专利名称：辣椒药材及其提取物的指纹图谱测定方法
技术领域：
本发明涉及辣椒药材和辣椒提取物指纹图谱的測定方法，更具体的说，是涉及用高效液相色谱(HPLC)指纹图谱方法来测定辣椒药材及辣椒提取物的化学成分的方法。
背景技术：
中药指纹图谱是指某种中药材(提取物、中成药)中所共有的、具有特征性的成分共同组成的光谱或色谱图谱。指纹图谱技术可以用在鉴别中药的真伪、生产质量监控、药材
到成品某些成分的变化、同种产品之间的质量差异等多个方面，是综合的，可量化的鉴定手段。它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药指纹图谱的研究和建立，对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要意义。辣椒药材用途广泛，既具有药用价值，还是日常生活的佳肴。辣椒具有通经活络、活血化瘀、驱风散寒、开胃健胃、补肝明目、温中下气、抑菌止氧和防腐驱虫等功效。所以常将它称为“红色药材”，用来预防和治疗某些多发病和常见病。如伤风感冒、脾胃受寒、消化不良、关节疼痛、脚手冻伤等。辣椒的营养价值很高，堪称“蔬菜之冠”，含有維持人体正常生理机能和增强人体抵抗性及活力的多种化学物质。辣椒药材在我国广泛种植，由于种源、产地、采收期不同而造成质量參差不齐，辣椒药材的质量控制中有显微和薄层鉴别，含量測定这两项；辣椒提取物的质量标准也较简単。由于辣椒种源较复杂，各种源间存在较大的区别，单是鉴别和含量測定不能全面控制药材的质量，保证入药药材的稳定；单ー测定辣椒素的含量不能有效控制辣椒提取物的质量，也不能全面反映生产エ艺的稳定性。为了从源头上保证入药中药量和半成品辣椒提取物的质量，同时监控生产エ艺的稳定性，使其质量控制技术更加完善、科学并对其今后的标准化提供一种可以利用的质量控制模式，现对辣椒药材及辣椒提取物指纹图谱进行研究。对15份辣椒药材和连续十五批的辣椒提取物进行了考察比较，建立了辣椒药材与辣椒提取物的指纹图谱HPLC方法，并最终确定辣椒药材与辣椒提取物标准图谱，为产品质量得到更好的控制奠定基础。
发明内容
本发明的ー个目的是提供一种辣椒药材指纹图谱的測定方法，保证药材质量在一定范围内稳定可控。本发明的另ー个目的是提供辣椒提取物的指纹图谱的測定方法。本发明的目的是通过下述技术方案来实现的一种辣椒药材指纹图谱的測定方法，该方法包括以下步骤
(a)辣椒药材的制备取辣椒药材粉末适量，精密称定，加甲醇提�。ㄈ荩斯艘鹤魑┦云啡芤�。(b)辣椒药材溶液的測定吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度洗脱进行測定，得到辣椒药材的指纹图谱；其中，高效液相色谱的色谱条件为色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为磷酸水溶液，流动相B为こ腈、甲醇，流动相中流动相A与流动相B的体积比随时间增加逐渐变化；检测波长为210-280nm。上述高效液相色谱法的检测波长优选210nm;色谱柱柱温为30_50°C，优选为350C ;流动相A优选为O. 01%磷酸水溶液；流动相B优选为こ腈。
上述高效液相色谱梯度洗脱的程序如下，其中下述比例均为体积比0-45min 时，流动相 A :流动相 B = 95 5-50 5045-63min 时，流动相 A :流动相 B = 50 50-50 50优选下属的梯度洗脱的程序Omin时,流动相A :流动相B = 95 : 545min时，流动相A :流动相B = 50 : 5063min时，流动相A :流动相B = 50 : 50ー种辣椒提取物指纹图谱的測定方法，该方法包括以下步骤(a)辣椒提取物溶液的制备取辣椒提取物适量，精密称定，加入甲醇、こ醇或与水混合一定比例的甲醇、こ醇中的至少ー种溶剂提取定容，过滤，滤液作为供试品溶液。(b)辣椒提取物溶液的測定吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度洗脱进行測定，得到辣椒提取物的指纹图谱；其中，高效液相色谱的色谱条件为色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为磷酸的水溶液，流动相B为こ臆、甲醇，流动相中流动相A与流动相B的体积比随时间增加逐渐变化；检测波长为210-280nm。上述高效液相色谱的检测波长优选2IOnm ;色谱柱柱温为30_50°C，优选为35°C ；流动相A优选为O. 01%且磷酸水溶液；流动相B优选为こ臆。上述高效液相色谱梯度洗脱的程序如下，其中下述比例均为体积比0-45min 时，流动相 A :流动相 B = 95 5-50 5045-63min 时，流动相 A :流动相 B = 50 50-50 50优选下属的梯度洗脱的程序Omin时，流动相A :流动相B = 95 : 545min时，流动相A :流动相B = 50 : 5063min时，流动相A :流动相B = 50 : 50本发明提供了一种辣椒药材和辣椒提取物的指纹图谱測定方法。本发明是在大量实验基础上所得到得切实可行的办法，具有可重复性。在本发明中，通过高效液相色谱法，在相同的测试条件下所获取的辣椒药材的高效液相指纹图谱及辣椒提取物的高效液相指纹图谱基本相同，说明重复性好。因此可通过将上述測定方法建立的辣椒药材指纹图谱作为辣椒的标准指纹图谱、辣椒提取物的指纹图谱作为提取物的标准指纹图谱，上述測定方法可以作为辣椒和辣椒提取物的质量控制标准，该方法能够客观的反应产品内在成分的变化，可以全面控制产品的质量。本发明具有如下优点(I)辣椒药材和辣椒提取物标准指纹图谱能有效的表征其质量，从而实现对辣椒药材和辣椒提取物各化学成分进行相似度评价，可以从整体上、宏观上控制辣椒药材和辣椒提取物的质量。(2)与现有方法相比，本发明为全面、准确评价辣椒药材和辣椒提取物的质量提供了新的对照标准。将辣椒药材和辣椒提取物中各成分指纹图谱作为ー个整体看待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和互相关系，注重整体面貌特征。本发明为完整、准确评价辣椒药材和辣椒提取物的质量提供了新的对照标准，将为提高辣椒药材的质量和辣椒提取物的生产エ艺控制提供參考依据。(3)本发明可以增强辣椒药材真伪的辨识力，并从所含化学成分整体具有共性特征的角度更全面的评价药材质量；辣椒提取物指纹图谱的发明可用于生产エ艺稳定性和产品稳定性的考察，有利于对提取物的质量进行全方面监控。(4)本发明方法具有简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。
图I :辣椒10批药材HPLC图谱比较图2 :辣椒药材标准图谱图3:辣椒药材与标准图谱相似度评价图4 :10批辣椒提取物HPLC图谱比较图5 :辣椒提取物标准图谱图6 :10批辣椒提取物与标准图谱相似度评价
具体实施例方式下面将例举具体的实施例对本发明进行详细的说明，下述实施例仅用于说明本发明，对本发明不构成限制。实施例I.仪器与试剂仪器采用岛津2010液相色谱仪，包括四元泵，在线脱气装置，自动进样器，LC-solution工作站；こ腈为色谱纯，磷酸、甲醇为分析纯，纯净水；10批辣椒药材；10批辣椒提取物。2.色谱条件Agilent C18 色谱柱(250mm*4. 6mm*5um);柱温 35°C ;流速 lml/min ;流动相 A 为O. 01%磷酸水(O. ImL加入到IOOOmL水中);流动相B为こ腈，波长210nm，梯度洗脱，洗脱程序为Omin时，流动相A :流动相B = 95 : 545min时，流动相A :流动相B = 50 : 5063min时，流动相A :流动相B = 50 : 50
3.标准指纹图谱的建立
3. I供试品溶液的制备3. I. I辣椒药材溶液的制备；分别取10个批次辣椒药材粉末约O. 5g，置于50mL的具塞三角瓶中，加甲醇25ml，超声30min，放冷，补重，滤过，续滤液过O. 2 μ m微孔滤膜，取续滤液即得。3. I. 2辣椒提取物溶液的制备分别取辣椒提取物10个批次约O. 25g，置于50mL的具塞三角瓶中，加甲醇25ml，超声30min，放冷，补重，滤过，续滤液过O. 2 μ m微孔滤膜，取续滤液即得。3. 2測定法分别吸取上述供试液IOul注入液相色谱仪測定，记录63min的色谱/图。构建标准指纹图谱按上述方法，对10个批次辣椒药材、10个批次辣椒提取物分别进行測定，分别找出其共有特征峰，经软件-CHR0MAP1. 20指纹图谱软件拟合，建立各自的HPLC标准色谱指纹图谱。具体为3. 2. I图2为辣椒药材标准指纹图谱，所示，3. 2. 2图5为辣椒提取物标准指纹图谱，所示，3. 3方法学考察3. 3. I精密度考察分别以同一批辣椒药材供试液，连续进样6次，考察仪器的精密度。以标准图谱中9号、10号峰保留时间(约48 54min之间)和峰面积计算，保留时间RSD(% )值分别为O. 16%,O. 20% ;峰面积RSD(% )值分别为O. 19%、O. 33%。结果表明精密度良好。3. 3. 2稳定性考察分别以同一批辣椒药材供试液，在O小时，2小时，4小时，6小时、8小时，10小时、
12小吋，24小时进样，考察样品稳定性。考察指标同精密度，保留时间RSD(% )值分别为O. 15%和O. 19% ;峰面积RSD(%)值为O. 49%、0. 58%。结果表明供试液在24小时内稳定。3. 3. 3重复性考察取同一批辣椒药材6份，按照样品制备方法“3. I. 2”项下方法进行制备，測定，以标准图谱9号、10号峰保留时间(约约48 54min之间)和峰面积计算，保留时间RSD(% )值均为O. 02% ;峰面积RSD(%)值为I. 27%、I. 26%。结果表明此方法重复性良好。4.测定辣椒药材和辣椒提取物4. I按照所述检测方法和条件分别测定5批辣椒药材(除已经采用的10批以外)，采集63min色谱图，即为这5批待测药材指纹图谱。4. 2按照所述检测方法和条件分别测定5批辣椒提取物(除已经采用的10批以外)，采集63min色谱图，即为这5批待测提取物指纹图谱。5.测定结果5. I将5批辣椒药材与3.2. I中建立的该药材标准指纹图谱比较，采用软件《CHR0MAP1. 20指纹图谱软件》计算整体相似度，结果相似度分别为O. 9686,0. 9769、O. 9786,0. 9921,0. 9907。5批半成品与标准指纹图谱的相似度大于O. 90，可以进入下ー步エ序。5. 2将5批辣椒提取物与3. 2. 2中建立的该提取物标准指纹图谱比较，采用软件《CHR0MAP1. 20指纹图谱软件》计算整体相似度，结果相似度分别为O. 9985,0. 9992、O. 9995,0. 9994,0. 9921。5批半成品与标准指纹图谱的相似度大于O. 90，可以作为合格品
进入'~■步工序。
权利要求
1.一种辣椒药材的指纹图谱測定方法，其特征在于该方法包括如下步骤 (a)供试品溶液制备取辣椒药材粉末适量，精密稳定，置于具塞三角瓶中，加甲醇超声，放冷，补重，滤过，取续滤液即得。
(b)供试品溶液的測定吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度洗脱进行測定，得到辣椒药材的指纹图谱； 其中，高效液相色谱的色谱 条件为色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为磷酸水溶液；检测波长为210nm ;柱温35°C ;流动相B为こ腈；其中流动相中流动相A与流动相B的体积比随时间变化而变化。
2.ー种辣椒提取物的指纹图谱測定方法，其特征在于该方法包括如下步骤 a)供试品溶液制备取辣椒提取物适量，精密稳定，置于具塞三角瓶中，加甲醇超声，放冷，补重，滤过，取续滤液即得。
(b)供试品溶液的測定吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度洗脱进行測定，得到辣椒提取物的指纹图谱； 其中，高效液相色谱的色谱条件为色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为磷酸水溶液；检测波长为210nm ;柱温35°C ;流动相B为こ腈；其中流动相中流动相A与流动相B的体积比随时间变化而变化。
3.根据权利要求I至2任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸为O. 01%。
4.根据权利要求I至2任一项所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序如下，其中下述比例均为体积比 Omin时,流动相A 流动相B = 95 5 45min时,流动相A :流动相B = 50 : 50 63min时，流动相A :流动相B = 50 : 50。
全文摘要
本发明涉及一种监控辣椒药材及其提取物质量的方法，它公开构建了辣椒药材及其提取物指纹图谱建立的方法及其标准HPLC指纹图谱。本发明所述的辣椒药材及其提取物质量控制方法由以下步骤组成1.制备辣椒药材及其提取物供试品溶液；2.用HPLC色谱法制定辣椒药材标准指纹图谱；3.用HPLC色谱法对辣椒提取物指纹图谱进行测定，并与其标准指纹图谱进行比较，整体相似度符合要求的批次进入下一道工序。(见附图)本发明的优点是方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从色谱整体特征面貌上把握辣椒药材及其提取物的质量情况，可作为辣椒药材及其提取物质量控制指标。
文档编号G01N30/02GK102654486SQ20121007635
公开日2012年9月5日 申请日期2012年3月22日 优先权日2012年3月22日
发明者姜家书, 张春霞, 李敦明, 武惠斌, 熊维政, 聂红梅, 谢其亮 申请人:河南羚锐制药股份有限公司
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