豆基食品中叶黄素的含量检测方法-山东亚星游戏官网机床有限公司

专利名称：豆基食品中叶黄素的含量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法。
技术背景
叶黄素是视网膜的主要色素成分，有过滤蓝光和抗氧化的作用，是匡助眼睛发育的重要营养素。由于光的照射，短光(蓝光)对视网膜的伤害很大。婴儿出身时的晶状体相对比较清彻，零-二岁段，约70-80%的蓝光可穿透晶状体到达视网膜。叶黄素为婴幼儿幼嫩的眼睛起到了屏障作用，于是有人把叶黄素比作“隐形的太阳镜”。由于人体自身并不能合成叶黄素，因此每天必须给宝宝补充一定量的叶黄素。
目前公司新推出的豆基产品中便添加了叶黄素，对于豆基食品中叶黄素的含量测定，国标中尚未有相应的检测方法。因此，开发豆基食品中叶黄素的含量检测方法对调配出最适于婴幼儿成长所需的含叶黄素豆基类食品有着重要意义。发明内容
本发明的目的在于提供一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法。旨在以方便、快捷、准确地检测豆基食品中叶黄素的含量。
本发明，其原理是豆基食品中含淀粉，先经淀粉酶酶解后，利用石油醚进行提取，浓缩后用丙酮重溶，经紫外检测器测定，外标法定量。
本发明，包括如下工作步骤 (1)试剂准备，所用试剂包括(a)甲醇色谱纯；(b)甲基叔丁基醚色谱纯；(c)丙酮色谱纯；(d)2，6- 二叔丁基对甲酚(BHT)纯度彡99% ；(e)二氯甲烷色谱纯；(f)石油醚分析纯；(g)淀粉酶酶活力彡1.5U/mg ；(h)叶黄素标准品纯度彡96.2% ；(i)0.P/oBHT的丙酮溶液称取0. 500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度； (j)标准储备液lOOPg/mL:准确称取IOmg叶黄素标准品，用二氯甲烷溶解并定容至lOOmL，于-80°C冰箱中避光保存，保存期为3个月；(k)标准中间液2(^g/mL 准确移取2mL标准储备液，用甲醇定容至IOmL ；(1)标准系列工作液以含0.P/oBHT的丙酮溶液将标准中间液分别稀释成0. 4Pg/mL、 0. 8Pg/mL、L 6Pg/mL、2. 0Pg/mL、2. 5Pg/mL ；(m)水超纯水；(2)仪器设备，仪器设备包括4(a)高效液相色谱仪岛津LC-20AT泵，SPD-20A紫外检测器；(b)电子天平精确至0.0001g；(c)超声波提取器；(d)涡旋混合器；(e)氮吹仪；(f)高速离心机；(3)样品处理准确称取样品1.0g，精确至0. 0001 g,置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入20mL45-50°C水，再加入0. Ig淀粉酶，涡旋混勻，置50_60°C培养箱中培养30min，取出冰浴冷却至30°C以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取lOmin，超声过程需更换冰块，保证整个提取过程温度不超过30°C，取出冷却至10°C以下，于5000r/min离心 5min，准确移取IOmL上清液于一 15mL离心管中，30°C以下氮吹至干，用含0. 1%BHT的丙酮溶液定溶至lmL，涡旋混勻，过0. 2Mm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；(4)色谱条件，色谱条件包括(a)色谱柱YMC Carotenoid(250 mmX4. 6mm, 5Mm)或相当者；(b)进样量:20μ ；(c)流速1.OmL/min ；(d)紫外检测器波长445nm;(e)柱温25°C；(f)流动相85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；(5)定量分析(a)标准曲线绘制将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪，测定相应的峰面积，以峰面积为横坐标，标准工作液浓度为纵坐标绘制标准曲线；(b)试液测定将制备好的样液注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，以标准曲线对样品进行定量，测得试液浓度；(c)计算，计算公式为X=Cxv1Xio(VOiiXv2)，式中 χ 试样中叶黄素的含量，单位为Pg/100g ；C 由标准曲线得到的试液浓度，单位为Pg/mL ； V1 加入石油醚的体积，单位为mL ； V2 移取上清液的体积，单位为mL ； m:试样质量，单位为g。
本发明，是在《奶粉中叶黄素测定》(GB/T 23209-2008)的基础上加以改进。(1) 婴幼儿食品中，豆基食品与奶粉的检验有许多相似之处。但因豆基中含有淀粉，需要酶解而奶粉中叶黄素的提取剂为丙酮，丙酮与水互溶，萃取后无法与水分层(酶解过程需加水)，最后亦无法氮吹浓缩。本方法采用石油醚进行萃�。腿『蠓植忝飨裕谏锨逡旱囊迫∮氲蹬ㄋ酰�(2)为将豆基中的叶黄素充分提取出来，本方法采用超声提取代替振荡萃取。且因叶黄素对热极不稳定，故整个超声提取过程采用冰浴降温，从而最大限度地减少提取过程中的损失；(3)GB/T 23209-2008中采用甲醇与甲基叔丁基醚进行梯度洗脱，整个梯度走完需15分钟。本发明采用等度洗脱，以85%甲醇与15%甲基叔丁基醚作为流动相，7. 3分钟左右即可出峰，每针样品走完仅需9分钟。
本发明，在豆基食品中检测叶黄素的含量，具有方便、快捷、准确等优点。对调配出最适于婴幼儿成长所需的含叶黄素豆基类食品有着重要意义。

图1为叶黄素含量标准曲线图。图中，纵坐标为标准工作液浓度，横坐标为标准工作液对应的峰面积。
具体实施方式
一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法，包括如下工作步骤 (1)试剂准备，所用试剂包括(a)甲醇色谱纯；(b)甲基叔丁基醚色谱纯；(c)丙酮色谱纯；(d)2，6- 二叔丁基对甲酚(BHT)纯度彡99% ；(e)二氯甲烷色谱纯；(f)石油醚分析纯；(g)淀粉酶酶活力彡1.5U/mg ；(h)叶黄素标准品纯度彡96.2% ；(i)0.P/oBHT的丙酮溶液称取0. 500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度； (j)标准储备液lOOPg/mL:准确称取IOmg叶黄素标准品，用二氯甲烷溶解并定容至lOOmL，于-80°C冰箱中避光保存，保存期为3个月；(k)标准中间液2(^g/mL 准确移取2mL标准储备液，用甲醇定容至IOmL ；(1)标准系列工作液以含0.P/oBHT的丙酮溶液将标准中间液分别稀释成0. 4Pg/mL、 0. 8Pg/mL、L 6Pg/mL、2. 0Pg/mL、2. 5Pg/mL ；(m)水超纯水；(2)仪器设备，仪器设备包括(a)高效液相色谱仪岛津LC-20AT泵，SPD-20A紫外检测器；(b)电子天平精确至0.0001g ；(c)超声波提取器；(d)涡旋混合器；(e)氮吹仪；(f)高速离心机；(3)色谱条件，色谱条件包括(a)色谱柱YMC Carotenoid(250 mmX4. 6mm, 5Mm)或相当者；(b)进样量:20μ ；(c)流速1.OmL/min ；(d)紫外检测器波长445nm;(e)柱温25°C；(f)流动相85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；6(4)标准曲线绘制将标准系列工作液 0. 4Pg/mL、0. 8Pg/mL、l. 6Pg/mL、2. OPg/mL 和 2. 5Pg/mL 分别注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积分别为16618. 7,31541. 1,60045. 9,74646. 1,93660. 2，以峰面积为横坐标，标准工作液浓度为纵坐标绘制标准曲线，如图1所示。利用高效液相色谱仪进行测定分析时，可直接读出峰面积的数值；(5)样品处理准确称取样品1.0g，精确至0. 0001 g,置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入20mL45-50°C水，再加入0. Ig淀粉酶，涡旋混勻，置50_60°C培养箱中培养30min，取出冰浴冷却至30°C以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取lOmin，超声过程需更换冰块，保证整个提取过程温度不超过30°C，取出冷却至10°C以下，于5000r/min离心 5min，准确移取IOmL上清液于一 15mL离心管中(对于脂肪含量高的样品，因脂肪上浮于醚层，影响上清液移�。墒泳咛迩榭鍪实奔跎僖埔毫�)，30°C以下氮吹至干，用含0. 1%BHT的丙酮溶液定溶至lmL，涡旋混勻，过0. 2Mm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；(6)定量分析本实施例对某批次的婴儿豆基食品中叶黄素含量的检测，分别提取样品 1和样品2，分别测出样品1和样品2中叶黄素的含量，再算出其平均值，如果偏差彡10%为检测合格，如果偏差> 10%时必须重新检测；样品1的样重为1.0005g，依照(3)样品处理方法得到样品1的样液，将样液注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，以标准曲线对样品进行定量分析，得到样液叶黄素的浓度为0. 402Pg/mL ；由于在样品处理时加入石油醚的体积为20mL ；移取上清液的体积为IOmL ；因此由计算公式X=Cxv1Xio(VOiiXv2)可计算出试样中叶黄素的含量为ο. 402x20x100/ (1.0005X10) =80. 4 (“g/100g)；样品2的样重为1. 0016g，依照(3)样品处理方法得到样品1的样液，将样液注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，以标准曲线对样品进行定量分析，得到样液叶黄素的浓度为0. 425Pg/mL ；由于在样品处理时加入石油醚的体积为20mL ；移取上清液的体积为IOmL ；因此由计算公式X=CXV1X 100/ (mXV2)可计算出试样中叶黄素的含量为0. 425X 20X 100/ (1.0016X10) =84. 9 (Pg/100g)；平均值的计算(80. 4+84. 9) /2=82. 6 (gg/lOOg)；精密度的计算[(84. 9-80. 4) /82. 6] X 100%=5. 45%。
结论本实施例对本批次婴儿豆基食品进行检测，样品中叶黄素的含量为 82. 6Pg/100g，两次检测精密度为5. 45%。
权利要求
1. 一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法，其特征在于包括如下工作步骤 (1)试剂准备，所用试剂包括(a)甲醇色谱纯；(b)甲基叔丁基醚色谱纯；(c)丙酮色谱纯；(d)2，6- 二叔丁基对甲酚(BHT)纯度彡99% ；(e)二氯甲烷色谱纯；(f)石油醚分析纯；(g)淀粉酶酶活力彡1.5U/mg ；(h)叶黄素标准品纯度彡96.2% ；(i)0.P/oBHT的丙酮溶液称取0. 500gBHT于500mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度； (j)标准储备液lOOPg/mL:准确称取IOmg叶黄素标准品，用二氯甲烷溶解并定容至lOOmL，于-80°C冰箱中避光保存，保存期为3个月；(k)标准中间液2(^g/mL 准确移取2mL标准储备液，用甲醇定容至IOmL ；(1)标准系列工作液以含0.P/oBHT的丙酮溶液将标准中间液分别稀释成0. 4Pg/mL、 0. 8Pg/mL、L 6Pg/mL、2. 0Pg/mL、2. 5Pg/mL ；(m)水超纯水；(2)仪器设备，仪器设备包括(a)高效液相色谱仪岛津LC-20AT泵，SPD-20A紫外检测器；(b)电子天平精确至0.0001g；(c)超声波提取器；(d)涡旋混合器；(e)氮吹仪；(f)高速离心机；(3)样品处理准确称取样品1.0g，精确至0. 0001 g,置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入20mL45-50°C水，再加入0. Ig淀粉酶，涡旋混勻，置50_60°C培养箱中培养30min，取出冰浴冷却至30°C以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取lOmin，超声过程需更换冰块，保证整个提取过程温度不超过30°C，取出冷却至10°C以下，于5000r/min离心 5min，准确移取IOmL上清液于一 15mL离心管中，30°C以下氮吹至干，用含0. 1%BHT的丙酮溶液定溶至lmL，涡旋混勻，过0. 2Mm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；(4)色谱条件，色谱条件包括(a)色谱柱YMC Carotenoid(250 mmX4. 6mm, 5Mm)或相当者；(b)进样量:20μ ；(c)流速1.OmL/min ；(d)紫外检测器波长445nm;(e)柱温25°C；(f)流动相85%甲醇-15%甲基叔丁基醚；(5)定量分析(a)标准曲线绘制将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪，测定相应的峰面积，以峰面积为横坐标，标准工作液浓度为纵坐标绘制标准曲线；(b)试液测定将制备好的样液注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，以标准曲线对样品进行定量，测得试液浓度；(C)计算，计算公式为X=CXV1X 100/(mXV2)，式中 X 试样中叶黄素的含量，单位为Pg/100g ； C 由标准曲线得到的试液浓度，单位为Pg/mL ； V1 加入石油醚的体积，单位为mL ； V2 移取上清液的体积，单位为mL ； m:试样质量，单位为g。
全文摘要
本发明涉及一种含豆基食品中叶黄素的含量检测方法。包括如下工作步骤样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.0001g,置于50mL具塞聚丙烯离心管中,加入20mL45-50℃水，再加入0.1g淀粉酶，涡旋混匀，置50-60℃培养箱中培养30min,取出冰浴冷却至30℃以下，在避光条件下加入20mL石油醚，冰浴超声提取10min，然后，于5000r/min离心5min，准确移取10mL上清液于一15mL离心管中，30℃以下氮吹至干，用含0.1%BHT的丙酮溶液定溶至1mL，涡旋混匀，过0.2μm有机滤膜；供HPLC测定，外标法定量；定量分析定量分析包括标准曲线绘制和试液测定，最后用公式计算。在豆基食品中检测叶黄素的含量，具有方便、快捷、准确等优点。
文档编号G01N30/02GK102507775SQ20111033711
公开日2012年6月20日申请日期2011年10月31日优先权日2011年10月31日
发明者袁凤娟, 许晓丽, 黄树杰申请人:广东东泰乳业有限公司

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豆基食品中叶黄素的含量检测方法