专利名称：一种分子印迹法测定苏木中苏木精含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种分子印迹法测定苏木中苏木精含量的方法。
背景技术：
苏木药理作用的研究始于20世纪70年代，国内外研究较多，近十年间已有几十篇报道显示出苏木具有较多的临床药理作用，其中包括免疫抑制作用、抗肿瘤作用、抗菌消炎作用、镇静镇痛作用、降糖作用等。由于苏木精是苏木呈现疗效的主要成分，对苏木精的定量分析及研究有极其重要的意义。苏木精属于植物多酚。由于植物多酚与黄酮类、蒽醌类、简单酚和木质素等在植物体内共存并且相似。其本身更是一类结构和性质都极为相似的混合物，并且多酚性质较活泼，很易发生缩合或者降解，因此对其进行精确定量比较困难。目前虽然有数十种多酚定量方法，但这些方法都是相对的，几乎没有一种可以适用所有测定，必须根据实际情况选择测定方法及相关测试条件。植物多酚的定量法主要有化学分析法、紫外可见分光光度法(UV) 和高效色谱法(HPLC)等。电化学传感器具有设计制造简单、灵敏度高、价格低廉、容易微型化等优点，但现有的电化学方法测量苏木精含量，电流强度信号低，灵敏度较差。分子印迹聚合物以其具有模拟天然受体的分子识别能力，越来越成为一类重要的人工合成材料。印迹聚合物是可以提供高选择性和稳定性的人工合成受体，尽管分子印迹技术的主要应用目前仍然是在分离领域，但将分子印迹聚合物用作识别元件构建新一代的电化学传感器已经有了初步的研究，并具有可观的应用前景。目前分子印迹法主要应用在小分子的检测上，苏木精分子量较大，有关其分子印迹分析法还未见报道。
发明内容
本发明的目的是寻找一种能定量检测苏木中苏木精含量的分析方法。本发明用对苏木精有分子识别作用的聚吡咯膜制备了电化学传感器，用于检测苏木中苏木精的含量。本发明的实现系通过一下步骤实现1.样品预处理将苏木加以粉碎，以保证固体样品有足够表面积与提取液(含乙醇5-50%质量分数的水溶液)相接触。取样品粉末精密称定后加提取液适量，经5-30分钟的超声波处理提取，在超声波的作用下，样品粉末中的苏木精可广泛地与溶液接触并不断地溶解进溶液中；超声波发生器的频率为20-80kHz，功率为5-500W，由于苏木精在高温会发生缩合等化学反应，干扰后续测定，因此提取温度应在40°C以下。将残渣提取3-8次。 合并提取液，该提取液经过滤和定容后即可供电化学测定。2.电化学传感器的制备石墨电极经0. 3 μ m的Al2O3粉末抛光成镜面后依次用乙醇和水超声清洗。然后， 将三电极体系置于含0. 01 0. 20mol/L的吡咯、0. 01 0. 20mol/L的苏木精和0. 10 0. 50mol/L KCl的磷酸缓冲溶液(pH = 6. 9)中。在-0. 2 0. 8V电位范围内进行循环伏安扫描10圈进行电聚合，扫描速度为0. 05V/S。电聚合过程中维持氮气气氛。聚合完毕，将所得修饰电极置于0. 1 0. 5mo VLNa2HPO4溶液中，在1. OV电位下电解100 600s，对吡咯膜进行过氧化处理。之后将电极在乙醇中(温度20 60°C)浸泡1 5小时，取出即制成苏木精-吡咯/石墨分子印迹电极。取出电极、置于搅拌器上用超纯水洗涤，N2气吹干后待用。3.电化学测量苏木精-吡咯/石墨印迹电极作工作电极的三电极体系，测试不同浓度的苏木精溶液中的CV曲线，以获得线性响应关系和检测下限等。取不同质量的苏木精标准品，溶解在pH值=3 11的缓冲溶液中，用苏木精-吡咯/石墨印迹电极作工作电极，钼电极做对电极，甘汞电极做参比电极，在扫描速度为 (30 200mV/s)下，测其循环伏安曲线，以苏木精浓度为横坐标，氧化峰的最高点电流为纵坐标，做氧化峰标准曲线。以苏木精浓度为横坐标，还原峰的最低点电流为纵坐标，做还原峰标准曲线。本发明可简便、可靠地完成苏木中苏木精含量的定量测定，抗干扰能力强。本发明与现有的电化学测量方法相比，测得的电流强度增强了 2个数量级，试验误差减�。槊舳忍嵘小�
图1为本发明的分子印迹修饰电极检测苏木精的循环伏安图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步描述。实施例1 将苏木加以粉碎成60目一下颗粒，取样品IOg加提取液(含乙醇5%质量分数的水溶液)至50mL，经5分钟的超声波处理提�。ǚ⑸鞯钠德饰�20kHz，功率为100W， 提取温度为20°C。将残渣再提取3次，提取液分别为50mL、30mL、20mL。合并提取液，该提取液经过滤后用缓冲溶液定容至200mL(pH = 3)，即可供测电化学测定。取不同质量的苏木精标准品，溶解在pH = 3的缓冲溶液中，用苏木精-吡咯/石墨印迹电极做工作电极，钼电极做对电极，甘汞电极做参比电极，在扫描速度为30mV/s下， 测其循环伏安曲线，氧化峰最高峰位置在0. 43V，还原峰最高峰位置在0. 26V0以苏木精浓度为横坐标，还原峰的最低点电流为纵坐标，做还原峰标准曲线。将待测样品在相同扫速下测其循环伏安曲线(结果如图1)，其还原峰电流强度-1.50E-4，信号比同样条件下非分子印迹法增强了 2个数量级，测得苏木中苏木精含量为5. 6% (wt/wt)。加标回收法表明，回收率在97%。实施例2:将苏木加以粉碎成60目一下颗粒，取样品IOg加提取液(含乙醇30%质量分数的水溶液)至50mL，经30分钟的超声波处理提�。ǚ⑸鞯钠德饰�80kHz，功率为 400W，提取温度为300C。将残渣再提取3次，提取液分别为50mL、30mL、20mL。合并提取液， 该提取液经过滤后用缓冲溶液定容至200mL(pH = 9)，即可供测电化学测定。取不同质量的苏木精标准品，溶解在pH = 7的缓冲溶液中，用苏木精-吡咯/石墨做工作电极，钼电极做对电极，甘汞电极做参比电极，在扫描速度为90mV/s下，测其循环伏安曲线，氧化峰最高峰位置在0. 19V，还原峰最高峰位置在0. IOV0以苏木精浓度为横坐标，还原峰的最低点电流为纵坐标，做还原峰标准曲线。 取苏木精待测样品(pH = 9)，用苏木精-吡咯/石墨电极做工作电极，钼电极做对电极，甘汞电极做参比电极，在相同扫速下测其循环伏安曲线，其还原峰电流强度-1. 62E-4，信号比同样条件下非分子印迹法增强了 2个数量级，测得苏木中苏木精含量为5.7% (wt/wt)。加标回收法表明，回收率在101%。
权利要求
1.一种苏木中苏木精的定量测定方法，其特征在于取不同质量的苏木精标准品，溶解在pH值=3 11的缓冲溶液中，用苏木精-吡咯/石墨印迹电极作工作电极，钼电极做对电极，甘汞电极做参比电极，在扫描速度为(30 200mV/s)下，测其循环伏安曲线，以苏木精浓度为横坐标，还原峰的最低点电流为纵坐标，做还原峰标准曲线。取待测苏木精待测样品溶解在相同PH的缓冲溶液中，测定其电流强度值，与标准曲线相比，得到其定量数据。
2.根据权利要求1所述的苏木精-吡咯/石墨印迹电极的制备方法如下石墨电极经Al2O3粉末抛光成镜面后依次用乙醇和水超声清洗。然后，将三电极体系置于含0.01 0. 20mol/L的吡咯、0. 01 0. 20mol/L的苏木精和0. 10 0. 50mol/L KCl的磷酸缓冲溶液 (pH = 6. 9)中。在-0. 2 0. 8V电位范围内进行循环伏安扫描10圈进行电聚合，扫描速度为0.05V/S。电聚合过程中维持氮气气氛。聚合完毕，将所得修饰电极置于0.1 0.5mol/ L Na2HPO4溶液中，在1. OV电位下电解100 600s，对吡咯膜进行过氧化处理。之后将电极在乙醇中(温度20 60°C )浸泡1 5小时，取出即制成苏木精-吡咯/石墨分子印迹电极。取出电极、置于搅拌器上用超纯水洗涤，N2气吹干后待用。
全文摘要
一种采用分子印迹法对苏木中苏木精含量进行定量测定的方法。其特点为用苏木精-吡咯/石墨印迹电极作工作电极的三电极体系，在pH＝3-11的缓冲溶液中，温度为20-80℃，扫描速度为30-600mv/s，测量不同浓度的苏木精溶液中的CV曲线，以获得线性响应关系和检测下限等。该法与其他电极相比，电流强度提高2个数量级，测量灵敏度大大提高。
文档编号G01N27/48GK102156162SQ20101057968
公开日2011年8月17日 申请日期2010年12月9日 优先权日2010年12月9日
发明者仇小飞, 侯秀良, 刘瑛, 汪茹, 许芳萍, 陈新, 高海燕 申请人:江南大学
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