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专利名称：一种红花逍遥片的质量检测方法
一种红花逍遥片的质量检测方法技术领域
本发明属于药物质量控制技术领域，特别涉及一种红花逍遥片的指纹图谱检测方法。
背景技术：
红花逍遥片由当归、白芍、白术、茯苓、红花、皂角刺、竹叶柴胡、薄荷、甘草九味药组成，功能主治为舒肝、理气、活血，用于肝气不舒，胸胁胀痛，头晕目眩，食欲减退，月经不调，乳房胀痛或伴见颜面黄褐斑。
由于中药具有成分复杂多变、活性成分多、药效成分和毒性成分不甚明确等特点， 红花逍遥片做为中成药，其药效不是来自任何单一的活性成分，其药效作用基本上是多种活性成分共同协作的结果。然而，目前对红花逍遥片的研究仅针对处方中当归、白芍、甘草、 竹叶柴胡、薄荷的薄层鉴别方法和白芍的高效液相色谱含量测定。显然，对于红花逍遥片这样一个由9味中药组成的复方制剂，其质量控制检测方法过于简单，不能较准确全面所映产品的内在质量，也无法用于生产过程中、以及产品质量的有效控制。
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段， 得到的能够标示其化学特征的色谱图。采用中药指纹图谱方式，一方面可以通过指纹图谱的特征性，有效的鉴别样品的真伪和产地；另一方面通过对主要指纹图谱特征峰的面积或比例的控制，能有效控制产品的质量，确保产品质量的稳定一致，从而保证产品安全有效。 因此建立红花逍遥片的指纹图谱势在必行，建立一种能全面检测红花逍遥片中有效成分的质量检测方法具有重要意义。发明内容
本发明的目的是针对上面所述红花逍遥片的质量控制现状，提供一种红花逍遥片的质量检测方法，该方法提供一种基于高效液相色谱法的红花肖遥片的指纹图谱检测方法，可行到红花逍遥片的HPLC (高效液相色谱)指纹图谱，可有效控制红花逍遥片的质量及保证其临床疗效。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。
一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于，包括如下步骤(1)对照品溶液的制备取芍药苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备取红花逍遥片制剂粉末，置锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；(3)色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为4. 6_Χ250_，5μπι;流动相Α为乙腈，B为O. 1%磷酸水溶液；采用梯度洗脱，洗脱程序如下O分钟时,9%流动相A、91%流动相B ；5分钟时，12%流动相A、88%流动相B ；25分钟时，12%流动相A、88%流动相B ；30分钟时，15%流动相A、85%流动相B ；65分钟时，45%流动相A、55%流动相B ；85分钟时，45%流动相A、55%流动相B ；流速1. OmL/min ;检测波长230nm ;柱温25°C ；(4)以芍药苷为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取上述对照品溶液和供试品溶液各8批，每批10 μ L，分别注入高效液相色谱仪中， 按高效液相色谱法测定，记录色谱图，依据所得的8批对照品的指纹图谱，制定标准指纹图所述红花逍遥片的标准指纹图谱，各共有峰以芍药苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积；(5)指纹图谱的质量控制将红花逍遥片的供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度， 识别两者所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。
所述步骤(2)中超声处理时间为25 35min。
所述步骤(2)中微孔滤膜的孔径为O. 45 μ m。
所述步骤(4)中相对保留时间的计算公式为相对保留时间=其它各组分峰的保留时间/参照峰的保留时间。
相对峰面积的计算公式为相对峰面积=其它各组分峰的峰面积/参照峰的峰面积。
所述参照峰为芍药苷峰。
步骤(4)中所述相对保留时间和相对峰面积分别为相对保留时间1 (O. 192 O. 193),2 (O. 579 O. 591),3 (O. 795),4 (I. 000),5 (I. 317 I. 324)，6 (I. 590 I. 602)，7 (I. 701 I. 711)，8 (I. 777 I. 793)，9 (I. 807 I.822)，10(1. 992 2. 014)；相对峰面积1 (O. 6296 O. 7345)，2 (O. 8666 I. 1740)，3 (O. 7374 O. 8077)，4 (I. 000),5 (O. 2065 O. 2473),6 (O. 0378 O. 0440), 7 (O. 0485 O. 0514),8 (O. 0532 O.0600,9(0. 0314 O. 0501)，10(0. 0614 O. 0706)；步骤(5)中所述确定相似度是指将红花逍遥片的供试品溶液指纹图谱与标准图谱比对，其相似度应为O. 90 I. 00。
本发明所述指纹图谱的质量控制，运用国家药典委员会制定的《中药指纹图谱相似度计算软件》(2004)，经过多点校正，色谱峰的匹配，计算供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱的相似度；指纹图谱相似度计算参数设置为时间宽度为O. 2秒；校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰，峰1(0. 192 O. 193)，峰2 (O. 579 O. 591)， 峰 3 (O. 795)，峰 4 (I. 000)，峰 10 (I. 992 2. 014)。
与现有技术相比，本发明的有益效果是a.本发明采用高效液相建立标准指纹图谱，通过指纹图谱得到量化参数，更有效的控制制剂的质量。b.本发明采用高效液相色谱指纹图谱，以芍药药材中的有效成分(芍药苷)特征为主的指纹图谱来全面控制红花逍遥片的质量，更加完善了制剂的质量控制。c.通过实验证明，本发明质量控制方法对红花逍遥片的质量控制更为有效，方法精密度较高、稳定性、重复性均良好。能有效控制产品的质量，确保产品质量稳定可靠，药性和疗效基本一致，从而保证产品的安全有效。


图I为本发明所述以芍药苷为参照制得的标准指纹图谱。
图2为本发明所述红花逍遥片制得的8批样品指纹图谱。
具体实施方式
实施例I :红花逍遥片标准指纹图谱建立。
(I)仪器及试剂高效液相色谱仪岛津LC - IOATvp高效液相色谱仪(SH) — MlOAvp检测器，CLASS-VP软件)；数控超声波清洗器KQ_250DB型，昆山市超声仪器有限公司；十万分之一天平岛津AUW220 ;万分之一天平AB104 — N型，梅特勒一托利多； Millipore超纯水仪。
乙腈山东禹王实验有限公司化工分公司；甲醇上海振兴化工一厂；磷酸(优级纯)天津精细化学品开发有限公司；超纯水。
芍药苷对照品中国药品生物制品检定所；红花逍遥片江西普正制药有限公司。
( 2 )对照品溶液的制备。
取芍药苷约23mg，精密称定，置25mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取 2mL，置25mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀即得。
( 3 )供试品溶液的制备。
取本品20片，除去薄膜衣，研细，取约O. 35g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理25min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经微孔滤膜(O. 45 μ m)滤过，即得。
(4)色谱条件。
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mmX 250 mm，5 μ m);流动相A 为乙腈，B为O. 1%磷酸水溶液，梯度洗脱(见表I);进样量10μ L ;检测波长230nm ;流速 I. OmL/min ;柱温25°C。
表I液相系统洗脱程序。
权利要求
1.一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于，包括如下步骤(1)对照品溶液的制备取芍药苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备取红花逍遥片制剂粉末，置锥形瓶中，加甲醇，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；(3)色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为4. 6_Χ250_，5μπι;流动相Α为乙腈，B为O. 1%磷酸水溶液；采用梯度洗脱，洗脱程序如下O分钟时,9%流动相Α、91%流动相B ；5分钟时，12%流动相Α、88%流动相B ；25分钟时，12%流动相Α、88%流动相B ；30分钟时，15%流动相Α、85%流动相B ；65分钟时，45%流动相Α、55%流动相B ；85分钟时，45%流动相Α、55%流动相B ；流速1. OmL/min ;检测波长230nm ;柱温25°C ；(4)以芍药苷为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取上述对照品溶液和供试品溶液各8批，每批10 μ L，分别注入高效液相色谱仪中， 按高效液相色谱法测定，记录色谱图，依据所得的8批对照品的指纹图谱，制定标准指纹图所述红花逍遥片的标准指纹图谱，各共有峰以芍药苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积；(5)指纹图谱的质量控制将红花逍遥片的供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度， 识别两者所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。
2.根据权利要求I所述的一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于所述步骤(2) 中超声处理时间为25-35min。
3.根据权利要求I所述的一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于所述步骤(2) 中微孔滤膜的孔径为O. 45 μ m。
4.根据权利要求I所述的一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于所述步骤(4) 中相对保留时间的计算公式为相对保留时间=其它各组分峰的保留时间/参照峰的保留时间；相对峰面积的计算公式为相对峰面积=其它各组分峰的峰面积/参照峰的峰面积；所述参照峰为苟药苷峰。
5.根据权利要求I所述的一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于步骤(4)中所述相对保留时间和相对峰面积分别为相对保留时间1 (O. 192 O. 193),2 (O. 579 O. 591),3 (O. 795),4 (I. 000),5(I. 317 I. 324)，6 (I. 590 I. 602)，7 (I. 701 I. 711)，8 (I. 777 I. 793)，9 (I. 807 I.822)，10(1. 992 2. 014)；相对峰面积1 (O. 6296 O. 7345)，2 (O. 8666 I. 1740)，3 (O. 7374 O. 8077)，4 (I. 000),5 (O. 2065 O. 2473),6 (O. 0378 O. 0440), 7 (O. 0485 O. 0514),8 (O. 0532 O. 0600,9(0. 0314 O. 0501)，10(0. 0614 O. 0706)。
6.根据权利要求I所述的一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于步骤(5)中所述确定相似度是指将红花逍遥片的供试品溶液指纹图谱与标准图谱比对，其相似度应为O.90 I. 00。
7.根据权利要求I所述的一种红花逍遥片的质量检测方法，其特征在于所述指纹图谱的质量控制，运用国家药典委员会制定的《中药指纹图谱相似度计算软件》(2004)，经过多点校正，色谱峰的匹配，计算供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱的相似度；指纹图谱相似度计算参数设置为时间宽度为O. 2秒；校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰，峰 I (O. 192 O. 193)，峰 2 (O. 579 O. 591)，峰 3 (O. 795)，峰 4 (1.000)， 峰 10(1. 992 2. 014)。
全文摘要
一种红花逍遥片的质量检测方法，属于药物质量控制技术领域。包括如下步骤对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、色谱条件、以芍药苷为参照峰的标准指纹图谱的制定、指纹图谱的质量控制。本发明采用高效液相建立标准指纹图谱，通过指纹图谱得到量化参数，更有效的控制制剂的质量，精密度较高、稳定性、重复性均良好。
文档编号G01N30/88GK102944634SQ20121012425
公开日2013年2月27日 申请日期2012年4月26日 优先权日2012年4月26日
发明者肖军平, 饶毅, 吴永忠, 余宝平, 邹贵阳 申请人:江西普正制药有限公司