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专利名称：检测肝炎病毒免疫球蛋白m抗体的免疫胶体金试剂及方法
技术领域：
本发明属于采用免疫测定法检测肝炎所用的试剂及方法技术领域。
目前在临床上用于检测肝炎病毒免疫球蛋白M类抗体所用的一种检测仪器为γ计数仪，采用放射免疫测定法来检测，该仪器所用的放射性同位素很容易污染环境，不利于操作人员的身体健康，而且这种仪器价格昂贵、操作复杂，不利于广泛推广使用。另外一种检测仪器为酶联检测仪，采用酶联免疫吸附试验法来检测，该仪器同样价格昂贵、而且采用活性较好的酶进行标记，实验流程较长，做一次检测需要2～24小时，操作复杂。上述两种检测仪器及检测方法仅能在科研单位和较大型医院使用，很难得到广泛推广使用。
本发明的目的在于克服上述两种测试仪器及检测方法的缺点，提供一种不需要测试仪器、简单、快速、敏感性高、重复性好、操作简单，能准确快速地检测肝炎病毒免疫球蛋白M类抗体所用的检测试剂以及方法。
为达到上述目的，本发明采用的解决方案是以下述配比的组分为原料制成的检测试剂氯金酸0.01～1g抗人免疫球蛋白M 0.004～0.1g蒸馏水加至1000ml应用上述试剂检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的方法按以下次序的几个步骤进行将甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗原分区滴在硝酸纤维或醋酸纤维或醋酸纤维与硝酸纤维混合物的微孔滤膜上，干燥后加血清1～15μl；经渗滤，加本发明检测试剂3～20μl；渗滤后，加磷酸钾盐或磷酸钠盐或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液50～500μl，单项阳性者出现单个红色斑点，多项阳性者出现多个红色斑点，无色者为阴性。
采用本发明试剂及方法可在3至5分钟内同时检测出甲型肝炎病毒免疫球蛋白M抗体、乙型肝炎病毒免疫球蛋白M核心抗体、丙型肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的结果，也可在3至5分钟内检测出上述三项中任意一项或任意两项的结果，所用的检测样本量比酶联检测仪少10～100倍，而检测结果与酶联检测仪相当。本发明与γ记数仪、与酶联检测仪，以及检测方法相比，具有操作简便、快速、特异敏感、重复性好、经济等优点，可在大小医疗单位广泛推广使用。
发明人给出了本发明第一个实施例(以生产本发明产品1000ml为例)所用的原料及其配比为氯金酸0.5g抗人免疫球蛋白M 0.05g蒸馏水 加至1000ml其制备工艺如下1、原材料预处理对已购买的氯金酸和抗人免疫球蛋白M的质量进行检测，其中的有效成份含量均应符合规定的范围，按配比称取各原料。
蒸馏水中应无杂质，用蒸馏水器将蒸馏水重新蒸馏一次，或用离子交换树脂制成去离子水。
将氯金酸溶解于蒸馏水中，配制成0.05％的氯金酸水溶液，抗人免疫球蛋白M用蒸馏水配制成0.005g/ml的水溶液。
2、氯金酸胶体金溶液的制备采用柠檬酸三钠还原法制备氯金酸胶体金溶液。取0.01％的氯金酸水溶液100ml，加温至沸腾，加入4ml 1％的柠檬酸三钠水溶液，用搅拌器充分搅拌至均匀混合，加温煮沸，制成氯金酸胶体金溶液。
3、成品制作将已配制好的抗人免疫球蛋白M水溶液倒入已制备的氯金酸胶体金溶液，用搅拌器充分搅拌至均匀混合，倒入低速离心机，经低速离心机旋转分离后，取上清液，再倒入高速离心机，经高速离心机旋转分离后，去除上清液，取沉淀物，加入1％的小牛血清白蛋白1～5g，加蒸馏水至1000ml，制成本发明试剂，经质量检查合格后，放入冰箱保存备用。
发明人给出了本发明第二个实施例(以生产本发明产品1000ml为例)所用的原料及其配比为氯金酸 0.015g抗人免疫球蛋白M0.005g蒸馏水 加至1000ml其制备工艺与第一个实施例完全相同。
发明人给出了本发明第三个实施例(以生产本发明产品1000ml为例)所用的原料及其配比为氯金酸 0.8g抗人免疫球蛋白M 0.09g蒸馏水 加至1000ml其制备工艺与第一个实施例完全相同。
发明人给出了采用本发明试剂检测病毒性肝炎免疫球蛋白M抗体的方法的一个实施例如下将甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗原分区滴在硝酸纤维素膜上，干燥后加血清8μl，经渗滤，加本发明第一个实施例检测试剂10μl，渗滤后，加磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液200μl，单项阳性者出现单个红色斑点，多项阳性者出现多个红色斑点，无色者为阴性。
发明人采用本发明第一个实施例制备的检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的免疫胶体金试剂，采用本发明检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的方法的一个实施例与用酶联检测仪采用酶联免疫吸附试验法对肝炎病毒免疫球蛋白M抗体、进行了对比检测血清标本156份，测试结果如下用酶联检测仪采用酶联免疫吸附试验法测得抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M阳性32份、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M阳性15份、抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白M阳性7份，抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M双阳性4份，抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M和抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白M三阳性2份。用本发明检测试剂以及采用本发明检测方法，除抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M阳性31份、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M阳性16份外，其余结果均与酶联检测仪采用酶联免疫吸附试验法测得的结果相符。采用两种检测手段和两种检测方法的总符合率为99.6％，若以酶联免疫吸附试验法为标准，本发明检测方法的检测灵敏度为98％、特异度为99％。随机抽取28份阳性标本经2-巯基乙醇溶液做破坏性试验后，再用本发明检测方法试验全转为阴性；将这28份阳性标本用本发明检测方法重复试验4次，试验结果完全相符。
本发明检测试剂以及检测方法还可用于检测其它的病原微生物特异性免疫球蛋白M(IgM)。
权利要求
1.一种检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的免疫胶体金试剂，其特征在于它是以下述配比的组分为原料制成的检测试剂氯金酸 0.01～1g抗人免疫球蛋白M0.004～0.1g蒸馏水 加至1000ml
2.一种应用权利要求1所述的试剂检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的方法，其特征在于它按以下次序的几个步骤进行将甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗原分区滴在硝酸纤维或醋酸纤维或醋酸纤维与硝酸纤维混合物的微孔滤膜上，干燥后加血清1～15μl；经渗滤，加本发明检测试剂3～20μl；渗滤后，加磷酸钾盐或磷酸钠盐或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液50～500μl，单项阳性者出现单个红色斑点，多项阳性者出现多个红色斑点，无色者为阴性。
全文摘要
一种检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的免疫胶体金试剂，在1000ml试剂中含氯金酸0.01～1g，含抗人免疫球蛋白M 0.004～0.1g，用本试剂检测肝炎病毒免疫球蛋白M抗体的方法为将肝炎病毒抗原分区滴在硝酸纤维或醋酸纤维的微孔滤膜上，干燥后加血清，经渗滤，加本发明检测试剂，渗滤后加磷酸钾盐或磷酸钠盐或三羟甲基氨基甲烷——盐酸，出现红色斑点者为阳性，无色者为阴性，可同时检测多型肝炎病毒特异性免疫球蛋白M抗体。
文档编号G01N33/576GK1140259SQ9511360
公开日1997年1月15日 申请日期1995年7月5日 优先权日1995年7月5日
发明者肖乐义, 阎小君, 陈远鑫, 李陕区 申请人:中国人民解放军第四军医大学