亚星游戏官网-www.yaxin868.com

重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量的测定方法
【专利摘要】本发明公开一种重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量的测定方法，包括有对照品溶液配制步骤、待测品溶液配制步骤和Triton X-100测定步骤，所述待测品溶液配制步骤包括：对每组待测品中的蛋白质含量进行检测，甄别出蛋白质含量大于一个阈值的待测品和蛋白质含量小于所述阈值的待测品；分别用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行第一次洗杂；对蛋白质含量大于所述阈值的待测品，再用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行再次洗杂；用1份体积浓度为2％～70％的甲醇溶液通过固相萃取柱，对每组待测品进行第三次洗杂。本发明可有效去除原液中的蛋白质大分子物质及其他干扰物质对Triton X-100残留量测定的影响，回收率高，能准确地测定原液中的Triton X-100残留量，其检测限可到达1μg/ml级。
【专利说明】重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-100残留量的 测定方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及重组基因工程乙型肝炎疫苗的配制技术，尤其涉及一种重组酿酒酵母 表达的HBsAg原液中TritonX-100残留量的测定方法。

【背景技术】
[0002] 我国是乙型肝炎高流行区，每年平均报告发病人50多万例，而接种乙肝疫苗是预 防乙型肝炎最有效、最经济的方法。利用重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原（h印atitisB surfaceantigen,HBsAg)大规模工业化生产乙型肝炎疫苗，是一种容易获取培养基、成本 低、生产率高的乙肝疫苗生产工艺，可满足我国对乙肝疫苗的大量需求。
[0003] 聚乙二醇辛基苯基醚（Tritonx-100)是一种非离子型表面活性剂（或称去污 剂），它能溶解脂质，以增加脂蛋白的溶解性。
[0004] 重组酿酒酵母菌发酵后，经破碎、纯化，得到用于配制乙肝疫苗的HBsAg原液， HBsAg原液的蛋白质含量为20yg/ml?250iig/ml。在所述纯化工艺中，添加了Triton X-100作为蛋白抽提液或洗脱剂，而待抗原纯化后，需要去除其中残留的TritonX-100。 HBsAg原液中的TritonX-100残留量是原液质量控制的关键指标之一。
[0005] 现行《中国药典》中规定，在重组乙型肝炎疫苗生产工艺样品中，TritonX-100残 留量的测定方法是苯酚与TritonX-100反应生成白色浑浊物质，采用分光光度法测定。该 方法检测限只能达到10Ug/ml，并且样品中的蛋白质对TritonX-100含量测定有干扰。
[0006] 采用高效液相色谱法，根据待测品的峰面积计算出TritonX-100的含量，是一种 较为先进的检测生物制品中TritonX-100残留量的有效方法。这种方法重复性好、准确 性高、省时简便，已经被应用于测定血浆制品、抗毒素/抗血清、纤原等多种生物制品中的 TritonX-100 残留量。
[0007] 在采用高效液相色谱法测定一些含有杂质的样品溶液中Tritonx-100的含量之 前，为了保护液相色谱柱和保证测定结果的准确性，还需要对样品溶液进行预处理，去除样 品溶液中的干扰物质。在现有技术中，对血浆、抗毒素/抗血清等制品，采用固相萃取柱活 化后对样品溶液进行上样、洗杂、洗脱处理，可有效去除样品溶液中的干扰物质。
[0008] 然而，发明人在研究本发明的过程中发现，重组酿酒酵母菌表达的乙肝表面抗原， 经纯化工艺得到用于配制疫苗的HBsAg原液，其蛋白质含量在20yg/ml?250yg/ml之 间，作为大分子物质，高浓度的蛋白质含量不仅会对高效液相色谱法测定TritonX-100残 留量的准确性产生严重干扰，而且，现有技术的固相萃取法的洗杂方法，不能有效去除杂质 干扰，同时在高效液相法测定步骤，配制对照品的溶剂是水，而待测品溶液为甲醇溶液，体 系不一致，影响准确性。


【发明内容】

[0009] 本发明所解决的技术问题是，提供一种重组酿酒酵母表达的HBgAs中Triton X-100残留量的测定方法，该方法回收率高、检测限低，能实现原液中TritonX-100残留量 的准确测定。
[0010] 为了解决上述技术问题，本发明公开了以下方案：
[0011] 一种重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Tritonx-100残留量的测定方法，包括有 对照品溶液配制步骤、待测品溶液配制步骤和TritonX-100测定步骤，在所述待测品溶液 配制步骤中，依次通过固相萃取柱活化、上样、洗杂和洗脱步骤，对待测品进行固相萃取处 理，在所述上样步骤之前，还包括：
[0012] 蛋白质含量检测步骤，从待检测的HBsAg原液中，以按体积计每份为单位，取若 干组待测品后，对每组待测品中的蛋白质含量进行检测，甄别出蛋白质含量大于一个阈 值的待测品和蛋白质含量小于所述阈值的待测品，其中所述阈值的取值范围为70yg/ ml-125ug/ml；
[0013] 而所述洗杂步骤包括：
[0014] 一次洗杂步骤，分别用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行第一次洗杂；
[0015] 二次洗杂步骤，对蛋白质含量大于所述阈值的待测品，在所述一次洗杂步骤后，分 别再用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行再次洗杂；
[0016] 三次洗杂步骤，在所述第一洗杂步骤/第二洗杂步骤后，分别用1份体积浓度为 2%?70%的甲醇溶液通过固相萃取柱，对每组待测品进行第三次洗杂。
[0017] 优选地，所述阈值的取值为100yg/ml。
[0018] 优选地，所述洗脱步骤包括：
[0019] 用90%?100%甲醇1份通过固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，即得到待测品溶 液。
[0020] 优选地，所述TritonX-100测定步骤包括：
[0021] 液相色谱测定步骤，分别对每组所述对照品溶液和待测品溶液进行高效液相色谱 测定；
[0022] 方程建立和求解步骤，通过对照品溶液的峰面积与对照品溶液中TritonX-100的 浓度进行线性回归，建立标准曲线方程，将待测品溶液的峰面积代入标准曲线方程，计算出 待测品中TritonX-100的残留量。
[0023] 优选地，在所述液相色谱测定步骤中，采用的色谱柱为WatersSymmetryShield? RP18, 5ym3. 9X150mm反相色谱柱，以甲醇水溶液为流动相，采用二级管阵列检测器监测， TritonX-100的分析波长范围在220nm?240nm。
[0024] 优选地，所述的甲醇水溶液流动相中，甲醇与水的比为70:30?85:15。
[0025] 优选地，甲醇水溶液流动相比为80:20时，流动相的流速范围在0. 6ml/?1. 0ml/ 分钟之间。
[0026] 优选地，所述对照品溶液配制步骤包括：
[0027] 以90%的甲醇溶液配制TritonX-100对照品溶液，制成若干组1?20iig/ml的 TritonX-100的对照品溶液。
[0028] 优选地，所述活化步骤包括：
[0029] 选取固相萃取柱，并在该固相萃取柱中依次通过1份甲醇和1份水，对其进行预先 活化；
[0030] 所述上样步骤包括：
[0031] 分别将每组待测品上样至活化后的固相萃取柱中；
[0032] 且在所述待测品溶液配制步骤中，液体通过固相萃取柱的流速不快于1ml/分钟。
[0033] 优选地，在所述活化步骤中，选取的固相萃取柱为WatersOasis?HLBlcc固相 萃取柱。
[0034]本发明的有益效果是：
[0035] 本发明的实施例通过对固相萃取进行优化，在上样前检测待测品中的蛋白质含 量，甄别出蛋白质含量高于1〇〇Ug/ml左右的待测品，并对其进行二次洗杂，并利用反相 高效液相色谱法测定TritonX-100含量，从而达到了将TritonX-100的检测限降低到 1Ug/ml，能准确地测定原液中TritonX-100残留量的效果。

【具体实施方式】
[0036] 下面详细描述本发明提供的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-100 残留量的测定方法的一个实施例；本实施例实现一次重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中 TritonX-100残留量的测定主要包括以下步骤：
[0037] 包括有对照品溶液配制步骤、待测品溶液配制步骤和TritonX-100测定步骤，在 所述待测品溶液配制步骤中，依次通过固相萃取柱活化、上样、洗杂和洗脱步骤，对待测品 进行固相萃取处理，在所述上样步骤之前，还包括：
[0038] 蛋白质含量检测步骤，从待检测的HBsAg原液中，以按体积计每份为单位，取若 干组待测品后，对每组待测品中的蛋白质含量进行检测，甄别出蛋白质含量大于一个阈 值的待测品和蛋白质含量小于所述阈值的待测品，其中所述阈值的取值范围为70yg/ ml-125ug/ml；
[0039] 而所述洗杂步骤具体包括：
[0040]一次洗杂步骤，分别用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行第一次洗杂；[0041] 二次洗杂步骤，对蛋白质含量大于所述阈值的待测品，在所述一次洗杂步骤后，分 别再用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行再次洗杂；
[0042] 三次洗杂步骤，在所述第一洗杂步骤/第二洗杂步骤后，分别用1份体积浓度为 2%?70%的甲醇溶液通过固相萃取柱，对每组待测品进行第三次洗杂。
[0043] 并且，所述洗脱步骤具体包括：
[0044] 用90%?100%甲醇1份通过固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，即得到待测品溶 液。
[0045] 另外，所述对照品溶液配制步骤可具体包括：
[0046] 以90%的甲醇溶液配制TritonX-100对照品溶液，制成若干组浓度为1?20iig/ ml的TritonX-100的对照品溶液。
[0047] 该步骤中，通过以甲醇取代现有技术的水作为溶剂配制对照品溶液，从而达到体 系一致化，保证了测定结果的准确性。
[0048] 所述活化步骤可具体包括：
[0049] 选取固相萃取柱，并在该固相萃取柱中依次通过1份甲醇和1份水，对其进行预先 活化；
[0050] 所述上样步骤可具体包括：
[0051] 分别将每组待测品上样至活化后的固相萃取柱中。
[0052] 具体实现时，在所述待测品溶液配制步骤中，液体通过固相萃取柱的流速不快于 lml/分钟。
[0053] 所述TritonX-100测定步骤可具体包括：
[0054] 液相色谱测定步骤，分别对每组所述对照品溶液和待测品溶液进行高效液相色谱 测定；
[0055] 方程建立和求解步骤，通过对照品溶液的峰面积与对照品溶液中TritonX-100的 浓度进行线性回归，建立标准曲线方程，将待测品溶液的峰面积代入标准曲线方程，计算出 待测品中TritonX-100的残留量。
[0056] 在所述活化步骤中，选取的固相萃取柱为WatersOasis?HLBlcc固相萃取柱。
[0057] 在所述液相色谱测定步骤中，采用的色谱柱为WatersSymmetryShield?RP18, 5ym3. 9X150mm反相色谱柱，以甲醇水溶液为流动相，采用二级管阵列检测器监测， TritonX-100的分析波长范围为220nm?240nm。
[0058] 且所述的甲醇水溶液流动相中，甲醇与水的比为70:30?85:15。
[0059] 甲醇水溶液流动相比为80:20时，流动相的流速范围在0. 6ml/?1. 0ml/分钟之 间。
[0060] 本实施例中，各物质份均以体积计。
[0061] 作为本实施例的一个优选实施方式，在所述蛋白质含量检测步骤中，所述阈值的 取值可选取100yg/ml，即，甄别出蛋白质含量大于100yg/ml的待测品和蛋白质含量小于 100yg/ml的待测品；而在所述_次洗杂步骤中，对蛋白质含量大于100Ug/ml的待测品， 在所述一次洗杂步骤后，分别再用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行再次洗杂为 佳。
[0062] 为了更进一步阐释本实施例为达成预定发明目的所采取的技术手段和效果，对本 实施例测定重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-100残留量的具体步骤，通过实例 数据详细说明如下。
[0063]实例1
[0064] 仪器：
[0065]WatersAlliance2695高效液相色谱仪，WatersPDA2996检测器，Waters Empower软件，梅特勒-托利多XP205电子分析天平。
[0066] 试剂与试药：
[0067]TritonX-100对照品：购自Sigma公司，批号100M0128V;甲醇：HPLC级，购自 Merck公司；水：超纯水。
[0068]流程：
[0069] 在对照品溶液配制步骤中，将TritonX-100对照品溶解于90%甲醇溶液中，制成 系列浓度分别为1Ug/ml、2. 5yg/ml、5yg/ml、10yg/ml、20yg/ml的对照品溶液。
[0070] 在活化步骤中，选取WatersOasis?HLBlcc固相萃取柱，先用lml甲醇通过，再 用lml水通过。
[0071] 在蛋白质含量检测步骤中，检测到待测品原液A中的蛋白质含量为20iig/ml;待 测品原液B中的蛋白质含量为250iig/ml;
[0072]以原液A为稀释液，配制成TritonX-100含量为2yg/ml的待测品PC-原液A; [0073]以原液B为稀释液，配制成TritonX-100含量为2iig/ml的待测品PC-原液B。 [0074] 在上样步骤中，取上述待测品各1ml，通过预先活化好的固相萃取柱。
[0075] 在洗杂步骤中，对原液A和PC-原液A用1ml水清洗各1次后，或者对原液B和 PC-原液B用lml水清洗各2次后，用体积浓度为2 %的甲醇溶液lml对上述待测品各清洗 1次。
[0076]在洗脱步骤中，用1ml甲醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液即为待测品溶液。
[0077] 其中，固相萃取中的各步操作，需控制液体流速，流速应不快于1ml/分钟。
[0078] 在TritonX-100测定步骤中，分别对所述对照品溶液配制步骤获得的对照品溶液 和待测品溶液配制步骤获得的待测品溶液进行高效液相色谱法测定后，通过对照品溶液的 峰面积与对照品溶液中TritonX-100的浓度进行线性回归，建立标准曲线方程，并将待测 品溶液的峰面积代入标准曲线方程，计算出待测品中的TritonX-100残留量分别为：原液 八和原液8为〈11^/1111，？(：-原液六为1.841^/1111，？(：-原液8为1.9〇1^/1111。其中，色谱 柱为WatersSymmetryShield?RP18, 5iim3.9X150mm反相色谱柱，甲醇水溶液流动相比 70 :30,流速为0. 6ml/分钟，采用二级管阵列检测器（PDA)监测，TritonX-100的分析波长 为 230nm。
[0079]实例2
[0080] 仪器：
[0081] WatersAlliance2695高效液相色谱仪，WatersPDA2996检测器，Waters Empower软件，梅特勒-托利多XP205电子分析天平。
[0082] 试剂与试药：
[0083] TritonX-100对照品，购自Sigma公司，批号100M0128V;甲醇：HPLC级，购自 Merck公司；水：超纯水。
[0084] 流程：
[0085] 在对照品溶液配制步骤中，将TritonX-100对照品溶解于90%甲醇溶液中，制成 系列浓度分别为1Ug/ml、2. 5yg/ml、5yg/ml、10yg/ml、20yg/ml的对照品溶液。
[0086] 在活化步骤中，选取WatersOasis?HLBlcc固相萃取柱，先用1ml甲醇通过，再 用lml水通过。
[0087] 在蛋白质含量检测步骤中，检测到待测品原液C中的蛋白质含量为20iig/ml;待 测品原液D中的蛋白质含量为250yg/ml;
[0088] 以原液C为稀释液，配制成TritonX-100含量为2yg/ml的待测品PC-原液C;
[0089] 以原液D为稀释液，配制成TritonX-100含量为2yg/ml的待测品PC-原液D。
[0090] 在上样步骤中，取上述待测品1ml，通过预先活化好的固相萃取柱。
[0091] 在洗杂步骤中，对原液C和PC-原液C用lml水清洗各1次后，或者对原液D和 PC-原液D用lml水清洗各2次后，用体积浓度为70%的甲醇溶液lml对上述待测品各清 洗1次。
[0092] 在洗脱步骤中，用90%甲醇溶液lml洗脱，收集洗脱液，洗脱液即为待测品溶液。
[0093] 其中，固相萃取中的各步操作，需控制液体流速，流速应不快于lml/分钟。
[0094] 在TritonX-100测定步骤中，分别对所述对照品溶液配制步骤获得的对照品溶液 和待测品溶液配制步骤获得的待测品溶液进行高效液相色谱法测定后，通过对照品溶液 的峰面积与对照品溶液中TritonX-100的浓度进行线性回归，建立标准曲线方程，将待测 品溶液的峰面积代入标准曲线方程，计算出待测品中的TritonX-100残留量分别为：原液 C和原液D为〈1yg/ml，PC-原液C为1. 87yg/ml，PC-原液D为1. 90yg/ml。其中，色谱 柱为WatersSymmetryShield?RP18, 5um3.9X150mm反相色谱柱，甲醇水溶液流动相比 为80 :20,流速为1. 0ml/分钟，采用二级管阵列检测器（PDA)监测，TritonX-100的分析波 长为240nm。
[0095]实例 3
[0096]仪器：
[0097]WatersAlliance2695 高效液相色谱仪，WatersPDA2996 检测器，Waters Empower软件，梅特勒-托利多XP205电子分析天平。
[0098] 试剂与试药：
[0099]TritonX-100对照品：购自Sigma公司，批号100M0128V;甲醇：HPLC级，购自 Merck公司；水：超纯水。
[0100] 流程：
[0101] 在对照品溶液配制步骤中，将TritonX-100对照品溶解于90%甲醇溶液中，制成 系列浓度分别为1Ug/ml、2. 5yg/ml、5yg/ml、10yg/ml、20yg/ml的对照品溶液；
[0102] 在活化步骤中，选取WatersOasis?HLBlcc固相萃取柱，先用1ml甲醇通过，再 用lml水通过。
[0103] 在蛋白质含量检测步骤中，检测到待测品原液E中的蛋白质含量为20iig/ml;待 测品原液F中的蛋白质含量为250yg/ml;
[0104] 以原液E为稀释液，配制成TritonX-100含量为10yg/ml的待测品PC-原液E;
[0105] 以原液F为稀释液，配制成TritonX-100含量为10yg/ml的待测品PC-原液F。
[0106] 在上样步骤中，取上述待测品各1ml，通过预先活化好的固相萃取柱。
[0107] 在洗杂步骤中，对原液E和PC-原液E用lml水清洗各1次后，或者对原液F和 PC-原液F用lml水清洗各2次后，用体积浓度为5 %的甲醇溶液lml对上述待测品各清洗 1次。
[0108] 在洗脱步骤中，用甲醇溶液lml洗脱，收集洗脱液，洗脱液即为待测品溶液。
[0109] 其中，固相萃取中的各步操作，需控制液体流速，流速应不快于lml/分钟。
[0110] 在TritonX-100测定步骤中，分别对所述对照品溶液配制步骤获得的对照品溶液 和待测品溶液配制步骤获得的待测品溶液进行高效液相色谱法测定后，通过对照品溶液的 峰面积与对照品溶液中TritonX-100的浓度进行线性回归，建立标准曲线方程，将待测品 溶液的峰面积代入标准曲线方程，计算出待测品中的TritonX-100残留量分别为：原液E 和原液F为〈1iig/ml，PC-原液E为9. 56iig/ml，PC-原液F为9. 73iig/ml。其中，色谱柱 为WatersSymmetryShield?RP18,5iim3.9X150mm反相色谱柱，甲醇水溶液流动相比为 85:15,流速为0.6ml/分钟，采用二级管阵列检测器（PDA)监测，TritonX-100的分析波长 为 220nm。
[0111] 通过上述各实例所测定的TritonX-100残留量数据可知，本实施例达到了回收率 高、检测限低，能实现原液中TritonX-100残留量的准确测定的效果。
[0112] 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属【技术领域】的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的 保护范围。
【权利要求】
1. 一种重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-IOO残留量的测定方法，包括有对 照品溶液配制步骤、待测品溶液配制步骤和Triton X-100测定步骤，在所述待测品溶液配 制步骤中，依次通过固相萃取柱活化、上样、洗杂和洗脱步骤，对待测品进行固相萃取处理， 其特征在于，在所述上样步骤之前还包括： 蛋白质含量检测步骤，从待检测的HBsAg原液中，以按体积计每份为单位，取若干组待 测品后，对每组待测品中的蛋白质含量进行检测，甄别出蛋白质含量大于一个阈值的待测 品和蛋白质含量小于所述阈值的待测品，其中所述阈值的取值范围为70μg/ml-125μg/ ml； 而所述洗杂步骤包括： 一次洗杂步骤，分别用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行第一次洗杂； 二次洗杂步骤，对所述蛋白质含量大于所述阈值的待测品，在所述一次洗杂步骤后，分 别再用1份水通过固相萃取柱，对每组待测品进行再次洗杂； 三次洗杂步骤，在所述第一洗杂步骤/第二洗杂步骤后，分别用1份体积浓度为2%? 70 %的甲醇溶液通过固相萃取柱，对每组待测品进行第三次洗杂。
2.如权利要求1所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量的测 定方法，其特征在于，所述阈值的取值为100 μ g/ml。
3.如权利要求1或2所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量 的测定方法，其特征在于，所述洗脱步骤包括： 用90%?100%甲醇1份通过固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，即得到待测品溶液。
4.如权利要求3所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量的测 定方法，其特征在于，所述Triton X-100测定步骤包括： 液相色谱测定步骤，分别对每组所述对照品溶液和待测品溶液进行高效液相色谱测 定； 方程建立和求解步骤，通过对照品溶液的峰面积与对照品溶液中TritonX-100的浓度 进行线性回归，建立标准曲线方程，将待测品溶液的峰面积代入标准曲线方程，计算出待测 品中TritonX-100的残留量。
5. 如权利要求4所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-100残 留量的测定方法，其特征在于，在所述液相色谱测定步骤中，采用的色谱柱为Waters SymmetryShield?RP18,5ym3. 9X150mm反相色谱柱，以甲醇水溶液为流动相，采用二级 管阵列检测器监测，TritonX-100的分析波长范围在220nm?240nm。
6. 如权利要求5所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-100残留量的测 定方法，其特征在于，所述的甲醇水溶液流动相中，甲醇与水的配比为70:30?85:15。
7.如权利要求6所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量的 测定方法，其特征在于，甲醇水溶液流动相比为80:20时，流动相的流速范围在0.6ml? I. Oml/分钟之间。
8.如权利要求1所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中Triton X-100残留量的测 定方法，其特征在于，所述对照品溶液配制步骤包括： 以90 %的甲醇溶液配制TritonX-100对照品溶液，制成若干组1?20μg/ml的TritonX-100的对照品溶液。
9. 如权利要求1所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-IOO残留量的测 定方法，其特征在于，所述活化步骤包括： 选取固相萃取柱，并在该固相萃取柱中依次通过1份甲醇和1份水，对其进行预先活 化； 所述上样步骤包括： 分别将每组待测品上样至活化后的固相萃取柱中； 且在所述待测品溶液配制步骤中，液体通过固相萃取柱的流速不快于Iml/分钟。
10. 如权利要求9所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg原液中TritonX-100残留量的测 定方法，其特征在于，在所述活化步骤中，选取的固相萃取柱为WatersOasis'?HLBIcc固 相萃取柱。
【文档编号】G01N30/02GK104458969SQ201410854555
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】饶洪冲, 朱征宇, 段琰, 黄龙 申请人:深圳康泰生物制品股份有限公司