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专利名称：肿瘤抗原肽及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及肿瘤抗原肽。更具体地，本发明涉及肿瘤抗原蛋白(乳头瘤病毒结合因子，PBF)的片段肽和其基因在癌症免疫领域中的用途。
背景技术：
细胞免疫，特别是细胞毒性T细胞(下文中称为CTL)在从活体中清除肿瘤细胞、病毒感染的细胞等中发挥重要作用。CTL识别肿瘤细胞上的抗原肽(肿瘤抗原肽)和MHC (主要组织相容性复合体)I类抗原(在人中其被称为HLA抗原)的复合物，并攻击和杀死肿瘤细胞。当细胞内合成肿瘤特异性蛋白(即肿瘤抗原蛋白质)后，该肿瘤特异性蛋白通过蛋白酶的细胞内降解产生肿瘤抗原肽。得到的肿瘤抗原肽与内质网中的MHC I类抗原(HLA抗原)结合以形成复合物，其被运输至细胞表面并作为抗原呈递。当肿瘤特异性CTL识别了作为抗原呈递的复合物时通过细胞毒性作用或淋巴因子的产生展示抗肿瘤作用。对一系列这些作用的阐明使通过使用肿瘤抗原蛋白或肽作为所谓的癌症免疫治疗剂(癌症疫苗)在具有肿瘤的患者中提高肿瘤特异性CTL的疗法成为可能。作为代表性实例，肿瘤抗原蛋白包括非专利文献1的表1中所列的那些。此外， 识别乳头瘤病毒的E2结合位点的乳头瘤病毒结合因子(PBF) (GenBank数据库登记号 AF263928, SEQ ID NO:2)作为可应用于包括肉瘤(例如骨肉瘤)的癌症(肿瘤)的肿瘤抗原蛋白被报导(专利文件1)。另外，鉴定了结合HLA-AM或HLA-B55抗原的肿瘤抗原肽。然而，还未发现结合HLA-A2抗原的PBF来源的肿瘤抗原肽。[非专利文献 1] Immunity, vol. 10:281, 1999 [专利文献1]国际公开号WO 04/029248
这些文献在此处弓I入作为参考。

发明内容
本发明待解决的问题
本发明的一个目的是提供，例如结合HLA-A2抗原的肿瘤抗原蛋白PBF的片段肽及其基因在癌症免疫领域中的用途。解决问题的手段
在努力研究后，本发明者发现了以GenBank登记号注册的乳头瘤病毒结合因子(PBF) (SEQ ID NO: 2)的片段肽，其为结合HLA-A2抗原的肿瘤抗原肽。本发明者证明了所述肿瘤抗原肽可用作在体内或体外诱导CTL的试剂，即癌症疫苗，并且所述肿瘤抗原肽对例如骨肉瘤、肾癌和其它肿瘤的肿瘤发挥治疗或改善作用。所述肿瘤抗原肽也用作例如肉瘤、肾癌和其它肿瘤的肿瘤的肿瘤标记物。因此，本发明包括
(1)由与SEQ ID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽，其中所述肽结合HLA抗原并被细胞毒性T细胞(下文中称为“CTL”)识别。(2)根据(1)的肽，其中所述HLA抗原为HLA-A2。(3)根据(2)的肽，其由下述氨基酸序列组成SEQ ID N0:4的氨基酸序列；或包含在SEQ ID N0:4的氨基酸序列中的氨基酸残基的取代的氨基酸序列，其中在SEQ ID N0:4第 2位上的氨基酸残基被蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或谷氨酰胺取代，或在SEQ ID N0:4 C-端的氨基酸残基被亮氨酸取代。(4)由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成的肽。(5)用于诱导CTL的试剂，其包含根据(1)至(4)中任一项的肽作为活性成分。(6)用于诱导CTL的试剂，其包含编码由与SEQ ID NO:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽的核酸。(7)根据(6)的用于诱导CTL的试剂，其中所述多核苷酸为由SEQ ID N0:3的序列组成的多核苷酸。(8)由编码根据(1)至(4)中任一项的肽的多核苷酸组成的核酸。(9)用于诱导CTL的试剂，其包含根据(8)的核酸。(10)产生抗原呈递细胞的方法，其中所述方法的特征在于将下述中的一种
(a)根据(1)至(4)中任一项的肽，或
(b)包含编码(a)的肽的多核苷酸的核酸， 与具有抗原呈递能力的细胞在体外接触。(11)由根据(10)的方法产生的抗原呈递细胞。(12)诱导CTL的方法，其中所述方法的特征在于将下述中的一种
(a)根据(1)至(3)中任一项的肽，
(b)包含编码(a)的肽的多核苷酸的核酸， 与外周血淋巴细胞在体外接触。(13)由根据(12)的方法诱导的CTL。(14)特异性结合根据(1)至(4)中任一项的肽的抗体。(15)肿瘤标记物，其包含编码由与SEQ ID NO:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽的多核苷酸，或与所述多核苷酸互补的多核苷酸。(16)根据(15)的肿瘤标记物，其中所述肿瘤标记物包含含有SEQ ID NO: 3的序列的多核苷酸或与所述多核苷酸互补的多核苷酸。(17)由下述多肽组成的肿瘤标记物，所述多肽由与SEQ ID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成。(18)根据(17)的肿瘤标记物，其中所述肿瘤标记物由与SEQ ID N0:4的氨基酸序列相同的多肽组成。(19)由下述抗体组成的肿瘤标记物，所述抗体针对由与SEQ ID NO:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽，或为根据(14)的抗体。(20)根据(19)的肿瘤标记物，其中所述肿瘤标记物由针对由SEQ ID N0:4的氨基酸序列组成的肽的抗体组成。(21)包含根据(1)至(4)中任一项的肽和HLA抗原的HLA四聚体。(22)由根据(21)的HLA四聚体组成的肿瘤标记物。
(23)根据(15)至(20)和(22)中任一项的肿瘤标记物，其中所述肿瘤为肉瘤或肾癌。(24)用于肿瘤的诊断的试剂，其中所述试剂包含根据(15)至(20)、(22)和(24) 中任一项的肿瘤标记物。发明效果
本发明提供了例如作为用于诱导CTL的试剂有用的肿瘤抗原肽和其基因。本发明提供的用于诱导CTL的试剂作为例如肉瘤、肾癌和其它癌症的治疗剂有用。附图简述


图1为显示了 CTL5A9的肽-特异性细胞毒性活性的图。纵坐标表示细胞毒性活性和横坐标表示CTL5A9细胞(效应物)数和靶细胞数的比例。图2为显示了 CTL5A9对癌细胞系的细胞毒性作用的图。符号“ + ”和“_”表示有关各个细胞系的？8 表达、!11^40201表达和正^^处理的存在或缺乏。通过变化的效应物靶比例测定了 CTL5A9对各个细胞系的细胞毒性活性。实施本发明的最佳方式 1)本发明提供的肽
在下文中可能被称为“本发明的肽”的本发明提供的肽为包含与SEQ ID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列的肿瘤抗原肽，并且本发明的肽为上述PBF蛋白质的肽片段，并具有结合HLA抗原、优选HLA-A2抗原从而使所述肽被CTL识别的活性。如本文使用的，“基本相同的氨基酸序列”指没有限制的任意氨基酸序列，只要由 “基本相同的氨基酸序列”组成的肽与由SEQ ID N0:4的氨基酸序列组成的肿瘤抗原肽发挥类似的活性。例如，基本相同的氨基酸序列可包括在SEQ ID NO:4的氨基酸序列中的第二位氨基酸具有蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或谷氨酰胺取代的或在C-端氨基酸具有亮氨酸取代的氨基酸序列。就此而论，关于HLA-A2类型的HLA (例如HLA-A0201，-A0204, -A0205, -A0206,和-A0207)，呈递的抗原肽序列的通常模式(即基序)是已知的，如下表1中所示 (Immunogenetics, 41，p. 178，1995 ；禾口 J. Immunol. , 155，p. 4749，1995，其在此处引入作为参考)。表 权利要求
1.由与SEQID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽，其中所述肽结合HLA抗原并被细胞毒性T细胞(下文中称为“CTL”)识别。
2.根据权利要求1的肽，其中所述HLA抗原为HLA-A2。
3.根据权利要求2的肽，其由下述氨基酸序列组成SEQID N0:4的氨基酸序列或包含在SEQ ID NO: 4的氨基酸序列中的氨基酸残基的取代的氨基酸序列，其中在SEQ ID NO: 4 第2位上的氨基酸残基被蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或谷氨酰胺取代，或在SEQ ID N0:4 C-端的氨基酸残基被亮氨酸取代。
4.由SEQID NO:4的氨基酸序列组成的肽。
5.用于诱导CTL的试剂，其包含根据权利要求1至4中任一项的肽作为活性成分。
6.用于诱导CTL的试剂，其包含编码由与SEQID NO:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽的核酸。
7.根据权利要求6的用于诱导CTL的试剂，其中所述多核苷酸为由SEQID NO: 3的核酸序列组成的多核苷酸。
8.由编码根据权利要求1至4中任一项的肽的多核苷酸组成的核酸。
9.用于诱导CTL的试剂，其包含根据权利要求8的核酸。
10.一种产生抗原呈递细胞的方法，其中所述方法的特征在于将下述中的一种(a)根据权利要求1至4中任一项的肽，和(b)包含编码(a)的肽的多核苷酸的核酸，与具有抗原呈递能力的细胞在体外接触。
11.由根据权利要求10的方法产生的抗原呈递细胞。
12.—种诱导CTL的方法，其中所述方法的特征在于将下述中的一种(a)根据权利要求1至4中任一项的肽，(b)包含编码(a)的肽的多核苷酸的核酸，与外周血淋巴细胞在体外接触。
13.由根据权利要求12的方法诱导的CTL。
14.特异性结合根据权利要求1至4中任一项的肽的抗体。
15.肿瘤标记物，其包含编码由与SEQID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽的多核苷酸，或与所述多核苷酸互补的多核苷酸。
16.根据权利要求15的肿瘤标记物，其中所述肿瘤标记物包含含有SEQID NO: 3的核酸序列的多核苷酸或与所述多核苷酸互补的多核苷酸。
17.由下述多肽组成的一种肿瘤标记物，所述多肽由与SEQID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成。
18.根据权利要求17的肿瘤标记物，其中所述肿瘤标记物由与SEQID N0:4的氨基酸序列相同的多肽组成。
19.由下述抗体组成的肿瘤标记物，所述抗体针对由与SEQID N0:4的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列组成的肽，或为根据权利要求14的抗体。
20.根据权利要求19的肿瘤标记物，其中所述肿瘤标记物由针对由SEQID N0:4的氨基酸序列组成的肽的抗体组成。
21.包含根据权利要求1至4中任一项的肽和HLA抗原的HLA四聚体。
22.由根据权利要求21的HLA四聚体组成的肿瘤标记物。
23.根据权利要求15至20和22中任一项的肿瘤标记物，其中所述肿瘤为肉瘤或肾癌。
24.用于肿瘤的诊断的试剂，其中所述试剂包含根据权利要求15至20、22和23中任一项的肿瘤标记物。
全文摘要
公开了由与SEQIDNO:4所示的氨基酸序列相同的氨基酸序列或基本相同的氨基酸序列组成的肽，其中所述肽结合HLA抗原并被细胞毒性T细胞识别。本发明的肽可在体内或体外被用作用于诱导CTL的试剂，即癌症疫苗，并对肿瘤例如肉瘤、肾癌和其它癌症发挥治疗或改善作用。本发明的肽还可用作针对肿瘤例如肉瘤、肾癌和其它癌症的肿瘤标记物。
文档编号G01N33/574GK102257138SQ200980151110
公开日2011年11月23日 申请日期2009年10月19日 优先权日2008年10月20日
发明者佐藤升志, 和田卓郎, 塚原智英, 川口哲 申请人:佐藤升志, 大日本住友制药株式会社