专利名称：活体内成分的测定方法，用于活体内成分测定的数据处理方法，活体内成分测定装置及收 ...的制作方法
活体内成分的测定方法，用于活体 内成分测定的数据处理 方法，活体内成分测定装置及收集部件
技术领域：
本发明涉及活体内成分的测定方法，用于活体内成分测定的数据处理方法，活体 内成分测定装置及收集部件。
背景技术：
特开2004-195218号公报中公开了具备适用于口腔粘膜侧和皮肤侧的一对电极 结构体，以及设置于口腔粘膜适用侧的电极结构体的提取用盘的离子渗入装置。此离子渗 入装置通过在被一对电极结构体所夹的部位负荷电能指定时间(30秒 20分钟)，通过所 谓的离子渗入作用，以可从口腔粘膜向提取用盘提取葡萄糖的方式构成。提取用盘中提取 的葡萄糖可由检测器定量。由此离子渗入装置，通过将电能负荷于活体，可以比如30秒 20分钟的短时间测定体内的葡萄糖量。通过空腹时或餐后(糖负荷后)测定血中葡萄糖(血糖)，可给糖尿病的诊断提供 有效的信息。例如空腹时的血糖值在受试者的糖尿病的诊断中用到。糖负荷后的血糖值成 为用于知高血糖状态在糖负荷后以何程度持续的指标，在筛选糖负荷后的血糖值的降低缓 慢的，所谓的隐性糖尿病中有用。但是，特开2004-195218号公报中对于掌握高血糖状态的持续的程度无任何记载。现有技术文献专利文献专利文献1 特开2004-195218号公报发明概述本发明旨在解决如上所述的课题，本发明的1个目的是提供使掌握活体内测定 对象成分的高浓度状态的持续的程度成为可能的活体内成分的测定方法及活体内成分测 定装置，活体内成分测定装置中用到的收集部件，用于活体内成分测定的数据处理方法。为了达成上述目的，本发明的第1方面的活体内成分的测定方法取得从进行了促 进组织液提取处理的活体提取60分钟以上的组织液中的关于测定对象成分的量的值。此第1方面的活体内成分的测定方法中，如上所述，通过促进从活体的组织液的 提�。墒勾踊钐逄崛∽橹喝菀�。另外，通过从活体经比如60分钟以上的充分的时间而 提取组织液，取得提取的组织液中的测定对象成分的量，可在提取时间内取得与循环活体 内的测定对象成分的总量相关的量。由于在提取时间内循环活体内的测定对象成分的总量 与将该时间内活体内的测定对象成分的浓度积分者相关，可基于取得的量，掌握活体内测 定对象成分以何程度持续高浓度状态。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，促进从活体的组织液提取处 理通过在活体的皮肤形成微细孔来进行，组织液的提取经形成微细孔的皮肤而进行。如此 构成则经皮肤中微细孔形成的部位而组织液变得容易提取。
上述第1方面的 活体内成分的测定方法中，优选为，从活体的组织液的提取通过 在包括渗透压比纯水高的高渗透压水溶液的提取介质中提取组织液来进行。如此构成，则 由于由渗透压比纯水高的高渗透压水溶液的渗透压而组织液的向提取介质的移动被促进， 与用包括纯水的提取介质的情况相比，可促进组织液的向提取介质的移动。由此，由于可使 单位时间内提取的测定对象成分的量增加，与测定对象成分的量少的情况相比，可减少测 定误差。此情况中，优选为，高渗透压水溶液在组织液中包括连同测定对象成分含有的测 定对象成分以外的辅助成分。如此构成则可不改变测定对象成分的量地，使用辅助成分而 得到有比纯水高的渗透压的高渗透压水溶液。通过使用这样的高渗透压水溶液，可不改变 测定对象成分的测定结果地促进组织液的向提取介质的移动。上述高渗透压水溶液包括辅助成分的构成中，优选为，辅助成分是选自氯化钾，甘 氨酸，及尿素的至少1种。如此构成则使用组织液中微量含有的氯化钾，甘氨酸，及尿素的 至少任何一种而可得到渗透压比纯水高的高渗透压水溶液。由此，可容易得到有比组织液 中的辅助成分的浓度高的浓度(渗透压)的高渗透压水溶液。此情况中，优选为，高渗透压水溶液中的辅助成分的浓度是0. 2mmol/L以上。如此 构成则组织液中微量含有的同时，相比组织液中的含有量的个体差异小的氯化钾，甘氨酸 及尿素的浓度，可使包括氯化钾，甘氨酸及尿素的至少任何的高渗透压水溶液的浓度(渗 透压)成为高浓度。由此，对于组织液中的辅助成分的浓度(渗透压)的高渗透压水溶液 的辅助成分的浓度(渗透压)升高导致，可进一步促进组织液的向提取介质的移动。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，提取组织液的时间是120分钟 以上。如此构成则相比将组织液以60分钟以上、不足120分钟的时间提取的情况，将活体 内生成的测定对象成分的循环的样式经更充分的时间而反映的量的测定对象成分蓄积。因 此，基于得到的关于测定对象成分的量的值，可推定更长时间内活体内生成的测定对象成 分的循环的样式。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，提取组织液的时间是180分钟 以上。如此构成则与将组织液以60分钟以上、且不足180分钟的时间提取的情况相比，将 活体内生成的测定对象成分的循环的样式经更充分的时间而反映的量的测定对象成分蓄 积。因此，基于得到的关于测定对象成分的量的值，可推定更长时间内活体内生成的测定对 象成分的循环的样式。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，测定对象成分是葡萄糖。如此 构成则可测定反映在提取时间内循环活体内的葡萄糖的总量的值，可掌握受试者的高血糖 状态以何程度持续。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，再基于关于测定对象成分的 量的值，取得与活体内测定对象成分浓度的组织液的提取时间对应的累加值。如此构成则， 由于此累加值是将提取时间内活体内的测定对象成分的浓度积分者，基于此累加值，可掌 握活体内测定对象成分以何程度持续高浓度状态。取得上述累加值的构成中，优选为，累加值基于关于测定对象成分的量的值和提 取的组织液中含的电解质的量取得。如此构成则基于活体富含的电解质的检测值，可推定 组织液的提取容易度。即，提取的组织液中的测定对象成分和电解质由于根据皮肤的状态等(提取容易度)一同变动，提 的组织液中含的电解质的量多，则皮肤的状态被认为是提 取组织液容易的状态，提取的电解质的量少，则皮肤的状态被认为是难以提取组织液的状 态。因此，通过基于测定对象成分的检测值和电解质的检测值取得关于测定对象成分的量 的值，组织液的提取容易度加大，可取得在提取时间内循环活体内的测定对象成分的总量 更正确反映的值。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，累加值是与测定对象成分的 血中浓度-时间曲线下面积(AUC)相当的值。AUC由于是活体内测定对象成分的浓度曲线 的面积，提取时间内测定对象成分的高浓度状态长时间持续则值增大，高浓度状态仅持续 短时间则值减小。所以，通过求AUC，可直接定量活体内测定对象成分的高浓度状态持续的程度。取得上述与测定对象成分的血中浓度_时间曲线下面积相当的值的构成中，优选 为，再取得将与测定对象成分的AUC相当的值除以从活体提取组织液的时间的值。如此构 成则由于可得到与每单位时间的血中浓度-时间曲线下面积相当的值，提取时间不同时， 也可容易比较它们的值。上述第1方面的活体内成分的测定方法中，优选为，从组织液的提取开始经过60 分钟以上的指定时间时，通知提取的结束。如此构成则受试者由于可根据通知知提取的结 束，可抑制提取时间与预定的时间错离。本发明的第2方面的活体内成分测定装置具备用于设置可蓄积从进行了促进组 织液提取处理的活体提取60分钟以上的组织液中的测定对象成分的收集部件的设置部， 及用于取得由设置于设置部的收集部件蓄积的关于测定对象成分的量的值的检测部。此第2方面的活体内成分测定装置中，如上所述，通过促进从活体的组织液的提 �。墒勾踊钐逄崛∽橹喝菀�。另外，通过将从活体经比如60分钟以上的充分的时间 而提取的组织液蓄积的收集部件设置于设置部，可取得提取的组织液中的测定对象成分的 量。由此，可取得与在提取时间内循环活体内的测定对象成分的总量相关的量。由于在提 取时间内循环活体内的测定对象成分的总量与将该时间内活体内的测定对象成分的浓度 积分者相关，基于取得的量，可掌握活体内测定对象成分以何程度持续高浓度状态。上述第2方面的活体内成分测定装置中，优选为，测定对象成分是葡萄糖。如此构 成则可取得反映在提取时间内循环活体内的葡萄糖的总量的值，此测定值可在糖尿病的病 态掌握等中利用。上述第2方面的活体内成分测定装置中，优选为，再具备基于关于测定对象成分 的量的值，取得与活体内测定对象成分浓度的组织液的提取时间对应的累加值解析部。如 此构成则通过由解析部取得累加值，由于此累加值是将提取时间内活体内的测定对象成分 的浓度积分者，基于此累加值，可掌握活体内测定对象成分以何程度持续高浓度状态。这时，优选为，累加值是与测定对象成分的血中浓度-时间曲线下面积(AUC)相当 的值。如此构成则AUC由于是活体内测定对象成分的浓度曲线的面积，提取时间内测定对 象成分的高浓度状态长时间持续则值增大，高浓度状态仅持续短时间则值减小。所以，通过 求AUC，可直接定量活体内测定对象成分的高浓度状态持续的程度。本发明的第3方面的收集部件是用于从组织液的提取被促进的活体提取组织液， 并取得提取的组织液中的关于测定对象成分的量的值的活体内成分测定装置中用到的收集部件，包括可蓄积从 活体提取60分钟以上的组织液中的测定对象成分的提取介质。此第3方面的收集部件中，如上所述，通过促进从活体的组织液的提�。墒勾踊� 体提取组织液容易。另外，由于可由收集部件，将从活体经比如60分钟以上的充分的时间 而提取的组织液在提取介质中蓄积，通过对于在提取介质中蓄积的组织液进行测定，可取 得提取的组织液中的测定对象成分的量。由此，可取得与在提取时间内循环活体内的测定 对象成分的总量相关的量。由于在提取时间内循环活体内的测定对象成分的总量与将该时 间内活体内的测定对象成分的浓度积分者相关，基于取得的量，可掌握活体内测定对象成 分以何程度持续高浓度状态。上述第3方面的收集部件中，优选为，提取介质是凝胶。如此构成则通过将凝胶贴 附到皮肤，自然提取组织液，测定对象成分在凝胶在中蓄积。由此，由于可容易蓄积测定对 象成分，可简易化测定作业。此情况中，优选为，凝胶包括渗透压比纯水高的高渗透压水溶液。如此构成则由于 由渗透压比纯水高的高渗透压水溶液的渗透压促进组织液的向提取介质的移动，相比用包 括纯水的凝胶的情况，可促进组织液的向凝胶的移动。由此，由于可使单位时间内提取的测 定对象成分的量增加，与测定对象成分的量少的情况相比，可减少测定误差。上述凝胶包括渗透压比纯水高的高渗透压水溶液的构成中，优选为，高渗透压水 溶液在组织液中包括连同测定对象成分含有的测定对象成分以外的辅助成分。如此构成则 可不改变测定对象成分的量地，使用辅助成分而得到有比纯水高的渗透压的高渗透压水溶 液。通过使用这样的高渗透压水溶液，可不改变测定对象成分的测定结果地促进组织液的 向提取介质的移动。此情况中，优选为，辅助成分是选自氯化钾，甘氨酸，及尿素的至少1种。如此构成 则使用组织液中微量含有的氯化钾，甘氨酸，及尿素的至少任何一种而可得到渗透压比纯 水高的高渗透压水溶液。由此，可容易得到有比组织液中的辅助成分的浓度高的浓度(渗 透压)的高渗透压水溶液。上述辅助成分是选自氯化钾，甘氨酸，及尿素的至少1种的情况中，优选为，高渗 透压水溶液中的辅助成分的浓度是0.2mmol/L以上。如此构成则组织液中微量含有的同 时，相比组织液中的含有量的个体差异小的氯化钾，甘氨酸及尿素的浓度，可使包括氯化 钾，甘氨酸及尿素的至少任何的高渗透压水溶液的浓度(渗透压)成为高浓度。由此，对于 组织液中的辅助成分的浓度(渗透压)的高渗透压水溶液的辅助成分的浓度(渗透压)升 高导致，可进一步促进组织液的向提取介质的移动。本发明的第4方面的活体内成分的测定方法将从进行了促进组织液提取处理的 活体提取60分钟以上的组织液中的测定对象成分变换为与测定对象成分不同的蓄积用成 分而蓄积，及基于蓄积的蓄积用成分的量，取得关于测定对象成分的量的值。此第4方面的活体内成分的测定方法中，如上所述，通过促进从活体的组织液的 提�。墒勾踊钐逄崛∽橹喝菀住Ａ硗猓ü踊钐寰热�60分钟以上的充分的时间而 将组织液中的测定对象成分变换为与测定对象成分不同的蓄积用成分而蓄积，及基于蓄积 的蓄积用成分的量，取得提取的组织液中的测定对象成分的量，可取得与在提取时间内循 环活体内的测定对象成分的总量相关的量。由于在提取时间内循环活体内的测定对象成分 的总量与将该时间内活体内的测定对象成分的浓度积分者相关，基于取得的量，可掌握活体内测定对象成分以何 程度持续高浓度状态。本发明的第5方面的用于活体内成分测定的数据处理方法取得从进行了促进组 织液提取处理的活体提取60分钟以上的组织液中的关于测定对象成分的量的值，及基于 取得的值，取得与活体内测定对象成分浓度的组织液的提取时间对应的累加值。此第5方面的用于活体内成分测定的数据处理方法中，如上所述，通过促进从活 体的组织液的提�。墒勾踊钐逄崛∽橹喝菀�。另外，可通过从活体经比如60分钟以上 的充分的时间而提取组织液，取得提取的组织液中的测定对象成分的量，基于该取得的值， 取得与活体内测定对象成分浓度的组织液的提取时间对应的累加值。由于此累加值是将提 取时间内活体内的测定对象成分的浓度积分者，基于此累加值，可掌握活体内测定对象成 分以何程度持续高浓度状态。上述第5方面的用于活体内成分测定的数据处理方法中，优选为，累加值是测定 对象成分的血中浓度-时间曲线下面积(AUC)。AUC由于是活体内测定对象成分的浓度曲 线的面积，提取时间内测定对象成分的高浓度状态长时间持续则值增大，高浓度状态仅持 续短时间则值减小。所以，通过求AUC，可直接定量活体内测定对象成分的高浓度状态持续 的程度。
图1是示本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的测定装置，传感 器芯片及收集部件的斜视图。图2是示图1中所示的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的测定装置的 模式的平面图。图3是示图1中所示的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的测定装置的 模式的侧面图。图4是示图1中所示的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的传感器芯片 的模式的平面图。图5是示图1中所示的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的传感器芯片 的模式的侧面图。图6是示本发明的第1及第3实施方式的血糖AUC测定方法中用到的收集部件 的模式的截面图。图7是示本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的穿刺工具的斜视 图。图8是示图7中所示的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的安装于穿刺 工具的微细针基片的斜视图。图9是示微细孔形成的皮肤的模式的截面图。图10是用于说明本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法的测定顺序的流 程图。图11是用于说明本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法的测定顺序的图。图12是用于说明本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法的测定顺序的图。图13是用于说明本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法的测定顺序的图。
图14是示本发明的第2实施方式的血糖AUC测定方法中用到的收集部件的断 面说明图。图15是用于说明本发明的第2及第4实施方式的血糖AUC测定方法的测定顺 序的图。图16是说明从本发明的第5实施方式的血糖AUC测定方法中用到的凝胶回收 分析物的方法的一例的图。图17是说明从本发明的第5实施方式的血糖AUC测定方法中用到的凝胶回收 分析物的方法的一例的图。图18是说明从本发明的第5实施方式的血糖AUC测定方法中用到的凝胶回收 分析物的方法的其他例的图。图19是说明从本发明的第5实施方式的血糖AUC测定方法中用到的凝胶回收 分析物的方法的其他例的图。图20是说明从本发明的第5实施方式的血糖AUC测定方法中用到的凝胶回收 分析物的方法的其他例的图。图21是用于说明本发明的第1实施方式及第2实施方式的血糖AUC测定方法 的测定原理的模式图。图22是用于说明本发明的第1实施方式及第2实施方式的血糖AUC测定方法 的测定原理的模式图。图23是用于说明通过采血的血糖AUC测定方法的测定原理的模式图。图24是示纯水中提取组织液时的电解质浓度与导电率的相关的坐标图。图25是示测定时间作为60分钟时的电解质提取速度与葡萄糖透过率的相关的 坐标图。图26是示测定时间作为120分钟时的电解质提取速度与葡萄糖透过率的相关 的坐标图。图27是示测定时间作为180分钟时的电解质提取速度与葡萄糖透过率的相关 的坐标图。图28是示对于实际葡萄糖透过率的推定葡萄糖透过率的比的频度的直方图。图29是示测定时间作为60分钟时的采血血糖AUC与推定血糖AUC的相关的坐 标图。图30是示测定时间作为120分钟时的采血血糖AUC与推定血糖AUC的相关的 坐标图。图31是示测定时间作为180分钟时的采血血糖AUC与推定血糖AUC的相关的 坐标图。图32是示采血血糖AUC (180)与，采血血糖AUC (30)，采血血糖AUC (60)，采血血 糖AUC(90)及采血血糖AUC(120)与的相关的坐标图。图33是示葡萄糖透过率与电解质提取速度的关系的图。图34是示采血血糖AUC(60)与提取葡萄糖量的相关的坐标图。图35是示采血血糖AUC(120)与提取葡萄糖量的相关的坐标图。图36是示葡萄糖透过率与钠离子提取速度的相关(60分钟)的坐标图。
图37是示葡萄糖透过率与钠离子提取速度的相关(120分钟)的坐标图。图38是示采血血糖AUC(60)与推定血糖AUC(60)的相关的坐标图。图39是示采血血糖AUC(120)与推定血糖AUC(120)的相关的坐标图。图40是示采血血糖AUC与推定血糖AUC的关系的图。图41是示作为提取介质使用氯化钾水溶液时的血糖AUC的测定误差的分布的 图。图42是示作为提取介质使用纯水时的血糖AUC的测定误差的分布的图。图43是示对于氯化钾水溶液的浓度的葡萄糖透过率的依赖性的图。图44是示对于尿素水溶液的浓度的葡萄糖透过率的依赖性的图。图45是示对于氯化钾水溶液的浓度的葡萄糖透过率的依赖性的图。图46是示对于甘氨酸水溶液的浓度的葡萄糖透过率的依赖性的图。图47是示本发明的第1 第4实施方式的变形例的储液池的模式图。实施方式以下，基于
本发明的具体化的实施方式。以下的实施方式中，说明本发明的适用于测定血糖AUC的情况的例。血糖AUC是由 在表示血糖值的时间经过的坐标图上描绘的曲线和横轴包围的部分的面积(单位mg · h/ dl)。血糖AUC是糖尿病治疗中，进行胰岛素或经口剂的效果判断中所用的指标。例如，通过 由血糖AUC测定反映糖负荷后(餐后)指定期间内在血中循环的葡萄糖(血糖)的总量的 值，可推定糖负荷后在受试者的体内循环的葡萄糖的总量。糖负荷后在受试者的体内循环 的葡萄糖的总量是用于知由糖负荷的高血糖状态以何程度持续的极其有用的信息。例如， 成为知糖负荷后的胰岛素的分泌应答速度的线索，或成为施用糖尿病经口药或胰岛素时， 知它们的效果的线索。作为如此测定血糖AUC的意义，可举出通过测定血糖AUC，可抑制由1个时间点的 血糖值测定的糖耐量评价中糖代谢的个体差异的影响的点。即，由于由糖负荷至血糖值呈 现反应的时间上有个体差异，仅测定糖负荷后的某时间点的血糖值，则无法掌握该血糖值 是初始时的，还是顶峰时的。另外，即便假设认为可测定顶峰时的血糖值，也不可能掌握该 高血糖状态以何程度持续。另外，近年被称为“隐性糖尿病”的疾病受到关注，此疾病的特 征在于，空腹时的血糖值是正常或略高水平，但，餐后的血糖值的升高急剧，或者升高后的 血糖值的下降速度缓慢，从而高血糖状态与健常者相比成为长时间。所以1个时间点的血 糖值测定中，无法知高血糖状态以何程度持续，当然无法提供对于隐性糖尿病的筛选有用 的信息。此时，如果测定血糖AUC，则由于可得到反映指定期间内在血中循环的血糖的总量 的值，测定值不因由糖负荷至血糖值呈现反应的时间受影响，另外，可基于测定值推定高血 糖状态以何程度持续。如此，通过测定血糖AUC，不受糖代谢的个体差异的影响，可得到对于 由糖负荷的糖耐量的推定有用的值。血糖AUC的测定中，通常，通过每指定的时间(例如，每30分钟)进行采血，分别取 得采取的血液的血糖值来进行。然后，取得表示血糖值的时间经过的坐标图的同时，通过求 坐标图上由描绘的曲线和横轴包围的部分的面积来求血糖AUC。使用以下的实施方式的血 糖AUC测定方法而得到的值可代替通过这样的采血的血糖AUC而在糖尿病的判断中使用。(第1实施方式)
首先，参照图1 图9，对于本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法中用到的 测定装置，传感器芯片，收集部件及穿刺工具的构成进行说明。[测定装置的构成]如图1 图3中所示，测定装置100具备表示部1，记录部2，解析部3，电源4，传 感器芯片200及后述的用于设置收集部件300 (参照图6)的凝胶301的设置部5，与设置于 设置部5的传感器芯片200连接的电路6，使用者(受试者)操作测定装置100的操作按钮 7，计时部8。表示部1有表示由解析部3的测定结果及记录部2中记录的数据等的功能。记录 部2为了保存以往的数据而设计。解析部3有基于电路6的输出值，计算葡萄糖浓度及电 解质(NaCl)浓度的功能。设置部5有凹形状，以可收容传感器芯片200及收集部件300的 凝胶301的方式构成。电路6包括葡萄糖测定用电路6a和电解质测定用电路6b。葡萄糖 测定用电路6a包括向设置部5内露出的端6c及6d，电解质测定用电路6b包括向设置部5 内露出的端6e及6f。另外，电路6包括用于切换葡萄糖测定用电路6a和电解质测定用电 路6b的开关6g。使用者通过操作操作按钮7操作开关6g而可切换葡萄糖测定用电路6a 和电解质测定用电路6b。操作按钮7为了开关6g的切换，表示部1的表示的切换及计时 部8的设定等的操作而设置。计时部8，则为了从开始葡萄糖的提取起在指定的时间结束提 �。邢蚴褂谜咄ㄖ崛〉慕崾奔涞墓δ�。[传感器芯片的构成]传感器芯片200包括塑料制的基板201，设置于基板201的上面上的一对葡萄糖 测定用电极202，设置于基板201的上面上的一对电解质测定用电极203。葡萄糖测定用电 极202由白金电极上形成GOD酶膜(GOD:葡萄糖氧化酶)的作用电极202a和由白金电极 构成的对电极202b构成，电解质测定用电极203由银/氯化银构成的作用电极203a和银 /氯化银构成的对电极203b构成。在传感器芯片200设置于测定装置100的设置部5的 状态下，葡萄糖测定用电极202的作用电极202a及对电极202b分别以与葡萄糖测定用电 路6a的端6c及6d接触的方式构成。同样，在传感器芯片200设置于测定装置100的设置 部5的状态下，电解质测定用电极203的作用电极203a及对电极203b分别以与电解质测 定用电路6b的端6e及6f接触的方式构成。[收集部件的构成]收集部件300有可保持通过被动扩散从受试者的体内向皮肤渗出的组织液的有 吸湿性及非导电性(基本上不含电解质的性质)的凝胶301由支持部件302支持的结构。 凝胶301由聚乙烯醇构成。支持部件302有凹部302a和在凹部302a的外周侧形成的锷部 302b，在凹部302a保持凝胶301。锷部302b的表面设置有粘着层303，测定前的状态时，通 过粘着层303贴附封闭保持于凹部302a的凝胶301的剥离纸304。进行测定时，剥离纸304 剥离而凝胶301及粘着层303露出的同时，可在凝胶301与受试者的皮肤接触的状态下，将 凝胶301通过粘着层303贴附到受试者的皮肤而固定。凝胶301以可蓄积从活体提取60分钟以上的组织液中的上述测定对象成分的方 式构成。更具体而言，凝胶301有容许蓄积从活体提取60分钟以上的组织液中的上述测定 对象成分的充分的体积。这样的凝胶301的体积根据组织液的提取时间确定。具体而言， 如果提取时间是60分钟，则凝胶的体积优选33 μ L以上。另外，如果提取时间是120分钟，则优选66 μ L以上，如果提取时间是180分钟，则优选100 μ L以上。可蓄积测定对象成分 的凝胶的体积可根据后述的方法求。[穿刺工具的构成]如图7 图9中所示，穿刺工具400是安装了经减菌处理的微细针基片500，而通 过将该微细针基片500的微细针501与活体的表皮，具体而言受试者的皮肤600抵接，从而 用于在受试者的皮肤600上形成提取组织液的微细的孔(微细孔601)的装置。微细针基 片500的微细针501有通过穿刺工具400形成微细孔601时，该微细孔601贯通皮肤600 的表皮，但不到达真皮的深部的深度。如图7中所示，穿刺工具400具备筐体401，设置于 筐体401的表面的释放按钮402，设置于筐体401的内部的阵列卡盘403及弹簧部件404。 筐体401的下部401a形成开口(未图示)。弹簧部件404有对阵列卡盘403向下施力的功 能。阵列卡盘403的下端可安装微细针基片500。微细针基片500的下面形成多个微细针 501。另外，穿刺工具400有将阵列卡盘403逆向于弹簧部件404的作用力而向上上押状态 下固定的固定结构(未图示)，使用者(受试者)通过按下释放按钮402，由固定结构的阵 列卡盘403的固定被解除，通过弹簧部件404的作用力阵列卡盘向下发射，从而微细针基片 500冲击皮肤。[血糖AUC测定方法]接着，参照图6 图13而说明本发明的第1实施方式的血糖AUC测定方法的测定 顺序。首先，参照图10而对于本发明的血糖AUC测定方法的测定顺序的概略说明。再 有，图10中所示的步骤中，步骤Sl S5的步骤是由实施测定者进行的步骤，步骤S6的步 骤是，由第1实施方式的测定装置100进行的步骤。首先，进行受试者的测定部位的洗净和使用穿刺工具400的测定部位中微细孔的 形成(步骤Si)。接着，使用设置于测定装置100的计时部8而设定组织液的提取时间(步 骤S2)。接着，将收集部件300设置于测定部位，开始组织液的提取及组织液中的成分的蓄 积(步骤S3)。接着，判断步骤S2中设定的提取时间的结束是否由计时部8的警报器通知 (步骤S4)，通知时拆下收集部件300而结束组织液的提取(步骤S5)。接着，向测定装置 100的设置部5设置提取结束的收集部件300的凝胶301，进行葡萄糖的测定及血糖AUC解 析(步骤S6)，测定结束。以下，对于各步骤详细说明。(步骤Si:前处理步骤)首先，受试者将皮肤600使用醇等而洗净，从而除去成为测定结果的搅乱要因的 物质(汗，尘等)。然后，进行洗净后，由安装了微细针基片500的穿刺工具400 (图7参照) 在皮肤600形成微细孔601。具体而言，在测定部位配置穿刺工具400的下部401a的开口 (未图示)的状态下，按下释放按钮402。由此，解除由固定结构(未图示)的阵列卡盘403 的固定的同时，阵列卡盘403通过弹簧部件404的作用力向皮肤600侧移动。然后，安装于 阵列卡盘403的下端的微细针基片500 (参照图8)的微细针501以指定的速度与受试者的 皮肤600抵接。由此，如图9中所示，受试者的皮肤600上形成微细孔601。(步骤S2计时器设定步骤)接着，受试者通过操作操作按钮7来设定测定装置100的计时部8的时间。时间只要是60分钟以上，则可设定任意的时间。其中将举设定于180分钟的例来说明。(步骤S3 S5提取-蓄积步骤)接着，如图11中所示，受试者拆除收集部件300的剥离纸304 (图6参照)的同时， 以在形成微细孔601的部位配置凝胶301的方式，将收集部件300贴附到皮肤(步骤S3)。 由此，形成微细孔601的部位与凝胶301接触的同时，经微细孔601而包括葡萄糖及电解质 (NaCl)的组织液开始向凝胶301移动，而提取开始。另外，受试者在提取开始的同时开启 测定装置100的计时部8。此后，至经过指定的时间(警报器的设定时间)，在将收集部件 300贴附到皮肤600的状态下放置(步骤S4)。然后，经过指定的时间而在警报器警鸣的时 间点受试者将收集部件300从皮肤600拆下(步骤S5)。其中，由于计时部8的警报器设定 于180分钟，经180分钟的时间而继续进行提取。由此，提取_蓄积步骤结束。(步骤S6:测定步骤)接着，如图12及图13中所示，受试者在测定装置100的设置部5设置传感器芯 片200的同时，在传感器芯片200上设置收集部件300的凝胶301。由此，由测定装置100 的葡萄糖测定用电路6a，传感器芯片200的葡萄糖测定用电极202及收集部件300的凝胶 301构成第1电路的同时，由测定装置100的电解质测定用电路6b，传感器芯片200的电解 质测定用电极203及收集部件300的凝胶301构成第2电路。测定提取的葡萄糖浓度时，受试者通过操作按钮7将开关6g切换到葡萄糖测定用 电路6a的同时，指示测定开始。由此，一定电压施加于第1电路，将通过电流计检测的电流 值I(glc)输入到解析部3。其中，电流值I(glc)与凝胶301的葡萄糖浓度C(glc)之间以 下的式⑴成立。C(glc) = AXI(glc)+B(A 及 B 是常数)...(1)解析部3基于上述式(1)，从电流值I(glc)计算葡萄糖浓度C(glc)。而且，解析部3使用得到的葡萄糖浓度C(glc)和提取溶剂的量，即凝胶的体积V 而基于下述式(2)，计算提取葡萄糖量M (glc)。M(glc) = C(glc) XV— (2)另外，测定提取的电解质浓度时，受试者通过操作按钮7将开关6g切换到电解质 测定用电路6b的同时，指示测定开始。由此，一定电压施加于第2电路，将通过电流计检测 的电流值I(ele)输入到解析部3。其中，在电流值I(ele)与凝胶301的电解质浓度C (NaCl) 之间，以下的式⑶成立。C(NaCl) = CX I (ele)+D (C 及 D 是常数)…(3)解析部3基于上述式(2)，从电流值I (ele)计算电解质浓度C(NaCl)。另外，解析部3从电解质浓度C (NaCl)，凝胶301的体积V，提取时间t，提取部位中 电解质的提取速度J，根据以下的式(4)计算。J = C(NaCl) XVX 1/t... (4)然后，解析部3，从计算的电解质提取速度J，将示葡萄糖的提取容易度的葡萄糖 透过率P(glc)，基于以下的式(5)计算。P (glc) =EX J+F (E 及 F 是常数)…(5)再有，式(5)如下得到。示葡萄糖的提取容易度的葡萄糖透过率P (glc)原本由通 过采血得到的血糖AUC与提取的葡萄糖的量的比率(将这些比率暂称为实际葡萄糖透过率P' (glc))给出。如下所述，实际葡萄糖透过率P' (glc)由于与电解质提取速度J示一定 的相关关系，通过基于电解质提取速度J和实际葡萄糖透过率P' (glc)求近似式，可得到 上述式(5)。根据上述式(5)，基于可不经过采血而取得的电解质提取速度J，可得到示葡萄糖 的提取容易度的葡萄糖透过率P (glc)。解析部3由通过式(2)得到的提取葡萄糖量M(glc)和通过式(5)得到的葡萄糖 透过率P (glc)，基于下述式(6)计算推定血糖AUC (推定的AUC)。推定的AUC = M (glc)/P (glc)... (6)此推定血糖AUC (推定的AUC)是与进行多次采血而计算的采血血糖AUC有高相关 的值。再有，推定血糖AUC与采血血糖AUC的相关性稍后详细说明。此推定血糖AUC的值， 表示在表示部1的同时，在记录部2中记录。如此而测定步骤结束。[第1实施方式的变形例]第1实施方式中，为了测定推定的AUC，例示了计算解析部3中葡萄糖浓度 C (glc)，葡萄糖量M (glc)，电解质浓度C (NaCl)，电解质提取速度J及葡萄糖透过率P (glc) 的构成，但也可不是这样的构成。例如，用于计算推定的AUC的式(6)可根据式(1) (5)， 置换到下述式。推定的AUC= {(AX I (glc)+B) Xt}/[EX (CXI(ele)+D) XF](Α F是常数)因此，使用上述式，则解析部3可基于电流值I (glc)及电流值I(ele)直接地计算 推定的AUC。(第2实施方式)接着，参照图14及图15，而对于本发明的第2实施方式的血糖AUC测定方法进行 说明。此第2实施方式中，作为提取介质，代替凝胶而用到纯水。第2实施方式中测定顺序 由于与第1实施方式的测定顺序和步骤Sl及步骤S2中相同，将以第1实施方式中示的测 定流程作为基�。÷圆街鑃l及S2而说明。(步骤S3 S5:提取-蓄积步骤)如图14中所示，使用上下有开口的筒状的支持部件700进行组织液的提取。如图 15中所示，受试者以支持部件700的中空部位于形成微细孔601的部位的方式，将支持部件 700通过粘着层701贴附到皮肤600。然后，经上侧的开口而向支持部件700内通过移液器 吸吐注入指定的量的纯水704后，为了防止纯水704的蒸发，将支持部件700的上侧的开口 由密封部件702密封。由此，微细孔601形成的部位与纯水704接触的同时，经微细孔601 而包括葡萄糖及电解质(NaCl)的组织液开始向纯水704中移动，而提取开始(步骤S3)。 另外，受试者在提取开始的同时开启警报器装置。此后，至经过指定的时间(警报器的设定 时间)，在支持部件700贴附到皮肤600的状态下放置(步骤S4)。然后，经过指定的时间 而在警报器警鸣的时间点，受试者在拆下密封部件702的同时，通过移液器吸吐回收支持 部件701内的液体(步骤S5)。由此，提取-蓄积步骤结束。(步骤S6:测定步骤)接着，测定回收的液体的导电率G。由于提取后的液体电解质大致由氯化钠组成， 通过测定液体的导电率G，可得到电解质浓度C (NaCl)。对于导电率与电解质浓度的相关而言将后述。然后，使用计算的电解质浓度C(NaCl)和上述式(4)及式(5)计算葡萄糖透过率 p(glc)。接着，将提取后的液体经高效液相色谱而测定葡萄糖浓度C(glc)。由此葡萄糖浓 度C(glc)和使用的纯水704的体积V，基于上述式(2)计算提取葡萄糖量M(glc)。然后， 从得到的提取葡萄糖量M和葡萄糖透过率P (glc)，基于上述式(6)计算推定血糖AUC。由 此，测定步骤结束。(第3实施方式)参照图6，对于本发明的第3实施方式的血糖AUC测定方法中用到的收集部件进行 说明。第1实施方式及第2实施方式中，作为提取介质，说明了含有纯水的凝胶或使用纯 水的实施方式。第3实施方式中，代替此纯水而使用含有渗透压高的高渗透压水溶液的凝 胶来提取组织液。由于第3实施方式中测定顺序与第1实施方式的测定顺序相同，省略说 明。第3实施方式的收集部件800具有有可保持从受试者的皮肤提取的组织液的吸湿 性(基本上不含Na+的性质)的凝胶801由支持部件302支持的结构。本实施方式中凝胶 801由聚乙烯醇构成。此凝胶801含有有比纯水高的渗透压的高渗透压水溶液。此高渗透 压水溶液是在组织液中包括连同葡萄糖等的测定对象成分含有的测定对象成分以外的辅 助成分的水溶液。第3实施方式中，组织液中连同葡萄糖等的测定对象成分含有的辅助成 分以用到选自氯化钾，甘氨酸及尿素的至少1种的方式构成。另外，此辅助成分的浓度以成 为0. 2mM(mmol/L)以上的方式构成。再有，第3实施方式的其他构成与上述第1实施方式同样。(第4实施方式)接着，参照图15而对于本发明的第4实施方式的血糖AUC测定方法进行说明。第 4实施方式中，使用高渗透压水溶液来提取组织液。由于第4实施方式中测定顺序与上述 第2实施方式的测定顺序相同，对于步骤S3 S5的提取-蓄积步骤以外的步骤，则省略说 明。(步骤S3 S5:提取-蓄积步骤)第4实施方式中，如图15中所示，受试者将剥离纸703剥离而将支持部件700通 过粘着层701贴附到形成微细孔601的部位。然后，经上侧的开口向支持部件700内通过 移液器吸吐(未图示)注入含有氯化钾(KCl)作为辅助成分的指定的量的高渗透压水溶液 904(KCl水溶液)。其后，为了防止所述KCl水溶液904的蒸发，将支持部件700的上侧的 开口由密封部件702密封。由此，形成微细孔601的部位与高渗透压水溶液904 (KCl水溶 液)接触的同时，经微细孔601而包括葡萄糖及电解质(NaCl)的组织液开始向KCl水溶液 904中移动而提取开始(步骤S3)。另外，受试者在提取开始的同时开启计时部8的警报器 装置。此后，至经过指定的时间(警报器的设定时间)在支持部件700贴附到皮肤600的 状态下放置(步骤S4)。然后，经过指定的时间而在警报器警鸣的时间点，受试者在拆下密 封部件702的同时，通过移液器吸吐回收支持部件700内的液体(提取组织液的高渗透压 水溶液904)(步骤S5)。由此，提取-蓄积步骤结束。
(第5实施方式)第1实施方式涉及的测定方法及第3实施方式涉及的测定方法中，虽然将从体内 提取的组织液蓄积的凝胶301 (801)分别设置于测定装置100的设置部5，而测定所述凝胶 301(801)中的葡萄糖浓度等，但也可将凝胶301 (801)中的分析物在专用容器内回收到纯 水中，并测定此回收溶液中的分析物浓度。例如，通过将具备结束从皮肤的分析物的提取的凝胶301(801)的凝胶储液池 20 (在基板21的片面配设凝胶301 (801)者)，如图16所示，在回收用管30内浸渍于纯水 构成的回收液31，从而回收凝胶301(801)内蓄积的分析物。分析物的回收结束后，如图17 所示，通过注射器32使回收用管30内的回收液31向测定装置40的测定部41移动。测定 部41中设置与前述的测定装置100同样的葡萄糖浓度测定用电极42及钠离子浓度测定用 电极43。然后，由电控制部44及解析部45使用利用式(1) (6)的前述方法测定葡萄糖 浓度及钠离子浓度，及进行血糖AUC的解析的方式构成。得到的结果用表示部46输出。另外，将凝胶301 (801)中的分析物通过其他方法回收也可。将具备如图18所示， 结束从皮肤的分析物的提取的凝胶301 (801)的凝胶储液池20设置于专用的回收筒50。此 回收筒50由箱形状的筒本体51构成。筒本体51的对向的壁面之一侧形成回收液的流入 口 52，另一侧形成回收液的流出口 53。凝胶储液池20以从在筒本体51的一面形成的开口 54，凝胶301 (801)向所述筒本体51的内部突出的方式设置于回收筒50的方式构成。接着，如图19所示，将回收筒50设置于测定装置60的指定位置。此测定装置60 具备箱部61及泵部62，形成到达箱部61，泵部62，筒本体51及测定部63的回收液的流路。 另外，测定部63中设置与前述的测定装置100同样的葡萄糖浓度测定用电极64及钠离子 浓度测定用电极65。将回收筒50设置于测定装置60之后，通过驱动泵部62，将箱部61中 收容的分析物回收用的回收液69移送到筒本体51内(参照图19)。再有，虽然省略图示， 但在筒本体51的流出口 53的下游侧配设阀，以将回收液69移送到筒本体51内之前，所述 阀闭合的方式构成。向筒本体51内填充回收液69的状态下放置一定时间，将凝胶301 (801)内的分析 物回收到回收液69中。其后，在开启上述的流出口 53的下游侧的阀的同时，如图20所示， 通过驱动泵部62将回收液69移送到测定部63。接着，由电控制部66及解析部67，根据利 用式(1) (6)的前述的方法测定葡萄糖浓度及钠离子浓度的同时，进行血糖AUC的解析。 得到的结果以通过表示部68输出的方式构成。[血糖AUC测定方法的原理]接着，参照图21及图22对于血糖AUC测定方法的测定原理进行说明。一般地，组织液中的葡萄糖浓度(IG⑴)随着血液中的葡萄糖浓度(BG⑴)变化， 已知组织液中的葡萄糖浓度(IG (t))与血液中的葡萄糖浓度(BG (t))有强相关关系。组织 液中的葡萄糖浓度(IG(t))使用常数α，而可如以下的式(7)表示。BG (t) = α XIG(t)... (7)如图21中所示，将液体或凝胶的提取介质施加于活体，考虑经皮肤而从活体内 收集组织液的情况。每单位时间从皮肤提取到提取介质的葡萄糖量作为葡萄糖提取速度 J(glc)，某时刻t的葡萄糖提取速度作为J(glc) (t)，时刻t的组织液中的葡萄糖浓度作为 IG (t)。此时，葡萄糖提取速度J (glc) (t)如以下的式(8)，作为葡萄糖浓度IG (t)与葡萄糖透过率P(glc)的积表示。J(glc) (t) = P(glc) XIG(t)... (8)再有，葡萄糖透过率P (glc)是表示对于皮肤的葡萄糖的透过性的系数，葡萄糖透 过率p(glc)越大，每单位时间内从皮肤提取的葡萄糖的量越多。其中，考虑进行仅提取指定的时间T的情况。对于上述式(8)的左边，将J(glc) (t)经过提取时间T积分时，该积分的值成为提取时间T内从活体提取到提取介质的葡萄糖 的总量M(glc)⑴。此关系如以下的式(9)中所示。M(glc) (T) = / J (glc) (t)... (9)例如，葡萄糖提取速度J(glc) (t) = IOng/分钟时，提取时间T是60分钟时提取 到储液池的葡萄糖的总量M(glc)成为M(glc) = IOng/分钟X60分钟=600ng。另一方面，对于上述式(8)的右边，将组织液中的葡萄糖浓度IG (t)经过时刻T积 分，则该值如图22中所示，成为由时刻T之间的葡萄糖浓度IG(t)的坐标图规定的图形(阴 影部分)的面积(曲线下面积AUC(IG(t)))。此关系如以下的式(10)中所示。AUC (IG (t)) = / IG(t)...(10)另夕卜，上述式(7)如所示，由于IG(t)与BG(t)有相关关系，在曲线下面积 AUC(IG(t))与曲线下面积AUC(BG⑴)之间也有相关关系。因此，曲线下面积AUC(BG(t)) 与曲线下面积AUC(IG(t))的关系使用常数α而如以下的式(11)表示。AUC(BG(t)) = α XAUC(IG(t))…(11)其中，考虑了时间T的积分时，由于上述式⑶及(9)，以下的式(12)成立。M(glc) (T) = P(glc) X f IG(t)...(12)从此关系式知，提取的葡萄糖的总量M(glc)是时刻t的组织液中的葡萄糖浓度 IG(t)的经过时间T的积分值乘以葡萄糖透过率P(glc)而得到。由于IG(t)的积分可根据 式(10)，作为IG⑴的AUC表示，以下的式(13)成立。M(glc) (T) = P (glc) X AUC (IG (t))…(13)根据式(11)，由于AUC(IG(t))可使用常数α和AUC(BG(t))而表示，根据式(13) 与式(11)，以下的式(14)成立。M(glc) = (P(glc)/a ) XAUC(BG(T))- (14)即知，根据上述式(14)，可取得提取时间T内在提取介质中蓄积的葡萄糖的总量 M(glc) (T)和提取时间T的葡萄糖的对于皮肤的透过性(由葡萄糖透过率P(glc))，常数 α，AUC (BG (T))。再有，由于血液中的葡萄糖浓度BG与组织液中的葡萄糖浓度IG大致相 同，上述实施方式中均作为a = 1计算。[本实施方式的血糖AUC测定方法的对于以往方法的益处]接着，参照图22及图23对于本发明的血糖AUC测定方法的对于通过以往的采血 的血糖AUC测定方法的益处进行说明。图23是纵轴设血中葡萄糖浓度，横轴设时间者，曲 线坐标图示血中葡萄糖浓度的经时变化。通过采血测定血糖AUC时，通过采血测量多个时 间点的血中葡萄糖浓度。图23示作为每时间间隔t进行采血的结果，得到血中葡萄糖浓度 A，B, C及D的例。通过采血的血糖AUC不是将血中葡萄糖浓度经过测定时间积分者，而是 将由A D的各血中葡萄糖浓度和时间t包围的梯形的面积S1，S2，及S3合计的值作为近 似值计算。图23中所示的例中，采血血糖AUC如以下的式(15)表示。
采血血糖AUC = {(A+B) X t/2} + {(B+C) X t/2} + {(C+D) X t/2}... (15)如此，通过采血测定血糖AUC时，将血中葡萄糖浓度的变化作为阶段性且线性者 总计而计算血糖AUC。但是，实际的血中葡萄糖浓度是如图22及图23中所示，连续性且曲线性地变化。 所以，如通过采血的AUC测定，将血中葡萄糖浓度的变化作为线性者测定时，例如图23中箭 头X表示的测定结果中未反映出的部分，或产生如箭头Y表示的剩余部分，实际的血糖AUC 和由基于式(15)的以往方法的血糖AUC的数值偏离。此时，第1及第2实施方式的血糖AUC测定方法中，从测定开始至测定结束连续地 提取组织液，由于蓄积提取的组织液中含的葡萄糖，反映连续性且曲线性的血中葡萄糖浓 度的变化的葡萄糖量蓄积。所以，根据本发明的第1及第2实施方式的血糖AUC测定方法， 相比通过采血的血糖AUC测定方法可得到将更实际的血中葡萄糖浓度的变化正确反映的 血糖AUC。[本实施方式的血糖AUC测定方法的益处]第1至第5实施方式中，如上所述，通过在皮肤600上形成微细孔601而促进组织 液的提�。し�600中微细孔601形成的部位而可使提取组织液容易。另外，从受试者的 皮肤经比如180分钟的长时间而提取包括葡萄糖的组织液，由于蓄积提取的组织液中的葡 萄糖，通过1次测定，可蓄积与指定期间内在活体内循环的循环血液中的葡萄糖的总量相 关的量的葡萄糖。因此，促进组织液的提取的同时，通过进行180分钟提取而取得关于蓄积 的葡萄糖的量的值，可测定反映在提取时间内循环活体内的葡萄糖的总量的值(推定血糖 AUC)。基于此推定血糖AUC，可掌握活体内测定对象成分以何程度持续高浓度状态。另外，第1至第5实施方式中，将提取组织液的时间作为180分钟，但不限于这些， 提取组织液的时间可在60分钟以上的时间的范围内任意设定。测定糖负荷后60分钟的血 糖曲线下面积来掌握高血糖状态，可知对于受试者的糖负荷的胰岛素分泌应答速度等，对 于病态掌握是有用的。将糖负荷60分钟后的血糖值作为用于知患者的糖耐量的指标来利 用。另外，通过将提取时间设为120分钟以上，相比提取时间设为60分钟以上、不足120分 钟时，可掌握更长期的血糖的变动状态，通过将提取时间设为180分钟以上，相比将提取时 间设为60分钟以上、不足180分钟时，可掌握更长期的血糖变动状态。另外，第1至第5实施方式中，如上所述，由于通过得到与采血血糖AUC相当的推 定血糖AUC，可不进行采血而得到与采血血糖AUC相当的值，在轻减了受试者的负担的同 时，还可进行糖尿病患者的病态掌握。另外，第1至第5实施方式中，如上所述，通过基于提取的组织液中的葡萄糖量的 值和提取的组织液中的电解质的量得到推定血糖AUC，微细孔的开启情况散乱时也可得到 与采血血糖AUC相关性高的推定血糖AUC。另外，第1至第5实施方式中，如上所述，通过由计时部8通知提取的结束，由于受 试者可根据由计时部8的通知知提取的结束，可抑制提取时间与预定的时间错离。第3及第4实施方式中，如上所述，凝胶801含有有比纯水高的渗透压的高渗透压 水溶液。由于通过渗透压促进组织液的向凝胶801的移动，相比用包括纯水的凝胶301的 情况，可促进组织液的向凝胶801的移动。由此，可使单位时间内提取的测定对象成分(葡 萄糖)的量增加。
另外，第3及第4实施方式中，如上所述，凝胶801中含的高渗透压水溶液通过在 组织液中包括与葡萄糖等的测定对象成分一同含有，并且，与测定对象成分(葡萄糖)不同 的辅助成分(氯化钾，甘氨酸及尿素选自的至少1种)，可不改变测定对象成分的测定结果 地促进组织液的向提取介质的移动。另外，第3及第4实施方式中，如上所述，作为辅助成分，通过选择选自氯化钾，甘 氨酸，及尿素的至少1种，使用组织液中微量含有的氯化钾，甘氨酸，及尿素的至少任何一 种而可得到渗透压比纯水高的高渗透压水溶液。由此，可容易得到有比组织液中的辅助成 分的浓度高的浓度(渗透压)的高渗透压水溶液。第3及第4实施方式中，如上所述，通过将辅助成分的浓度设为0. 2mM(mmol/L)以 上，组织液中微量含有的同时，相比组织液中的含有量的个体差异小的氯化钾，甘氨酸及尿 素的浓度，可使包括氯化钾，甘氨酸及尿素的至少任何的高渗透压水溶液的浓度(渗透压) 成为高浓度。再有，第3实施方式的其他效果与上述第1实施方式同样。实施例实施例1使用纯水的多个检体的血糖AUC测定的例根据本发明的第2实施方式测定了推定血糖AUC。1.前处理 组织液的提取首先，对于多个检体(受试者)，通过第2实施方式(前处理步骤)的说明中记载 的方法进行前处理。具体而言，对于7个检体的合计51个部位，由穿刺工具400 (参照图7) 形成了微细孔601(参照图9)。接着，通过第2实施方式(提取-蓄积步骤)的说明中记载的方法，经形成微细孔 的皮肤而进行组织液的提取。组织液的提取中使用纯水100 μ L，组织液的提取是将提取时 间设为60分钟，120分钟，180分钟及300分钟而进行。2.采血血糖AUC的测定与组织液的提取并行而每15分钟进行采血，测定通过采血的血糖AUC。3.提取葡萄糖量的计算回收组织液提取的液体，从回收的液体使用葡萄糖氧化酶测定法而测定了葡萄糖 浓度C(glc)。从其中得到的葡萄糖浓度C(glc)与纯水的体积(ΙΟΟμ ，基于上述式(2) 计算了提取葡萄糖量M(glc)。4.钠离子浓度的测定接着，测定了回收的液体的导电率G。导电率G的测定中，使用了导电率计(DS-51 堀场制作所社制)。图M是示导电率G与电解质浓度C(NaCl)的相关的坐标图。从图M 的坐标图，知可使用导电率G而计算电解质浓度C(NaCl)。从而，从图M中所示的导电率G 与电解质浓度C (NaCl)的关系将下述式(16)作为近似式求出，使用此式，从导电率G计算 了电解质浓度C (NaCl)。C(NaCl) = 0. 0086XG... (16)5.葡萄糖透过率的计算5-1.实际葡萄糖透过率P' (glc)的计算由2.中测定的采血血糖AUC和3.中计算的提取葡萄糖量M(glc)，基于下述式求了实际葡萄糖透过率P' (glc)。P' (glc) = M (glc)/AUC (BG)5-2.电解质提取速度J的计算接着，使用4.中得到的电解质浓度C(NaCl)，基于式(4)计算了电解质提取速度
Jo5-3.常数E及F的确定为了基于5-2.中求出的电解质提取速度J和式(5)计算推定葡萄糖透过率 P (glc)，如下确定了常数E及F。图25 图27是示将提取时间设为60分钟，120分钟及180分钟时的分别的电解 质提取速度J与实际葡萄糖透过率P' (glc)的相关的坐标图。图25 图27的坐标图中， 纵轴及横轴分别是实际葡萄糖透过率P' (glc)及电解质提取速度J。图25 图27的坐 标图中，实际葡萄糖透过率P‘ (glc)和电解质提取速度J的相关系数是0. 8973,0. 9252及 0.8555，示高相关。这被认为是以下的理由所致。即，电解质在体内稳定存在，在组织液中 也基本上以一定浓度存在。因此，由于微细孔601大的情况中电解质的提取速度也增大，微 细孔601小的情况中电解质的提取速度也减�。缃庵侍崛∷俣菾 (ion)被认为反映微细孔 601的状态。另一方面，微细孔601的状态也被认为反映在葡萄糖的提取容易度，即葡萄糖 透过率P' (glc)中。因此，电解质提取速度J(ion)与葡萄糖透过率P' (glc)被认为示 高相关。由此结果，如果将电解质提取速度J近似而求出推定葡萄糖透过率P (glc)，则知 得到可代替实际葡萄糖透过率P' (glc)的值。本实施例中，分别对于提取时间60分钟，120分钟及180分钟的情况，求用于近似 电解质提取速度J的常数E及F而得到了下述的值。提取时间(分) 常数E 常数F6057684 -0. 874612039259 —1. 712618065571 -0. 75475-4.推定葡萄糖透过率P (glc)的计算使用得到的常数E及F的值与5-2.中得到的提取速度J，基于式(5)，计算了推定 葡萄糖透过率P (glc)。5-5.推定葡萄糖透过率的正确度的验证为了验证根据本实施例求出推定葡萄糖透过率P(glc)的正确度，比较了 5-4.中 得到的推定葡萄糖透过率p(glc)与5-1.中得到的实际葡萄糖透过率P' (glc)。比较结 果示于图28。图观是将使用实际葡萄糖透过率P' (glc)和上述式( 计算的葡萄糖透过率的 比的值设于横轴，纵轴设了该比的值的频度的直方图。如图28中所示，实际葡萄糖透过率 与推定葡萄糖透过率的比的值取接近于1的值的频度高，知实际葡萄糖透过率与推定葡萄 糖透过率近似。6.推定血糖AUC的计算接着，使用3.中得到的葡萄糖量M(glc)和5.中得到的推定葡萄糖透过率P(glc)，基于上述式(6)计算了推定血糖AUC(推定的AUC)。7.推定血糖AUC与采血血糖AUC的相关性的验证接着，参照图7，图9及图M 图观，说明了使用上述第2实施方式的测定方法实 际测定的推定血糖AUC与通过采血的采血血糖AUC的相关关系。再有，以下的说明中相关 系数R是表示纵轴的参数与横轴的参数的相关的强度的-1从1至的值，该绝对值越是接近 于1的值，示相关高。各点的全部在相同直线上时，相关系数成为1或-1。将通过实施例1得到的推定血糖AUC与采血血糖AUC的关系分别对于提取时间为 60分钟，120分钟及180分钟的情况标绘于坐标图，检查了这些的相关性。该坐标图示于图 四 图31。在图四 图31的坐标图中，横轴及纵轴分别示采血血糖AUC及推定血糖AUC。图四 图31如中所示，推定血糖AUC与采血血糖AUC的相关系数分别对于提取 时间为60分钟，120分钟及180分钟的情况，成为如下所述。提取时间(分)相关系数600.63111200. 8721800. 5574由此结果知，推定血糖AUC与采血血糖AUC在提取时间60分钟以上的情况中有非 常高的相关。由此结果提示了，可将根据第1及第2实施方式不进行采血而得到的推定血 糖AUC的值，代替通过进行采血计算的采血血糖AUC而采用。通过上述的实验证实了，根据第1及第2实施方式的测定方法，可测定有可代用通 过采血得到的血糖AUC的正确性的血糖AUC。8.由推定血糖AUC的提取时间的测定值的变动的验证接着，参照图32，根据第1及第2实施方式测定的血糖AUC的，对于对由提取时间 的测定值的变动的检查结果进行说明。再有，以下的说明中，将由X分钟的测定的采血血糖 AUC及由X分钟的提取的推定血糖AUC分别称为采血血糖AUC(X)及推定血糖AUC(X)。采血血糖AUC(ISO)是最常用的用于推定糖尿病患者的病态掌握或药物被活体摄 取的量的指标。从而，假设采血血糖AUC(180)是最理想的值的前提的下，检查了采血血糖 AUC (180)和采血血糖AUC (X (X = 30，60，90，120))的相关。如图32中所示，知60分钟以上 的采血血糖AUC与采血血糖AUC(180)相关高。另一方面，知不足60分钟的采血血糖AUC 与采血血糖AUC (180)的相关低。因此提示了，通过测定60分钟以上的血糖AUC，可测定与理想值的血糖AUC(ISO) 示高相关的值。基于这样的见解，认为在第1及第2实施方式的测定方法中，也通过经过60 分钟以上的提取步骤，可得到反映理想值的血糖AUC(ISO)的推定血糖AUC。如上，第1及第2实施方式的测定方法通过将该提取时间设定为60分钟以上，可 取得与理想值的采血血糖AUC(ISO)有高相关的推定血糖AUC，证实了推定血糖AUC (60) 推定血糖AUC(ISO)可代替采血血糖AUC(180)使用而作为糖尿病患者的病态掌握的指标。另外，如图四 图31所示，由于不受限于提取时间(60分钟，120分钟及180分 钟)，推定血糖AUC与采血血糖AUC的相关高，认为推定血糖AUC (60)，推定血糖AUC (120) 及推定血糖AUC(ISO)均可作为在糖尿病患者的病态掌握之时信赖性高的指标使用。另外， 对于理想值的采血血糖AUC (180)的相关，由于以采血血糖AUC (60)，采血血糖AUC (120)的顺序升高，认为作为实际中使用的指标，相比推定血糖AUC (60)，优选推定血糖AUC (120)的 值，用更优选推定血糖AUC (180)的值。实施例2使用纯水的单独检体的血糖AUC测定的例根据实施例1，在第2实施方式的测定方法中提示了，通过将提取时间设定于180 分钟以上，可取得与采血血糖AUC(180)相关高的推定血糖AUC(180)。从而，在与实施例1 中所示的测定条件相同测定条件下，对于提取时间设为180分钟而测定推定血糖AUC的实 施例2进行说明。与实施例1同样，使用纯水100 μ L而从检体提取组织液180分钟以上。另外，与 组织液的提取并行而每15分钟进行了采血。由提取的组织液，以与实施例1同样的要领测定了葡萄糖浓度C(glc)及电解质浓 度C(NaCl)。测定结果如下。葡萄糖浓度C(glc)5686ng/mL电解质浓度 C(NaCl)3. 6mM(mmol/L)再有，由从此检体采血而得到的血液计算采血血糖AUC(180)时，采血血糖 AUC (180)是 358mg · h/dL。由测定提取的组织液而得到的葡萄糖浓度C(glc)，基于式O)，计算了提取葡萄 糖量M(glc)。即，提取葡萄糖量M(glc)根据下述式(17)求出。 M (glc) = 5686 (ng) X 100/1000 (mL)... (17)从而得到比如M(glc) = 568. 6ng的结果。接着，由得到的电解质浓度C(NaCl)，基于式，计算了电解质提取速度J。即，电 解质提取速度J根据下述式(18)求出。J = 3. 6 (mM) X 100 X KT6(L) X 1/3(时间:h)... (18)从而得到比如J=L 2X 10_4(mmol/h)的结果。接着，由得到的电解质提取速度J，基于式(5)，计算了葡萄糖透过率P(glc)。再 有，本实施例中，作为式(5)中用到的常数E，用到成为13474的值，作为常数F用到成 为-0.0327的值。即，葡萄糖透过率P (glc)根据下述式(19)求出。P (glc) = 13474X 1. 2 X 1(T4 (mmol/h) _0· 0327…(19)从而，得到比如P(glc) = 1.58(10_6dL/h)的结果。接着，由上述中得到的提取葡萄糖量M(glc)和葡萄糖透过率P(glc)，基于式(6)， 计算了推定血糖AUC(推定的AUC)。即，推定血糖AUC根据下述式00)求出。推定的AUC = 568. 6(ng)/l. 58X10_6(dL/ti)··· (20)从而，得到比如推定的AUC = 360mg · h/dL的结果。知此值是与上述的采血血糖 AUC的测定值(358mg · h/dL)极其近似的值。因此，根据实施例2证实了，可测定可代用理 想值的采血血糖AUC (180)的，正确的血糖AUC。实施例3使用高渗透压水溶液的单独检体的血糖AUC测定的例对于根据第4实施方式涉及的测定方法计算血糖值的例进行了说明。提取时间设 为3小时(180分钟)，作为时间通知手段使用了附带警报器功能的计时器。实验中使用的 检体A的实测值如下。检体A的实测值
提取葡萄糖浓度4615ng/mlKCl 水溶液量100 μ 1提取电解质浓度2. 415mM曲线下面积(采血测定法)358mg · h/dl根据上述式0)，提取葡萄糖量M(glc)是，M(glc)=(提取葡萄糖浓度)X (KCl水溶液量)= 4615X100/1000= 461. 5ng ；另外，电解质(钠离子)提取速度J，根据上述式⑷求出为J =(电解质浓度)X (KCl水溶液量)/ (提取时间)= 2. 415 X IO3 X 100 X 1(Γ6/3= 8. 05 X 1(Γ2 ( μ mol/h)；接着，葡萄糖透过率P (glc)，根据上述式(5)求出为P (glc) = α X (电解质提取速度)+ β= 16. 987 X 8. 05 X 1(Γ2_0· 0948= 1. 27(1(Γ6 · dl/ti)。其中，比如α = 16. 987，β = _0. 0948的值，如图33中所示，与上述实施例2 (参 照图25 图27)同样，是通过实验得到的值。实施例3中葡萄糖透过率P(glc)和电解质 提取速度J的相关系数R是0. 8946，与上述实施例2同样示了高相关。接着，使用上述式(6)，计算了推定血糖AUC (推定的AUC)。推定的AUC = M(glc)/P (glc)= 461.5/(1.27X10—)= 363. 4(mg · h/dl)，如以上而计算的推定血糖AUC (推定的AUC)成为接近于通过以别的方式采血从曲 线下面积(通过采血的测定法)得到的检查值358mg · h/dl的值。实施例4使用高渗透压水溶液的多个检体的血糖AUC测定的例1.血糖AUC的测定此实施例4中，通过以下的实验说明作为提取介质使用高渗透压水溶液(KCl水溶 液)的例中，可推定提取时间60分钟的情况的糖负荷后60分钟的血糖时间曲线下面积(血 糖AUC (60))，及提取时间120分钟的情况的糖负荷后120分钟的血糖时间曲线下面积(血 糖AUC(120))。再有，图34 图39中，点记号的差异示检体的差异。实验方法如下。〔实验条件〕提取溶剂KC1水溶液70mM，90 μ L提取形态液体室(收集部件)提取面积5mmX10mm提取时间60分钟及120分钟检体数6人部位数22个部位
葡萄糖测定方法G0D萤光吸光法钠离子测定方法HPLC测定微细针阵列形状微细针长度=300 μ m,微细针数=305根穿刺速度6m/s血糖测定方法前腕SMBG值以15分钟的间隔测定血糖AUC测定方法由前腕SMBG值以梯形近似法计算首先，示血糖AUC (60)及血糖AUC (120)的计算方法。将采血血糖AUC (60)及采血 血糖AUC(120)与提取葡萄糖量M(glc)的关系显示于图34及图35。通过上述式(14)，在提取葡萄糖M(glc)和血糖AUC (X)(糖负荷后X分钟的血糖时 间曲线下面积)之间以下关系式成立。M(glc) = P (glc) X 血糖 AUC(X)... (21)从此葡萄糖透过率P (glc)和提取溶剂的电解质(钠离子)浓度求出的电解质提 取速度J呈现如图36及图37所示的相关性。使用此相关性，由上述式(5)，根据以下式0 及求60分钟提取时及120分 钟提取时的葡萄糖透过率P (glc)。60 分钟提取时P (glc) = α X J+ β ( α = 25.278，β = 0.8079)...(22)120 分钟提取时P (glc) = α X J+ β ( α = 29.471，β = -1. 1869)— (23)使用由上述式02)及式03)得到的葡萄糖透过率P(glc)，由上述式(6)推定了 60分钟提取时及120分钟提取时的推定血糖AUC (推定的AUC (60)及推定的AUC (120))。将得到的推定的AUC (60)及推定的AUC (120)与血糖值更得到采血血糖AUC (60) 及采血血糖AUC (120)的相关性示于图38及图39。根据此结果，由于可得到相关系数R = 0. 8163及0. 9308的高值，示可使用本方法 测定血糖AUC (60)，血糖AUC (120)。如参考，如图40中所示，在表示通过采血的180分钟的采血血糖AUC测定结果与 本发明的180分钟的推定血糖AUC的相关的坐标图中，相关系数R为0. 5925，表明两者之间
有高相关性。2.使用KCL水溶液时的显著性的验证接着，将使用第4实施方式涉及的测定方法而实际测定的推定血糖AUC(推定的 AUC)与通过采血的采血血糖AUC的相关关系使用着实施例说明。图40 42是用于说明本 发明的第4实施方式涉及的推定血糖AUC (推定的AUC)与通过采血的采血血糖AUC的相关 关系的图。验证了作为提取介质使用高渗透压水溶液(KCl水溶液)时的，推定血糖AUC的 推定精度。实验条件如下，实施例4中，将KCl溶剂的浓度调到了 70mM，溶剂渗透压调到了 140m0sm/Lo〔实验条件〕提取溶剂KC1水溶液70mM，90 μ L提取形态液体室(收集部件)提取面积5mmX10mm提取时间180分钟
检体(受试者)数7人部位数80个部位葡萄糖浓度测定方法G0D萤光吸光度法钠离子浓度测定方法离子层析微细针阵列形状微细针长度=300 μ m,微细针数=305根穿刺速度6m/s血糖测定方法前腕SMBG值以15分钟的间隔测定血糖AUC测定方法由前腕SMBG值以梯形近似法计算与上述实施例3同样，使用式(5)而从电解质提取速度J计算了葡萄糖透过率 p(glc)。由得到的葡萄糖透过率P(glc)及提取葡萄糖量M(glc)，使用上述式(6)计算了推 定血糖AUC (推定的AUC)。使用上述式(6)计算的推定血糖AUC与通过采血求出的采血血糖AUC的相关性示 于图40。如图40中所示，采血血糖AUC与推定血糖AUC有相关系数R = O. 5925左右的相 关性。其中，为了评价推定血糖AUC的精度，如下求了测定值与实际值的比r。r =推定血糖AUC/采血血糖AUC通过评价此!·以1为中心具有以何程度的分散，评价了上述测定系统的精度。图 40中r的分布如图41中所示。其中，除了代替高渗透压水溶液(KCl水溶液)而使用纯水以外，在与前述的实验 条件相同条件下进行了比较实验。基于此比较实验的结果，求了与图41相当的血糖AUC测 定误差的分布。结果如图42中所示。然后，通过F检验评价图41 (KCl水溶液)和图42(纯水)的测定误差的分布的差 异时，P < 0.005而观察到显著差异。即得知，使用高渗透压水溶液(KCl水溶液)作为提 取介质时，相比纯水构成的提取介质，血糖AUC的测定精度升高。3.由KCL水溶液浓度的葡萄糖透过率的变动的验证接着，通过将KCl水溶液的浓度(高渗透压水溶液中的辅助成分的浓度)进行各 种变更的提取实验验证了作为提取介质使用高渗透压水溶液(KC1水溶液)时，葡萄糖透过 率P (glc)以何程度升高。实验条件如下。〔实验条件〕提取溶剂=KCl水溶液(5，10，20，40，70mM)提取溶剂量90 μ L提取形态液体室(收集部件)提取面积5mmX10mm提取时间15分钟检体(受试者)数1人测定部位3个部位葡萄糖测定方法G0D萤光吸光度法钠离子测定方法离子层析微细针阵列形状微细针长度=300 μ m,微细针数=305根
穿刺速度6m/s血糖测定方法将前腕SMBG值以15分钟的间隔测定血糖AUC测定方法由前腕SMBG值以梯形近似法计算由根据以上的实验得到的，提取葡萄糖量M(glc)和采血血糖AUC，基于上述式(6) 计算了实际葡萄糖透过率P' (glc)。而且，计算将使用各提取溶剂时的实际葡萄糖透过率 P' (glc)用作为提取介质使用纯水而提取时的实际葡萄糖透过率P' (glc)标准化的值的 葡萄糖透过率比(P' (glc)比)，评价了高渗透压水溶液中的辅助成分(氯化钾)的浓度 的关系。结果如图43中所示。图43中，点记号的差异示部位的差异。根据图43，提取介质中，使作为辅助成分的KCl浓度为5mM以上，则介质的渗透压 升高，得知葡萄糖透过率相比使用纯水构成的提取介质而提取的情况升高。图43中辅助成 分(氯化钾)的浓度与渗透压的关系如下。氯化钾浓度 渗透压5mM10m0sm/lIOmM20m0sm/l20mM40m0sm/l40mM80m0sm/l70mM140m0sm/l作为使用渗透压比纯水高的高渗透压水溶液(氯化钾水溶液)作为提取介质时， 葡萄糖透过率升高的理由，考虑下述者。即，纯水介质的情况，由于提取介质(纯水)的盐 浓度相对体内的盐浓度低，水的渗透压对于体内而收集储液池(收容提取介质的部分)内 的一方低，水分子向活体内方向扩散，产生降低葡萄糖的透过率的负方向的溶剂流。另一方 面，使用高渗透压水溶液(氯化钾水溶液)作为提取介质，则收集储液池内的盐浓度升高， 由于所述收集储液池内KCl水溶液的渗透压升高，负方向的溶剂流消失，认为由此从活体 向提取介质的葡萄糖透过率升高。4.辅助成分的种类及浓度的检查通过使高渗透压水溶液(氯化钾水溶液)中含有的辅助成分(氯化钾)的浓度变 更的上述3.提示了，通过使用渗透压比纯水高的高渗透压水溶液(氯化钾水溶液)作为提 取介质，葡萄糖透过率升高。从而与4.中，3.中所示的测定条件相同的测定条件下，进行使 高渗透压水溶液中含有的辅助成分的种类及浓度变更的提取实验，用高渗透压水溶液作为 提取介质时，对于相比用纯水的情况，可使葡萄糖透过率升高的条件进行了更详细的检查。具体而言，作为高渗透压水溶液的辅助成分，除了上述1.及2.中使用的氯化钾 (KCl)之外，使用了甘氨酸及尿素。另外，作为各高渗透压水溶液中的辅助成分的浓度，以相 比确认了使葡萄糖透过率升高的效果的5mM，更低的浓度为中心进行了实验。实验条件如 下。〔实验条件1〕辅助成分尿素辅助成分浓度0.3,0. 6,1.3,2. 5,5 (mM)〔实验条件2〕辅助成分氯化钾
辅助成分浓度0.4,0. 7,1.4,2. 9,5. 7 (mM)〔实验条件3〕辅助成分甘氨酸辅助成分浓度0.2,0. 3,0. 7,1. 3,2. 7 (mM)再有，其他实验条件与上述3.同样。由根据以上的实验得到的，提取葡萄糖量M(glc)与血糖AUC，使用上述式(6)计算 了实际葡萄糖透过率P' (glc)。而且，与上述3.同样计算葡萄糖透过率比P' (glc)比， 评价了葡萄糖透过率比P' (glc)比和提取介质(高渗透压水溶液)中的辅助成分的浓度 的关系。从实验条件1(尿素)，实验条件2 (氯化钾)及实验条件3 (甘氨酸)得到的结果 分别如图44 图46中所示。根据图44得知，使高渗透压水溶液(提取介质)中的尿素浓度达到0. 3mM以上， 则相比使用纯水构成的提取介质而提取的情况，葡萄糖透过率升高。另外，由于P' (glc) 比升高至尿素浓度达到0. 3mM 5mM，提示尿素浓度设为5mM以上时P' (glc)比也升高。根据图45得知，使高渗透压水溶液(提取介质)中的氯化钾浓度达到0.4mM以上， 则相比使用纯水构成的提取介质而提取的情况，葡萄糖透过率升高。另外，P' (glc)比升 高至氯化钾浓度达到0. 4mM 5. 7mM。因此得知，使氯化钾浓度升高，则随着辅助成分(氯 化钾)的浓度升高，葡萄糖透过率升高。根据图46得知，使高渗透压水溶液(提取介质)中的甘氨酸浓度达到0. 2mM以上， 则相比作为提取介质使用纯水而提取的情况，葡萄糖透过率升高。另外，由于P' (glc)比 升高至甘氨酸浓度达到0. 2mM 2. 7mM,与上述3.同样提示，使甘氨酸浓度设为2. 5mM以上 时，葡萄糖透过率也升高。由于这些结果确认了，4.中，作为辅助成分，使用氯化钾以外的尿素及甘氨酸时， 也相比作为提取介质使用纯水而提取的情况，葡萄糖透过率升高。另外确认了，作为辅助成 分的浓度，由至少0. 2mM以上的浓度得到使葡萄糖透过率升高的效果。另外，考虑上述3.的 结果，由于使氯化钾的浓度升高至0. 4mM 20mM左右的情况中，葡萄糖透过率单调升高，证 实了高渗透压水溶液(KCl水溶液)的渗透压(浓度)的升高导致从活体向提取介质的葡 萄糖透过率升高。根据以上，在第3及第4实施方式的测定方法中证实了，通过使用有比纯水高的渗 透压的高渗透压水溶液作为提取介质，可促进测定对象成分(葡萄糖)的向高渗透压水溶 液的移动。另外证实了，通过用选自氯化钾，甘氨酸，及尿素的至少1种作为辅助成分的同 时，将此辅助成分的浓度设为0. 2mM以上，可促进组织液的向高渗透压水溶液的移动。再有，本次公开的实施方式及实施例在全部方面是例示，而不应被认为是限制。本 发明的范围不由上述的实施方式及实施例的说明表示，而是由权利要求表示，而且包括与 权利要求有均等的含义及范围内的全部变更。例如，上述的实施方式示了测定血糖AUC的例，但只要是与测定对象成分的活体 内浓度的组织液的提取时间对应的累加值，则不限于AUC，也可测定别的值。例如，也可求组 织液的提取时间内血中葡萄糖浓度的平均值。另外，实施例1及2中，作为收集部件示了使用纯水的例，但使用凝胶也得到同样 的效果是不言自明的。纯水或凝胶的容积有可蓄积提取60分钟以上的组织液中的葡萄糖的体积即可，那样的凝胶或纯水的体积可如下求。求多个受试者的葡萄糖透过率P (glc)时，葡萄糖透过率P (glc)的最大值往高了 估推定为5X 10_6dL/h。另外，由180分钟的组织液的提取的血糖AUC的最大值往高了估推 定为800mg .h/dL。根据式(6)，由于是M(glc)=推定的AUCXP (glc)，对应于提取时间180 分钟的最大葡萄糖提取量(Mmax)计算为，Mmax = 5 X 1(T6 (dl/h) X 800 (mg) = 4· 0 μ g。由于保持此最大葡萄糖提取量的凝胶中的葡萄糖浓度成为正�？崭故毖侵� (80mg/dL)的5% (Cmax)以下的凝胶的体积V是，Mmax/Cmax，成为4. 0μ g/ (80mg/dLX0. 05) = 1. 0Χ10Λο因此，提取时间180分钟的情况的凝胶的体积优选100 μ L以上。另外，提取时间 120分钟时，凝胶的体积优选100 μ LX 2/3 = 66 μ L以上。同样，提取时间60分钟时，优选 100 μ LX 1/3 = 33μ L 以上。另外，上述第3及第4实施方式中，作为用于升高提取介质(高渗透压水溶液)的 渗透压的辅助成分使用了氯化钾(KCl)，尿素及甘氨酸，此外，通过用其他中性分子溶剂或， 其他电解质溶剂也可使渗透压升高，从而可得到同样的效果。另外，上述第1 第4实施方式中示了不施加电而通过被动扩散从皮肤提取组织 液的例，但无需考虑由长时间的组织液的提取的向受试者的负担时，使用离子渗入法而通 过电力提取组织液也可。此时，也经60分钟以上的长时间而进行提取时，无需为了以短时 间进行提取而施加强电压。由此可小型化施加电的装置。另外，上述第1 第4实施方式中示了，由穿刺工具400形成微细孔601而促进组 织液的提取之后进行组织液的提取的例，但本发明不限于此，也可通过除去皮肤的角质的 所谓的剥离等而促进组织液的提取。另外，也可使用促进从皮肤的测定对象物(葡萄糖) 的透过的增强剂而促进组织液的提取。作为增强剂，可使用例如醇或表面活性剂。增强剂 也可直接涂布于皮肤，使包含在凝胶中也可。而且，也优选利用超声波促进测定对象成分的 提取。具体而言通过使20kHz左右的低频率超声波作用于皮肤，将表皮组织的屏障功能削 弱而可促进组织液的提取。另外，上述第1 第4实施方式中，为了反映微细孔601的开启情况，示了使用电 解质(NaCl)的提取速度校正提取葡萄糖量的值而计算推定血糖AUC的例，但本发明不限于 此，只要是可使微细孔的开启情况一定，则无使用电解质的提取速度校正提取葡萄糖量的 值的必要。此时，可将提取葡萄糖量的值作为推定血糖AUC使用。另外，上述第1 第4实施方式中，为了反映微细孔601的开启情况，示了测定电 解质(NaCl)的提取速度的例，但本发明不限于此，只要是组织液中富含的物质，也可不是 电解质。另外，上述第1及第3实施方式中，作为凝胶301及凝胶801，示了分别使用聚乙烯 醇构成的凝胶的例，但本发明不限于此，也可使用纤维素或聚丙烯酸构成的凝胶。另外，上述第1及第2实施方式中示了作为与糖尿病患者的病态掌握中用到的指 标之一的采血血糖AUC相当的值计算推定血糖AUC的例，但本发明不限于此，将使用本发明 的测定方法得到值用于其他疾病的病态掌握也可。另外，上述第1及第2实施方式中示了，测定组织液中的葡萄糖量的例，但本发明不限于此，也可测定组织液中含的葡萄糖以外的物质的量。作为根据本发明测定的物质，可 举出例如，生物化学成分或施用于受试者的药剂等。作为生物化学成分，可举出生物化学成 分的一种的蛋白白蛋白，珠蛋白及酶等。另外，作为蛋白以外的生物化学成分，可举出肌 酸酐，肌酸，尿酸，氨基酸，果糖，半乳糖，戊糖，糖原，乳酸，丙酮酸及酮体等。另外，作为药 剂，可举出洋地黄制剂，茶碱，心律失常用剂，抗癫痫剂，氨基酸糖体抗生物质，糖肽系抗生 物质，抗血栓剂及免疫抑制剂等。另外，上述第1实施方式中示了，将计算的推定血糖AUC的值直接表示于表示部1 的例，但本发明不限于此，将计算的推定血糖AUC的值除以提取时间的值表示于表示部1也 可。由此，由于可得到每单位时间的推定血糖AUC，在提取时间不同时，也可容易比较它们的值。另外，上述实施方式中示了，形成微细孔，在形成微细孔的皮肤上贴附凝胶的例， 但本发明不限于此，也可使用图47中所示的收集储液池1000。具体而言，使用将微细针基 片1001与凝胶1002作为一体，设置从微细针IOOla的尖端通入凝胶1002的中空部1003的 收集储液池1000。使此收集储液池1000与皮肤600接触，如图47中所示的微细针IOOla 贯通皮肤600的表皮的状态下放置收集储液池1000，则通过皮肤600内的组织液毛细管现 象，从微细针IOOla的尖端通入中空部1003而向凝胶1002移动，在凝胶1002内蓄积。另外，上述实施方式中，虽然根据GOD酶测定法，根据葡萄糖氧化时的电流值定量 葡萄糖，但在GOD和过氧化物酶共存的反应系统中使葡萄糖作用，基于染料的呈色的变化 定量葡萄糖的构成也可，而且，将由葡萄糖的吸光效率高的特异波长的光照射到凝胶或纯 水而测量吸光度，基于吸光度定量葡萄糖的构成也可。另外，上述实施方式中，虽然以将提取的组织液中含的葡萄糖在凝胶在中蓄积，定 量蓄积的葡萄糖的方式构成，但以将提取的组织液中的葡萄糖变换为其他化学物质而蓄 积，定量变换的化学物质的方式构成也可。例如，可举出使凝胶301含葡萄糖氧化酶(GOD) 和过氧化物酶(POD)和色原体的方式构成的例。如此构成则凝胶301内发生下述的化学反 应，凝胶301变色。葡萄糖+Α+Η20 — (GOD由的催化剂)一葡萄糖酸+ H2O2+色原体一(POD由的催化剂)一2H20+色原体(氧化·发色)由于色原体的发色程度与葡萄糖的量成比例，通过指定时间的组织液的提取之后 使凝胶经历比色定量，可定量葡萄糖量。
权利要求
1.活体内成分的测定方法，其取得组织液中的关于测定对象成分的量的值，所述组织 液从进行了促进组织液提取处理的活体提取60分钟以上而得到。
2.权利要求1所述的活体内成分的测定方法，其中所述促进从上述活体的组织液提取处理通过在活体的皮肤形成微细孔来进行，且上述组织液的提取经上述微细孔形成的皮肤进行。
3.权利要求1或2所述的活体内成分的测定方法，其中从上述活体的组织液的提取通 过在包括渗透压比纯水高的高渗透压水溶液的提取介质中提取组织液来进行。
4.权利要求3所述的活体内成分的测定方法，其中上述高渗透压水溶液在上述组织液 中包括连同上述测定对象成分含有的与上述测定对象成分不同的辅助成分。
5.权利要求4所述的活体内成分的测定方法，其中上述辅助成分是选自氯化钾，甘氨 酸，及尿素的至少1种。
6.权利要求5所述的活体内成分的测定方法，其中上述高渗透压水溶液中的上述辅助 成分的浓度是0. 2mmol/L以上。
7.权利要求1 6中任一项所述的活体内成分的测定方法，其中提取上述组织液的时 间是120分钟以上。
8.权利要求1 7中任一项所述的活体内成分的测定方法，其中提取上述组织液的时 间是180分钟以上。
9.权利要求1 8中任一项所述的活体内成分的测定方法，其中上述测定对象成分是葡萄糖。
10.权利要求1 9中任一项所述的活体内成分的测定方法，其再基于关于上述测定对 象成分的量的值，取得与活体内测定对象成分浓度的组织液的提取时间对应的累加值。
11.权利要求10所述的活体内成分的测定方法，其中上述累加值基于关于上述测定对 象成分的量的值与提取的组织液中含的电解质的量取得。
12.权利要求10或11所述的活体内成分的测定方法，其中上述累加值是与上述测定对 象成分的血中浓度-时间曲线下面积(AUC)相当的值。
13.权利要求12所述的活体内成分的测定方法，其再取得与上述测定对象成分的AUC 相当的值除以从活体提取上述组织液的时间的值。
14.权利要求1 13中任一项所述的活体内成分的测定方法，其中从上述组织液的提 取开始经过60分钟以上的指定时间时通知提取的结束。
15.活体内成分测定装置，其具备设置部，其用于设置可蓄积组织液中的测定对象成分的收集部件，所述组织液从进行 了促进组织液提取处理的活体提取60分钟以上而得到，及检测部，其用于取得关于上述测定对象成分的量的值，所述测定对象成分由设置于上 述设置部的上述收集部件蓄积。
16.权利要求15所述的活体内成分测定装置，其中上述测定对象成分是葡萄糖。
17.权利要求15或16所述的活体内成分测定装置，其再具备解析部，所述解析部基于 关于上述测定对象成分的量的值，取得与活体内上述测定对象成分浓度的组织液的提取时 间对应的累加值。
18.权利要求17所述的活体内成分测定装置，其中上述累加值是与测定对象成分的血中浓度-时间曲线下面积(AUC)相当的值。
19.收集部件，其为用于从组织液的提取被促进的活体提取组织液，并取得提取的组织 液中的关于测定对象成分的量的值的活体内成分测定装置中用到的收集部件，其包括可 蓄积从活体提取60分钟以上的组织液中的上述测定对象成分的提取介质。
20.权利要求19所述的收集部件，其中上述提取介质是凝胶。
21.权利要求20所述的收集部件，其中上述凝胶包括相比纯水渗透压高的高渗透压水 溶液。
22.权利要求21所述的收集部件，其中上述高渗透压水溶液在上述组织液中包括连同 上述测定对象成分含有的上述测定对象成分以外的辅助成分。
23.权利要求22所述的收集部件，其中上述辅助成分是选自氯化钾，甘氨酸，及尿素的 至少1种。
24.权利要求23所述的收集部件，其中上述高渗透压水溶液中的上述辅助成分的浓度 是 0. 2mmol/L 以上。
25.活体内成分的测定方法，其将从进行了促进组织液提取处理的活体提取60分钟以上的组织液中的测定对象成分 变换为与上述测定对象成分不同的蓄积用成分而蓄积，及基于蓄积的上述蓄积用成分的量，取得关于上述测定对象成分的量的值。
26.用于活体内成分测定的数据处理方法，其取得从进行了促进组织液提取处理的活体提取60分钟以上的组织液中的关于测定对 象成分的量的值，及基于取得的值，取得与活体内测定对象成分浓度的组织液的提取时间对应的累加值。
27.权利要求26所述的用于活体内成分测定的数据处理方法，其中上述累加值是测定 对象成分的血中浓度_时间曲线下面积(AUC)。
全文摘要
提供使掌握活体内测定对象成分的高浓度状态的持续的程度成为可能的活体内成分的测定方法。此活体内成分的测定方法取得从进行了促进组织液提取处理的活体提取60分钟以上的组织液中的关于测定对象成分的量的值。
文档编号G01N27/06GK102105103SQ200980129269
公开日2011年6月22日 申请日期2009年7月31日 优先权日2008年7月31日
发明者冈田正规 申请人:希森美康株式会社
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
