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专利名称：一种复杂基质水体样品中雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚a的共检测方法
技术领域：
本发明涉及一种水环境中有机污染物的检测技术领域，特别是涉及复杂基质水体样品中雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚A的提取、净化和仪器检测方法。
背景技术：
近年来,天然与合成雌激素雌酮(Estrone, El)、17 β-雌二醇(17 β-Estradiol,E2)、17 α -乙炔基雌二醇(17 a -Ethinyl Estradiol, EE2)，以及类雌激素活性物质壬基酚(Nonylphenol, NP)、辛基酌· (Octylphenol, 0P)双酌· A (BisphenolA, BPA)作为典型的环境中内分泌干扰物引起了学术界的广泛关注。相关调查研究表明，水环境中ng/L浓度水平的雌激素足以导致水生生物的雌性化。而由人和哺乳动物的尿液和粪便排放的雌激素以及制造奶瓶等食具、电子器件的包覆材料、纸水杯、金属饮料罐的保护涂层、食品包装材料等产生的类雌激素物质壬基酚、辛基酚和双酚A等的排放是不可避免的。生活污水的集中处理和排放以及规模化畜禽养殖，是造成河流或土壤环境中雌激素污染的最重要原因。欧美等国对多家污水处理厂雌激素浓度及去除效率的调查结果显示，在污水处理厂出水及受纳水体中残留着ng/L浓度水平的雌激素。因此，调查和研究污水和畜禽养殖废水中的雌激素及类雌激素物质浓度对于该类物质的控制和去除具有重要意义。但这些废水基质组成复杂，而雌激素又痕量存在，这对样品前处理提出了较高的要求。近年来，痕量有机物的仪器检测技术有了很大的提高，如气相色谱-质谱联用(GC/MS)、气相色谱-串联质谱联用(GC/MS/MS)、液相色谱-质谱联用(LC/MS)、液相色谱-串联质谱联用(LC/MS/MS)等，具有较高的灵敏度和精确度。然而，对于实际环境样品，由于基质干扰作用，使分析方法的精确性和精密性大大降低。如何将复杂水样中痕量存在的雌激素富集并净化，成了水环境中雌激素分析的一个瓶颈。因次，建立回收率高、重现性好的适用于分析复杂基质水体中痕量存在的雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚A的前处理方法是十分必要的。

发明内容
本发明的目的是针对复杂基质水体样品中雌激素痕量存在、基质干扰大、前处理技术难度大等问题，拟开发一种回收率高、灵敏度高、准确、快速的分析技术，实现对雌酮、17 β -雌二醇、雌三醇、17 α -乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和双酚A的定量测定。本发明的技术方案如下—种检测复杂基质水体样品中痕量雌酮、17 β_雌二醇、雌三醇、17 α-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和双酚A的定量测定方法。其特征在于该方法包括如下部分(I)HLB 柱富集水样采用GF/F玻璃纤维滤膜进行过滤，并用盐酸调节pH为3 ;利用固相萃取装置活化Waters公司的HLB固相萃取柱(200mg,6cc),活化的顺序为5mL色谱纯乙酸乙酯、5mL色谱纯甲醇及IOmL超纯水，流速为lmL/min ;采用已活化的固相萃取柱对水样进行固相萃取富集，控制流速为3mL/min ；富集完成后，首先用40%甲醇水溶液淋洗，再用甲醇/氨/水溶液淋洗，所述甲醇/氨/水溶液v/V/V= 10/2/88 ;淋洗结束后真空抽干lOmin，然后用甲醇洗脱，并将洗脱 液氮吹干。(2)Florisil 柱净化用正己烷/ 二氯甲烷=3/1 (v/v)溶液重新溶解氮吹干后的残渣，然后通过预先用正己烧活化好的Florisil固相萃取柱(500mg,6cc),再用正己烧/ 二氯甲烧=3/1 (v/v)淋洗，最后用丙酮/ 二氯甲烷=2/8 (v/v)为洗脱剂进行洗脱，洗脱液用氮气吹干；残渣用甲醇定容，漩涡混合后过O. 22 μ m的尼龙滤头待测。(3)液相色谱-串联质谱分析液相色谱-串联质谱联用仪器为Agilent 1100高效液相色谱系统，包括四元输液泵，美国Agilent公司的自动进样器；3200QTRAP型液相色谱/串联质谱仪，配有电喷雾离子化源(ESI)以及Analyst I. 4. I数据处理软件；色谱柱Nova_PakC18, 3. 9mmX 150mmX 4 μ m, Waters 公司；离子源电喷雾离子化源(ESI)，负离子方式检测；离子喷射电压-4500V ;温度450°C;源内气体1(GS1)，N2，压力45psi ;源内气体2(GS2)，N2，压力45psi ;气帘气体为N2，压力20psi ;扫描方式为多重反应监测(MRM);碰撞气N2的压力为Medium ;HPLC流动相梯度洗脱条件如表I所示表IHPLC流动相梯度洗脱条件
时间流速乙腈氨水(1%。)甲醇
minpL/min%%%
00.006507.585.07.5
10.206507.585.07.5
21.20 650 10.0 80.0 10.0
32.0065015.070.015.0
43.0065049.02.049.0
56.1065050.0o.O50.0
66.206507.585.07.5
7_IOOO_650_TJ_85 _ 7.5(4)标准曲线的绘制，以外标法进行定量测定所述的外标法标准曲线的绘制利用分析天平准确称量4种雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚A，溶于色谱纯乙腈内，配置成系列浓度的标准溶液，采用液相色谱-串联质谱联用进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到标准曲线，用于测定样品中分析物的量。(5)样品及回收率的测定采集某污水处理厂水样，按步骤I对水样中的目标化合物进行富集，再按步骤2进行提取物的净化，然后用液相色谱-串联质谱联用检测，并与步骤4得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测水体样品中雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚A的含量。采用同样的污水样品，按50ng/L的添加量加入标准溶液，进行上述预处理并测定雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚A含量，按照下式进行回收率计算
权利要求
1. 一种复杂基质水体样品中雌酮、170-雌二醇、雌三醇、17a-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和双酚A的共检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 (1)HLB柱富集 水样采用GF/F玻璃纤维滤膜进行过滤，并用盐酸调节pH为3 ;利用固相萃取装置活化Waters公司的HLB固相萃取柱，活化的顺序为5mL色谱纯乙酸乙酯、5mL色谱纯甲醇及IOmL超纯水,流速为lmL/min ;采用已活化的固相萃取柱对水样进行固相萃取富集,控制流速为3mL/min ;富集完成后，首先用6mL 40%甲醇水溶液淋洗，再用6mL甲醇/氨/水溶液淋洗，所述甲醇/氨/水溶液v/V/V = 10/2/88 ;淋洗结束后真空抽干lOmin，然后用6mL甲醇洗脱，并将洗脱液氮吹干；(2)Florisil柱净化 用6mL正己烷/ 二氯甲烷=3/1 (v/v)溶液重新溶解氮吹干后的残渣，然后通过预先用正己烧活化好的Waters公司的Florisil固相萃取柱,再用6mL正己烧/二氯甲烧=3/1 (v/v)淋洗，最后用6mL丙酮/ 二氯甲烷=2/8 (v/v)为洗脱剂进行洗脱，洗脱液用氮气吹干；残渣用0. 5mL甲醇定容，漩涡混合后过0. 22 y m的尼龙滤头待测； (3)液相色谱-串联质谱分析 液相色谱-串联质谱联用仪器为=Agilent 1100高效液相色谱系统，包括四元输液泵，美国Agilent公司的自动进样器；3200QTRAP型液相色谱/串联质谱仪，配有电喷雾离子化源(ESI)以及Analyst I. 4. I数据处理软件； 色谱柱Nova_Pak C18, 3. 9mmX 150mmX4 u m,, Waters公司；离子源电喷雾离子化源(ESI)，负离子方式检测；离子喷射电压-4500V ;温度4500C ;源内气体I (GSl)，N2，压力45psi ;源内气体2(GS2)，N2，压力45psi ;气帘气体为N2，压力20psi ;扫描方式为多重反应监测(MRM);碰撞气N2的压力为Medium ;HPLC流动相梯度洗脱条件如表I所示 表I HPLC流动相梯度洗脱条件
全文摘要
本发明涉及一种水环境中内分泌干扰物的检测技术，特别是涉及一种采用液相色谱-串联质谱联用技术对复杂基质水体样品中雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和双酚A定量分析的技术。本方法将采集好的水体样品，采用HLB固相萃取小柱富集并用甲醇洗脱，再将洗脱液氮吹干，用Florisil净化，最后利用液相色谱-串联质谱联用分析。该方法环境友好、易于操作、且回收率较高，能够快速分析复杂基质水体样品中痕量存在的雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇、壬基酚、辛基酚和双酚A。
文档编号G01N30/88GK102636611SQ20121012755
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月27日 优先权日2012年4月27日
发明者刘晓薇, 史江红, 吴唯, 张晖, 薄婷, 贾彦舶, 陈庆彩 申请人:北京师范大学