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专利名称：：抗肌钙蛋白抗体和心血管风险的制作方法抗肌钙蛋白抗体和心血管风险
背景技术：
：本发明涉及心肌病领域。本发明公开了从个体获得的样品中存在的抗心肌肌4丐蛋白抗体可以作为诊断标志物、尤其在评估个体发生心肌病的风险中使用。描述了辅助评估个体发生心肌病风险的方法，包括体外测量抗心月几肌4丐蛋白抗体和任选地一种或多种在评估个体发生心月几病风险中有用的其它标志物，并且使所获得的值或诸值与个体发生心肌病的风险建立关联。尽管在治疗上有显著进步，但是心肌疾病(CVD)在发达国家仍是发病率和死亡率的单一最常见原因。因此，预防心肌病如心力衰竭、心肌梗死和中风是具有重要公共卫生意义的领域。已经描述了几种未来心肌病的风险因素并且它们目前在临床广泛用于检测具有高风险的个体。此类筛查试验包括例如评估总胆固醇水平、LDL胆固醇水平、HDL胆固醇水平和C反应性蛋白水平。然而，为数众多的心肌病在具有似乎低至中等风险状况的个体中出现，并且确定此类患者的诊断性选项仍然有限。众多心血管合并症会在心脏表现出来。这些合并症总称为冠心病。i貪断为患有潜在冠心病的个体可一皮分成不显示临床症状的个体和表现气促和/或胸痛的那些个体。后者组可^&划分成患稳定型心绞痛(SAP)的个体和患急性冠状动脉综合征(ACS)的那些个体。ACS患者可以显示不稳定型心绞痛(UAP),或这些个体已经患有心肌梗死(MI)。MI可以是ST升高的MI或ST不升高的MI。MI出现后，可以出现左心室功能紊乱(LVD)。LVD患者可以发生充血性心力衰竭(CHF)，死亡率约15%。心脏是独特的器官。这对于心脏组织和其众多组分而言也是如此。心脏特异性蛋白质释放至循环中(例如作为心肌梗死的结果)是心脏坏死的标志。对此类心脏特异性标志物的才企测构成心月几梗死和充血性心力衰竭领域中诊断方法的基础。众所周知并成熟的是，可以通过测量循环中的心肌肌4丐蛋白水平以高灵敏度和高特异性诊断急性ML充血性心力衰竭的严重期和急性期可以通过测量例如脑源性利尿钠肽(BNP)或其氨基端前肽(NT-原BNP)而诊断。尽管已经在心肌合并症的急性期诊断方面的确取得一些进展，然而仍存在对急性期情况下进一步改进诊断的巨大需求，以便区分可能需要不同治疗模式的患者亚群，尤其是建立并改进对个体发生心肌病风险的评估。现在已经发现抗心肌肌钓蛋白抗体可以作为诊断标志物使用，尤其在心肌病领域中使用。抗心肌肌钓蛋白抗体单独或任选地与心血管风险的一种或多种其它标志物组合在评估个体发生心肌病风险中是有价值的。发明简述本发明描述了确定并在心肌病评估中利用抗心肌肌钙蛋白抗体的存在、不存在或水平的新诊断试马全。在一个实施方案中，本发明涉及辅助评估个体发生心肌病风险的方法，包括步骤a)体外测量抗心肌肌钓蛋白抗体和任选地一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物，和b)使在(a)中获得值或诸值与个体发生心肌病的风险建立关联。这些新试验广泛地包括(1)评估未来心肌病(例如心H几梗死和充血性心力衰竭)的风险，和(2)确定某些个体将或多或少获地从使用祐:设计为预防和/或治疗心肌病的某些疗法中获益的可能性。本发明还公开了包含心肌肌钙蛋白和适用于测量抗所述心肌肌钙蛋白抗体的辅助试剂的试剂盒。本发明的这些和其它方面将联系发明详述而更详细地描述。发明详述在第一优选的实施方案中，本发明涉及抗心肌肌钙蛋白抗体作为诊断标志物的用途。技术人员了解可以在确定个体样品内存在的抗体中使用的不同方法。确定患者样品内存在的抗体的诊断领域叫做血清学。对患者样品内所包含抗体的检测例如在传染病或自身免疫性疾病的诊断中是极重要的。据信心肌肌4丐蛋白的释放仅在心肌受损并变坏死时才发生。直至九十年代末，检测心脏坏死的最佳标准是还是升高的CK-MB(肌酸酐激酶的心脏特异性同种型)水平。在过去十年结束时，心肌肌钙蛋白已经作为至少优异的标志物出现。肌钙蛋白冲t验的意义已经由Goldmann,B.U.等(Curr.CorttrolTrialsCardiovasc.Med.2(2001)75-84)综述。现在已经普遍认为心肌肌钾蛋白阳性试验在检测心肌梗死中有极高灵敏度。扩张性心肌病(DCM)是以心肌收缩功能渐进性衰退和心室扩张为特征的心肌疾病。近来，Nishimura,H.等(Science291(2001)319画322)报道PD-1受体缺陷性小鼠发生严重DCM。他们还发现这些小鼠产生抗心肌月几钓蛋白I抗体。Okazaki,T.和Honjo,T.(TrendsinMolecularMedicine11(2005)322-326)证实肌钓蛋白I是由DCM患者中心脏自身抗体所识别的约15种自身抗原之一。已知抗心肌肌钓蛋白抗体可以存在于具有急性冠状动脉综合征的一些患者的循环中。这些抗体已经被筌定为用于测量相同类型心肌肌钙蛋白的不同测定法之间不一致性数据的原因。这些抗肌钙蛋白抗体导致测定灵敏度下降，因此例如在心肌梗死后，延误对心肌肌钙蛋白的检测(Eriksson,S.等，N.Engl.J.Med.352(2005)98-100)。该组研究员因此建议设计用于肌钙蛋白I的不受来自抗肌钓蛋白I自身抗体影响的新测定法(Eriksson,S.等，N.Engl.J.Med.352(2005)98-100)。本发明的发明人现在已经令人惊讶地发现在患者样品中确定的抗心肌月几钓蛋白抗体的存在和/或水平具有诊断用途。它们可以例如用作评估个体发生心肌病风险中的标志物。冠词"a"和"an"在本文中用来指一种或多于一种(即至少一种)的该冠词的语法对象。例如，"amarker"意指一种标志物或多于一种标志物。在本发明中，抗心肌肌钙蛋白的"anantibody"和"antibodies"视为可互换的，因为技术人员理解，总是众多抗体被检测到。心肌肌钓蛋白"心月几肌钓蛋白"是在心脏组织中存在并且在除心脏之外的组织中根本不存在或不以任何相关的程度存在的肌钓蛋白。例如对于人类，已经描述了两种心脏特异性肌4丐蛋白。这些人心脏特异性肌钓蛋白分别-故称为肌钓蛋白T和肌《丐蛋白I。肌钙蛋白T具有约37.000Da的分子量。在心肌组织内发现的肌钙蛋白T同种型(cTnT)与骨骼肌TnT差异明显，以至于能产生识别这些TnT同种型的抗体。TnT被视为急性心肌损伤的标志物；参考Katus,H.A.等，J.Mol.Cell.Cardiol.21(1989)1349-1353;Hamm,C.W.等，N.Engl.J.Med.327(1992)146-150;Ohman,E.M.等,N.Engl.J.Med.335(1996)1333-1341;Christenson,R.H.等，Clin.Chem.44(1998)494-501和EP0394819。肌钙蛋白I(TnI)是肌钙蛋白复合体的25kDa抑制性部分，存在于肌肉组织中。Tnl在Ca"缺乏下与肌动蛋白结合，抑制肌动球蛋白的ATP酶活性。心肌中存在的Tnl同种型(cTnl)与骨骼肌Tnl相异400/0，从而允许通过免疫区分这两种同种型。cTnl的正常血浆浓度是<0.1ng/ml(4pM)。cTnl在心脏细胞死亡后释放进入血流；因此，血浆cTnl浓度在急性心肌梗死患者中升高(Benamer,H.等，Am.J.Cardiol.82(1998)845-850)。在一个优选实施方案中，本发明涉及辅助评估个体发生心肌病风险的方法，包括a)体外测量抗心肌肌4丐蛋白抗体和任选地一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物，和b)将(a)中获得的值或诸值与个体发生心肌病的风险建立关联。本发明的方法"辅助评估"个体发生心肌病的风险。技术人员理解的是，没有生物化学标志物以100%特异性和同时100%灵敏度诊'断给定疾病。相反，生物化学标志物^L用来以某种可能性或预测值评估疾病的存在、不存在或严重性。因此，在常规临床诊断中，通常在诊断、治疗和控制潜在疾病中一起考虑多种临床症状和生物学标志物。测量抗心肌肌4丐蛋白抗体将辅助医生建立正确的诊断或预后的工作。确诊或最终预后总是由医生作出。术语"心肌病"涉及影响心肌的一组病症。优选的心肌病组由动脉粥样硬化、充血性心力衰竭、急性冠状动脉综合征(包括心肌梗死和不稳定心绞痛)组成。优选地，在本发明方法中评估的心肌病选自充血性心力衰竭和急性冠状动脉综合征。还优选，术语"心肌病"就本发明的意义而言涉及心脏移植后患者中的移植排斥。在又一个优选实施方案中，本发明涉及辅助对心肌梗死患者评估症状明显的心力衰竭(overtheartfailure)风险的方法，包括a)体外测量抗心肌肌4丐蛋白抗体和任选地一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物，和b)将(a)中获得的值或诸值与个体发生症状明显的心力衰竭的风险建立关联。技术人员显而易见，MI患者可能在MI发生之前就已经患有心力衰竭，这种情况下本发明方法可辅助评估疾病恶化的风险。根据"ACC/AHA2005成人慢性心力衰竭诊断与控制最新指南"(Hunt,S.等，www.acc.org=ACC/AHA实用指南),在心力衰竭领域中的疾病连续过程(continuum)如今分成四期。在A和B期中，发现具有发生心力衰竭风险的个体，而C和D期4戈表显示心力衰竭征兆和症状的患者组。本文因而将如以上参考文献中给出的从A至D不同期的详细定义包括进来。从临床角度来看，该疾病在代偿期和非代偿早期(在A期中彻底无症状，而B期中具有器质性心脏�。�但是无征兆及症状，参考ACC/AHA实用指南)是临床无症状的。该疾病的外显征兆(如气短)不出现，直至完全进入非代偿期(即根据ACC/AHA指南的C和D期)。当前诊断基于患者在C和D期中的外显症状。症状明显的心力衰竭就本发明的意义而言是如ACC/AHA指南所定义在C和D期中的心力衰竭。抗心肌肌鈣蛋白抗体是在"体外，，测量。这意味着从个体获得用于诊断目的样品。该样品用于一项或几项体外研究并且不用于该个体的治疗。优选的样品是心脏组织活枱，样品、全血、血浆或血清，尤其优选血浆和血清。在为检测抗心肌肌4丐蛋白抗体所建立的优选测定法中，心肌肌钓蛋白抗原直接或间接地与固相结合。通常，将样品在样品緩冲液中稀释。固相结合的抗原与所研究(稀释)的样品温育。温育在允许研究样品内包含的抗体与固相结合抗原相结合的条件下进行。通过合适方法检测与固相结合抗原相结合的抗体。在抗病原体(如病毒病原体)抗体的检测中，极频繁及很有利地使用根据(例如在US4,945,042描述的)双抗原桥模式的抗体检测系统。相同的测定原理可以用来检测抗心肌肌《丐蛋白抗体。根据这种桥概念的免疫测定法需要使用直接或间接与固相结合的抗原并且使用直接或间接可检测的同种或交叉反应性的速溶性抗原。所研究的抗体，若存在，则在固相结合抗原与标记的^r测抗原间形成桥。只有这两种抗原由特异性抗体-例如由抗心肌肌钩蛋白抗体桥接时，才产生与样品中存在的抗体浓度关联的信号。本发明方法中所用的心肌肌钙蛋白抗原在一个优选实施方案中包含肌钙蛋白I和肌钙蛋白T。还优选建立用于分别检测抗肌钙蛋白I抗。在后一测定法中，每种心肌肌钙蛋白单独地用作抗原。在优选实施方案中，在本发明方法中测量的抗体是抗肌钓蛋白I的抗体。在实施本发明方法的优选模式中，把来自骨骼肌的肌钙蛋白添加至样品緩冲液中以便通过封闭非特异性抗体即在肌肉肌钙蛋白和心肌肌钙蛋白之间发生交叉反应的抗体而增强与心肌肌钙蛋白结合的抗体的特异性。技术人员要理解，检验结果可以以定性及定量性术语记录。本发明涉及将个体的标志物水平与预定值进行比较。预定值可以采取多种形式。它可以是单一临界值，如中位数或均数。预定值可以基于对照组而建立，如其中在一个定义组内的风险两倍于另一个定义组中的风险。预定值可以是一个范围，例如其中将受检验群体均等(不均等)分组，如低风险组、中等风险组和高风险组，或划分象限，最低象限是具有最低风险的个体而最高象限是具有最高风险的个体。预定值可以取决于选择的具体群体。例如，看起来健康的群体具有不同于患有既往心肌病的成员群体'正常，标志物范围。因此，所选的预定值可以考虑其中个体所属的分类。合适的范围和分类可以由本领域普通技术人员仅以常规实-睑而选择。若测量的抗体高于预定的阈值水平，则可以例如记录为阳性结果。此类阈值水平通常设定至健康对照群体的卯％百分位数或95%百分位数。当实施本发明时，优选在健康对照群体的95%百分位数上的阈值水平。定量值可以通过对本领域技术人员无需解释的方法而轻易与疾病状态建立关联。目前，不知道在个体中导致抗心肌肌钙蛋白抗体形成的原因。肌钙蛋白释放进入循环可能是由于心脏的一个或多个坏死事件而发生。在循环中的心月几月几4丐蛋白可以触发抗所述心肌月几钓蛋白抗体的形成。这种自身抗体或简而言之抗心肌肌钙蛋白抗体可以是不同类别的免疫^求蛋白。在感染期间，首种抗体即免疫球蛋白M类(IgM)形成。在IgM形式的第一体液免疫应答后是次级体液免疫反应，反映为或多或少明显的免疫球蛋白G类(IgG)抗体形成。通常认为对免疫系统的"攻击"持续时间越长，例如在感染的情况下，感染持续持续时间越长和/或感染越严重和/或传染原越经常地触发免疫应答，则IgG应答一般会越高。已经发现，在患者样品中存在的抗心肌肌钙蛋白抗体可以包含免疫球蛋白的IgG类以及IgM类免疫球蛋白抗体。还可能的是不同类别抗心肌肌钓蛋白抗体指示不同亚组的患者。在优选的实施方案中，本发明方法基于免疫球蛋白G和M类抗心肌肌钓蛋白抗体。高滴度的抗心肌肌4丐蛋白抗体可以视为指示未来心脏合并症的4支高风险。在又一个优选的实施方案中，本发明方法基于^r测免疫球蛋白M类(IgM)抗心肌肌钓蛋白抗体。高滴度的IgM抗体可以视为指示心肌最近的坏死事件。高滴度IgM抗体可以表明需要更适于心脏急性事件的疗法。在又一个优选的实施方案中，本发明方法基于免疫球蛋白类别G类(IgG)抗心肌肌4丐蛋白抗体。高滴度IgG抗体可以视为指示心脏在过去的至少一个坏死事件。该事件在过去最有可能在获得样品四周之前出现。高滴度IgG抗体也可以视为指示严重发作和/或几个坏死性发作并且可以提示更适于心脏既往和/或'隄性事件的治疗才莫式。当已经用本发明方法对个体的样品分析其未来患有心肌病的风险时，所述个体可^皮分层为一种或多种;f莫式的治疗性疗法。这些疗法可以选自抗体(单克隆抗体、多克隆抗体)、小分子、药理学活性化合物即抗炎药和降脂药(例如他汀类)、溶栓药(例如血小板拮抗剂)、纤蛋白溶解药(例如肝素)、血管形成术疗法(例如PCTI(经皮治疗性介入)、球嚢扩张(balloondilatation)、支架术、旁路手术)。用于降低心肌病风险的药物包括选自抗炎药、抗血栓药和/或纤蛋白溶解药、抗血小板药、降脂药、凝血酶直接抑制剂和糖蛋白IIb/IIIa受体抑制剂的那些药物以及与细胞粘附分子结合并对白细胞与此类分子结合的能力抑制的药物(例如抗细胞粘附分子抗体)。抗炎药包括阿氯芬酸；二丙酸阿氯米松；阿孕奈德；oc-淀粉酶(oc-Amylase);安西法尔；安西非特；氨酚酸钠；盐酸氨普立糖；阿那白滞素；阿罗尼酸；阿尼扎芬；阿扎丙宗；巴柳氮二钠；千达酸；苯喁洛芬；盐酸千达明；菠萝蛋白酶；溴派莫；布地奈德；卡洛芬；环洛芬；辛喷他宗；克利洛芬；丙酸氯倍他索；丁酸氯倍他索；氯吡酸；丙酸氯硫卡木>;醋酸可米+>;可托多+>;地夫可特；地奈德；去羟米木>;二丙酸地塞米*>;双氯芬酸钾；双氯芬酸钠；双醋二氟4^^;二氟米酮钠；二氟尼柳；二氟泼尼酯；地氟他酮；二曱基亚砜；羟西奈德；恩曱羟松；恩莫单抗；依诺利康钠；依匹唑；依托度酸；依托芬那酯；联苯乙酸；非那莫；芬布芬；芬氯酸；苯克洛酸；芬度柳；苯吡帕酮；芬替酸；夫拉扎酮；氟扎可特；氟芬那酸；氟咪唑；醋酸氟尼缩松；氟尼辛；氟尼辛葡曱胺；氟可丁酯；醋酸氟米;^;氟喹宗；氟吡洛芬；氟瑞托芬；丙酸氟替卡松；呋喃洛芬；呋罗布芬；哈西奈德；丙酸氯倍他；醋酸卣泼尼松；异丁芬酸；布洛芬；布洛芬铝；布洛芬吡啶甲醇；依洛达普；吲哚美辛；吲哚美辛钠；吲哚洛芬；吲哚克索；吲四唑；醋酸异氟泼尼松；伊索克酸；伊索昔康；酮洛芬；盐酸洛非咪唑；氯诺昔康；氯替泼诺碳酸乙酯；甲氯芬那酸钠；甲氯芬那酸；二丁酸甲氯松；曱氯那酸；5-氨基水杨酸；美西拉宗；磺庚甲泼尼龙；吗尼氟酯；萘丁美酮；萘普生；萘普生钠；萘普索；尼马宗；奥沙拉秦钠；奥古蛋白；奥帕诺辛；喁丙溱；羟布宗；盐酸瑞尼托林；戊聚硫钠；保泰松甘油酸钠；吡非尼酮；吡罗昔康；肉桂酸吡罗昔康；吡罗昔康乙醇胺；吡洛芬；泼那扎特；普立非酮；普罗度酸；普罗喹宗；普罗沙唑；柠檬酸普罗沙唑；利美索龙；氯马扎利；柳胆来司；沙那西定；双水杨酸酯；水杨酸类(Salycilates);血根氯铵；司克拉宗；丝美辛；舒多昔康；舒林酸；舒洛芬；他美辛；他尼氟酯；他洛柳酯；特丁非�。惶婺岽锲眨惶婺岽锲漳疲惶媾滴艨担惶嫖艨担惶嫖裘椎拢籘etrydamine;硫平酸；替可的松匹伐酯；托美�。煌忻蓝∧疲蝗�氯奈德；三氟米酯；齐多美辛；糖皮质素；佐美酸钠.抗血栓药和/或纤蛋白溶解药包括纤维蛋白溶酶原(通过前激肽释放酶、激肽原、因子XII、XIIIa、纤溶酶原前激活物和组织纤溶酶原i敫活物[TPA]的相互作用产生纤维蛋白溶酶)链激酶；尿激酶茴酰化纤溶酶原-链激酶激活物复合物；尿激酶原；(Pro-UK);rTPA(阿替普酶或activase;r指重组)、重组尿激酶原；尿激酶(Abbokinase);依米那酶；盐酸SreptaseAnagrelide;比伐卢定；达肝素钠；达那肝素钠；盐酸哒唑氧；硫酸依非那群；依诺肝素钠；依非曲班；依非曲班钠；亭扎肝素钠；瑞替普酶(retaplase);三苯纟各雷；华法林；右旋糖酐。抗血小板药包括Cl叩ridogrel;磺吡酮；阿司匹林；双嘧达莫；氯贝丁酯；吡醇氨酯；PGE;胰高血糖素抗5-羟色胺药物；咖啡因；茶碱己酮可可碱(TheophyllinPentoxifyllin);p塞氯匹定；阿那才各雷。降脂药包括吉非贝齐、考来烯胺(cholystyramine)、考来替泊、烟酸、普罗布考(probucol)、洛伐他汀(lovastatin)、氯伐他汀、辛伐他汀、阿托伐斗也汀、普4戈他汀、西立伐z他汀(cirivastatin)。凝血酶直接抑制剂包括水蛭素、水蛭素原、比伐卢定(hirulog)、阿加曲班(agatroban)、PPACK、凝血酶适体。糖蛋白Ilb/IIIa受体抑制剂是抗体和非抗体，包括但不限于ReoPro(阿昔单抗)、拉米非班、替罗非班。一种可以用来在抗心肌肌4丐蛋白抗体检验呈阳性的个体中降低未来心脏病症风险的优选药物是阿司匹林。本发明方法还可以允许治疗性处理来监测已经用所述方案治疗的个体。在本发明另一个令人惊讶的方面，已经发现抗心月几肌钙蛋白抗体具有独立于评估个体发生心月几病风险中所用的其它标志物的预测值。在又一个优选的实施方案中，本发明涉及辅助评估个体发生心肌病风险的方法，包括a)体外测量抗心肌肌4丐蛋白抗体和一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物，和b)将(a)中获得的值与个体发生心肌病风险建立关联。与抗心肌肌钓蛋白抗体一起使用的一种或多种额外标志物可以#见为用于评估个体发生心肌病风险的标志物组的一部分，即适于进一步改进风险评估的一系列标志物。该标志物组中的标志物总数优选地少于20个标志物，更优选少于15个标志物，还优选是少于IO个标志物，甚至更优选8个或更少标志物。优选除了抗心肌肌4丐蛋白抗体之外，还包含2、3、4、5或6个标志物的用于评估个体发生心力几病风险的标志物组。技术人员了解已经^皮描述为在评估个体发生心肌病风险中有用的多个标志物。优选地，一种或多种其它标志物选自心肌肌钙蛋白、利尿钠肽或利尿钠肽相关标志物、炎症标志物、D-二聚体、胆固醇、高半胱氨酸、脂连蛋白、sCD40L、髓过氧化物酶和缺血^f饰的白蛋白。"标志物"是其存在、不存在或水平可以与目的状态例如与疾病建立关联的分子或特征。利尿钠肽和利尿钠肽-相关标志物利尿钠肽优选地选自A型利尿钠肽(ANP)和/或B型利尿钠肽(BNP)。术语"相关标志物"如本文.中所用指具有特定标志物或其生物合成性母体的至少10、12、15或20连续氨基酸的一种或多种多肽片段。优选地当存在于循环中时，所述片段是免疫学可检测的片段。利尿钠肽相关标志物优选地是ANP相关或BNP相关标志物。脑源性利尿钠肽或B型利尿钠肽(BNP)人BNP由含108个氨基酸的前体分子的蛋白水解而衍生，该前体分子自此以下称作BNPwq8。成熟BNP或"BNP利尿钠肽"或"BNP-32"或简称"BNP"是代表所述前体第77-108位氨基酸的含32个氨基酸的分子，也可以称作BNP77-1()8。BNP前体分子的剩余残基第1-76在本领域已知为氨基端原BNP(NT-proBNP)。BNPw。s作为更大的前体即含总计134个氨基酸的前-原BNP的部分而合成，其中氨基端26个氨基酸代表"前"序列。成熟BNP本身可以作为额外标志物在本发明中使用。前原-BNP、BNPwos和NT-proBNP分子均代表可以作为成熟BNP的替代物或本身作为标志物而测量的BNP相关标志物。此外，这些分子的一种或多种片段，包括选自BNP77-106、BNP79-106、BNP76-107、BNP69-108、BNP79—108、BNP8(M08、BNP81—108、BNP83-108、BNP簡、BNP53—85、BNP關、BNP3(M03、BNPwo7、BNP9.K)6和BNP3-雨的BNP相关多肽或标志物也可以在循环中存在。此外，利尿钠肽片段(包括BNP片段)可以包含一个或多个可氧化的甲硫氨酸，所述曱硫氨酸氧化成曱硫氨酸亚砜或甲硫氨酸砜产生额外的BNP相关标志物。参见例如2003年4月17日提交的美国申请系列号10/419,059，该文献因而完整地通过4爰引并入。以相似方式，本文以下所述的众多标志物作为更大的前体分子而合成，所述前体分子随后^皮加工以提供成熟分子或标志物；和/或在循环中以携带二次修饰的片段和/或标志物分子形式存在。因此，对本文以下所述的每种标志物的"相关标志物"可以按照与如上对BNP所述的相似方式鉴定并使用。A型利尿钠肽(ANP)A型利尿钠肽(ANP)(又称作心房钠尿肽或心舒血管素Forssmann,W,G.等，Histochem.CellBiol.110(1998)335-357)是由前房肌细胞应答于前房扩张、血管紧张素II刺激、内皮缩血管肽及(P-肾上腺素受体介导的)交感神经刺激而合成、贮藏并释放的含28个氨基酸的肽。ANP作为前体分子(pro-ANP)合成，由蛋白酶剪切转化成活性形式ANP并且还形成氨基端ANP(l-98)。已经^艮道氨基端ANP和ANP在表现心房颤动和心力衰竭的患者中上升(Rossi,A.等，J.Am.Coll.Cardiol.35(2000)1256-1262)。然而，技术人员会认识到，因为与ANP的关系，氨基端ANP分子的浓度也可以提供患者中的诊断或预后信息。短语"与ANP相关的标志物"或"ANP相关肽"指除了含28个氨基酸的ANP分子之外，含有源自proANP分子(l-126)的至少10、12、15或20个连续氨基酸的任何多肽。ANP及与ANP相关肽的蛋白水解性降解也已经在文献中描述并且这些天然存在的蛋白水解片段也包括在术语"ANP相关肽"中。心肌肌钓蛋白两种心脏特异性月几4丐蛋白，即肌钓蛋白I和月几4丐蛋白T分别已经如上例举。尽管上文讨论了心肌肌钓蛋白作为抗原在检测抗肌4丐蛋白抗体中的用途，然而，作为标志物组中的其它标志物或分析物使用的心肌肌钙蛋白是分子本身。本领域技术人员认识到在测量心肌肌钙蛋白中，可以测量相异的肌钙蛋白I和肌钙蛋白T同种型。因此，可以优选地测量游离心肌月几钙蛋白I、游离心肌肌钓蛋白T、在包含肌4丐蛋白T和月几钙蛋白C之一或这两种蛋白质的复合体中的心肌肌钙蛋白1、在包含肌钙蛋白I和肌钙蛋白C之一或这两种蛋白质的复合体中的心肌肌4丐蛋白T、总心肌J几钩蛋白I(意指游离和复合的心肌肌钙蛋白1)和/或总心肌肌钙蛋白T。优选地，心肌肌钓蛋白I和/或心肌肌4丐蛋白T根据现有技术方法测量并且测量的值与抗心月几肌钓蛋白抗体的测量结果组合，用于评估心脏病症。两种抗心肌肌4丐蛋白抗体及心肌月几4丐蛋白的存在可以进一步指示具有急性冠月永合并症的复发疾�。�如ACS。若在个体样品中对于抗心肌肌钓蛋白抗体及利尿钠肽或利尿钠肽相关标志物发现升高值，则这可以视为提示既往心肌损伤情况，如过往心月几梗死。已经发现升高水平的抗心肌肌钾蛋白抗体指示疾病的严重性，并且尤其指示该患者在未来患有充血性心力衰竭的增高风险。与抗心肌肌钓蛋白抗体一起用在本发明的标志物组中的优选炎症才示志物是急'l"生炎症才示志4勿及戶斤i胃近炎症才示志物(proximalinflammatorymarker)。本领域技术人员已知的急性炎症标志物包括C反应性蛋白(CRP)、血纤蛋白原、D-二聚体、血清淀粉状蛋白A(SAA)、妊娠相关多肽A(PAPP-A)、细胞间粘附分子(例如ICAM-1、VCAM-1)、IL-1-P、IL-6、IL-18/IL-18b;TNF-oc;髓过氧化物酶(MPO);TF;单核细胞趋化蛋白1(MCP-1);P-选择素；E-选择素；血小板活化因子乙酰基水解酶(PAF-AH);血管性血友病因子(vWF)。在本发明方法中使用的优选急性炎症标志物是CRP、血纤蛋白原、D-二聚体和SAA，其中更优选使用CRP和D-二聚体。C反应性蛋白(CRP)C反应性蛋白(CRP)是参与宿主防御的含21kDa亚基的同五聚体Ca^结合性急性期蛋白。CRP合成由IL-6诱导，并且间接地由IL-1诱导，因为IL-1可以触发肝窦状隙中的枯否氏细胞合成IL-6。CRP的正常血浆浓度在卯％健康群体中是<3(ig/ml(30nM)并且在99%健康个体中是<10ng/ml(100nM)。血浆CRP浓度可以例如通过同质分析模式(homogeneousassayformat)或ELISA测量。C反应性蛋白祐^见为进展性全身炎症的标志物。目前，可以以极高灵敏度测量CRP,可以可靠地检测到1-3mg/l血液的CRP-值。在该范围内的测量称作高灵敏性CRP或hs-CRP测量，也优选地在本发明方法中使用。血纤蛋白原血纤蛋白原(又叫做因子I)是在第4号染色体上编码并由肝细胞合成的340kD蛋白质。它由两个相同亚基构成，每个亚基含有通过二石危键连接的三条不同多肽链(otA、PB、yG)。凝血酶将血纤肽A和B从血纤蛋白原中切下，导致形成由三对链cx、P和y构成的不溶性血纤蛋白单体的链。异常血纤蛋白原血症是与产生结构性异常血纤蛋白原有关的疾病。已经描述了与出血素质有关的超过250种结构变体(Ebert，R.F.,CRCPress，BocaRaton,1991)。这些变体大多显示受损的凝血酶催化性血纤肽释放，或受损的血纤蛋白聚合作用。血纤蛋白原的一些变体与血栓形成素质而非出血素质有关，并且这已经归咎于纤溶酶原或组织纤溶酶原激活物对异常血纤蛋白原分子的受损结合作用。升高的血纤蛋白原水平可以指示进展性感染或炎症。D-二聚体D-二聚体是具有约200kDa分子量的交联的血纤蛋白降解产物。D-二聚体的正常血浆浓度是<150ng/ml(750pM)。D-二聚体的血浆浓度在患有急性心肌梗死和不稳定心绞痛的患者中升高，但是在稳定型心绞痛患者中不升高(Hoffmeister、H.M.等,Circulation91(1995)2520-2527)。D-二聚体的血浆浓度也会在血凝固和血纤蛋白裂解激活有关的任何状况(包括中风、手术、动脉粥样硬化、创伤和血栓性血小板减少性紫癜)期间升高。D-二聚体在纤维蛋白溶酶所致的蛋白水解性血块溶解后立即释放进入血流。D-二聚体的血浆浓度在患有不稳定心绞痛的患者中可以超过2Mg/ml(Gurfinkel,E.等，Br.HeartJ.71(1994)151-155)。血浆D-二聚体是血纤蛋白裂解的特异性标志物并且提示存在与急性心肌梗死和不稳定心绞痛有关的前血栓形成性状态。近炎症标志物是位于上游的大分子，即接近或处在疾病事件的致病起源处。尤其是，它们在冠l^心脏损伤的部位内、优选地在动务^斑块部的风险并且与斑块破裂及血栓形成的可能性有关。近炎症标志物是本领域技术人员已知的，并且非限制性实例包括妊娠相关多肽A(PAPP-A)、基质金属蛋白酶(MMP，例如MMP-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-9、-10、-11、-12)和脂蛋白结合的磷脂酶A2(Lp-PLA2)。优选的近炎症标志物是PAPP-A、MMP-9和Lp-PLA2。最优选的近炎症标志物是PAPP-A和Lp-PLA2，尤其PAPP-A。妊娠相关性血浆蛋白-A(PAPP-A)妊娠相关性血浆蛋白-A(PAPP-A)属于锌金属蛋白酶的金属锌蛋白(metzincin)超家族。PAPP-A的分子量是187kDa。人妊娠相关性血浆蛋白A(PAPP-A)切割胰岛素样生长因子(IGF)结合蛋白-4(IGFBP-4),造成该蛋白质对IGF-I和IGF-II的亲和力显著下降。通过这种机制，PAPP-A在几个系统(包括人卵巢系统和心血管系统)中充当IGF生物活性的调节物。最近研究表明PAPP-A也可以是急性冠状动乐:M宗合征的新候选标志物(Bayes-Genis,A.,N.Engl.J.Med.345(2001)1022-1029)。该项研究中的数据显示当与稳定型心绞痛患者或对照受试者比较时，PAPP-A水平在不稳定心绞痛或急性心肌梗死患者中显著升高。脂蛋白结合的磷脂酶A2(Lp-PLA2)脂蛋白结合的磷脂酶A2(Lp-PLA2)是主要由巨噬细胞产生的50kDa的Ca不敏感性脂肪酶。这种酶主要位于人血浆中的低密度脂蛋白(LDL)上。它与分泌性磷脂酶A2(sPLA2)区别明显。Lp-PLA2的水平不受急性全身性感染病症的影响。临床研究已经显示Lp-PLA2与动脉粥样硬化相关。还发现升高的血浆水平与CHD及缺血性中风风险关联。在临床前动物研究中，对该酶的抑制减弱炎症过程并延緩动脉粥样硬化疾病进展。高半胱氨酸循环性总高半胱氨酸的浓度是叶酸盐和维生素B12不充足状态的敏感标志物。升高的高半胱氨酸浓度与增加的血管病风险有关。总高半胱氨酸浓度的参考范围(第5和第95百分位数)最近已被确定(Selhub,J.,等，Ann.Intern.Med.131(1999)331-339)。将高的总高半胱氨酸浓度定义为超过参考样品的性别特异性第95百分位数的总高半胱氨酸浓度。血清总高半胱氨酸浓度的参考范围是年龄依赖性的；这些范围对于年龄12-19岁的男性参与者是4.3-9.9微摩尔/L并且对于年龄12-19岁的女性参与者是3.3-7.2微摩尔/L，并且对年龄60岁或更高龄的男性是5.9-15.3微摩尔/L,并且对于年龄60岁或更高龄的女性是4.9-11.6微摩尔/L。将高的高半胱氨酸浓度定位为对男性参与者至少11.4微摩尔/L并且对于女性参与者至少10.4微摩尔/L。脂连蛋白脂连蛋白是主要由脂肪细胞产生的含226个氨基酸的蛋白质。脂连蛋白的水平似乎反映胰岛素敏感度并涉及脂肪贮备及动脉硬化。就临床用途而言，几种不同的预期用途正在讨i仑和/或研究中。US6,461,821描述并对脂连蛋白作为关节硬化标志物的用途提出权利要求。可溶性CD40配体(sCD40L)已经建议sCD40L作为炎症标志物(Aukrust,P.等，Circulation100(1999)614-620)并且因此指示发生冠脉心脏事件的风险。在WO03/040691中，已经将sCD40L描述为炎症的全身性标志物。最近，也已经讨论sCD40L并将其描述为心肌病的候选标志物。Heeschen,C.等，N.Engl.J.Med.348(2003)1104-1111指出sCD40L可能作为急性冠状动脉综合征中的标志物而使用。sCD40L尤其与血小板活化、血小板聚集和血栓扩大有关，代表如此风险，即已经变脆弱的斑块会破裂，导致可引起左心室功能紊乱(LVD)、充血性心力衰竭(CHF)和死亡的可逆性血管闭塞(UAP)或不可逆性血管闭塞(AMI)。胆固醇胆固醇同时是类固醇、脂和醇。它存在于全部身体组织的细胞膜中并且在全部动物的血浆内运输。大部分胆固醇并不来源于摄入，而是内部合成的。胆固醇在众多生物化学过程中发挥重要作用，但是其与心肌疾病的相关最为知名。胆固醇在其与蛋白质结合的嚢泡中流经血液。这种胆固醇-蛋白质包装物叫做脂蛋白。脂蛋白是高密度或低密度的，这取决于脂蛋白相对于脂肪具有多少蛋白质。具有比脂肪更多的蛋白质的脂蛋白叫做高密度脂蛋白(HDL)。具有比蛋白质更多的脂肪的脂蛋白叫做低密度脂蛋白(LDL)。高密度脂蛋白胆固醇有时候称作"好"胆固醇。HDL胆固醇通过在血液中与LDL胆固醇结合并携带它返回肝脏以处理而帮助从身体中除去LDL胆固醇。高水平的HDL胆固醇似乎降低发生心脏疾病和中风的风险。低密度脂蛋白胆固醇有时候称作"坏"胆固醇。LDL胆固醇聚集在动脉内壁内并且常常促进斑块形成。LDL胆固醇从总胆固醇、HDL和三酰甘油水平中计算。在本发明的又一个优选实施方案中，测定了LDL胆固醇或HDL对LDL的比率并且将它们作为标志物组的部分而用来评估个体发生心月几病的风险。髓过氧化物酶髓过氧化物酶是存在于白细胞、嗜中性粒细胞中的溶酶体酶。髓过氧化物酶使用过氧化氢将氯化物转化成次氯酸的酶。产生的次氯酸与细菌反应并摧毁细菌。在众多炎症病理学如嚢性纤维化和类风湿性关节炎中，嗜中性粒细胞也造成组织损伤。当动脉发炎并且具有易于破裂的脂肪沉积物时，也产生髓过氧化物酶。动脉中的炎症可以产生血液凝块并最终导致心脏病发作或中风。髓过氧化物酶^^见为有前景的心脏标志物。通过测量血液中的髓过氧化物酶水平，有可能预测某人在后续6个月中是否有心脏病发作或死亡的风险(BaldusS.等，Circulation108(2003)1440-1445)。胎盘生长因子(P1GF)胎盘生长因子(P1GF)是多肽生长因子和血小板衍生性生长因子家族的成员，但是与血管内皮生长因子(VEGF)更相关。P1GF-1仅作为极微弱促分裂原对某些内皮细胞类型发挥作用或作为有效化学引诱物对单核细胞发挥作用。P1GF-1的体内生理功能仍在争论。在几个报告中，通过使用不同分析法显示P1GF-1不是内皮细胞的有效促分裂原并且没有体内血管生成性。最近由一位研究人员证实，来自细胞培养上清液的P1GF-1在CAM测定法中并且在兔角膜试验中具有血管生成性。两种不同的蛋白质可以通过人P1GF基因差异性剪接而产生P1GF-1(131个氨基酸的天然链)和P1GF-2(152个氨基酸的天然链)。这两种促分裂原是分泌性蛋白质，不过P1GF-2可以与肝素以高亲和力结合。P1GF-1是同二聚体，然而P1GF的制备物在SDS凝胶上显示某些异质性，这取决于变动的糖基化程度。全部二聚体形式具有相似的生物学特征。有充分证据说明存在VEGF与P1GF之间的异二聚体分子并且它们有生物学活性。与P1GF相关的蛋白质是具有约53%同源性的VEGF。缺血修饰的白蛋白观察到心肌缺血导致钴对白蛋白较低的金属结合能力(=缺血修饰的白蛋白或IMA),这种观察导致开发了最近符合FDA要求的白蛋白-钴结合性(ACB)试验。ACB试验是测量人血清中缺血修饰的白蛋白(IMA)的定量分析。原则上，添加至血清中的钴不与IMA的氨基末端结合，使得更多游离钴与二硫苏糖醇反应并且在来自局部缺血患者的样品中形成更深的颜色。目前，该测定法可用在多种临床化学平台上。需要遵循具体的预分析要求，包括避免使用含螯合剂的收集管，在2.5小时内开展测定分析或在-20。C以下冷冻，并避免样品稀释。此外，当血清白蛋白浓度<20g/L或〉55g/L或存在升高的乳酸盐或氨浓度时，应当谨慎解释ACB检z睑结果。增加的IMA值可以存在于例如患有癌症、感染、末期肾病、肝病和脑缺血的患者中。几项临床研究已经评估了ACB测定法在心脏病患者中的表现，大部分是4企马全IMA在评估局部缺血中的作的额外标志物。在优选实施方案中本发明方法在看起来健康个体的研究中实施。"看起来健康"，如本文中所用，意指以前没有经历或没有意识到以往的有害心血管事件如心肌梗死的个体。看起来健康的个体还不表现疾病的症状。换句话说，此类个体若由医学专家检查将以健康并且无疾病症状为特征。技术人员会理解，存在众多方式使用2种或更多种标志物的量值来改进所研究的诊断问题。在一个相当筒单然而却往往有效的方法中，若样品对研究的至少一种标志物呈阳性，则接受为阳性结果。这例如可以是如此情况，即此时通过检测传染源的核酸或多肽或通过检测针对该传染源的抗体而诊断传染病如AIDS。然而，标志物的组合往往进行数学或统计学评估。优选地，将对标志物组的标志物(例如抗心肌肌钙蛋白抗体和心肌肌钓蛋白水平)所测量的值以数学方式组合，并且使组合值与潜在的诊断问题建立关联。优选地，诊断问题是未来发生心肌病的相对风险。优选地，该相对风险与i^康对照相比專支而给出。优选地，1*康对照在年龄及其它协变量方面相似。标志物值可以通过现有技术的任何适宜数学方法组合。用于使标志物组合与疾病或与发生疾病风险建立关联的公知数学方法采用下列方法，如判别分析(DA)(即线性、二次、正则化DA)、核方法(KernelMethod)(即SVM)、非参数法(即K邻近分类法(k-Nearest-NeighborClassifiers))、PLS(偏最小二乘法)、基于树的方法(Tree-BasedMethod)(即逻辑回归、CART、随才几森4木法(RandomForestMethod)、Boosting/Bagging法)、广义线性模型(即逻辑回归(LogisticRegression》、基于主成分的方法(即SIMCA)、广义加性模型、基于�：�逻辑的方法、基于神经网络和遗传算法的方法。技术人员会毫无问题地选择适宜的方法以评估本发明的标志物组合。优选地，在使本发明的标志物组合例如与不存在或存在心朋j疾病或与发生心脏病症风险建立关联中所用的方法选自DA(即线性、二次、正则化判别分析)、核方法(即SVM)、非参数法(即K邻近分类法)、PLS(偏最小二乘法)、基于树的方法(即逻辑回归、CART、随机森林法、助推法(BoostingMethod))或广义线性模型(即逻辑回归)。涉及这些统计方法的细节在如下文献中找到Ruczinski，I.,J.的ComputationalandGraphicalStatistics12(2003)475-511;Friedman,J.H.,RegularizedDiscriminantAnalysis,JASA84(1989)165-175;Hastie，T.等，TheElementsofStatisticalLearning,SpringerSeriesinStatistics,2001;Breiman,L.等，Classificationandregressiontrees,WadsworthInternationalGroup,Belmont/California(1984);Breiman,L.,MachineLearning45(2001)5-32;Pepe,M.S.，TheStatisticalEvaluationofMedicalTestsforClassificationandPrediction,OxfordStatisticalScienceSeries,28(2003)和Duda,R.O.等,PatternClassification,WileyInterscience,第二版(2001)。本发明的优选实施方案是对潜在的生物标志物组合使用优化的多变量临界值并且例如区分具有低度、中度和高度的发生心肌病风险的患者。在这种类型的多变量分析中，标志物不再是独立的，而形成标志物组。诊断方法的精确度最佳地由其接收者操作特性曲线(ROC)(具体见Zweig,M.H.,和Campbell,G.,Clin.Chem.39(1993)561國577)描述。ROC曲线是在所观察数据的全部范围上连续变动判断阈值而产生的全部灵敏度/特异性对的曲线。实验室检验的临床性能取决于其诊断精确性或正确地将受试者分类至临床相关性亚组内的能力。诊断精确性测量了检验法正确区分所研究受试者的两种不同状况的能力。此类状况例如分别是健康与疾病或良性与恶性疾病。在每种情况下，ROC曲线通过将灵敏度对1-特异性在判断阈值完整范围上作图而描绘两种分布间的重叠。在y-轴上是灵敏度或真阳性分数[定义为(真阳性检验结果数)/(真阳性检验结果数+假阴性检验结果数)]。这也已经称作在疾病或状况存在下的阳性。它完全从受影响的亚组中计算。在x-轴上是假阳性分数，或l-特异性[定义为(假阳性结果数)/(真阴性结果数+假阳性结果数)]。其为特异性指标并且完全从不受影响的亚组中计算。因为真阳性分数和假阳性分数通过使用来自两个不同亚组的检马t结果而完全独立地计算出来，因此ROC曲线独立于样品中的疾病流行率。ROC曲线上的每个点代表与特定判定阈值相对应的灵敏度/l-特异性对。可完全区分(在结果的两个分布中无重叠)的检验具有通过左上角的ROC曲线，其中真阳性分数是1.0或100%(完全灵敏度)并且假阳性分数是0(完全特异性)。对于无区分(对于两个组，结果分布相同)检验的理论曲线是从左下角至右上角的45°对角线。大部分的曲线落在这两种极端之间。(若ROC曲线完全处在45。对角线下，这通过将"阳性"标准从"大于，，反转成"少于，，或反之而轻易修正。定性地说，曲线越靠近左上角，检验的整体精确性越高。对实验室检验的诊断精确性定量的一个合适目标是通过单个数字表述其性能。最常见的整体衡量是ROC曲线下面积。按照惯例，这个面积总是大于0.5(若非如此，可以反转判定尺度以使该面积大于0.5)。ROC值在1.0(两个组的才企-验值完全分开)和0.5(两个组的片企-睑值之间没有明显分布差异)之间。该面积不仅取决于所述曲线的特定部分如最靠近对角线的点或在90%特异性时的灵敏度，还取决于整条曲线。这是对ROC曲线如何接近于完美曲线(面积=l.O)的定量说明性表述。在优选的实施方案中，本发明涉及通过测量样品中抗心肌肌钙蛋白抗体的浓度和心肌肌钙蛋白水平并且使测定的浓度与发生心肌病风险建立关联而改进对个体发生心肌病的风险进行评估的方法。在优选的实施方案中，本发明涉及通过测量样品中抗心肌肌钙蛋白抗体的浓度和胆固醇水平并且使测定的浓度与发生心肌病风险建立关联而改进对个体发生心月几病的风险进4亍评估的方法。在优选的实施方案中，本发明涉及通过测量样品中抗心肌肌钙蛋白抗体的浓度和CRP水平并且使测定的浓度与发生心肌病风险建立关联而改进对个体发生心肌病的风险进4亍评估的方法。在优选的实施方案中，本发明涉及通过测量样品中抗心肌肌钙蛋白抗体的浓度和利尿钠肽或利尿钠肽相关标志物的水平并且使测定的浓度与发生心肌病风险建立关联而改进对个体发生心肌病的风险进行评估的方法。在优选的实施方案中，本发明提供对抗心肌肌钙蛋白抗体特异的并具有合适灵敏度的新试剂盒或测定法。本发明的优选试剂盒包括适于测量抗所述心肌月几4丐蛋白抗体的心肌J几4丐蛋白和辅助试剂。的药物治疗中获益的可能性的方法。该方法可以对患者治疗以及还对临床开发新疗法具有重要意义。医生基于对患者的预期净益处而为患者治疗选择治疗方案。净益处来源于风险对获益比。本发明可以允许选择更可能通过介入作用而获益的个体，因此辅助医生选择治疗方案。这可能包括使用其中预期获益可能性增加的具有更高风险特征的药物。同样，临床研究员想要为临床试验选择极有可能获得净益处的群体。本发明可以帮助临床研究员选择此类个体。预期临床研究员现在将使用本发明以确定临床试验的入选标准。抗心月几月几钩蛋白抗体在个体样品中的存在可以提示炎症过程正在进行，这可能导致心脏组织的进一步损伤。抗炎症疗法可能对于抗心肌肌钙蛋白I抗体检测呈阳性的患者尤其重要。心肌肌钓蛋白可以心脏手术介入期间释放至循环中。这可能对接受心脏移植手术的患者尤其是这样。心肌肌钙蛋白在心脏手术期间的释放可以触发或可以不触发自身抗体形成。然而一旦受诱导，则抗肌钙蛋白自身抗体完全可以对患者产生不利影响并且可能例如与排斥移植的心脏有关。在又一个优选的实施方案中，自身抗心肌肌钙蛋白抗体将尤其辅助心脏手术后的患者随访，并且优选地是心脏移植随访。与对这类自身抗体检测不呈阳性的患者相比较，产生抗肌钙蛋白抗体的心脏移植患者可能需要额外的或不同的治疗。提供以下实施例以辅助理解本发明，而本发明的真实范围在所附权利要求书中描述。可理解的是可以在所述方法中进行调整而不脱离本发明的精神。实施例1检测抗心肌肌4丐蛋白抗体的一般方法为了检测血清抗心肌肌钓蛋白T或肌4丐蛋白I抗体，可以使用如下测定法微量滴定平板的孔首先用小鼠抗心肌肌钙蛋白T或I单克隆抗体包被。在第二个步骤中，相应的抗原即心肌肌钙蛋白T或I与抗体结合。通过温育适度稀释的血清样品与结合的肌钙蛋白抗原，能够与孔内肌4丐蛋白结合的血清抗体会与该肌钓蛋白结合。结合的血清抗体随后可以通过合适的检测抗体如抗人IgG过氧化物酶缀合物而检测。技术人员熟知合适的封闭及洗涤步骤。实施例2;险测人血清样品中的抗心肌肌钙蛋白I抗体微量滴定板MaxiSorp⑧平底96孔平板(Nunc订单号44-2404)的孔用抗心肌肌4丐蛋白I抗体包被。在包被緩冲液(K).lMNaHC〇3,Sigma订单号S-51761,34mMNa2C03;Sigma订单号S-7795,pH9.5)内的0.5pg/ml抗体浓度上以100pl/孔在4°C包^皮过夜。用PBS/Tw(石舞酸盐緩冲盐水，NaClSigma订单号S-5886,氯化钾Sigma订单号P-4504,磷酸钠，Sigma订单号S-5136,磷酸二氢钾，SigmaP-5655,含0.05%Tween20Roth订单号9127.1)洗涤两次(每孔每次洗涤300(il)。为封闭非特异性结合作用，全部孔接受300pi含1%明胶(冷水鱼皮，Sigma订单号G-7765)的PBS。温育在室温进4亍3小时。孔如上用PBS/Tw洗涤。试验孔接受100(il肌钙蛋白1溶液(在样品稀释液=含0.1%Tween20⑧和1。/o牛血清白蛋白(BSA,Sigma订单号A-9647)的PBS中的3pg/ml)。对照孔接受100pi样品稀释液。温育在室温(RT)进行2小时。孔如上用PBS/Tw洗涤。将人血清在样品稀释液内l:20稀释并且在步骤2中进一步稀释。在室温下一式两份将每孔100pl稀释的血清分别在试验孔以及对照孔中温育90分钟。孔如上用PBS/Tw洗涤。随后向每孔添加100pl的在样品稀释液中1:10,000稀释的检测抗体(辣根过氧化物酶(HRP)缀合的抗人IgG单克隆抗体-BDPharmingen产品编号555788)并温育1小时，随后如上所述洗涤。与孔结合的过氧化物酶活性通过使用100pl/孔BlueStarTMB-HRP-底物(DiarectAG,产品编号DIA91000)如供应商所述检测。反应在45分钟后通过添加100jil/孑L0.3MH2S04J.T.Baker订单号6057而终止。使用550nm作为参考波长通过SLTSpectraII,Tecan记录在450nm处的消光。对于试-睑孔内的双次测量以及对于对照孔内的双次测量计算中位数值。校正的OD结果通过从相应检测孔的中位数中减去对照孔的中位数以便弥补非特异性结合作用而计算。大于0.2光密度值的校正OD值视为阳性。结果在表l中汇总。表1:抗肌4丐蛋白I抗体检验结果样品来源阳性样品数/样品总数HOCM(月巴厚梗阻性心肌病)5/7DCM(扩张性心肌病)6/13ICM(缺血性心肌病)5/13对照(无已知的心功能障碍)0/4可以见到，已经发现显著数量的患有各种类型心肌病的患者在其样品中具有抗心肌肌钙蛋白I抗体。这清楚表明抗心肌肌钙蛋白抗体的存在可以代表心肌疾病的标志。因为由人体产生(IgG)抗体只是时间早晚问题，故这些抗体极可能可以充当用于患心血管疾病、尤其来自心肌病的风险4示志物。实施例3对具有或没有抗肌钙蛋白抗体的AMI患者的评估将AMI患者再分组为具有抗cTNI自身抗体的组和没有抗TNI自身抗体的组。通过分别测量MI后6-24小时和6-9月后的左心室射血分数(LVEF)而评估疾病过程。LVEF指示心脏的泵送功能。下降的LVEF提示发生心力衰竭，而后续期间LVEF的增加提示泵送功能恢复及患者康复。初步研究的结果示于表2。表2:具有或没有抗TNI抗体的AMI患者的LVEF的改变<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>从表2中显而易见，LVEF的平均改变对于血液中含抗肌钙蛋白抗体的患者呈阴性，而VEF的平均改变对于循环中不具有可检测水平的自身抗肌钓蛋白抗体患者呈阳性(心功能改善)。权利要求1.辅助评估个体发生心肌病风险的方法，包括a)体外测量抗心肌肌钙蛋白抗体和任选地一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物，以及b)使在(a)中获得的值或诸值与个体发生心肌病的风险建立关联。2.根据权利要求1的方法，其中所述心肌肌钙蛋白包括肌钙蛋白T和肌4丐蛋白I。3.根据权利要求1的方法，其中所述心肌肌钓蛋白是肌钙蛋白I或肌钓蛋白T。4.根据权利要求1-3任一项中所述的方法，其中所述抗心肌肌钙蛋白抗体属于免疫球蛋白M类。5.根据权利要求1-3任一项中所述的方法，其中所述抗心肌肌钓蛋白抗体属于免疫球蛋白G类。6.根据权利要求1-5任一项中所述的方法，其中所述一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物选自心肌肌钓蛋白、利尿钠肽或利尿钠肽相关标志物、炎症标志物、D-二聚体、胆固醇、高半胱氨酸、脂连蛋白、sCD40L、髓过氧化物酶、P1GF和缺血修饰的白蛋白。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述标志物是心肌肌钙蛋白。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述标志物是BNP或BNP相关沖示志物。9.抗心肌肌钓蛋白抗体在评估个体发生心肌病的风险中的用途。10.试剂盒，包括心肌肌钓蛋白和适用于测量抗所述心肌肌钙蛋白抗体的辅助试剂。全文摘要本发明涉及心肌病领域。本发明公开了在从个体获得的样品中存在的抗心肌肌钙蛋白抗体可以作为诊断标志物、尤其是在评估个体发生心肌病的风险中使用。描述了辅助评估个体发生心肌病风险的方法，包括体外测量抗心肌肌钙蛋白抗体和任选地一种或多种在评估个体发生心肌病风险中有用的其它标志物，并且使获得的值或诸值与个体发生心肌病的风险建立关联。文档编号G01N33/68GK101371144SQ200780002883公开日2009年2月18日申请日期2007年1月23日优先权日2006年1月25日发明者H·卡图斯,K·哈勒迈耶,Z·卡亚申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司