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专利名称：依达拉奉杂质苯肼的检测方法
技术领域：
本发明属于药物分析领域，具体涉及依达拉奉杂质苯肼的检测方法。
背景技术：
依达拉春是一种脑保护剂(自由基清除剂)。化学命名为3_甲基-1-苯基_2_批 唑啉-5-酮；分子式为=CiciHltlN2tj ;化学结构式如下
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J I
O入,N 6。临床研究提示N-こ酰门冬氨酸(NAA)是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初期含量急剧減少。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的減少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。机理研究提示，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。苯肼是依达拉奉合成过程中的中间体，有強烈的溶血作用，其分子式为C6H8N2,化
NHNH2
学结构式为
。现有报道中，国家食品药品监瞀管理局标准(试行)YBH09952003采用高效液相色谱法进行苯肼检查；依达拉奉原料质量标准(YBH01592008)采用气相色谱法进行苯肼检查。但是这两种方法分别存在不同的缺陷，限制了苯肼測定的准确性、安全性、易操作性等。发明人在进行依达拉奉有关物质检查方法的研究过程中发现，苯肼有很强的紫外吸收，为了更快速、精确检测依达拉奉中的杂质苯肼，发明人提供了ー种新的检测方法，以实现简便、快速、精确控制产品质量的目的。

发明内容
本发明所解决的技术问题是提供ー种操作简便，迅速、精确的检测方法，用于检测依达拉奉中的杂质苯肼。本发明苯肼的检测方法采用液相色谱检測，HPLC检测条件如下固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相醋酸盐缓冲液-甲醇体积百分比70%_90% 10%-30% ;或醋酸盐缓冲液-こ腈体积百分比70%-90% 10%-30% ;其中，醋酸盐缓冲液浓度为0. 04-0. 06mol/L,pH值为 6. 4-6. 8 ； 优选醋酸盐缓冲液-甲醇(或こ腈)体积百分比70-80% 20-30% ；进ー步优选以醋酸盐缓冲液为醋酸铵溶液；最优条件为以0.05mol/L醋酸铵溶液-甲醇或こ腈(75%:25%)为流动相；醋酸铵溶液用醋酸或氨试液调节PH值至6. 6 ;流速0.6-1. 2ml/min ;优选 I. Oml/min ；柱温10-35°C ;优选 25 °C ；检测波长226 238nm ;优选 232nm ；理论板数按苯肼峰计算应不低于2000 ；(I)对照品溶液制备临用新配。精密称取苯肼对照品适量，加甲醇制成每Iml中约含0. 5 5 ii g苯肼的溶液，作为对照品溶液。(2)供试品溶液制备临用新配。取本品适量,加甲醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含依达拉奉5 50mg的溶液，作为供试品溶液。检测前，按照HPLC检测条件，精密量取对照溶液20 U I注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的20%。该检测方法的优点是操作简便；測定结果准确可靠；专属性更强；主峰保留时间在9分钟左右，检测时间较短；盐酸苯肼在谱图中峰形尖鋭、对称、理论塔板数非常高，与依达拉奉及其他杂质之间完全分离。


图I苯肼流动相选择图。
权利要求
1.依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于苯肼采用液相色谱检測，HPLC检测条件如下 固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相醋酸盐缓冲液-甲醇体积百分比70%-90% 10%-30% ;或醋酸盐缓冲液-乙腈体积百分比70%-90% 10%-30% ;其中，醋酸盐缓冲液浓度为0. 04-0. 06mol/L, pH值为6. 4-6. 8 ； 检测波长:226 238nm ；流速0. 6-1. 2ml/min ；柱温:10-35 0C ； 理论板数按苯肼峰计算应不低于2000 ； 实验材料的处通 (1)供试品溶液的制备取依达拉奉适量,加甲醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含依达拉奉5 50mg的溶液，作为供试品溶液； (2)对照品溶液的制备精密称取苯肼对照品适量加甲醇制成每Iml中约含0.5 5ug的溶液，作为对照溶液。
2.根据权利要求I所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于HPLC检测条件流动相中醋酸盐缓冲液-甲醇体积百分比70-80% 20-30%;或醋酸盐缓冲液-こ腈体积百分比:70-80% 20-30%o
3.根据权利要求I所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于HPLC检测条件流动相中醋酸盐缓冲液-甲醇体积百分比75% 25%;或醋酸盐缓冲液-こ腈体积百分比75% 25%。
4.根据权利要求I所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法,其特征在于HPLC检测条件流动相中所述的醋酸盐缓冲液PH值为6. 6。
5.根据权利要求I所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于HPLC检测条件流动相中所述的醋酸盐缓冲液浓度为0. 05mol/L。
6.根据权利要求I所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于HPLC检测条件中所述的流速为I. Oml/min ;柱温为25°C。
7.根据权利要求I所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于对照品溶液与供试品溶液的制备中加甲醇，供试品溶液浓度为对照品溶液浓度的10000倍。
8.根据权利要求1-6任一项所述的依达拉奉杂质苯肼的检测方法，其特征在于HPLC检测条件流动相所述的醋酸盐缓冲液为醋酸铵溶液。
全文摘要
本发明属于药物分析领域，具体涉及依达拉奉杂质苯肼的检测方法。本发明为了提供一种操作简便，迅速、精确的方法用于检测苯肼，具体是采用液相色谱检测，控制关键HPLC检测条件流动相醋酸盐缓冲液-甲醇体积百分比70%-90%︰10%-30%；或醋酸盐缓冲液-乙腈体积百分比70%-90%︰10%-30%；其中，醋酸盐缓冲液浓度为0.04-0.06mol/L，pH值为6.4-6.8；检测波长226～238nm；流速0.6-1.2ml/min；柱温10-35℃。通过控制关键检测参数实现简便，迅速、精确检测的目的。本发明方法操作简便，测定结果准确可靠，专属性更强，主峰保留时间在9分钟，检测时间较短；为检测杂质、控制产品质量提供了一种全新的选择。
文档编号G01N30/06GK102841170SQ20121031901
公开日2012年12月26日 申请日期2012年8月31日 优先权日2012年8月31日
发明者孙毅, 田阿娟, 陈明霞 申请人:成都百�？萍贾埔┯邢薰�司