专利名称：曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法
技术领域：
本发明为一种液相色谱药物对映体分离方法。具体地讲，本发明叙述了一种曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法。
曲美布汀又名三甲丁酯，是消除痉孪的药物，目前以消旋体的方式被人们所使用。结构式如下图所示。此药对胃、肠、结肠痉孪有显著疗效。从曲美布汀的结构式可知，含有一个不对称碳原子，因而曲美布汀具有一对对映体，但是关于纯(R)和(S)对映体的生理活性、毒性、药理动力学还未见报道。
目前国外专利已经申请曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法(JP05,215,736)，手性柱为涂敷三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯手性柱(250×4.6mmI.D)，柱填料的担体为平均粒度10μm，比表面积20m2/g的大孔硅珠；洗脱液为0.1M的HClO4-NaClO4和CH3CN(80/20，V/V)。
本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法。
本发明的目的通过以下措施来实现本发明所用的手性填料担体为大孔硅胶，平均粒度6μm，平均孔径15nm，比表面积67.2m2/g，经硅烷化预处理，元素分析结果C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％。手性填料为涂敷型，涂敷的手性试剂为三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯，涂敷量是15％(质量)，涂敷时采用的溶剂为HCCl3，然后在湿的手性填料中加入正己烷，水浴温度下缓慢蒸除正己烷，这样能使三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯在硅胶担体表面分布均匀，具有色谱对映体分离能力。湿法装柱，采用四氯化碳-二氧六环(v/v)作悬浮液，正己烷作顶替液。
本发明所述的液相色谱分离在HP1090高效液相色谱仪上进行，所用洗脱液为正己烷/异丙醇(v/v)，流速为1.0mL/min，每次20μL进样量。正己烷/异丙醇(v/v)的体积比是98∶2～90∶10。
本发明所述的手性柱的制备和色谱分离是这样实现的本发明所用的大孔硅胶，平均粒度6μm，平均孔径15nm，比表面积67.2m2/g，经硅烷化预处理，元素分析结果C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％。
本发明所述的手性柱为涂敷型，涂敷的手性试剂为三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯，涂敷过程分三步进行。在硅烷化硅胶中加入三氯甲烷，电磁搅拌，在旋转蒸发仪上蒸除三氯甲烷。将三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯溶于三氯甲烷中，静置过夜。取此溶液加入上述硅烷化硅胶中，电磁搅拌，在旋转蒸发仪上蒸除三氯甲烷。重复上述过程一次。最后将余下的三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯溶液加到已经涂敷二次的硅烷化硅胶中，电磁搅拌。将此硅烷化硅胶加入正己烷中，电磁搅拌，水浴温度下缓慢蒸除正己烷，抽滤，用正己烷和异丙醇依次洗涤，抽干，制得的固定相真空干燥。湿法装柱，采用四氯化碳/二氧六环(v/v)作悬浮液，正己烷作顶替液。
本发明所述的液相色谱分离在HP1090高效液相色谱仪上进行，配有晶体管二级阵列检测器和数据处理工作站，全波长检测。
本发明曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法的特点如下1.使用涂敷三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯手性柱。色谱担体为大孔硅胶，平均粒度6μm，平均孔径15nm，比表面积67.2m2/g。经氨基丙基三乙氧基硅烷预处理后元素分析结果C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％，比表面积41-56m2/g.三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯的涂敷量15％(wt)。2.洗脱液为正己烷/异丙醇(v/v)。洗脱液中异丙醇含量在色谱分离对映体性能方面具有较大的影响，异丙醇含量增加，分离度逐渐降低。柱温对色谱分离对映体的分离度影响较大。随着温度的逐渐升高，对映体的保留时间和分离度逐渐降低。
实施例1.高效液相色谱手性柱的制备在5g硅烷化硅胶中加入20mL三氯甲烷，电磁搅拌15min，在旋转蒸发仪上蒸除三氯甲烷。将0.882g三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯溶于23mL三氯甲烷中，静置过夜。取此溶液8mL加入上述硅烷化硅胶中，电磁搅拌15min，在旋转蒸发仪上蒸除三氯甲烷重复上述过程一次。最后将7mL溶液加到已经涂敷二次的硅烷化硅胶中，电磁搅拌15min。将此硅烷化硅胶加入50mL正己烷中，电磁搅拌20min，水浴温度下缓慢蒸除正己烷，抽滤，用正己烷和异丙醇依次洗涤，抽干，制得的固定相在70℃，P2O5存在下真空干燥10h。湿法装柱(250mm×4.6mmI.D.)，采用1∶2四氯化碳/二氧六环(v/v)作悬浮液，正己烷作顶替液。
样品曲美布汀对映体溶在90∶10正己烷/异丙醇(v/v)中，洗脱液流速为1.0mL/min，每次20μL进样量。用洗脱液90∶10正己烷/异丙醇(v/v)平衡色谱柱30min。1.3.5-三叔丁基苯被用来测定死时间。
柱温在24.9，30.0，35.0，40.0和45℃时曲美布汀对映体的色谱分离结果如表1所示。从表1可见，随着柱温从24.9℃升高到45.0℃，对映体的容量因子和分离因子逐渐降低；分离度在24.9℃～30.0℃范围内变化不大；在30.0℃～45.0℃范围内降低；在柱温24.9℃时，分离度Rs＝1.02。因此，升高柱温不利于对映体的分离。
表1柱温变化时，曲美布汀对映体的容量因子、分离因子、分离度柱温(℃) 24.9 30.0 35.040.045.0k1′ 3.31 2.98 2.381.991.63k2′ 4.52 4.00 3.112.552.06α 1.37 1.35 1.311.281.26Rs1.02 1.01 1.020.990.91表中k1′，先洗脱对映体的容量因子；k2′，后洗脱对映体的容量因子；α、分离因子；Rs，分离度。
实施例2高效液相色谱手性柱的制备和死时间的测定如实施例1。样品曲美布汀对映体溶在洗脱液90∶10正己烷/异丙醇(v/v)中，洗脱液流速为1.0mL/min，每次20μL进样量。用洗脱液90∶10正己烷/异丙醇(v/v)平衡色谱柱30min。温度为室温。
改变洗脱液正己烷/异丙醇(v/v)中异丙醇含量，色谱分离曲美布汀对映体的容量因子、分离因子、分离度的结果如表2。从表2可见，随着洗脱液中异丙醇含量从4％增加到12％，曲美布汀对映体的容量因子逐渐降低，分离因子变化不大，分离度逐渐降低。因此，洗脱液中异丙醇含量在4％时，对映体的分离度最大，分别为Rs＝1.14和α＝1.41。表2洗脱液中异丙醇含量不同时时，曲美布汀对映体的容量因子、分离因子、分离度异丙醇(％)(v/v) 4 6 8 10 12k1′ 4.35 3.31 2.76 2.422.15k2′ 6.10 4.52 3.74 3.252.88α 1.41 1.37 1.35 1.351.34Rs1.14 1.02 0.89 0.860.80表中k1′，k2′，α，Rs，参见表1。
权利要求
1.一种曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法，其特征在于涂敷15％(质量)三(4-甲基苯甲酸)纤维素酯于大孔硅胶担体上，制备手性填料，湿法装填液相色谱柱，直接分离曲美布汀对映体；洗脱液为正己烷/异丙醇(v/v)；其中大孔硅胶平均粒度6μm，平均孔径15nm，比表面积67.2m2/g，经氨基丙基三乙氧基硅烷预处理后元素分析C1.56％-2.30％，H0.28％-0.42％，N0.21％-0.39％。
2.如权利要求1所述的色谱药物对映体分离方法，其特征在于洗脱液为正己烷/异丙醇的体积比是98∶2～90∶10。
全文摘要
本发明公开了一种曲美布汀药物对映体的液相色谱分离方法。涂敷15%(质量)三(4－甲基苯甲酸)纤维素酯于大孔硅胶担体上,制备手性填料,湿法装填液相色谱柱,直接分离曲美布汀对映体。洗脱液为正己烷/异丙醇(v/v)。该方法使用的色谱担体价格较低,洗脱液为有机溶剂,在制备曲美布汀药物对映体时较易除去。
文档编号G01N30/02GK1258003SQ9912658
公开日2000年6月28日 申请日期1999年12月18日 优先权日1999年12月18日
发明者王来来, 吕士杰, 李树本 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所
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