左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物及其应用。具体地，提供了血管生成素在诊断左室射血分数保留的心力衰竭中的用途、包括检测血管生成素血清含量试剂的试剂盒、以及具有检测血管生成素含量试剂的芯片或阵列。本发明证实了血管生成素可作为左室射血分数保留的心力衰竭的诊断标志物，且其特异性高、灵敏度好、诊断结果准确可靠、方法简便易行，因此具有重要的临床应用价值。
【专利说明】左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物及其应用
[0001]【【技术领域】】
本发明涉及临床诊断【技术领域】，具体地说，涉及左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物及其应用。
[0002]【【背景技术】】
心力衰竭(heart failure, HF)是各类心脏疾病发展的终末阶段，严重影响人群健康。随着认识的不断加深，人们发现左室射血分数保留的心力衰竭(HFPEF，左室射血分数^ 50%)患者数量庞大，约占心力衰竭患者总数的一半，且死亡率与左室射血分数降低的心力衰竭(HFREF，左室射血分数< 40%)相当。另外，还有一类心衰患者左室射血分数介于两者之间(亦可称HFPEF亚分类，41%-49%)。然而，目前人们对射血分数无明显降低的心衰患者认识非常有限，其诊断和治疗措施亟待发展。
[0003]为了使左室射血分数保留的心力衰竭的诊断更加客观化，提高诊断的一致性和准确度，寻找左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物、建立有效的检测方法是十分必要的。生物标志物指可供客观测定和评价的普通生理或病理或治疗过程中的某种特征性的生化指标，通过对它的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。生物标志物的化学本质可以是DNA、RNA、蛋白或代谢物，一般从体液获得。将生物标志物应用于左室射血分数保留的心力衰竭，可以 有效辅助当前的诊断方法，减少不确定因素，降低误诊率并有助于指导用药和康复过程。
[0004]吉林大学2009年硕士学位论文《激活素A在心力衰竭患者血清中的表达水平变化及其临床意义》，作者通过检测心力衰竭患者血清中ACT-A的表达水平，探讨了其表达水平变化及临床意义，结果显示ACT-A在心力衰竭患者血清中呈现高表达状态，其表达水平与心力衰竭程度呈正相关。然而，上述检测血清激活素A水平的方法仍然不能用于左室射血分数保留的心力衰竭的诊断，而且以单一的生物标志物作为诊断标准，其诊断误差相对较大，而使用多个生物标志物进行联合诊断将显著提高准确率。
[0005]中国专利文献CN200910201045.4，公开了一种用于诊断慢性舒张性心力衰竭的试剂盒，该发明提供了一种具有预测慢性舒张性心力衰竭功能的试剂盒，其特征在于，由细胞因子及其酶标抗体，PH9.6碳酸盐缓冲液，PH7.4磷酸盐缓冲液，血清蛋白稀释液，终止液，四甲基联苯胺底物溶液，正常人血清和阳性对照血清组成，所述的细胞因子是包括生长因子、炎症相关因子、神经元营养因子，以及凝血因子等多种细胞因子类别在内的17种细胞因子。虽然该文献公开了血管生成素可用于诊断慢性舒张性心力衰竭，但是该文献并未记载血管生成素的具体结构，本领域技术人员并不能确定所述的血管生成素究竟是何种物质，且该文献所用于筛选上调或下调细胞因子的样本量很�。杂诒玖煊蚣际跞嗽倍裕膊荒苋范ㄕ庑┫赴蜃佑糜谡锒下允嬲判孕牧λソ叩目尚哦龋虼耍梦南资导噬喜⒚挥懈鲅苌伤氐�17种细胞因子能用于诊断慢性舒张性心力衰竭的启示。
[0006]血液中细胞因子众多，为筛选疾病诊断的生物标志物，需要对该疾病的发病机制和生理生化机制有透彻的了解，以指导缩小筛选范围，减少盲目性，增加实验的可行性。
[0007]总之，仍有必要寻找更多的诊断和评估左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物，同时还应保证生物标志物良好的灵敏度和特异度。
[0008]【
【发明内容】
】
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供血管生成素的一种用途。
[0009]本发明的再一的目的是，提供一种用于诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂盒。
[0010]本发明的另一的目的是，提供所述的用于诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂盒的用途。
[0011]本发明的第四个目的是，提供一种芯片或阵列。
[0012]本发明的第五个目的是，提供所述的芯片或阵列的用途。
[0013]为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是:
血管生成素的用途，用于制备诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂或试剂盒。
[0014]所述的血管生成素包含SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列。
[0015]为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是:
一种用于诊断左室射 血分数保留的心力衰竭的试剂盒，所述的试剂盒包括检测血管生成素的血清含量的试剂。
[0016]所述的血管生成素包含SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列。
[0017]为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是:
如上所述的试剂盒的用途，用于制备诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂或试剂盒。
[0018]为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是:
一种芯片或阵列，所述的芯片或阵列上具有检测血管生成素含量的试剂。
[0019]为实现上述第五个目的，本发明采取的技术方案是:
如上所述的芯片或阵列的用途，其特征在于，用于制备诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂或试剂盒。
[0020]需要说明的是，如本文所用，所述的血管生成素属于促血管生成因子，包含147个氨基酸组成(SEQ ID N0.1)的分泌型碱性蛋白，该蛋白的PubMed编号为NP_001136.1，网址:http://www.ncb1.nlm.nih.gov/protein/NP_001136.1。
[0021]本发明优点在于:本发明从众多细胞因子中筛选出了能用于诊断左室射血分数保留的心力衰竭的生物标志物——血管生成素，其特异性高，灵敏度好，诊断结果准确可靠，且方法简便易行，因此具有重要的临床应用价值。
[0022]【【专利附图】
【附图说明】】
附图1是聚类分析结果。
[0023]附图2中，图2A是进一步筛选验证实验中HFPEF患者组和16名健康对照组的血管生成素测定结果，图2B是进一步筛选验证实验中HFPEF患者亚组的血管生成素测定结果。
[0024]附图3是血管生成素和NT-proBNP水平进行相关性分析结果。
[0025]附图4是受试者工作特征(ROC)曲线分析结果。
[0026]【【具体实施方式】】
下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0027]实施例1一、研究方法
首先依据2008年欧洲心脏病学会指南标准入选3名HFPEF患者、3名单纯高血压患者、3名健康对照，检测获得各研究对象基本临床特征。
[0028]然后利用人细胞因子抗体芯片(购于美国RayBiotech公司)检测上述9名研究对象血清中507种细胞因子表达水平，初步筛选存在表达差异的细胞因子。
[0029]再在初步筛选的基础上扩大研究对象数量，进一步入选16名HFPEF患者及16名健康对照，通过检测这16名HFPEF患者及16名健康对照血清，证实相关细胞因子的表达差异。同时，对研究对象跟踪随访2年，探讨相关细胞因子在疾病诊断和预后评估中的作用。
[0030]二、研究结果 1、患者基础资料
表1是用于初步筛选差异表达细胞因子的9名研究对象基本临床特征。
[0031]表1.用于初步筛选的患者基础资料
【权利要求】
1.血管生成素的用途，其特征在于，用于制备诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂或试剂盒。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的血管生成素包含SEQID N0.1所示的氨基酸序列。
3.一种用于诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括检测血管生成素的血清含量的试剂。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的血管生成素包含SEQID N0.1所示的氨基酸序列。
5.权利要求4所述的试剂盒的用途，其特征在于，用于制备诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂或试剂盒。
6.一种芯片或阵列，其特征在于，所述的芯片或阵列上具有检测血管生成素含量的试剂。
7.权利要求6所述的芯片或阵列的用途，其特征在于，用于制备诊断左室射血分数保留的心力衰竭的试剂或试剂盒。
【文档编号】G01N33/68GK103954769SQ201410167209
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年4月24日 优先权日:2014年4月24日
【发明者】姜红, 张磊, 虞莹, 邹云增 申请人:复旦大学附属中山医院
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