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专利名称：牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试剂盒。
背景技术：
免疫球蛋白IgG作为牛初乳中一种非常重要的免疫因子，其含量与其它生 物活性物质含量具有一定的正相关性，其含量的多少是衡量牛初乳及其产品优 劣的一个重要指标。免疫球蛋白IgG也是免疫乳及其制品的主要功能成分，其 含量是免疫乳及其制品质量好坏的最重要标准。对牛乳免疫球蛋白IgG的检测 还可以评估常乳中是否掺有牛初乳以及判断牛乳是否掺假。因而，牛乳免疫球 蛋白IgG的检测对于乳制品的质量控制有着非常重要的意义。
为了保证初乳、免疫乳以及常乳制品的质量，我们往往需要在产品质量控 制的各个环节加强对乳样中免疫球蛋白水平的准确检测。比较上述不同的牛乳 免疫球蛋白IgG检测方法，可以发现常规的免疫检测方法如免疫单向扩散、免 疫双向扩散以及火箭免疫电泳，这些方法都具有操作简便、设备要求低的优点， 但存在着检测时间长、精确性差的缺点。胶体金免疫层析技术虽然可以快速检 测，但只局限于定性或半定量检测，无法达到精确检测的目的。而高效液相和 毛细管电泳虽然能够快速、精确检测，但对设备和操作人员的要求极高，不适 合常规工厂和普通试验室分析，普及较为困难。

实用新型内容
本实用新型的目的是为解决现有牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG含量的检 测时间长、精确性差的问题，提供一种牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检 测试剂盒。
本实用新型由第一试剂瓶、第二试剂瓶、第三试剂瓶、第四试剂瓶、第五 试剂瓶、第六试剂瓶、第七试剂瓶、第八试剂瓶、盒体、固定板和酶标包组成， 固定板设置在盒体内，固定板上设有第一瓶孔、第二瓶孔、第三瓶孔、第四瓶 孔、第五瓶孔、第六瓶孔、第七瓶孔和第八瓶孔，第一试剂瓶设置在第一瓶孔 内，第二试剂瓶设置在第二瓶孔内，第三试剂瓶设置在第三瓶孔内，第四试剂瓶设置在第四瓶孔内，第五试剂瓶设置在第五瓶孔内，第六试剂瓶设置在第六 瓶孔内，第七试剂瓶设置在第七瓶孔内，第八试剂瓶设置在第一瓶孔内，酶标 包放置在盒体的底部与固定板之间。
本实用新型的优点是 一、本实用新型的试剂用不同大小、不同颜色的塑 料瓶盛装并固定在塑料泡沫模具中与酶标包一同封装在盒内，以便于携带和运 输，本试剂盒具有精确性高、检测时间短、检测成本低、特异性强，结果容易 观察等特点。二、本实用新型简化了实验操作中的很多繁杂步骤，能节约实验 者的时间，较好地满足实验操作的简单化和提高实验结果的准确性。三、本实 用新型的有益效果是能快速、简便、灵敏、准确地用于牛乳及其制品中免疫球 蛋白G含量的检测。


图1是本实用新型的整体结构示意图，图2是酶标包11的结构示意图，图
3是框支撑架11-1的结构示意图，图4是微孔条ll-2的结构示意图，图5是盖 板ll-3的结构示意图，图6是盖板膜ll-4的结构示意图。
具体实施方式

具体实施方式
一结合图l说明本实施方式，本实施方式由第一试剂瓶l、 第二试剂瓶2、第三试剂瓶3、第四试剂瓶4、第五试剂瓶5、第六试剂瓶6、第 七试剂瓶7、第八试剂瓶8、盒体9、固定板10和酶标包11组成，固定板10 设置在盒体9内，固定板10上设有第一瓶孔10-1、第二瓶孔10-2、第三瓶孔 10-3、第四瓶孔10-4、第五瓶孔10-5、第六瓶孔10-6、第七瓶孔10-7和第八瓶 孔10-8，第一试剂瓶1设置在第一瓶孔10-1内，第二试剂瓶2设置在第二瓶孔 10-2内，第三试剂瓶3设置在第三瓶孔10-3内，第四试剂瓶4设置在第四瓶孔 10-4内，第五试剂瓶5设置在第五瓶孔10-5内，第六^;剂瓶6设置在第六瓶孔 10-6内，第七试剂瓶7设置在第七瓶孔10-7内，第八试剂瓶8设置在第一瓶孔 10-8内，酶标包11放置在盒体9的底部与固定板10之间。每个试剂瓶上有说 明标签，试剂瓶内密封包装着固定重量配比和准确称量的试剂，第一试剂瓶1 为棕色塑料瓶，瓶内封闭装有按固定重量准确称量的免疫球蛋白IgG标准品， 其净重为IO吗，用于标准曲线的绘制，此为试剂I， 4。C保存；第二试剂瓶2 为棕色塑料瓶，瓶内封闭装有按固定重量和配比配成的辣根过氧化物酶标记物，体积为1.0mL，此为试剂II， 4'C保存；第三试剂瓶3为白色塑料瓶，瓶内封闭 装有按固定重量和配比配成的稀释液，体积为60mL，此为试剂III， 4'C保存； 第四试剂瓶4为白色塑料瓶，瓶内封闭装有按固定重量和配比配成的洗涤液， 体积为60mL，此为试剂IV， 4"C保存；第五试剂瓶5为白色塑料瓶，瓶内封闭 装有按固定重量和配比配成的显色剂A液，体积为20mL，此为试剂V， 4"C保 存；第六试剂瓶6为棕色塑料瓶，瓶内封闭装有按固定重量和配比配成的显色 剂B液，体积为2mL,此为试剂VI， 4-C保存；第七试剂瓶7为白色塑料瓶，瓶 内封闭装有按固定重量和配比配成的显色剂C液，体积为2mL，此为试剂W，4°C 保存；第八试剂瓶8为白色塑料瓶，瓶内封闭装有按固定重量和配比配成的终 止液，终止液的体积为20mL,此为试剂VI， 4。C保存；试剂I为固体，试剂II-V11I为液体。
具体实施方式
二结合图2 图6说明本实施方式，本实施方式的酶标包ll 由外框支撑架11-1、微孔条11-2、盖板11-3、盖板膜11-4组成，外框支撑架11-1 上面横向和纵向有规则的设有支撑孔11-1-1，微孔条11-2上设有反应微孔 11-2-1，微孔条11-2设置在支撑孔11-1-1内，盖板11-3设置在微孔条11-2的上 面，盖板膜11-4真空包装在外框支撑架11-1、微孔条11-2和盖板11-3的组件 外表面上。微孔条ll-2可随要求拆卸，每个反应微孔11-2-1内预包被免疫球蛋 白G偶联抗体；盖板11-3用于置水浴或恒温箱内反应时封盖微孔条11-2;盖板 膜11-4真空密封包装在外框支撑架11-1、盖板11-2和酶标反应微孔条11-3的 组件外表面上；盖板膜11-4为铝箔膜。利用反应微孔11-2-1作为固相载体，在 试剂盒微孔条11-2上预包被免疫球蛋白G偶联抗体制成的检测板，结合8个试 剂进行牛乳免疫球蛋白IgG的快速、大量样品的检测分析。
具体实施方式
三结合图3说明本实施方式，本实施方式的外框支撑架11-1 上面一侧方向上设有七至十个支撑孔11-1-1，另一侧方向上设有十至十五个支 撑孔11-1-1,微孔条11-2上设有七至十个反应微孔11-2-1。外框支撑架ll-l上 共有七十至一百五十个支撑孔11-1-1，这个数量范围内的支撑孔11-1-1才能进 行一次连续多个样品的检测。
具体实施方式
四结合图3说明本实施方式，本实施方式的外框支撑架11-1 上面一侧方向上设有八个支撑孔11-1-1，另一侧方向上设有十二个支撑孔11-1-1,微孔条11-2上设有八个反应微孔11-2-1。外框支撑架11-1上共有九十 六个支撑孔11-1-1，每个试剂盒中的试剂足够进行96次测定，即可进行一次连 续多个样品的检测。
具体实施方式
五结合图1说明本实施方式，本实施方式的盒体9的材质 为硬纸或薄塑料板。这种材质具有重量轻、携带方便的特点。
具体实施方式
六结合图1说明本实施方式，本实施方式的固定板10的材
质为硬纸或塑料泡沫板。这种材质具有重量轻、携带方便的特点。
本实用新型的使用方法
一、 试剂的配制
1、 从试剂盒中取出试剂I ，用试剂ni稀释至10mL (即1000ng/mL)，分装 后置-20'C条件下保存。临用时，再用稀释液试剂m配制成浓度分别为Ong/mL， 100ng/mL， 125 ng/mL， 250 ng/mL， 500 ng/mL、 750 ng/mL， 1000ng/mL的免 疫球蛋白IgG标准液。
2、 从试剂盒中取出试剂ii，使用前，取试验所需用量，用试剂in将其稀释
到100倍。
3、 临用前，从试剂盒中取出试剂v、试剂vi和试剂vn，按照试剂v:试剂
VI:试剂W的比例为10: 0.5: 0.032，将三者进行混合，现用现配，此溶液为底
物显色剂。
二、 检测步骤
1、待检样品的处理
(l)液态乳样取液态牛乳试样进行离心30分钟，去上层脂肪，然后量取
lOmL脱脂牛乳试样，用双蒸水稀释至1000mL，混匀后再从稀释后的溶液中量 取10mL样品溶液，再用双蒸水稀释至1000mL，混匀后从再次稀释后的溶液中 量取100mL祥品溶液，用稀释液稀释至lmL，最终混匀后备用。
(2)固态乳样:将各种类型的固态牛乳样粉碎后，称取O.lg(精确至O.OOlg) 试样，用双蒸水稀释至100mL，混匀后再从稀释后的溶液中量取10mL样品溶 液，再用双蒸水稀释至1000mL，混匀后从再次稀释后的溶液中量取lOOpL样 品溶液，用稀释液稀释至lmL，最终混匀后备用(待测乳样不含脂肪成分)；如 果待测乳样含有脂肪成分，需采用同液态牛初乳样相同的离心条件进行去除脂 肪，接着操作同(1)。上面所列的待测样品稀释倍数仅供参考，部分待测样品中IgG的含量可能 过高或过低，应根据实际情况加以调整。
2、 取预包被好的酶标板，以其中一个反应微孔11-2-1不加任何溶液作为空 白对照孔，以另一个反应微孔11-2-1加入100ML试剂m作为阴性对照孔。将浓 度为100ng/mL、 125ng/mL、 250ng/mL、 500ng/mL、 750ng/mL、 1000ng/mL的 免疫球蛋白IgG标准系列试剂I ，以每孔100juL加入各反应微孔11-2-1中。将 处理好的样品溶液以每孔lOO^L依次加入其余各反应微孔11-2-1中，用盖板盖 后，置37"C水浴或恒温箱反应1小时后取出，用试剂IV洗涤5次。
3、 以每孔10(HiL向各反应微孔11-2-1中添加稀释好的试剂II，空白对照 孔不加试剂II，用盖板盖后，置37'C水浴或恒温箱反应1小时后取出，用试剂 IV洗涤5次。
4、 以每孔lOO^L向各反应微孔11-2-1中添加底物显色剂，置37'C水浴或 恒温箱反应10分钟。
5、 以每孔50nL向各反应微孔11-2-1中添加试剂週，终止反应。
6、 酶标仪检测，以空白对照孔校领，450nm波长检测。
7、 以免疫球蛋白IgG标准品浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准 曲线，得出线性方程。
8、 待测样品中免疫球蛋白IgG含量的计算，根据所得的线性方程，计算出 样品溶液中免疫球蛋白IgG的含量，然后用样品溶液中免疫球蛋白IgG的含量 乘以样品稀释的倍数，最终得出待测样品中免疫球蛋白IgG的含量。
权利要求1、一种牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒，它由第一试剂瓶(1)、第二试剂瓶(2)、第三试剂瓶(3)、第四试剂瓶(4)、第五试剂瓶(5)、第六试剂瓶(6)、第七试剂瓶(7)、第八试剂瓶(8)、盒体(9)、固定板(10)和酶标包(11)组成，其特征在于固定板(10)设置在盒体(9)内，固定板(10)上设有第一瓶孔(10-1)、第二瓶孔(10-2)、第三瓶孔(10-3)、第四瓶孔(10-4)、第五瓶孔(10-5)、第六瓶孔(10-6)、第七瓶孔(10-7)和第八瓶孔(10-8)，第一试剂瓶(1)设置在第一瓶孔(10-1)内，第二试剂瓶(2)设置在第二瓶孔(10-2)内，第三试剂瓶(3)设置在第三瓶孔(10-3)内，第四试剂瓶(4)设置在第四瓶孔(10-4)内，第五试剂瓶(5)设置在第五瓶孔(10-5)内，第六试剂瓶(6)设置在第六瓶孔(10-6)内，第七试剂瓶(7)设置在第七瓶孔(10-7)内，第八试剂瓶(8)设置在第一瓶孔(10-8)内，酶标包(11)放置在盒体(9)的底部与固定板(10)之间。
2、 根据权利要求1所述的牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒， 其特征在于酶标包(11)由外框支撑架(11-1)、微孔条(11-2)、盖板(11-3)、 盖板膜(11-4)组成，外框支撑架(11-1)上面横向和纵向有规则的设有支撑孔(11-1-1)，微孔条(11-2)上设有反应微孔(11-2-1)，微孔条(11-2)设置在支 撑孔(11-1-1)内，盖板(11-3)设置在微孔条(11-2)的上面，盖板膜(11-4) 真空包装在外框支撑架(U-l)、微孔条(11-2)和盖板(11-3)的组件外表面 上。
3、 根据权利要求2所述的牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒， 其特征在于外框支撑架(11-1)上面一侧方向上设有七至十个支撑孔(11-1-1)， 另一侧方向上设有十至十五个支撑孔(11-1-1)。
4、 根据权利要求3所述的牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒， 其特征在于微孔条(11-2)上设有七至十个反应微孔(11-2-1)。
5、 根据权利要求3所述的牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒， 其特征在于外框支撑架(11-1)上面一侧方向上设有八个支撑孔(11-1-1)， 另一侧方向上设有十二个支撑孔(11-1-1)。
6、 根据权利要求4所述的牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒， 其特征在于微孔条(11-2)上设有八个反应微孔(11-2-1)。
专利摘要牛乳免疫球蛋白IgG的酶联免疫定量检测试剂盒，它涉及一种检测试剂盒。本实用新型为解决现有牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG含量的检测时间长、精确性差的问题。本实用新型固定板设在盒体内，第一试剂瓶设在第一瓶孔内，第二试剂瓶设在第二瓶孔内，第三试剂瓶设在第三瓶孔内，第四试剂瓶设在第四瓶孔内，第五试剂瓶设在第五瓶孔内，第六试剂瓶设在第六瓶孔内，第七试剂瓶设在第七瓶孔内，第八试剂瓶设在第一瓶孔内，酶标包放在盒体的底部与固定板之间。本实用新型的试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶盛装并固定在塑料泡沫模具中与酶标包一同封装在盒内，本试剂盒具有精确性高、检测时间短、检测成本低、特异性强，结果容易观察等特点。
文档编号G01N33/543GK201247245SQ20082009076
公开日2009年5月27日 申请日期2008年8月29日 优先权日2008年8月29日
发明者姜瞻梅, 鹏 杜, 波 田 申请人:东北农业大学