专利名称：牛奶中体细胞数的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种计量牛奶中体细胞数量的方法，具体是一种通过确定牛奶中白细胞数量从而确定体细胞数量的方法。
背景技术：
在农业上，牛奶中体细胞95%以上都是白细胞，精确的检测牛奶中体细胞数量，已被广泛作为乳房炎感染的测定方法。到目前为止，CMT法是最普遍的检测方法。然而，CMT法劳动量大，存在使用者的主观判断，假阴性量高到无法接受。此外还有自动细胞计数技术，在该技术中，样品被稀释，不同大小和形状的细胞通过细胞流得到计数，基于流体技术的仪器价格昂贵，且需要经过专业训练的人员在实验室条件下操作。应用毫微技术的分析仪体积比传统的技术仪器小得多，但是该技术还处于发展阶段。同时，分析仪所需的复杂的机械泵及瓣膜系统使得生产者很难提供价格低廉的设备。目前还没有合适的方法检测由临床型 乳房炎引起的牛奶中体细胞数量的增加。因此，有必要开发一种牛奶中体细胞数的检测方法，且成本低廉，可靠性高，劳动量低。
发明内容
本发明公开一种牛奶中体细胞数的检测方法，用于低成本，省时省力，具有较高可靠性的检测牛奶中体细胞的数量。牛奶中体细胞95%以上都是白细胞，因此，本发明公开的牛奶中体细胞数的检测方法，包括以下步骤(A)将需要检测的样本，滴加在白细胞过滤膜上；(B)向白细胞过滤膜上滴加清洗剂；(C)将显色剂滴加到白细胞过滤膜上；(D)读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。在该测定白细胞数量的方法中，清洗剂，可以是水或甲醇、乙醇、丙酮。pH值范围为8 11。在该测定白细胞数量的方法中，显色剂可以为3-乙酰基吲哚酚或者3- (N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚。可以在过滤膜下面设置纤维素滤膜制成的吸水层，用于吸收清洗剂。采用利用比色法检测白细胞数量的方法，成本低廉，而且省时省力，具有有较高可靠性。
图I为本发明实施例5的测试数据图。
具体实施例方式实施例I选取待检测的牛奶样本，选取能够快速过滤白细胞并能够在洗脱时仍保留在其上的过滤膜Leukosorb A，在过滤膜的下部设置，纤维素滤膜制成的吸水层，用于吸收清洗剂。清洗剂采用1:1的水和乙醇组成，显色剂选用3-乙酰基吲哚酚。测定时将待检测的牛奶样本，滴加在过滤膜Leukosorb A上一滴；三分钟后向白细胞过滤膜上滴加有I: I的水和乙醇组成清洗剂三滴；将显色剂3-乙酰基吲哚酚滴加到白细胞过滤膜上一滴；五分钟后读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。实施例2选取待检测的牛奶样本，选取能够快速过滤白细胞并能够在洗脱时仍保留在其上的过滤膜Leukosorb A，在过滤膜的下部设置，纤维素滤膜制成的吸水层，用于吸收清洗剂。清洗剂采用2:1的水和甲醇组成，显色剂选用3-(N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚。测定时将待检测的血液样本，滴加在过滤膜Leukosorb A上一滴；四分钟后向白细胞过滤膜上滴加有2:1的水和甲醇组成清洗剂三滴；将显色剂3-(N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚滴加到白细胞过滤膜上一滴；五分钟后读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。实施例3选取待检测的牛奶样本，选取能够快速过滤白细胞并能够在洗脱时仍保 留在其上的过滤膜EB，在过滤膜的下部设置，纤维素滤膜制成的吸水层，用于吸收清洗剂。清洗剂采用1:1的水和丙酮组成，显色剂选用3-乙酰基吲哚酚。测定时将待检测的尿液样本，滴加在过滤膜EB上一滴；三分钟后向白细胞过滤膜上滴加有1:1的水和丙酮组成清洗剂三滴；将显色剂3-乙酰基吲哚酚滴加到白细胞过滤膜上一滴；五分钟后读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。实施例4选取待检测的牛奶样本，选取能够快速过滤白细胞并能够在洗脱时仍保留在其上的过滤膜Leukosorb A。清洗剂采用1:5的水和乙醇组成,显色剂选用3-乙酰基吲哚酚。测定时将待检测的牛奶样本，滴加在过滤膜Leukosorb A上一滴；二分钟后向白细胞过滤膜上滴加有I 5的水和乙醇组成清洗剂三滴；将显色剂3-乙酰基吲哚酚滴加到白细胞过滤膜上一滴；四分钟后读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。实施例5选取待检测的牛奶样本，选取能够快速过滤白细胞并能够在洗脱时仍保留在其上的过滤膜EB，在过滤膜的下部设置，纤维素滤膜制成的吸水层，用于吸收清洗剂。清洗剂采用1:3的水和甲醇组成，显色剂选用3- (N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚。测定时将待检测的牛奶样本，滴加在过滤膜EB上一滴；三分钟后向白细胞过滤膜上滴加有1:3的水和甲醇组成清洗剂三滴；将显色剂3- (N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚滴加到白细胞过滤膜上一滴；三分钟后读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。同时选取同样的样本车送往不同的两个实验室用F0SSMATIC进行测试。如图I所示，使用实施例5方法测试得到的结果与两个实验室数据取平均数后的结果，其相关度表现是非常优秀的(R = O. 9569)，除了少数例外。导致这些例外数据的原因不同。部分是由于奶样太稠(乳房炎感染较严重)以至于奶样不能完全吸入试纸中的吸孔；其他原因是随机的。
权利要求
1.一种牛奶中体细胞数的检测方法，其特征在于包括以下步骤 (A)将需要检测的牛奶样本，滴加在白细胞过滤膜上；(B)向白细胞过滤膜上滴加清洗剂；(C)将显色剂滴加到白细胞过滤膜上；(D)读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。
2.根据权利I所述的牛奶中体细胞数的检测方法，其特征在于所述样本是血液、奶液、尿液、汗液和唾液中的一种。
3.根据权利I所述的牛奶中体细胞数的检测方法，其特征在于所述清洗剂，包括水或甲醇或乙醇或丙酮。
4.根据权利I所述的牛奶中体细胞数的检测方法，其特征在于所述清洗剂PH值范围为8 11。
5.根据权利I所述的牛奶中体细胞数的检测方法，其特征在于所述显色剂为3-乙酰基吲哚酚或者3- (N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚。
6.根据权利I所述的牛奶中体细胞数的检测方法，其特征在于所述过滤膜下面设置纤维素滤膜制成的吸水层。
全文摘要
本发明公开一种牛奶中体细胞数的检测方法，用于低成本，省时省力，具有较高可靠性的检测牛奶中体细胞的数量。牛奶中体细胞95%以上都是白细胞，因此，本发明公开的牛奶中体细胞数的检测方法，包括以下步骤(A)将需要检测的样本，滴加在白细胞过滤膜上；(B)向白细胞过滤膜上滴加清洗剂；(C)将显色剂滴加到白细胞过滤膜上；(D)读取白细胞表面的颜色，通过与比色卡比较半定量的确定牛奶样本中体细胞数量。清洗剂，可以是水或甲醇、乙醇、丙酮。pH值范围为8～11。显色剂可以为3-乙酰基吲哚酚或者3-(N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚。采用利用比色法检测白细胞数量的方法，成本低廉，而且省时省力，具有有较高可靠性。
文档编号G01N21/25GK102841058SQ20121031323
公开日2012年12月26日 申请日期2012年8月30日 优先权日2012年8月30日
发明者温文驰 申请人:山西华诚睿光生物科技有限公司
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
