专利名称：细胞分份装置、细胞分份系统及细胞分份方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞分份装置、细胞分份系统及细胞分份方法。
背景技术：
以往，作为用于从在病理诊断等中使用的组织的薄切片切下并提取几十微米左右的微小区域的技术，公知有LMD (IaserMicrodissection :激光显微切割)法。在LMD法中，通过向组织切片的应提取的微小区域照射UV激光来从薄切片切下微小区域。非专利文献l:Leica MI CRO SYSTEMS、“Leica LMD7000”、[online]、[日本平成 22年 4 月 23 日检索]、网址〈URL http://www. leica-microsystems. co. jp/ffebsite/Products, nsf/(ALLIDs)/9482D2B75AA53E5F49257555001FB123> 但是，在从薄切片上切下存在癌细胞等特定细胞的区域、并想要使用从切下的微小的断片所含有的细胞中提取的基因实施基因检查的情况下，利用LMD法提取的断片所含有的细胞数量过少导致无法提取检查所需量的基因。因而，必须对许多薄切片进行显微解剖来收集足够数量的细胞，存在进行一次基因检查要花费大量劳力和时间的问题。另一方面，考虑增大切下的断片的面积或者增加从生物体组织切下的薄切片的厚度。但是，在想要增大通过LMD法切下的断片的情况下，需要增大能够扫描激光的区域，或者为了利用激光的压力吹走通过扫描激光而切下的断片而需要增大激光的输出。因此，存在装置的结构进一步大型化且装置的价格也激增的不良情况。另外，在增加了薄切片厚度的情况下，存在为了利用激光切断薄切片而仍然需要增大激光的输出的不良情况。
发明内容
本发明是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供一种能够通过简单的结构和操作从生物体组织的薄切片提取对于基因检查也足量的细胞的细胞分份装置、细胞分份系统及细胞分份方法。为了达到上述目的，本发明提供以下技术方案。本发明的第I技术方案所涉及的细胞分份装置包括基板，其设置为能够借助规定的分割线而分割成多个小片，且该基板具有能够粘贴生物体组织的薄切片的平坦的表面；片状的伸展构件，其以能够剥离的方式粘接该基板，并且能够朝向沿着上述表面的方向伸展；伸展部件，其使上述伸展构件至少在粘接有上述基板的区域中朝向沿着上述表面的方向伸展；以及提取部件，其从上述伸展构件剥离并提取被分割出的上述小片。根据上述第I技术方案，在将粘结有生物体组织的薄切片的基板粘接于伸展构件的状态下，通过利用伸展部件使伸展构件伸展，从而使粘贴在基板上的薄切片与基板一起借助规定的分割线被分割。因而，通过利用提取部件从被分割成的多个小片当中提取含有所期望的细胞的薄切片的断片，能够仅通过简单的结构和操作从薄切片提取细胞。在该情况下，通过增加薄切片的厚度或者在平面方向上使小片增大，能够增加附着于各个小片的细胞的量，仅靠提取一个或多个小片就能够容易地提取对于基因检查也足量的细胞。在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述伸展构件在表面上具有粘合性。通过如此设置，能够容易地将基板粘接于伸展构件。另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述基板以多个分离的小片以彼此相邻地排列的状态粘接于上述伸展构件而形成。通过如此设置，在使伸展构件伸展时，能够容易且可靠地将基板分割成小片。另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述分割线由形成在上述基板的表面上的槽构成。通过如此设置，在使伸展构件伸展时，能够在槽的位置容易地分割基板。
另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述伸展构件由光学上透明或半透明的材料构成。通过如此设置，在利用光学显微镜观察伸展构件的透过光图像时，能够确认伸展构件上的小片的位置。另外,在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述小片呈具有O. 05mm O. 5mm的厚度尺寸和O. 05mm 5. Omm的边尺寸的立方体状。通过如此设置，能够以充分高的精度从薄切片选择并提取所期望的区域，并且使足够量的细胞附着于各个小片。另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述伸展部件包括固定构件，其将上述伸展构件的、粘接有上述基板的区域的周边部位固定为规定的形状；以及按压构件，其从与粘接有上述基板的面相反的面的一侧按压由该固定构件固定的上述伸展构件的上述区域。通过如此设置，仅通过简单的结构和操作就能够使伸展构件伸展。另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述提取部件具有针构件，该针构件从与粘接有上述小片的面相反一侧的面刺入上述伸展构件的粘接有该小片的位置。通过如此设置，能够容易地使多个小片中的特定的小片从伸展构件剥离并进行提取。另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述细胞分份装置具有将上述伸展构件的上述区域保持为伸展状态的保持构件。通过如此设置，能够使伸展构件伸展而保持为在各个小片彼此之间隔开有间隔的状态，从而能够更容易地利用提取部件进行小片的提取。另外，在上述结构的基础上，也可以是，上述保持构件能够将上述伸展构件的粘接有上述基板的一侧的面保持为朝向下方。通过如此设置，通过在以基板朝下的方式保持伸展构件的状态下利用保持构件使小片剥离，能够利用自重使小片落下并容易地回收。另外，在具有上述保持构件的结构的基础上，也可以是，该细胞分份装置具有吸引构件，该吸引构件配置在由上述保持构件保持的上述伸展构件的、粘接有上述基板的面的一侧，且该吸引构件的内部被吸引而形成负压。通过如此设置，仅使吸引构件靠近应提取的小片就能够容易地将该小片回收到吸引构件内。
另外，在上述第I技术方案的基础上，也可以是，上述小片是具有O. OOlmm O. 5mm的直径尺寸的磁性微粒。通过如此设置，能够例如在溶液中对回收的小片进行处理时使利用磁力从溶液中分离该小片等处理高效化。另外，在上述结构的基础上，优选的是，上述提取部件在与上述小片的尺寸大致相同大小的空间内具有产生使上述磁性微�？拷拇帕Φ拇盘�。通过如此设置，通过使磁体靠近所期望的小片，能够将该小片捕捉到磁体上并容易地从伸展构件提取。另外，本发明的第2技术方案所涉及的细胞分份系统包括上述任一项所述的细胞分份装置；以及观察装置，其用于观察粘接于上述伸展构件的上述基板上的上述薄切片。 根据上述第2技术方案，通过利用观察装置对粘贴在基板上的薄切片、分割后形成的小片等进行观察，能够更容易且更准确地选择应当提取的小片、提取所选择的小片。另外，本发明的第3技术方案所涉及的细胞分份方法包括将生物体组织的薄切片以跨越上述分割线的方式粘贴在能够借助规定的分割线而分割成多个小片的基板的表面上的粘贴步骤；通过朝向沿着上述表面的方向拉伸粘贴有上述薄切片的上述基板而利用上述分割线使上述基板和上述生物体组织的薄切片分割的分割步骤；以及提取在该分割步骤中被分割的上述薄切片的上述小片的提取步骤。根据上述第3技术方案，在粘贴步骤中将薄切片粘贴在基板上之后，通过在分割步骤中拉伸基板来将基板与粘贴在该基板上的薄切片一起分割成多个小片，通过在提取步骤中从分割成的多个小片中选择并提取小片，能够通过简单的结构和操作从生物体组织的薄切片提取对于基因检查也足量的细胞。根据本发明，发挥了能够通过简单的结构和操作从生物体组织的薄切片提取对于基因检查也足量的细胞的效果。
图I是本发明的一个实施方式的细胞分份系统的整体结构图。图2A是粘接在粘合片上的玻璃基板的侧视图，表示使槽朝向粘合片侧时。图2B是粘接在粘合片上的玻璃基板的侧视图，表示使槽朝向与粘合片相反一侧时。图3A是表示粘接在粘合片上的玻璃基板的图。图3B是表示通过粘合片的伸展而被分割的玻璃基板的图。图4是表示伸展用台和夹具的结构的图。图5A是说明图4的伸展用台和夹具的使用方法的图，表示使粘合片伸展前的状态。图5B是说明图4的伸展用台和夹具的使用方法的图，表示使粘合片伸展后的状态。图5C是说明图4的伸展用台和夹具的使用方法的图，表示利用夹持环保持粘合片的状态。图6是说明使用图I的细胞分份装置和细胞分份系统从薄切片提取细胞的过程的流程图。图7是表示基板的变形例的图。图8是表不基板的另一个变形例的图。图9是表示图I的细胞分份系统的变形例的图。
图10是表示图I的细胞分份系统的另一个变形例的图。图11是表示使用图I的细胞分份系统提取细胞的过程的变形例的流程图。图12是表示使应用了外筒和内筒的粘合片伸展的方法的变形例的图，且是表示在外筒设置有粘合片的状态的图。图13是表示使用图12的外筒和内筒使粘合片伸展后的状态的图。图14是表示通过另一方法利用图12的外筒和内筒使粘合片伸展后的状态的图。图15A是表示使粘合片伸展的方法的另一个变形例的图，表示粘合片伸展前。图15B是表示使粘合片伸展的方法的另一个变形例的图，表示粘合片伸展后。图16是表示夹持环的变形例的图。图17是通过本发明的实施例制成的薄切片的照片，表示分割前的状态。图18是表示图17的薄切片的分割后的状态的照片。图19是表示从伸展结束的粘合性片分离并提取小片的状态的例子的图。图20A是表示从伸展结束的粘合性片分离小片并利用吸引构件提取小片的状态的例子的图。图20B是表示从伸展结束的粘合性片分离小片并利用吸引构件提取小片的状态的例子的放大图。图21A是表示使伸展结束的粘合片倾斜并利用针提取小片的状态的图。图21B是表示使伸展结束的粘合片倾斜并利用吸引构件提取小片的形态的图。
具体实施例方式以下，参照
本发明的一个实施方式的细胞分份装置I和细胞分份系统100。如图I所示，本实施方式的细胞分份系统100具有光学显微镜(观察装置)2和本实施方式的细胞分份装置I。光学显微镜2是正置型。光学显微镜2在摄像机用端口 2a处连接有拍摄其视野的C C D摄像机等摄像装置3，由摄像装置3拍摄的影像显示在未图示的监视器中。由摄像装置3拍摄的影像也可以在由图像处理器等未图示的影像处理装置实施影像处理之后显示在监视器中。细胞分份装置I具有粘贴生物体组织的薄切片的玻璃基板(基板)4、能够朝向沿着其表面的方向伸展并供玻璃基板4粘接的粘合片(伸展构件)5、使该粘合片5伸展的伸展用台(伸展部件、按压构件)6、在利用该伸展用台6进行伸展时保持粘合片5的夹具7以及从粘合片5提取玻璃基板4的小片4b的提取部件8。玻璃基板4呈具有平坦的表面的平板状。如图2A及图3A所示，在玻璃基板4的表面上隔开规定的间隔地形成有方格状的槽(分割线)4a。槽4a既可以通过例如激光加工、化学蚀刻、切割等来形成，也可以借助操作者的手动操作使用玻璃切刀等来形成。
玻璃基板4优选为能够稳定地支承生物体组织的薄切片的厚度、例如O. 05mm O. 5_。槽4a的间隔虽能够根据应从薄切片提取的断片的大小而适当地变更，但是为了以充分细微的位置精度从薄切片内提取所期望的区域的断片、并且在所提取的断片中含有足够量的细胞，槽4a的间隔优选为O. 05mm 5. 0mm。玻璃基板4使用在光学上透明的构件，以便能够利用光学显微镜2观察粘贴在该玻璃基板4上的薄切片的透光图像。另外，对于玻璃基板4，为了提高其表面与薄切片之间的紧密接触性，也可以对表面实施硅烷化等化学处理，也可以根据在提取小片4b之后进行的检查等的目的而实施例如用于防止核酸、蛋白质等吸附的涂敷处理等。粘合片5在一个面上涂布有粘接剂而具有能够足够牢固并且以能够借助后述的提取部件8剥离的方式粘接玻璃基板4的粘合性。另外，粘合片5能够向沿着其表面的方向伸展。当在使玻璃基板4粘接于粘合片5的状态下使粘合片5向沿着其表面的方向伸展时，伴随着粘合片5的伸展，玻璃基板4也向沿着其表面的方向被拉伸，如图3B所示，玻璃基板4在槽4a的位置被切断而被分割为多个小片4b。另外，此时，粘贴在玻璃基板4的表1·面上的薄切片A也同时向沿着其表面的方向被拉伸而沿着槽4b被切断。粘合片5在光学方面具有透过性或半透过性，当利用光学显微镜2观察粘合片5时，也能够观察隔着该粘合片5配置在与光学显微镜2的物镜相反侧的物体。作为粘合片5，例如能够酌情使用在半导体制造工艺的切割工序中使用于暂时固定晶片的切割带。另外，图2A中示出玻璃基板4以使槽4a朝向粘合片5侧的方式粘接于粘合片5的例子，但是如图2B所示，也可以使玻璃基板4以使槽4a朝向与粘合片5相反的一侧的方式粘接于该粘合片5。如图4所示，伸展用台6呈大致圆柱状，两端形成为大致平行且平坦。伸展用台6以上端侧的部分(以下，称做小径部分。)6a具有比其他部分(以下，称作大径部分。)6b小的直径尺寸的方式在侧表面形成有台阶。夹具7具有能够以扩展了粘合片5的状态粘贴该粘合片5的下框(固定构件)9a、从上方覆盖于该下框9a的上框9b以及将粘合片5保持为伸展状态的夹持环10a、10b (保持构件)。夹持环10a、10b由外环IOa与内环IOb构成,外环IOa的内径尺寸与内环IOb的外径尺寸形成为大致相同。下框9a与上框9b在大致中央部分分别形成有沿压板方向贯通的窗孔9c、9d。在上框9b的窗孔9d的内侧沿着其内周面嵌入有外环10a。下框9a的窗孔9c具有小径部分6a的外径尺寸以上的直径。夹具7以如下方式使用。首先，沿着小径部分6a的外周嵌入内环10b。然后，在将玻璃基板4配置在窗孔9c的位置并使粘接有玻璃基板4的一侧朝向上方的状态下，将粘接有玻璃基板4的粘合片5粘接于下框9a的下表面。由此，如图5A所示，粘合片5的粘接有玻璃基板4的区域的周边被固定为规定的形状。接着，在将粘合片5的与窗孔9c对齐的部分压靠于伸展用台6的上端面的状态下，向下方按压下框9a而使其移动。由此，如图5B所示，粘合片5的与窗孔9c对齐的部分从伸展用台6被按压而伸展，玻璃基板4伴随着粘合片5的伸展而被分割为多个小片4b。接着，如图5C所示，通过在使粘合片5伸展的状态下将上框9b覆盖于下框9a，使外环IOa与内环IOb嵌合。由此，粘合片5的与窗孔9c对齐的部分被夹持环10a、IOb保持为伸展状态。
另外，在以此方式使粘合片5伸展时，也可以在粘合片5上附加用于获知该粘合片5伸展到何种程度的记号例如刻度。提取部件8具有提取针11和操作该提取针11的操纵器12。提取针11的顶端部具有与小片4b大致相同或其以下的直径尺寸。操纵器12在臂12a的顶端保持有提取针
11。操纵器12根据由操作者进行的操作相应地使臂12a沿三维方向移动。以下，参照图6说明使用如此构成的细胞分份装置I和细胞分份系统100从生物体组织的薄切片提取含有所期望的细胞的断片的方法。为了使用本实施方式的细胞分份装置I和细胞分份系统100从生物体组织的薄切片提取目标细胞，首先，从生物体组织切下提取用薄切片(薄切片)(步骤Si)，将切下的提取用薄切片粘贴于玻璃基板4 (步骤S2、粘贴步骤)。然后，利用光学显微镜2观察提取用薄切片并获取检体图像(步骤S3)。 提取用薄切片的切下例如通过冷冻切片法、石蜡切片法等来进行。提取用薄切片的厚度虽根据所提取的细胞的用途而不同，但是比普通的在病理标本等中使用的薄切片的厚度(约几μ m 10 μ m)厚,例如以约50 μ m的厚度切下提取用薄切片。当切下的提取用薄切片的尺寸小于玻璃基板4的槽4a之间的间隔时，以提取用薄切片跨越槽4a的方式将提取用薄切片粘贴在玻璃基板4上。另外，相对于提取用薄切片另外从生物体组织的与提取用薄切片的切下位置相邻的位置切下厚度几Pm ΙΟμπι左右的染色用薄切片。所切下的染色用薄切片在粘贴于滑动玻璃上之后，例如预先实施病理诊断用的染色(步骤S4)。然后，利用光学显微镜2观察染色完成的染色用薄切片而获取染色图像(步骤S5)，确定在所获取的染色图像内存在有期望的细胞的应提取的区域、例如被癌细胞侵蚀的区域(步骤S6)。接着，将所获取的检体图像与染色图像以各个图像内的薄切片恰好重合的方式重叠地显示(步骤S7)，记录与染色用薄切片内的确定了的应提取的区域对齐的小片4b的位置、例如该小片4b的列编号与段编号(步骤S8)。接着，将玻璃基板4粘接在粘合片5上。另外，也可以在预先粘接于粘合片5的玻璃基板4上粘贴所切下的提取用薄切片。接着，通过使用伸展用台6和夹具7使粘合片5伸展来分割玻璃基板4 (步骤S9、分割步骤)。此时，粘贴在玻璃基板4上的提取用薄切片也与玻璃基板4 一起沿其平面方向被拉伸而在槽4a的位置分割为断片。接着，利用夹持环10a、IOb将粘合片5保持为伸展状态，以使粘接有玻璃基板4的一侧的面朝向下方的方式将粘合片5设置在标本台2b上。此时，既可以将粘合片5以从下框9a剥离后的状态设置在标本台2b上，也可以将粘合片5与下框9a —起设置在标本台2b上。接着，通过一边利用光学显微镜2观察预先记录的位置的小片4b —边在其视野内操作操纵器12来将提取针11配置在应提取的小片4b背后，通过利用提取针11刺入应提取的小片4b的背面来使小片4b从粘合片5剥离并落下(步骤S10、提取步骤)。此时，也可以在标本台2b的下方配置管支架13，在小片4b的落下位置预先设置回收管13a。通过以上过程，能够从提取用薄切片提取存在所期望的细胞的区域的断片和小片4b。所提取的细胞例如在基因检查等中使用。这样，根据本实施方式，具有仅通过简单的结构和操作就能够从薄切片选择性地提取存在所期望的细胞的区域的优点。另外，由于不需要UV激光光源这样的昂贵的结构，因此具有能够将制造成本控制得较便宜的优点。另外，由于与LMD不同，通过力学切断薄切片，因此即使是比较厚的薄切片也能够容易地切断，并且仅调节槽4a之间的间隔就能够容易地扩大小片4b的大小。因而，以往为了回收足够的细胞数量而需要从多个薄切片提取断片从而需要花费巨大的劳力的作业仅提取I个或少数小片4b就可完成，因此具有能够大幅度削减作业所需的劳力和时间的优点。在上述实施方式中，虽使用形成有方格状的槽4a的玻璃基板4作为粘贴薄切片的基板，但代替该情况，也可以使用玻璃的小片4b沿平面方向排列而成的玻璃基板4。在该情况下，为了保持玻璃基板4的形状，如图7所示，使玻璃的小片4b以预先排列的状态粘合在粘合片5上。通过如此设置，当使粘合片5伸展时，能够在小片4b彼此的边界(分割线)处更容易且可靠地分割玻璃基板4。另外，为了形成分割的小片预先排列在粘合片5上的状态，作为一例，能够采用如 下所述的方法。在粘合片5上粘接玻璃基板4，利用玻璃切刀在该玻璃基板4上呈方格状划出痕迹。然后，通过在划痕位置徒手分割玻璃基板4而能够容易地如图7所示那样形成小片4b排列在粘合片5上的状态。此时，优选的是，一边利用薄膜等保护玻璃基板4表面一边进行分割，以使得玻璃基板4不会弄脏。另外，在上述实施方式中采用的基板的结构仅是一例，并不限定于该结构。例如，基板的材料除了玻璃以外也可以是树脂等。作为小片4b的形状，只要是能够紧密排列在粘合片5的表面上的形状即可，例如也可以是正六边形、三角形。另外，如图8所示，也可以使用球状的玻璃串珠、树脂串珠4c作为小片，通过使这些串珠在粘合片5上以作为优选方式的单层排列来构成基板4’。另外，作为基板，也可以使用具有磁性的基板。例如，也可以使直径为Ιμπι 500 μ m的磁性微粒紧密地排列在粘合片5的表面上，也可以将不锈钢等金属板用作基板。在作为基板而使用金属那样的不会使可见光透过的基板的情况下，当利用光学显微镜观察粘合片5的透光图像时，即使小片4b较小也能够清楚地目视确认。在该情况下，也可以使用磁体作为提取部件8。例如，在提取针11的顶端设有与磁性微粒大致相同大小的磁体。进而，通过使提取针11的顶端从与粘合片5相反的一侧靠近磁性微粒，能够利用磁力在提取针11的顶端捕捉所期望的磁性微粒并从粘合片5进行提取。另外，在上述实施方式中使用正置型的光学显微镜2，虽采用了伸展用台6与光学显微镜2分开设置的结构，但是细胞分份系统100的结构并不限定于此。例如，作为光学显微镜2，也可以使用倒立型，也可以将伸展用台6搭载于光学显微镜2。图9表示在倒立型的光学显微镜2中设置伸展用台6与夹具7的结构的一例。标本台2b设置为能够在光学显微镜2的观察位置与离开光学显微镜2的主体的位置之间沿着导轨2c在水平方向上滑动。在这种结构中，通过在将标本台配置于观察位置的状态下使夹具7向下方移动而使粘合片5在伸展用台6上伸展。之后，使标本台2b滑动，使用与光学显微镜2分开设置的提取部件8提取小片4b。图10表示在正置型的光学显微镜2中设置有伸展用台6、夹具7及提取部件8的结构的一例。伸展用台6设置为能够在标本台2b的上方与物镜一体地沿上下方向移动，使伸展用台6从上方压紧借助夹具7保持在标本台2b上方的粘合片5。在该结构中，在标本台2b上能够进行从粘合片5的伸展到小片4b的提取这一连串的操作。另外，在上述实施方式中，虽通过使提取用薄切片的检体图像与染色用薄切片的染色图像对齐来确定应提取的小片4b，但是代替这种情况，也可以根据提取用薄切片的图像来确定应提取的小片4b。在比较厚的提取用薄切片的情况下，由于细胞在厚度方向上重叠，因此即使实施染色也难以根据图像准确地识别各个细胞的形状、细胞的分布等。但是，在根据这种染色图像、未染色的薄切片的图像也能够基于大概的组织形状、细胞的分布判断应提取的区域的情况下，例如，如图11所示，可以一边利用光学显微镜2观察提取用薄切片一边当场选择应提取的小片4b (步骤S11)，也可以进行粘合片5的伸展(步骤S9)和小片4b的提取(步骤S10)。通过如此设置，能够根据需要进一步简化过程。
另外，在上述实施方式中，虽使用大致圆柱状的伸展用台6使粘合片5伸展，但是使粘合片5伸展的方法并不限定于此。例如，取代伸展用台6，也可以使用外筒14a和能够容纳在该外筒14a内的内筒14b。在该情况下，如图12所示，将粘合片5覆盖在外筒14a的上端面并固定在外筒14a的侧表面。附图标记15示出用于将粘合片5固定在外筒14a的侧表面的固定构件。接着，如图13所示,使内筒14b从外筒14a的内部相对地突出，或者如图14所示,从外筒14a的外部向该外筒14a内相对地压入内筒14b,从而能够使粘合片5向各个方向大致均勻地伸展。另外，如图15A所示，利用保持件16在观察粘接有玻璃基板4的区域的位置将粘合片5保持为恒定的形状，如图15B所示，通过使粘接有玻璃基板4的区域压紧伸展用台6，也可以使粘合片5伸展。另外，作为夹持环，也可以使用能够借助于磁力维持为相互紧密接触状态的构件。例如，如图16所示，夹持环10c、10d由具有相同直径尺寸且利用由磁体构成的上环IOc和由不锈钢等金属构成的下环IOd构成，通过使粘合片5以伸展的状态夹在上环IOc与下框IOd之间并利用磁力使两环10c、IOd相互紧密接触，也能够将粘合片5保持为伸展状态。两个环10c、10d也可以由相互产生引力的磁体构成。另外，在上述实施方式中，虽通过利用提取针11从背后刺入小片4b而使该小片4b从粘合片5剥离并进行回收，但是代替这种情况，也可以使用能够将内部吸引为负压的吸引构件。即使这样，通过使吸引构件从与粘合片5相反的一侧靠近应提取的小片4b，从而能够使小片4b从粘合片5剥离并回收到吸引构件内。另外，作为粘合片5，也可以使用通过照射紫外线使粘合性丧失的构件。在该情况下，例如在光学显微镜2上搭载紫外光源(提取部件)。并且，通过经由物镜向应提取的小片4b的位置局部地照射从紫外光源放射的紫外线，从而能够使小片4b容易地从粘合片5剥离并进行回收。此外，即使利用光纤引导紫外光并使纤维端朝向应提取的小片4b的位置局部地进行照射，也能够获得相同的效果。〈利用吸引来提取小片的方式〉
也可以利用在顶端开设有小片无法通过的大小的孔的管状的吸引构件从粘合片提取任意的小片。吸引构件的内部能够根据需要形成为负压，从而能够在顶端吸附小片而从粘合性片输送并提取该小片。该管状的吸引构件既可以呈捆束有多个的形态，也可以按照与伸展后的小片的间隔吻合的配置在管状的吸引构件的顶端开设有多个小片无法通过的大小的孔。只要使用这种构件，就能够同时提取多个小片。另外，也可以使管状吸引构件的孔的大小比小片大，通过进行吸引将小片回收到管内。而且，也可以利用具有导电性的材料制作吸引构件并设置吸引构件。这样，即使小片带电也能够进行去电，因此小片的处理变容易。<在从伸展完成的粘合性片上分离所有或一部分小片之后进行提取的方式>
只要在粘合性片中使用具有紫外线敏感性的粘合剂，就能够通过照射紫外线来能够降低粘合性。在利用这种粘合性片使粘合性降低的状态下，可以利用图19所示的集合针构件17在平板18上分离所有或者任意的小片，并在平板18上从分离的小片组提取所需的小片。作为提取方法，既可以利用镊子把持来进行提�。部梢允褂孟惹八龅墓茏次辜�19如图20A或图20B所示那样通过吸引来进行提取。<使伸展完成的粘合片倾斜并利用针或吸引构件提取小片的方式>也可以不使伸展完成的粘合片铅垂地朝下，而是使该粘合片相对于铅垂线倾斜来使小片落下并进行提取。在这种情况下，与使粘合片水平的时候相比，用于观察小片的观察部24和用于回收落下的小片的容器23的配置变容易。作为提取方法，既可以如图21A所示那样使用漏斗状引导构件22从伸展完成的粘合片5背侧提取利用针21按压而落下的小片，另外，也可以使用先前所述的管状吸引构件19如图21B所示那样通过吸引来进行提取。<通过在容器的上方配置漏斗状的构件来回收小片的方式>也可以将足够大的漏斗状的构件配置在回收容器的上方。这样，即使是较小的开口的回收容器，也能够稳妥且容易地提取小片。实施例接着，说明上述实施方式的实施例。在本实施例中，为了确认利用细胞分份装置分割生物体组织的薄切片的情况而进行以下实验。使用猪的结肠作为生物体组织，利用冷冻切片法从生物体组织切下厚度为50 μ m、4边约为10_的薄切片。将切下的薄切片以角部彼此相邻的方式排列在切割片(伸展构件)上，并在以跨越该玻璃盖片的边界(分割线)的方式粘贴在相粘贴的两片玻璃盖片上之后使薄切片风干。玻璃盖片使用各边尺寸为18mm、厚度为O. 13mm O. 17mm的玻璃盖片。接着，以薄切片配置在窗孔的大致中央部分的方式，将切割带粘贴于在大致中央部贯通地形成有圆状的窗孔而成的上框。接着，使粘贴有玻璃盖片侧的面朝向上方，通过在窗孔内配置有圆柱状的台的状态下一边将上框保持为大致水平一边下压该上框，从而使切割带的配置在窗孔内的部分沿其平面方向伸展。由此，使两片玻璃盖片彼此分离，在玻璃盖片的边界处将粘贴在玻璃盖片上的薄切片分割为两个断片。在图17、图18中示出将如此分割薄切片之前、之后的薄切片的照片。图17表示使切割带伸展前的状态。在照片的大致中央呈纵向显示的线L是玻璃盖片的边界(分割线)。图18表示使切割带伸展后的状态，可知薄切片沿着玻璃盖片的边界被彻底地分割。根据以上实验能够确认，通过使用本发明的细胞分份装置和细胞分份系统，即使是比较厚的薄切片，也能够容易地且沿着分割线足够彻底地进行分割。附图标记说明I细胞分份装置；2光学显微镜(观察装置)；2a摄像机用端口 ；2b标本台；3摄像装置；4玻璃基板(基盘)；4a槽(分割线)；4b 小片；5粘合片(伸展构件)；6伸展用台(伸展部件、按压构件)；7夹具；8提取部件；9a下框(固定构件);9b上框；9c、9d窗孔；IOa夹持环、外环(保持构件)；10b 夹持环、内环(保持构件)；10c 夹持环、上环(保持构件)；10d 夹持环、下环(保持构件)；11提取针(针构件)；12操纵器；12a 臂；13管支架；13a回收管；14a外筒；14b内筒；15固定构件；16保持件；17集合针构件；18平板；19 吸引构件；21针；22漏斗状引导构件；23回收容器；24观察部；100细胞分份系统。
权利要求
1.一种细胞分份装置，包括 基板，其设置为能够借助规定的分割线而分割成多个小片，且该基板具有能够粘贴生物体组织的薄切片的平坦的表面； 片状的伸展构件，其以能够剥离的方式粘接该基板，并且能够朝向沿着上述表面的方向伸展； 伸展部件，其使上述伸展构件至少在粘接有上述基板的区域中朝向沿着上述表面的方向伸展；以及 提取部件，其从上述伸展构件剥离并提取被分割出的上述小片。
2.根据权利要求I所述的细胞分份装置，其中， 上述伸展构件在表面上具有粘合性。
3.根据权利要求I或2所述的细胞分份装置，其中， 上述基板以多个分离的小片彼此相邻地排列的状态粘接于上述伸展构件而形成。
4.根据权利要求I或2所述的细胞分份装置，其中， 上述分割线由形成在述基板的表面上的槽构成。
5.根据权利要求I至4中任一项所述的细胞分份装置，其中， 上述伸展构件由光学上透明或半透明的材料构成。
6.根据权利要求I至5中任一项所述的细胞分份装置，其中， 上述小片呈具有O. 05mm O. 5mm的厚度尺寸和O. 05mm 5. Omm的边尺寸的立方体状。
7.根据权利要求I至6中任一项所述的细胞分份装置，其中， 上述伸展部件具有 固定构件，其将上述伸展构件的、粘接有上述基板的区域的周边部位固定为规定的形状；以及 按压构件，其从与粘接有上述基板的面相反的面的一侧按压由该固定构件固定的上述伸展构件的上述区域。
8.根据权利要求I至7中任一项所述的细胞分份装置，其中， 上述提取部件具有针构件，该针构件从与粘接有上述小片的面相反一侧的面刺入上述伸展构件的粘接有该小片的位置。
9.根据权利要求I至8中任一项所述的细胞分份装置，其中， 该细胞分份装置具有将上述伸展构件的上述区域保持为伸展状态的保持构件。
10.根据权利要求9所述的细胞分份装置，其中， 上述保持构件能够将上述伸展构件的粘接有上述基板的一侧的面保持为朝向下方。
11.根据权利要求9或10所述的细胞分份装置，其中， 该细胞分份装置具有吸收构件，该吸收构件配置在由上述保持构件保持的上述伸展构件的、粘接有上述基板的面的一侧，且该吸收构件内部被吸引而形成负压。
12.根据权利要求3所述的细胞分份装置，其中， 上述小片是具有O. OOlmm O. 5mm的直径尺寸的磁性微粒。
13.根据权利要求12所述的细胞分份装置，其中， 上述提取部件在与上述小片的尺寸大致相同大小的空间内具有产生使上述磁性微�？拷拇帕Φ拇盘濉�
14.一种细胞分份系统，其中，该细胞分份系统具有 权利要求I至13中任一项所述的细胞分份装置；以及 观察装置，其用于观察粘接于上述伸展构件的上述基板上的上述薄切片。
15.—种细胞分份方法,该细胞分份方法包括 将生物体组织的薄切片以跨越上述分割线的方式粘贴在能够借助规定的分割线而分割成多个小片的基板的表面上的粘贴步骤； 通过朝向沿着上述表面的方向拉粘贴有上述薄切片的上述基板而利用上述分割线使上述基板和上述生物体组织的薄切片分割的分割步骤；以及 提取在该分割步骤中分割出的上述薄切片的上述小片的提取步骤。
全文摘要
本发明提供一种细胞分份装置、细胞分份系统及细胞分份方法。通过简单的结构和操作从生物体组织的薄切片提取对于基因检查也足量的细胞。该细胞提取装置包括基板(4)，其设置为能够借助规定的分割线而分割成多个小片，且该基板(4)具有能够粘贴生物体组织的薄切片(A)的平坦的表面；片状的伸展构件(5)，其以能够剥离的方式粘接该基板(4)，并且能够朝向沿着表面的方向伸展；伸展部件(6)，其使伸展构件(5)在至少粘接有基板(4)的区域中朝向沿着表面的方向伸展；以及提取部件，其从伸展构件(5)剥离并提取被分割出的小片。
文档编号G01N1/28GK102918376SQ20118002606
公开日2013年2月6日 申请日期2011年5月26日 优先权日2010年5月28日
发明者森本伸彦 申请人:奥林巴斯株式会社
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
