专利名称：检测人体血清肌肉生长抑制素应用于筛选体育运动员的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测人体血清肌肉生长抑制素应用于筛选体育运动员。
背景技术：
目前对体育运动员的选拔，主要是通过比赛本身发现有培养前途的运动员，然后 进行集中训练，提高成绩。这种方式选拔出来的运动员有可能是具有天分的天资运动员。也 有可能是天资欠佳，但通过刻苦训练而取得好成绩的运动员。后一种类的运动员继续培养 的前途远不如前一种运动员。目前国内外还没有一种方法能够准确及时的发现有培养前途 的天资运动员。目前国内外已对人肌肉生长抑制素(myostatin)进行了很多研究，如《郧阳医学 院学报》<2009年12月28卷6期〉曾报导=Hiyostatin作为一种肌肉生长的负性调节因子 已得到公认，它决定着肌肉纤维的数量和大小。它还能调节胚胎的和出生后婴儿的肌肉系 统。Germline通过敲除小鼠体内myostatin基因导致小鼠骨骼肌的超常增生和肥大，表明 myostatin作为骨骼肌生长的负调节蛋白调节着骨骼肌的生长。另外，也有报道肌肉生长 抑制素与成年动物肌肉萎缩和肌肉再生有关。McPherron等通过基因打靶技术敲除小鼠体 内Myostatin基因，使其不能正常发挥作用，结果在Myostatin敲除的小鼠体内，肌纤维广 泛增生和肥大，导致骨骼肌肌肉质量显著增加，其平均体重超过正常小鼠的261%，而且突变 型小鼠骨骼肌纤维的数量较野生小鼠高出86%。利用基因敲除技术研究Myostatin基因的 功能发现，纯合突变型小鼠的体重要比杂合体或野生型小鼠重约30% (与性别、年龄无关)。 突变纯合体小鼠肩和臀部的肌肉明显肥大，移去皮肤后发现整个身体的骨骼肌都比野生型 的小鼠大很多，单块肌肉的重量约为野生型小鼠的2 — 3倍。研究这种突变型小鼠肌肉肥 大的原因，发现既有肌细胞的增生(Hyperplasia)，也有肌纤维的肥大(Hvpertronhv)，即 “双肌现象”。同时，Myostatin功能丧失与双肌牛的关系也已被实验验证(Grobet et al. A deletion in the bovine myostatin gene causes the double-muscled phenotype in cattle. Nat Genet. 1997 S�。�17 (1) : 71-4. )。2004年，英国科学家报道一名出生不久 的男婴大腿和上臂的肌肉都非常突出。在他四岁半时，已经可以平举3kg的哑铃了。经遗传 学调查分析发现，编码Myostatin的基因在第一个内含子上由于剪接位点的突变导致mRNA 不能正确剪接，产生无功能的 Myostatin (Schuelk et al. (2004) Myostatin mutation associated with gross muscle hypertrophy in a child. N Engl J Med. 2004 Jun 24; 350 (26) : 2682-8.现有的研究结果表明Myostatin在人体中的作用与在鼠和牛中一 样，抑制骨骼肌的生长发育。不仅如此，Myostatin在成体的骨骼肌中也持续表达，同样能 抑制成体肌肉的增生与肥大，甚至促进肌肉萎缩与消耗。有一项研究表明Mnostatin基因 的表达水平在由HIV感染引起的骨骼肌萎缩而消瘦的病人中高于正常人。目前已有报导将 RNA干扰技术应用于肌肉生长抑制素基因的开发，可以有效提高畜禽产肉量，获得重大的 经济效益.但目前还没有通过检测人体血清肌肉生长抑制素应用于筛选天资运动员。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过检测血清肌肉生长抑制素水平应用于筛选体育 运动员，以实现方法简单快速、准确可靠、可以极大提高筛选效率，为国家节约大量人力物 力。本发明是将检测人体血清肌肉生长抑制素的方法应用于筛选体育运动员，其受检 者血清肌肉生长抑制素水平越低，培养前途越大，其血清肌肉生长抑制素在电泳带上显示 接近0时，该个体具有最佳培养前途。本发明方法简单快速、准确可靠、可以极大提高筛选效率，可为国家节约大量人力 物力。
图1为普通人的血清检测结果图； 图2为天资运动员的血清检测结果图。图中1为血清蛋白1 (72kD) ；2为血清蛋白2 (45kD) ；3为血清肌肉生长抑制素。
具体实施例方式实施例
(1)采血2-5毫升，离心得到血清；
(2)将60微升琼脂糖一抗人肌肉生长抑素抗体复合物(Abcam，UK)与0.5毫升被测者 血清在4°C时孵育孵育3小时；
(3)用2mLpH为7. 4含1%的Triton X-100的磷酸盐缓冲液洗两次；
(4)按以下步骤将蛋白从琼脂糖珠上洗脱
A.加100微升磷酸盐缓冲液到琼脂糖一抗人肌肉生长抑素抗体复合物中，在温度 3-50C，孵育20-40分钟；收集上清液，与30-40微升锂十二烷基硫酸钠4倍浓缩液混合；
B.加100-120微升含上述抗体竞争肽(1微克/微升)的磷酸盐缓冲液在4°C孵育 30-35分钟；
C.加30微升的锂十二烷基硫酸钠(4倍浓缩)和100微升磷酸盐缓冲液加热至80°C持 续10分钟，收集上清液至干净试管中；
(5)聚丙烯酰胺(SDS)凝胶电泳
加2-5微升的蛋白质样品与磷酸/聚丙烯酰胺样品缓冲液按1 1混合，于100°C加热2 分钟；加入聚丙烯酰胺凝胶电泳仪中进行电泳电泳条件是温度为15-20°C ；对于0. 75毫 米厚的凝胶，先以15毫安电流电泳至示踪染料进入凝胶，再在30毫安下电泳至染料到达凝 胶底部为止；最后取出凝胶；
(6)转膜及检测将抗人肌肉生长抑制素的抗体在阻止缓冲液中按1:2000稀释后在室 温下与硝酸纤维膜孵育1一3小时。用pH为7.4的2 mL Tris缓冲盐溶液洗涤五次，再加 与辣根过氧化酶相联的羊抗牛IgG(Abcam，UK)。再用pH为7. 4的2mLTris缓冲盐溶液洗 涤五次；
(7)将羊抗牛IgG中的放射自显影信号用西微微基质(WestPico Substrate)(Pierce 公司)检测；(8)结果分析
其受检者血清肌肉生长抑制素水平越低，培养前途越大，其血清肌肉生长抑制素在电 泳带上显示接近0时，该个体具有最佳培养前途。
权利要求
检测人体血清肌肉生长抑制素应用于筛选体育运动员，其特征在于，受检者血清肌肉生长抑制素水平越低，培养前途越大，其血清肌肉生长抑制素在电泳带上显示接近0时，该受检者具有最佳培养前途。
全文摘要
检测人体血清肌肉生长抑制素应用于筛选体育运动员，当受检者血清肌肉生长抑制素水平越低，培养前途越大，其血清肌肉生长抑制素在电泳带上显示接近0时，该受检者具有最佳培养前途。本发明方法简单快速、准确可靠、可以极大提高筛选效率，可为国家节约大量人力物力。
文档编号G01N27/447GK101887046SQ20101023020
公开日2010年11月17日 申请日期2010年7月19日 优先权日2010年7月19日
发明者田韵, 高常青 申请人:高常青
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