专利名称：一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法
技术领域：
本发明属于水产品检测技术领域，是一种用高效液相色谱-串联质谱法(LC/APC1-MS/MS)测定水产品中硝基酚钠残留量的方法。
背景技术：
20世纪60年代日本旭化学工业株式会社最先发现的高效植物生长调节剂，由对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠混配而成，它能迅速渗透到植物体内，调节和控制植物体内的核酸、蛋白质及酶的合成，促进植物原生质流动，增加细胞活力，从而促进植物的萌芽、发根、生长和结果。其在农业上的应用不可避免地将随雨水等汇集于养殖水体中，从而导致其在水产品中残留。同时，硝基酚钠作为一种新型鱼虾促生长药物添加剂，在预防和治疗疾病方面具有较好的疗效。该药物在东南亚某些国家广泛用于水产养殖业中。硝基酚钠还应用在畜牧上，在提高肉、蛋、毛、皮产量和质量的同时，还能增强动物的免疫能力，预防多种疾病。此外，硝基酚钠还是重要的多用途工业有机化合物，作为原料和中间物被广泛应用于火药、药物、杀虫剂、色素、染料、木材、防腐剂、橡胶等化学工业中，具有致畸或致癌作用，并可在食物链中积聚。这些化合物随工业废水、农业径流水、生活污水流入水体，最终进入海洋，对海洋水生生物的生长、发育和繁殖构成威胁，并且对人体健康有潜在的�：�。硝基酚钠是水体中常见的有机物质，它们在水中超过一定量时就会危及鱼虾及它们的饵料生物，同时也是危害环境和人类健康的污染物。美国环保局(EPA)已将邻硝基苯酚、对硝基苯酚列为“优先控制污染物”，并限制自然水体中它们的质量浓度不大于10 u g/L0我国农业部公告第193号食品动物禁用的兽药及其它化合物清单将硝基酚钠列为禁用药物。目前，国家及行业还没有水产品中硝基酚钠残留量的测定方法。我国行业标准SN0198-93《出口蔬菜中复硝盐残留量检验方法》规定了出口番茄中硝基酚钠残留量的测定方法，采用的是气相色谱法，其中邻硝基苯酚钠的测定低限为0.01mg/kg ;对硝基苯酚钠为
0.02mg/kg ;5_硝基邻甲氧基苯酹钠为0.01mg/kg。关于酚类化合物的分析方法通常采用薄层紫外分光光度法(TLC-UV)、高效液相色谱法、气相色谱法。TLC-UV法的准确度较低，精密度不理想，操作步骤繁琐，耗时费力；高效液相色谱法采用紫外检测器检测，干扰较多，灵敏度较差，无法满足残留检测的要求。硝基酚钠的物理化学性质不同于硝基苯酚，硝基酚钠属于强极性化合物，采用气相色谱法需先将其衍生化降低极性后，再进行测定，操作过程较为繁琐。采用常规的配有ESI源的液相色谱-串联质谱仪测定，邻硝基酚钠的灵敏度很差。而本发明采用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，可以极大的提高邻硝基酚钠的灵敏度，有效将三种目标化合物分离并进行定性和定量测定。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，本方法对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的检出限为I U g/kg,邻硝基酚钠的检出限为2 u g/kg ;对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠定量限为2 y g/kg，邻硝基酚钠的定量限为5 y g/kg ;对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠在2 u g/kg 200 u g/kg添加浓度范围内，回收率为70% 110%，邻硝基酚钠在5 u g/kg 200 u g/kg添加浓度范围内，回收率为70% 110%;本方法的批内相对标准偏差< 15%，批间相对标准偏差< 20%。本发明是按照以下操作方法完成的:—种 检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，用乙腈提取样品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠，提取液经中性氧化铝去脂，碱性条件下浓缩后，经HLB固相萃取柱净化，用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，对水产品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量进行准确的定性和定量分析。一种检测水产品硝基酚钠残留量的方法，它包括样品提取、净化、基质加标标准曲线的绘制、实验所用的仪器条件和定性与定量，具体步骤如下:(1)样品提取样品用乙腈超声波提取，提取液过中性氧化铝柱，收集滤液，滤液中加入氢氧化钠溶液，减压浓缩，再加入磷酸，离心，取上清液备用。(2)净化将步骤(I)的上清液转移至HLB固相萃取柱中，用水淋洗，抽干后，用甲醇洗脱，收集洗脱液于容量瓶中，并用含0.1%甲酸的乙酸铵水溶液定容，涡旋混合，过0.22 y m有机相微孔滤膜后，进LC-MS/MS分析。(3)基质加标标准曲线的绘制分别称取5g空白试样，准确加入相应量的标准工作液，使对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酌 钠最终溶液浓度均分别为0.001 ii g/mL、0.005 u g/mL0.010 u g/mL、0.050 u g/mL、0.100 u g/mL、0.200 u g/mL,邻硝基酚钠最终溶液浓度为 0.002 u g/mL、0.005 u g/mL、
0.0lOil g/mL、0.050 u g/mL,0.1OOu g/mL,0.200 y g/mL，按照上述(I)和(2)操作步骤进行提取和净化，进LC-MS/MS分析，绘制标准曲线。(4)实验所用的仪器条件色谱条件如下:a)色谱柱:C18 反相色谱柱，2.1mmX 150mm, 5 ii m ;b)柱温:室温；c)流速:0.5mL/min ；d)进样量:25uL;e)流动相:A:甲醇，B:水，梯度洗脱程序见表I。表I流动相梯度洗脱条件
权利要求
1.一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，其特征在于其步骤如下:用乙腈提取样品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠，提取液经中性氧化铝去脂，碱性条件下浓缩后，经HLB固相萃取柱净化，用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，对水产品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量进行准确的定性和定量分析。
2.一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，它包括样品提取、净化、基质加标标准曲线的绘制、实验所用的仪器条件和定性与定量，其特征在于具体步骤如下: (1)样品提取 样品用乙腈超声波提取，提取液过中性氧化铝柱，收集淋洗液，离心，取上清液，加入氢氧化钠溶液，减压浓缩，再加入磷酸，离心，取上清液备用； (2)净化 将步骤(I)的上清液转移至HLB固相萃取柱中，用水淋洗，抽干后，用甲醇洗脱，收集洗脱液于容量瓶中，并用含0.1%甲酸的乙酸铵水溶液定容，涡旋混合，过0.22 pm有机相微孔滤膜后，进LC-MS/MS分析； (3)基质加标标准曲线的绘制 分别称取5g空白试样，准确加入相应量的标准工作液，使对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酌 钠最终溶液浓度均分别为0.001 Ii g/mL、0.005 u g/mL0.010 u g/mL、0.050 u g/mL、0.100 u g/mL、0.200 u g/mL，邻硝基酚钠最终溶液浓度为 0.002 u g/mL、0.005 u g/mL、.0.0lOil g/mL、0.050 u g/mL,0.1OOu g/mL,0.200 y g/mL，按照上述(I)和(2)操作步骤进行提取和净化，进LC-MS/MS分析，绘制标准曲线； (4)实验所用的仪器条件 色谱条件如下: a)色谱柱:C18反相色谱柱，2.1mmX 150mm, 5 u m ； b)柱温:室温；c)流速:0.5mL/min ； d)进样量:25iiL; e)流动相:A:甲醇，B:水，梯度洗脱程序见表I ; 表I流动相梯度洗脱条件 __
全文摘要
一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，属于水产品检测技术领域，它包括样品提取和净化、标准曲线的绘制、仪器条件及定性与定量。本发明质谱仪选择APCI离子源，邻硝基酚钠的灵敏度提高了数十倍；采用中性氧化铝净化，可以有效去除样品中脂肪等干扰物质，缩短浓缩时间；浓缩时加入氢氧化钠，使邻硝基酚钠在样品中始终以钠盐形式存在，保证了邻硝基酚钠的回收率在70%以上；浓缩后加入磷酸，可以中和过量的氢氧化钠，使待净化液的pH保持在3左右，能够满足上固相萃取柱的要求。本发明填补了目前水产品和其他动物源性食品中没有硝基酚钠残留量检测方法的空白，对准确科学的评价水产品质量安全及制定水产品中有害物质的新标准具有重要意义。
文档编号G01N30/02GK103091422SQ201310028360
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月24日 优先权日2013年1月24日
发明者邢丽红, 冷凯良, 孙伟红, 翟毓秀, 李兆新, 谭志军, 郭萌萌, 苗钧魁 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所
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