 20ml于 50ml容量瓶中，再加体积浓度为60%乙醇溶液至刻度，在波长为276nm处，制 做甘草黄酮标准吸收曲线，取氯霉素滴眼液样品1毫升，在波长为276nm处测 定其吸收度，将氯霉素滴眼液的吸收度与标准曲线中相应的吸收度进行比对， 从而得出氯霉素滴眼液中甘草黄酮的含量。
实施例3:
高效液相法测定甘草黄酮含量
取氯霉素滴眼液样品l毫升，过滤，取续滤液适量，用体积浓度为20%的乙 腈稀释成每毫升溶液中约含有甘草黄酮20 ul的溶液，注入高效液相色仪，记 录色谱图，色谱条件为以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相 为体积比为l: 4的乙腈一0.5%醋酸溶液，检测波长276nm;
取甘草黄酮对照品适量，加甲醇制成每毫升溶液中含有甘草黄酮20ul的 溶液，作为标准品，注入高效液相色仪，记录色谱图，以外标法计算甘草黄酮 的含量。
实施例4:
a)混合菌种的制备取多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli) CGMCC 1. 1432、其扩大培养液混合的体积比为6: 1: 6。(每毫升液体中含有2XK)7个 活性菌体以上)。
b)将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的1。/。(V/V)加入，在30—35"保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液2ml，作为氯霉素滴眼液样品，按实施例1的方法进行检测。
实施例5:
a) 混合菌种的制备为
取多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC
1. 1432、其扩大培养液混合的体积比为1: 1: 1。(每毫升液体中含有2X107个
活性菌体以上)，过滤，
b) 将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的P/。(V/V)加入，在30—35'C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液作为氯霉素滴眼液样品，按照实施例3进行检测。
实施例4与实施例1相比，最大波长更容易辨别。 实施例5与实施例3相比，没有氯霉素主峰的干扰。
上面结合实施例对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受
上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质 性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均 在本发明的保护范围之内。
权利要求
1、一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，其特征在于在鉴别项中，增加甘草黄酮的鉴别方法。
2、 根据权利要求1所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的甘草黄酮的鉴别方法取氯霉素滴眼液l一5毫升，用60 — 80%乙醇水溶液(v/v)稀释10 — 20倍，照紫外一可见分光光度法(中国药典附录 IV A)，在276士10nm的波长处有最大吸收。
3、 根据权利要求2所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于在含量测定项中，增加甘草黄酮的含量测定方法。
4、 根据权利要2所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征 在于所述的甘草黄酮的含量测定方法即可为紫外分光光度法，也可为高效液相色谱法。
5、 根据权利要4所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征 在于所述的甘草黄酮的含量测定方法为高效液相色谱法。
6、 根据权利要5所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征 在于在氯霉素滴眼液检测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体 为在含量测定项下的甘草黄酮的测定中，氯霉素滴眼液中的甘草黄酮主峰保 留时间应与甘草黄酮对照品的保留时间 一致。
7、 根据权利要求2所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在鉴别反应中增加预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼 液，加入混合菌种，在30—35t:保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯 霉素滴眼液与混合菌种体积比为100: 0.5-5。
8、 根据权利要求7所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC1.794、粘质沙雷氏菌(Serratia marces訓)CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌 (Escherichia coli) CGMCC 1. 1.1432、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 6-10。
9、 根据权利要求2所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的氯霉素的标示量为85 — 115°/0。
10、 根据权利要求2所述的一种稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项目中增加有效期项，并将有效 期定为2年。
全文摘要
本发明公开了一种稳定性好氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了甘草黄酮的鉴别方法。本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的银杏提取物检测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴眼液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
文档编号G01N33/15GK101183096SQ20071019225
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月24日 优先权日2007年12月24日
发明者南 方 申请人:南 方