专利名称：利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于农业技术领域，具体地说，涉及一种微观动态离子流检测技术在水稻稻瘟病的评价方面的应用。
背景技术：
稻瘟病是由真菌引起的水稻病害，是由异宗配合子囊菌的无性世代产生的分生孢子感染而引发的。稻瘟病的发生一般能使水稻减产10%-20%，甚至更高，以往的检测稻瘟病的方法看发病率、分析病情指数、以及捕捉病原孢子等方法分析病情状况(李琼等， 应用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术早期检测稻瘟�。参锊±硌Пǎ�2011,41 (2) 118-123)。王延锋等Q011)从黑龙江省分离得到了 139个稻瘟病菌株(王延锋等，黑龙江省稻瘟病菌生理小种的鉴定，黑龙江省农业科学，2011，3 :15-17)；吴双清等O010)认为稻瘟病是威胁水稻生产的主要因素之一，选育抗稻瘟病的水稻品种是育种机构和个人的重要课题，而科学有效的检测评价稻瘟病的发生能够为稻瘟病提供检测工具。(吴双清，王林，建立稻瘟病自然诱发鉴定体系的关键技术，中国稻米，2010，16 (2) =47-48,66)。微观动态离子流检测技术是通过微电极和微传感器获取离子和分子的信号，基于Nernst方程和Fick' s第一扩散定律计算离子和分子的浓度和流速的技术，可获得 pmol · cm-2 · s-1数量级的离子流信号，该技术能够以对被测材料无损检测的方式在细胞、 器官、组织外周测量进出的离子或分子的运动速率、方向及浓度等。这种技术主要应用在植物学、动物学、微生物学、医学、环境科学、材料科学等领域。2011年澳大利亚的Smbala等人报道了用马铃薯病毒X(Potatc) virus X，PVX)侵染烟草，并暴露在氧化胁迫中，用非损伤性离子流检测技术(non-invasive ion flux measuring technique，MIFE)测定了 Ca2+和 K+流速，结合药理学和细胞学方法研究了植物整体的适应性反应，发现马铃薯病毒X对植物的抗逆性具有重要的作用(Plant, Cell and Environment，2011，34 :406-417)，非损伤性离子流检测技术与本实验所使用的微观动态离子流检测技术同属一个技术。以往人们主要以防治水稻稻瘟病为主，如王维超Q011)详细概括了稻瘟病的症状，提出了防治方法(王维超，稻瘟病的发生规律与防治技术，现代农业科技，2011，5: 165-166)；另外，利用分子生物学手段检测稻瘟病也有报导利用荧光定量PCR技术检测和评价稻瘟病的发病情况(李琼等，应用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术早期检测稻瘟病，植物病理学报，2011,41 ) :118-123)；利用图像处理技术判断稻瘟病的发生也有报导马德贵等O008)通过图像处理技术检测稻瘟病的发生(马德贵等，水稻稻瘟病及水稻纹枯病病害程度图像检测，农业工程科学，2008，M(9) :485-489)；通过孢子识别检测稻瘟病黄费元等(199 通过检测叶片病斑孢子量的方法检测稻瘟病(黄费元等，稻瘟病田间叶片病斑孢子量检测方法研究初报，植物保护，1992，18(1) :36-37)。上述方法，对水稻稻瘟病的的评价一般为捕捉孢子、图像的识别，以及分子生物学方法检测，未能从植物与病害的互作机理上给以具体的解释，不适合田间病害评价。上述方法存在成本高、鉴别周期长、对被测材料损坏等特点。2011年澳大利亚的Smbala等人报道了用马铃薯病毒X(Potatc) virus X，PVX)侵染烟草，用非损伤性离子流检测技术(non-invasive ion flux measuring technique，Mira)测定了 Ca2+和 K+流速， 结合药理学和细胞学方法研究了植物整体的适应性反应，发现马铃薯病毒X对植物的抗逆性具有一定的离子吸收规律(Plant,Cell and Environment,2011,34 :406-417)，因此利用离子流检测来判别水稻稻瘟病的发生成为可能。利用微观动态离子流检测技术可测得水稻稻瘟病发病时的离子流信息，通过与正常生长的水稻比较，获得稻瘟病发病时的离子流吸收或释放规律，利用此规律评价水稻稻瘟病的发生。以往检测离子流的方法为原子吸收分光光度法，如高叶等O008)研究NaCl 对甘薯试管苗影响时通过原子吸收分光光度法检测离子含量判断收胁迫的程度(高叶， 赵术珍，陈敏，宋晓征，王宝山NaCl胁迫对甘薯试管苗生长及离子含量影响安徽农业科学 [J]，2008，36 (35) :15333-15335)；郭小俊等(2008)研究ABA对NaCl胁迫下的黄瓜幼苗影响时，也利用原子吸收分光光度法检测离子含量研究黄瓜幼苗耐盐机理(郭小俊，谢成俊 外源ABA对NaCl胁迫下黄瓜幼苗不同离子含量的影响中国蔬菜[J]，2008 (9) 27-30)。然而，该方法不能实现活体生物材料的无损、动态检测，破坏了植物的生活状态。因此，开发新的检测水稻稻瘟病的方法具有非常重要的意义。
发明内容
本发明旨在为水稻育苗和水稻育种提供一种快速、无损的检测水稻稻瘟病的新方法。具体地，本发明提供一种利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法，采用 BI0-001B系统检测。所述方法包括以下步骤1)向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；2)将经过步骤1)处理后的电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座，并放入校正液中校正；3)取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测；4)对检测结果进行处理和分析。进一步地，所述方法包括以下步骤1)向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端1-1. 8cm，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；2)将经过步骤1)处理后的电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座，并放入校正液中校正；3)取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡30-50min，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测10 20min ；4)对检测结果进行处理和分析。更进一步地，所述方法包括以下步骤1)向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端1. 2cm，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；
2)将经过步骤1)处理后的电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座，并放入校正液中校正；3)取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡40min，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测12min ；4)对检测结果进行处理和分析。在所述方法中检测使用的水稻处于幼苗期。所述微观动态离子流检测技术中测试缓冲液中的测试离子浓度范围为0. 05 0. 15mM，所述测试离子为K+和Ca2+中的一种或两种，所述K+离子流的流速为0 68. 4pmol. cnT2· Ca2+ 离子流的流速为 0 4pmol. cnT2· s-1。检测使用的水稻苗处于2叶1心期，测量位置为距所述水稻苗根尖100 500 μ m 的根尖分生区的外表面10 50 μ m处。所述步骤1)中的电极的前端吸入液体离子交换剂的长度为K+:100 160μπι ；Ca2+ 15 25 μ m。所述步骤1)中的灌充液为K+:80 140mM KCl ；Ca2+ 80 140mM CaCl2 ；所述步骤2)中的校正液为K+ 0. 05 0. 15mM KCl 和 0. 5 1. 5mM KCl ；Ca2+ 0. 05 0. 15mM CaCl2 和 0. 5 1. 5mM CaCl2 ；校正后电极的能斯特方程计算理想值为K+ 56 60mV ；Ca2+ 25 29mV。所述步骤3)中的测试缓冲液为K+或 Ca2+ 0. 05 0. 15mM KCl、0· 05 0. 15mM CaCl2,0. 05 0. 15mMMgCl2、0. 3 0. 6mM NaCl、0· 1 0. 3mM Na2SO4^O. 2 0. 5mM MES 脂肪酸甲酯磺酸盐(MES)。本发明还提供一种所述利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法在检测水稻稻瘟病方面的应用。水稻在发生稻瘟病的时候K+和Ca2+离子由正常的内流转为外流，导致无机营养流失，造成生理机能的改变。由此，可以判断，当水稻幼苗K+平均流速为0-68. 40pmol -^2 -s"1 时即可能发生稻瘟�。籆a2+平均流速为0-4. 00 pmol · cm_2 · s—1可能发生稻瘟�。籏+和Ca2+ 离子的流速都处于外流状态下也可判断水稻幼苗稻瘟病的发生。本发明提供的利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法主要针对于水稻的稻瘟病的检测方法，本发明利用微观动态离子流检测技术可测得稻瘟病发病时的离子流信息，通过与正常生长的水稻比较，获得稻瘟病发病时的离子流吸收或释放规律，利用此规律评价稻瘟病的发生，从而实现对水稻稻瘟病的快速、无损检测，检测后的植株材料还能够正常生长，避免了珍贵水稻苗的损失，检测结果对比明显，方法可靠，为水稻育苗和水稻育种提供了一种快速、无损的检测水稻稻瘟病的新方法。
图1为本发明基于微观动态离子流检测技术检测水稻稻瘟病的实验过程图。图2为本发明实施例1中的水稻稻瘟病与正常水稻苗的K+离子流分析图(实时流速)；图3为本发明实施例1中的水稻稻瘟病与正常水稻苗的K+离子流分析图(平均流速)；图4为本发明实施例1中的水稻稻瘟病与正常水稻苗的Ca2+离子流分析图(实时流速)；图5为本发明实施例1中的水稻稻瘟病与正常水稻苗的Ca2+离子流分析图(平均流速)；图6为感染稻瘟病叶片与正常水稻苗叶片。其中，图2、4中纵坐标为离子流速，单位为pmol. cm_2. 横坐标为时间，单位为秒 (s)；图3、5中纵坐标为离子平均流速，单位为pmol. cm—2. Γ1。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。其中，水稻品种水稻品种空育131购自黑龙江省农科院佳木斯水稻研究所。实施例11.实验材料及培养条件水稻品种空育131(由黑龙江省农科院佳木斯水稻研究所提供)，将水稻品种空育131的种子经过10%次氯酸钠消毒30min，蒸馏水冲洗后， 250C 士 1°C发芽，发芽后Hogland营养液培养至2叶1心时开展稻瘟病侵染，幼苗与稻瘟病菌共培养1周后，开始离子流检测。培养地点在国家农业信息化工程技术研究中心温室。2.实验仪器及耗材离子流检测用非损伤微测系统(BIO-OOlBJoungerUSA Sci. &Tech. Corp.，USA)， 系统软件imFlux，微电极采用尖端直径为3μπι的玻璃微电极。3.实验试剂及溶液(1)液态离子交换剂包括K+ :Potassium ionophore I-cocktail A ；Sigma-Aldrich, Louis, M063103, USA ；Ca2+ Calcium ionophore I-cocktail A ;Sigma_Aldrich, Louis, M063103, USA。(2)测试缓冲液离子流测试时，测试不同的离子需要不同的测试液，如下K+离子0. ImM KC1、0. ImM CaCl2、0. ImM MgCl2、0. 5mM NaCl、0. 2mM Na2SO4^O. 3mM MESCa2+ 离子0. ImM KCl、0· ImM CaCl2,0. ImM MgCl2、0. 5mMNaCl、0. 2mM Na2SO4^O. 3mM MES(3)电极灌充液K+: IOOmM KClCa2+: IOOmM CaCl2(4)校正液
K+ 离子0. ImM 和 ImM KClCa2+ 离子0. ImM 和 ImM CaCl24.实验内容及方法实验过程如说明书附图1所示。从电极末端灌入1. 2cm的相应测试离子的灌充液至电极尖端充满，前端吸入适当长度(K+150 μ mXa2+20 μ m)的离子交换剂(LIX)。将电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座。参比电极为固体低渗漏性电极(WPI)。电极在相应的校正液中校正，其校正后的能斯特理想值分别是K+ :58mV, Ca2+ J8mV。测试前将材料在相应的测试液中平衡40min。然后在距离水稻根尖分生区(距离根尖400 μ m)表面30 μ m的地方振动检测，每个样品检测15min。5.数据处理离子流处理基于Fick' s扩散定律，并通过在线软件MageFlux_3DIon Flux Plotting System(http://www. xuyue. net/mageflux/)计算得出。由 4 次独立实验所得到的数据做统计分析，利用EXcel2003分析作图。6实验结果由图2和图3可以看出，正常水稻幼苗K+处于内流状态，平均流速为-18. 24pmol · cm—2 · s-1 ；发生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速为73. 33pmol · cm—2 · s-1。由图4和图5可以看出，正常的水稻幼苗的Ca2+处于内流状态，平均流速为-4. 14pmol · cm—2 · s—1，发生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+处于外流状态，平均流速为 5. 19pmol · cnT2 · s-1。由上述结果可知，正常水稻幼苗K+处于内流状态，平均流速为-18. 24pmol · cm—2 · s-1 ；发生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速为73. 33pmol · cm—2 · s-1。 K+在植物体内参与多种代谢途径，参与离子运输调控，因此正常水稻幼苗吸收K+，感染稻瘟病水稻幼苗K+明显外排，因此，K+离子的吸收和外排可作为评价水稻发生稻瘟病的依据。正常的水稻幼苗的Ca2+处于内流状态，平均流速为-4. 14pmol · cm_2 · s—1，发生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+处于外流状态，平均流速为5. 19pmol · cm_2 · s—1。钙是植物必须的营养元素，同时也是植物体内信号转导途径的第二信使。因此，Ca2+的吸收和外排可以作为评价水稻稻瘟的的依据。图6可以看出，感染稻瘟病的水稻苗叶片具有稻瘟病病斑，叶片发黄，叶尖卷曲干枯，最终导致叶片光合作用受到抑制；而正常水稻苗叶片呈现健康绿色，无病斑等稻瘟病病害现象。实施例21.实验材料及培养条件同实施例1。2.实验仪器及耗材微观动态离子流检测用非损伤微测系统(BI0-001B，hunger USA Sci. &Tech. Corp.，USA)，系统软件imFlux，玻璃微电极尖端直径为2 μ m。3.实验试剂及溶液(1)液态离子交换剂包括K+ :Potassium ionophore I-cocktail A ；Sigma-Aldrich, Louis, M063103, USA ；
Ca2+ Calcium ionophore I-cocktail A ;Sigma_Aldrich, Louis, M063103, USA。(2)测试缓冲液离子流测试时，测试不同的离子需要不同的测试液，如下K+离子0.05mM KCl、0.05mM CaCl2,0. 05mM MgCl2、0. 05mMNaCl、0. ImM Na2SO4, 0.2mM MESCa2+ 离子0. 05mM KCl、0. 05mM CaCl2,0. 05mM MgCl2、0. 05mMNaCl、0. ImM Na2SO4, 0.2mM MES(3)电极灌充液K+: IOOmM KClCa2+: IOOmM CaCl2(4)校正液K+ 离子:0. 05mM 和 0. 5mM KClCa2+ 离子:0. 05mM 和 0. 5mM CaCl24.实验内容及方法实验过程如说明书附图1所示。从电极末端灌入Icm的相应测试离子的灌充液至电极尖端充满，前端吸入适当长度(K+100 μ mXa2+ 15 μ m)的离子交换剂(LIX)。将电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座。参比电极为固体低渗漏性电极(WPI)。电极在相应的校正液中校正，其校正后的能斯特理想值分别是K+ :56mV, Ca2+ :25mV。测试前将材料在相应的测试液中平衡30min，然后在距离水稻根尖分生区(距离根尖400 μ m)表面30 μ m的地方振动检测，每个样品检测15min。5.数据处理离子流处理基于Fick' s扩散定律，并通过在线软件MageFlux_3DIon Flux Plotting System(http://www. xuyue. net/mageflux/)计算得出。由 4 次独立实验所得到的数据做统计分析，利用EXcel2003分析数据。6实验结果正常水稻幼苗K+处于内流状态，平均流速为-17. OOpmol · cm_2 · s—1 ；发生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速为70. 20pmol · cm—2 · s-1。正常的水稻幼苗的Ca2+处于内流状态，平均流速为-4. OOpmol · cm_2 · s—1，发生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+处于外流状态，平均流速为4. 50pmol · cm—2 · s—1。实施例31.实验材料及培养条件同实施例1。2.实验仪器及耗材微观动态离子流检测用非损伤微测系统(BI0-001B，hunger USA Sci. &Tech. Corp.，USA)，系统软件imFlux，玻璃微电极尖端直径为4 μ m。3.实验试剂及溶液(1)液态离子交换剂包括K+ :Potassium ionophore I-cocktail A ；Sigma-Aldrich, Louis, M063103, USA ；Ca2+ Calcium ionophore I-cocktail A ;Sigma_Aldrich, Louis, M063103, USA。
(2)测试缓冲液离子流测试时，测试不同的离子需要不同的测试液，如下K+ 离子0. 15mM KCl、0· 15mM CaCl2,0. 15mM MgCl2、0. 15mMNaCl、0. 3mM Na2SO4, 0.5mM MESCa2+离子0. 15mM KCl、0. 15mM CaCl2,0. 15mM MgCl2、0. 15mMNaCl、0. 3mM Na2SO4, 0.5mM MES(3)电极灌充液K+: IOOmM KClCa2+: IOOmM CaCl2(4)校正液K+ 离子:0. 15mM 和 1. 5mM KClCa2+ 离子0. 15mM 和 1. 5mM CaCl24.实验内容及方法实验过程如说明书附图1所示。从电极末端灌入Icm的相应测试离子的灌充液至电极尖端充满，前端吸入适当长度(K+160 μ mXa2+25 μ m)的离子交换剂(LIX)。将电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座。参比电极为固体低渗漏性电极(WPI)。电极在相应的校正液中校正，其校正后的能斯特理想值分别是:K+ :60mV, Ca2+』9mV。测试前将材料在相应的测试液中平衡50min，然后在距离水稻根尖分生区(距离根尖400 μ m)表面30 μ m的地方振动检测，每个样品检测15min。5.数据处理离子流处理基于Fick' s扩散定律，并通过在线软件MageFluX-3DI0n Flux Plotting System(http://www. xuyue. net/mageflux/)计算得出。由 4 次独立实验所得到的数据做统计分析，利用EXcel2003分析数据。6实验结果正常水稻幼苗K+处于内流状态，平均流速为-15. 45pmol · cm_2 · s—1 ；发生稻瘟病的水稻苗K+外流，平均流速为68. 40pmol · cm—2 · s-1。正常的水稻幼苗的Ca2+处于内流状态，平均流速为-3. 98pmol · cm_2 · s—1，发生稻瘟病的水稻幼苗Ca2+处于外流状态，平均流速为4. OOpmol · cm—2 · s—1。上述结果表明，水稻在发生稻瘟病的时候K+和Ca2+离子由正常的内流转为外流，导致无机营养流失，造成生理机能的改变。由此，可以判断，当水稻幼苗K+平均流速为 0-68. 40pmol · cm_2 · s—1时即可能发生稻瘟�。籆a2+平均流速为0-4. 00 pmol · cm_2 · s—1可能发生稻瘟�。籏+和Ca2+离子的流速都处于外流状态下也可判断水稻幼苗稻瘟病的发生。 实施例结果证明，两种无机离子的离子流向和流速可以判断水稻是否感染了稻瘟病以及感染程度。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
权利要求
1.一种利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法，采用BI0-001B系统检测，其特征在于，其包括以下步骤1)向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；2)将经过步骤1)处理后的电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座，并放入校正液中校正；3)取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测；4)对检测结果进行处理和分析。
2.根据权利要求1所述的利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法，其特征在于，所述步骤1)为向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端1-1. 8cm，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；所述步骤幻为取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡30-50min，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测10 20min。
3.根据权利要求2所述的利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法，其特征在于，所述步骤1)为向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端1. 2cm，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；所述步骤幻为取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡 40min,再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测12min。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，检测使用的水稻处于幼苗期。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的评价方法，其特征在于，所述微观动态离子流检测技术中测试缓冲液中的测试离子浓度范围为0. 05 0. 15mM，所述测试离子为K+和Ca2+ 中的一种或两种，所述K+离子流的流速为0 68. 4pmol. cm—2, s—1，Ca2+离子流的流速为0 4pmol. cm 2· s 1O
6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，检测使用的水稻苗处于2 叶1心期，测量位置为距所述水稻苗根尖100 500 μ m的根尖分生区的外表面10 50 μ m 处。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤1)所述电极的前端吸入液体离子交换剂的长度为K+ 100 160μ ； Ca2+ 15 25 μ m。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的灌充液为 K+ IOOmM KCl ；Ca2+ IOOmM CaCl2 ； 所述步骤2)中的校正液为 K+ 0. 05 0. 15mM KCl 和 0. 5 1. 5mM KCl ； Ca2+ 0. 05 0. 15mM CaCl2 和 0. 5 1. 5mM CaCl2 ； 校正后电极的能斯特方程计算理想值为 K+ 56 60mV ；Ca2+ 25 29mV。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤；3)中的测试缓冲液为K+或Ca2+ 0. 05 0. 15mM KC1、0. 05 0. 15mM CaCl2,0. 05 0. 15mMMgCl2、0. 3 0. 6mM NaCl、0. 1 0. 3mM Na2SO4^O. 2 0. 5mM MES。
10.权利要求1-9中任一项所述的利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法在检测水稻稻瘟病方面的应用。
全文摘要
本发明提供一种利用微观动态离子流技术检测水稻稻瘟病的方法及其应用，该方法包括以下步骤1)向微电极灌入离子灌充液至充满所述电极尖端，再将电极前端吸入相应测试离子交换剂；2)将经过步骤1)处理后的电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座，并放入校正液中校正；3)取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测；4)处理分析检测结果。所述方法是主要针对于水稻的稻瘟病的检测方法，实现了对水稻稻瘟病的快速、无损检测，检测后的植株材料还能够正常生长，避免了珍贵水稻苗的损失，检测结果对比明显，方法可靠，为水稻育苗和水稻育种提供了一种快速、无损的检测水稻稻瘟病的新方法。
文档编号G01N27/416GK102565168SQ20111042728
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月19日 优先权日2011年12月19日
发明者侯佩臣, 侯瑞锋, 朱大洲, 王成, 王晓冬, 高权 申请人:北京农业智能装备技术研究中心
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