专利名称：一种功能性纳米铽荧光探针及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及纳米铽荧光探针，具体地说是一种以纳米硅胶为基质，以铽荧光配合物为发光内核并且在纳米硅胶微粒表面带有生物标记活性官能团的具有强荧光性的功能性纳米铽荧光微粒及其在生物检测技术中的应用。
背景技术：
生物技术与生命科学的飞速发展对生物分析化学提出了大量新的课题，核酸、多肽、蛋白质等生物大分子、生物药物、微生物、超微量生物活性物质等的分析测定对医学及生命科学的发展正起着越来越重要的作用。因此生物分析化学已成为当今国际生物技术，生命科学及分析科学领域最重要的前沿研究领域之一。纳米尺度上的生物分析化学是纳米生物技术的最主要发展方向之一，功能性纳米荧光材料是近年来纳米材料研究中的一个新生长点，已有的研究结果表明其在生物大分子的单分子原位检测、荧光显微镜检测、免疫组织化学染色、细胞生物学，分子生物学，生物传感器等生物技术和生命科学领域有重要的应用价值和应用前景。
纳米荧光探针是指可标记到生物分子上作为荧光检测探针使用的纳米发光粒子，目前已经报道的纳米荧光探针主要有(1)半导体纳米晶体(又称量子点)(文献1W.C.W.Chan，S.Nie，Science，1998，281，2016-2018；文献2Y.W.Cao，Angew.Chem.Int.Ed.，1999，38，3692-3694)。(2)内含荧光分子的纳米荧光探针(文献3H.Hrm，T.Soukka，T.Lvgren，Clin.Chem.，2001，47，561-568；文献4赵艺强，高海峰，杨武利，府寿宽，荧光标记的高分子微粒及其制备方法，中国专利，
公开日2001年1月3日，公开号CN1278534A)。(3)内包三(联二吡啶)钌荧光配合物的纳米硅胶微粒荧光探针(文献5S.Santra，P.Zhang，K.Wang，R.Tapec，W.Tan，Anal.Chem.，2001，73，4988-4993；文献6S.Santra，K.Wang，R.Tapec，W.Tan，Journal ofBiomedical Optics，2001，6，160-166；文献7谭蔚泓，王柯敏，肖丹，核壳型纳米颗粒，中国专利，
公开日2002年4月3日，公开号CN1342515A)。
量子点纳米荧光探针是II-VI族和III-V族元素化合物的纳米级微晶体，如CdSe，InP和InAs等。量子点荧光探针虽然激发光范围宽，发光峰尖锐，Stokes位移大，通过改变其粒径可以获得从蓝色到红色几乎所有波长的发光探针等优点，但其缺点是水溶性差，表面修饰及生物标记困难，发光不稳定，易闪烁，且不具备足够好的单分散性。另外由于量子点荧光探针的发光是常规荧光，在荧光测定时存在各种散乱光和背景荧光干扰测定的问题。
内含荧光分子的纳米荧光探针是用聚苯乙烯内包β-二酮-铕荧光配合物的纳米塑料荧光微粒，该类高分子塑料微粒由于是疏水性的，在水中易凝集，而在有机溶剂中高分子又易溶胀而导致微粒内荧光分子泄漏，另外该类纳米微粒通常粒子直径在100纳米以上，限制了其作为荧光探针的使用范围(如细胞标记染色等)。
内包三(联二吡啶)钌荧光配合物的纳米硅胶微粒荧光探针是以三(联二吡啶)钌荧光配合物为核，以硅胶为外壳的纳米荧光微粒。由于此类纳米荧光微粒的发光内核-三(联二吡啶)钌荧光配合物所发出的仍然是常规荧光，无法解决各种散乱光和短寿命本底荧光对荧光测定干扰的问题。
稀土荧光化合物的荧光具有非常特殊的性质，其最大的特征是荧光寿命非常长。基于这一特征，以稀土荧光化合物作为标记物的时间分辨荧光免疫测定法等生物检测技术近20年来已经取得了重大的进展，在医学与生命科学的实践与研究中发挥着越来越重要的作用。时间分辨荧光生物检测技术的最大优点就是可完全消除各种散乱光和短寿命荧光对测定的影响，从而极大地提高测定灵敏度。稀土荧光化合物直接作为标记物使用的不利之处是这类化合物一般荧光量子产率都较�。饨先酰淙徊捎檬奔浞直嬗獠舛ǚㄒ鸭蟮靥岣吡苏饫嗷衔锏挠獠舛槊舳龋龃痈慕⊥劣獗昙俏锏挠饬孔硬式蠓忍岣呤奔浞直嬗馍锛觳饧际醯牧槊舳纫丫惶赡�。袁景利等最近开发的功能性纳米稀土荧光探针(文献8袁景利，谭明乾，叶志强，王桂兰，一种功能性纳米稀土荧光微粒及其制备和应用，中国发明专利，申请号02144517.6，申请日2002.11.01；文献9袁景利，谭明乾，海晓丹，王桂兰，β-二酮-三价铕配合物纳米荧光探针及其制备和应用，中国发明专利，申请号03133857.7，申请日2003.07.04)技术由于可将高浓度的稀土荧光化合物包裹在纳米级的硅胶微粒中，一方面有效的解决了直接使用稀土荧光化合物作为标记物使用时存在的荧光较弱的问题，另外该类荧光探针可使用时间分辨荧光测定技术进行测定，从而解决了测定中各种散乱光和短寿命本底荧光对荧光测定干扰的问题。但前述发明中制备的硅胶基质的纳米铽荧光微粒由于需要经过表面活化过程才可用于生物标记(文献10，Zhiqiang Ye，Mingqian Tan，GuilanWang，Jingli Yuan，Anal.Chem.，2004，76，513-518)，其生物标记过程比较繁杂费时。为解决这种问题，研制一种荧光发光强，化学性质稳定，且可直接用于生物标记的纳米铽荧光探针十分必要。
发明内容
针对以上的问题，本发明的目的是提供一种可直接用于生物标记的铽纳米荧光探针及其在生物检测技术中的应用方法。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下利用铽荧光配合物与硅酸酯及氨基烃基单取代的硅酸酯共聚成粒技术首先制备内部包裹了铽荧光配合物、表面带有活性氨基，颗粒形状规则、大小均匀的功能性纳米硅胶荧光微粒。在对其进行各种物理化学性质表征的基础上，将其与抗体等生物分子共价键合制备纳米荧光微粒标记的生物分子。这种标记了纳米荧光微粒的生物分子即可用于细胞及组织染色，以及时间分辨荧光免疫测定等生物检测技术。
其采用如下过程制备获得，将三价铽荧光配合物(采用三价铽离子与下述配位体所形成的荧光配合物)作为发光内核，采用铽荧光配合物与硅酸酯和氨基烃基单取代的硅酸酯在含有表面活性剂、助表面活性剂，有机溶剂以及水制成的油包水型(W/O)微乳液中，用氨水引发聚合制备的内部包裹了铽荧光配合物的颗粒形状规则、大小均匀的纳米硅胶荧光微粒，由于氨基烃基单取代的硅酸酯在共聚合后可在硅胶微粒表面导入氨基，因此制备出的纳米荧光微粒表面带有可直接用于生物标记的氨基活性官能团，省却了常规纳米硅胶微粒用于生物标记时必需进行的表面修饰过程。
所述油包水型微乳液中水∶TEOS∶Triton X-100∶正辛醇∶环己烷的质量比例为1～1.5∶0.1～0.3∶2～3.5∶1.5～3∶5～10；三价铽荧光配合物是指三价铽离子(Tb3+)与具有N，N，N1，N1-[2，6-二(3-氨甲基-1-吡唑基)-吡啶]四乙酸骨架结构的配位体所形成的强荧光性配合物，有机配位体的结构式可表示如下 结构式中R＝H，C6H5，CnH2n+1，n＝1，2，3，4，5等脂肪烃类及芳香烃类取代基。
有机溶溶剂为苯、正己烷、环己烷、石油醚中的一种；助表面活性剂为乙醇、丙醇、异丙醇、正己醇、乙二醇、正辛醇或正癸醇中的任何一种；表面活性剂为Triton X-100，Tween 20，Tween 40，Tween 80中的一种，优选为Triton X-100；硅酸酯的分子式为[Si(OR)4]，其中的R是-CnH2n+1，n＝1～5。优选为正硅酸四乙酯[Si(OC2H5)4]；氨基烃基单取代的硅酸酯为氨丙基三乙氧基硅烷或[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷中的一种。
本发明功能性纳米铽荧光探针的生物标记方法首先使用桥联试剂将纳米荧光微粒与一种架桥蛋白质分子共价键合，然后再将表面健合了架桥蛋白质分子的纳米微粒用桥联试剂与生物活性分子共价键合；桥联试剂为二醛类化合物(如戊二醛)或三氯三氮锉等，架桥蛋白质分子为各种血清白蛋白及卵白蛋白，生物活性分子为各种抗体，抗原，亲合素，链亲合素或核酸等。具体为一定量的纳米荧光微�：臀於�(或三氯三氮唑)溶液加入到含有血清白蛋白的缓冲溶液中，4℃至室温下搅拌反应。离心收集沉淀，沉淀用水和缓冲溶液洗后加入到含有生物活性分子(抗体等)的缓冲溶液中，再加入戊二醛溶液。4℃至室温下搅拌反应后，加入NaBH4室温反应，离心收集沉淀，洗涤数次后悬浮于含有BSA，NaN3，NaCl的缓冲溶液中备用。
本发明的另一目的是提供一种具有强荧光性的、制备方法简单的纳米铽荧光探针在生命科学、医学检测等领域的应用技术。由于本发明的纳米铽荧光探针在制备时就已引入可与生物分子结合的官能团，可直接用于各种生物分子的标记。标记后的生物分子可用于各种时间分辨荧光生物检测技术(在时间分辨荧光测定法中的应用)，如时间分辨荧光免疫测定、时间分辨荧光DNA杂交测定、细胞识别(时间分辨荧光组织染色测定法)、显微镜成像测定(时间分辨荧光显微镜成象测定法)、单细胞原位测定(时间分辨荧光细胞测定法)、生物芯片(时间分辨荧光生物芯片测定法)等技术。
图1是内包了铽荧光配合物BPTA-Tb3+的功能性纳米硅胶荧光微粒的透射电子显微镜照片(十万倍，插入的为二十万倍)。
图2是BPTA-Tb3+配合物(1.1M，虚线)和功能性铽纳米荧光微粒(20mg/L，实线)水溶液的时间分辨荧光光谱。
图3是BPTA-Tb3+配合物(a，30μM)、功能性铽纳米荧光微粒(b，40mg/L)和空白硅胶纳米颗粒(c，70mg/L)的紫外吸收光谱。
图4是功能性铽纳米荧光微粒标记抗人甲胎蛋白(AFP)抗体的步骤及反应原理。
图5是使用功能性铽纳米荧光微粒标记抗体夹心法测定人血清中甲胎蛋白(AFP)的反应原理。
图6是使用功能性铽纳米荧光微粒标记抗体的时间分辨荧光免疫分析法测定人血清中AFP的工作曲线。
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明。本实施例仅用于对本发明的具体说明，其它基于相同原理及使用类似试剂的方法也属于本发明的范畴。
实施例1内包三价铽离子与N，N，N1，N1-[2，6-二(3-氨甲基-1’-吡唑基)-苯基吡啶]四乙酸的荧光配合物(简称BPTA-Tb3+)及N，N，N1，N1-[2，6-二(3’-氨甲基-1’-吡唑基)-甲基吡啶]四乙酸的荧光配合物(简称BMTA-Tb3+)的功能性纳米硅胶荧光微粒的的制备及表征(1)功能性纳米荧光微粒的制备BPTA-Tb3+配合物的制备将192mg的BPTA溶于4ml水中，用NaHCO3将pH调到6.5。然后将120mg的TbCl3溶于2ml水的溶液加入到BPTA水溶液中，用NaHCO3将pH调到6.5，室温下搅拌2小时，过滤除去沉淀，滤液中加入300ml丙酮，室温下搅拌1小时，过滤收集沉淀，真空干燥，再用干燥甲醇洗涤干燥固体，滤液减压蒸干，真空干燥即可制得198mg的BPTA-Tb3+配合物(收率为72.9％)。
BMTA-Tb3+配合物的制备采用相同方法制备，收率为75.0％。
将含有160mg的BPTA-Tb3+(或BMTA-Tb3+)水溶液加入含有的正硅酸四乙酯(简称TEOS)，Triton X-100、正辛醇以及环己烷制成的W/O型微乳液中，其中水∶TEOS∶Triton X-100∶正辛醇∶环己烷的重量百分比比例控制在1～1.5∶0.1～0.3∶2～3.5∶1.5～3∶5～10，在剧烈搅拌下向其中加入含有TritonX-100、正辛醇、环己烷以及浓氨水的另一种微乳液，其中Triton X-100∶正辛醇∶环己烷∶浓氨水(重量百分比为28％)的比例控制在2～3.5∶1.5～3∶5～10∶0.1～0.3。室温搅拌反应5小时后，加入6～10μl的[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷(简称AEPS)，继续反应至总反应时间达24小时后，加入约50ml丙酮结束反应。将反应液离心后除去上清液，沉淀部分则分别用乙醇和二次蒸馏水分别洗三次，真空干燥后得到白色的功能性硅胶包裹铽配合物纳米荧光微粒。
(2)功能性纳米荧光微粒的性质表征(a)纳米荧光微粒的形态及大小尺寸图1是内包了铽荧光配合物BPTA-Tb3+的功能性纳米硅胶荧光微粒的透射电子显微镜照片。通常情况下，共聚合反应是将两种硅烷化试剂同时加入到反应体系中进行水合化和聚合化反应。但实验中发现用此方法制备的纳米微粒大小不均匀，直径分布非常宽。这可能是因为AEPS所带甲氧基的水解速度要快于TEOS的乙氧基的水解速度。虽然AEPS的量比较�。侵灰酆显诠杞耗擅卓帕５谋砻妫陌被啪突嶙柚筍i-O-Si骨架的形成，纳米荧光颗粒的直径也就不再增长。本实验通过延迟AEPS的加入时间解决了这一问题，在一系列的条件试验后，确定采用TEOS开始水解5小时后再加入AEPS的方法所制备的纳米微粒不但大小均匀，粒径分布范围窄(45±3nm)，而且氨基基团也成功地被引入到荧光纳米颗粒的表面。粒径的大小可以通过调整水与表面活性剂的比例、助表面活性剂的种类、氨水的浓度、TEOS的量以及反应时间等来进行调控。
(b)纳米荧光微粒的荧光光谱特性图2是BPTA-Tb3+配合物(1.1M，虚线)和功能性纳米铽荧光微粒(20mg/L，实线)水溶液的时间分辨荧光光谱。从时间分辨荧光光谱图中可以看出，BPTA-Tb3+配合物和铽纳米荧光微粒的最大激发波长和最大发射波长基本上没有差别，都为324nm和543nm。发射光谱的四个峰是铽离子的四种跃迁形式，分别为5D4→7F6(489nm)，5D4→7F5(543nm)，5D4→7F4(582nm)和5D4→7F3(620nm)。纳米荧光微粒的荧光寿命为2.0ms，这虽然比BPTA-Tb3+配合物的荧光寿命(2.68ms)稍短，但已经足够用于时间分辨荧光免疫分析。
(c)纳米荧光微粒的荧光量子产率纳米荧光微粒在pH值9.1的0.05mol/L硼酸缓冲溶液中的荧光量子产率通过比较法来测定(文献12，L.Qu，X.Peng，J.Am.Chem.Soc.，2002，124，2049-2055)，用公式1＝I1A2/I2A1计算求得。公式中I1和I2分别为纳米微�：捅曜急冉衔镒畲蠓⑸洳ǔさ挠馇慷龋籄1和A2分别为纳米微�：捅曜急冉衔锏奈舛戎担�2为标准比较物的荧光量子产率。标准比较物使用N，N，N1，N1-[4’-苯基-2，2’6’，2”-联三吡啶-6，6”-二取代]二(亚甲基氨基)四乙酸与铽的配合物，其荧光量子产率为10.0％(文献13，M.Latva，H.Takalo，V.-M.Mukkala，C.Matachescu，J.C.Rodríguez-Ubis，J.Luminescence，1997，75，149-169)。测定结果显示，功能性铽纳米荧光微粒的荧光量子产率为10％，这低于游离BPTA-Tb3+配合物在同样条件下的荧光量子产率(～100％)，其原因可以通过测定铽纳米荧光微粒、BPTA-Tb3+配合物和空白硅胶纳米微粒的紫外吸收光谱来解释。
图3是BPTA-Tb3+配合物(a，30μM)、功能性铽纳米荧光微粒(b，40mg/L)和空白硅胶纳米颗粒(c，70mg/L)的紫外吸收光谱。从图中可以看出，空白的硅胶微粒在紫外光区有持续的吸收，而这部分被吸收的能量是不能用于发射荧光的。也就是说纳米荧光微粒所吸收的光并没有全部用于激发稀土配合物发射荧光，其中一部分硅胶基质的吸收对荧光发光没有作用，从公式1＝I1A22/I2A1可以看出，硅胶基质的吸收必然导致纳米微粒荧光量子产率的下降。此外，硅胶基质和铽配合物之间的相互作用也是纳米微粒荧光量子收率下降的重要原因之一。
虽然功能性铽纳米荧光微粒的荧光量子产率要低于游离的BPTA-Tb3+配合物，由于每个纳米微粒中包裹有大量的BPTA-Tb3+配合物分子(从荧光光谱强度比较可得出每个纳米微粒中包裹有3000个以上的BPTA-Tb3+配合物分子)，所以在作为标记物使用时每个功能性铽纳米荧光微粒的荧光强度要远大于每个游离的BPTA-Tb3+配合物。另外由于游离的BPTA-Tb3+配合物没有合适的用于生物标记的活性官能团，制备成功能性铽纳米荧光微�：笠氲幕钚园被倌芡沤饩隽烁门浜衔锊荒苤苯佑糜谏锉昙堑哪烟�。
实施例2功能性纳米铽荧光微粒作为标记物的时间分辨荧光免疫测定法测定人血清样品中的甲胎蛋白(简称AFP)(1)利用功能性纳米铽荧光微粒标记山羊抗人AFP多克隆抗体2.0mg的纳米荧光微�：�100μl的1％戊二醛溶液加入到含有20mgBSA(牛血清白蛋白)的1.0m1的0.1mol/L磷酸缓冲溶液(pH＝7.0)中，4℃下搅拌反应24小时。离心收集沉淀，沉淀用水和磷酸缓冲溶液各洗两次后加入到含有0.25mg山羊抗人AFP多抗的1.0ml、pH值7.0的0.1mol/L磷酸缓冲溶液中，再加入100μl的1％戊二醛溶液。4℃下搅拌反应24小时后，加入2mg的NaBH4，室温反应2小时，离心收集沉淀，洗涤数次后悬浮于含有0.2％BSA，0.1％NaN3，0.9％NaCl的pH值7.8的0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液中备用。图4给出了该标记方法的的步骤及反应原理，由于功能性纳米铽荧光微粒表面带有活性氨基基团，使得使用纳米微粒标记抗体分子变得简单方便。在修饰方法中，通过二次使用戊二醛作为桥联试剂将纳米微粒-BSA和BSA-抗AFP抗体相连，每一步反应都是共价结合，所以纳米微�：涂固宓慕岷鲜鞘治榷ǖ�。
(2)人血清样品中AFP的测定(a)96微孔板的包被将含抗人AFP单克隆抗体(10μg/ml)的pH值为9.6的0.1mol/L的NaHCO3缓冲溶液50μl分注于96微孔板的各孔中，4℃，24小时包被后，用含有0.05％Tween 20的0.05mol/L，pH值7.8的Tris-HCl缓冲溶液(缓冲溶液1)洗两次，再用0.05mol/L，pH值7.8的Tris-HCl缓冲溶液(缓冲溶液2)洗1次备用。
(b)AFP的时间分辨荧光免疫测定将稀释到一定浓度(稀释溶液为5％BSA-0.9％NaCl-0.1％NaN3的pH值7.8的0.05mol/L Tris-HCl缓冲溶液)的AFP标准溶液或血清样品45μl注入上述包被后的微孔板的各孔中，37℃，1小时反应后，用上述缓冲溶液1洗两次，缓冲溶液2洗一次，然后加入45μl纳米荧光微粒标记的抗AFP多抗溶液，37℃，1小时反应后，用缓冲溶液1洗4次，然后进行固相时间分辨荧光测定。测定用仪器为PerkinElmer Victor 1420型时间分辨荧光测定仪，测定条件为激发波长＝320nm，发射波长＝545nm，延迟时间＝0.2ms，测定时间＝0.4ms。
图5给出了上述测定的的反应原理，该方法采用的是荧光微粒标记抗体夹心型时间分辨荧光免疫测定法。
(3)人血清中AFP测定的工作曲线使用功能性纳米荧光微粒标记抗AFP多抗的时间分辨荧光免疫分析法测定人血清中AFP的工作曲线如图6所示。从图中可以看出，在AFP浓度范围为0.1-10ng/ml之间，工作曲线显示了很好的线性响应，线性方程式为log(signal)＝0.893log[AFP]+3.649，r＝0.999。方法的最低检测限为0.1ng/ml(计算方法dl＝(3SD×C)/(I-I0)，SD是本底信号的标准偏差，C是最低测定液浓度，I是其对应的荧光强度，I0是本底信号的荧光强度)，曲线的最高检测上限约为100ng/ml。
(4)方法的精密度和准确度为了考察AFP测定方法的精密度和准确度，选取三种不同浓度的AFP添加到三个不同的血清样品中(皆为健康人血清，用前在-20℃保存)，每个样品平行测定6次，测定结果如下表所示。由表中结果可以看出该法的相对标准偏差(CV％)小于9.0％，回收率在84.0-98.0％范围内，说明该法具有较高的精密度和准确度，可以满足样品测定中微量分析的要求。
权利要求
1.一种功能性纳米铽荧光探针，其特征在于其采用如下过程制备获得，将三价铽荧光配合物作为发光内核，采用铽荧光配合物与硅酸酯和氨基烃基单取代的硅酸酯在含有表面活性剂、助表面活性剂，有机溶剂以及水制成的油包水型微乳液中，用氨水引发聚合制备的内部包裹了铽荧光配合物的颗粒形状规则、大小均匀的纳米硅胶荧光微粒，其表面带有的氨基可直接用于生物分子的标记。
2.根据权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针，其特征在于所述油包水型微乳液中水∶TEOS∶Triton X-100∶正辛醇∶环己烷的质量比例为1～1.5∶0.1～0.3∶2～3.5∶1.5～3∶5～10。
3.根据权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针，其特征在于所述的三价铽荧光配合物是指三价铽离子(Tb3+)与具有N，N，N1，N1-[2，6-二(3’-氨甲基-1’-吡唑基)-吡啶]四乙酸骨架结构的配位体所形成的强荧光性配合物，有机配位体的结构式可表示如下 结构式中R＝H，C6H5，CnH2n+1，n＝1，2，3，4，5。
4.根据权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针，其特征在于所述的有机溶溶剂为苯、正己烷、环己烷、石油醚中的一种。
5.根据权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针，其特征在于其中所述的助表面活性剂为乙醇、丙醇、异丙醇、正己醇、乙二醇、正辛醇或正癸醇中的任何一种；表面活性剂为Triton X-100，Tween 20，Tween 40，Tween80中的一种。
6.根据权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针，其特征在于其中所述的硅酸酯的分子式为[Si(OR)4]，其中的R是-CnH2n+1，n＝1～5。
7.根据权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针，其特征在于其中所述的氨基烃基单取代的硅酸酯为氨丙基三乙氧基硅烷或[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷中的一种。
8.一种权利要求1所述的功能性纳米铽荧光微粒的生物标记方法，其特征在于首先使用桥联试剂将纳米荧光微粒与一种架桥蛋白质分子共价键合，然后再将表面健合了架桥蛋白质分子的纳米微粒用桥联试剂与生物活性分子共价键合；桥联试剂为二醛类化合物或三氯三氮唑，架桥蛋白质分子为各种血清白蛋白或卵白蛋白，生物活性分子为各种抗体，抗原，亲合素，链亲合素或核酸。
9.一种权利要求1所述的功能性纳米铽荧光探针在时间分辨荧光测定法中的应用。
10.根据权利要求9所述的功能性纳米铽荧光探针在时间分辨荧光测定法中的应用，其特征在于其中的时间分辨荧光测定法为时间分辨荧光免疫测定法，时间分辨荧光DNA杂交测定法，时间分辨荧光组织染色测定法，时间分辨荧光显微镜成象测定法，时间分辨荧光细胞测定法及时间分辨荧光生物芯片测定法。
全文摘要
本发明公开了一种以纳米硅胶为基质，内包铽荧光配合物并且在纳米硅胶表面带有活性氨基的具有强荧光性的功能性纳米铽荧光探针的制备方法及其在生物检测技术中的应用方法。它以三价铽的强荧光性配合物为发光中心，采用与硅酸酯与氨基烃基单取代的硅酸酯共聚成粒技术制备而成。所得纳米微粒除具有强的铽化合物特征性荧光外，其表面还带有可直接用于生物标记的活性氨基官能团，作为荧光探针用于时间分辨荧光测定时不受各种散乱光和短寿命荧光的干扰，在临床检测、医学、生命科学以及分析化学等领域有重要的应用价值。
文档编号G01N21/76GK1707246SQ20041002070
公开日2005年12月14日 申请日期2004年6月9日 优先权日2004年6月9日
发明者袁景利, 叶志强, 谭明乾, 王桂兰 申请人:中国科学院大连化学物理研究所
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