专利名称：一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸及制备方法
技术领域：
本发明涉及免疫诊断试剂领域，具体为一种在可同时检测TORCH感染五项指标的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸及制备方法。
背景技术：
我国是一个出生缺陷高发国家，每年约有20-30万肉眼可见的先天畸形儿出生， 加上出生后数月和数年才显现出来的缺陷，每年先天缺陷儿童总数高达80-120万，约占每年总出生人数的4% -6%，大约每30秒就会诞生一个缺陷儿。1940年，澳大利亚风疹流行，次年新生儿白内障明显增多。经调查，患儿母亲于孕期都有感染风疹的历史。首次发现新生儿畸形与母亲孕期感染风疹有关。1964年，美国风疹流行，次年出生了数万名畸形儿。证明了孕期感染风疹可引起新生儿畸形。TORCH—词于1971年由Nahmias首次提出，系指能引起胎儿感染造成先天畸形或发育异常的几种病原体的联称。T指弓形虫(Toxplasma gomdii Tox) ；R指风疹病毒 (Rubella virus RV) ；C指巨细胞病毒(Cytomegao virus CMV) ；H指单纯疱疹病毒(Herpes Simplex virus HSV) ；0指其它(Others)，如梅毒螺旋体等。TORCH感染如果在妇女妊娠期发生，常可并发先天性或围产期新生儿感染，导致流产、畸胎、死胎、早产或发育不全等。在免疫系统正常个体中，原发感染后，多数呈隐形感染，无临床症状(鼠弓形体、 巨细胞)，或是病程缓慢温和或不典型(风疹、单疱)。且一旦发生感染后，特异性IgG抗体将终生存在于体内。在我国人群中，感染率极高。据资料统计，除弓形体(约5%-20%)和 HSV-2(约20% -40% )外，其他TORCH病原体的IgG抗体在正常人群中的阳性率可达80% 甚至90%以上，可以说感染普遍存在。当孕妇处于潜伏感染期或复发时，几乎对胎儿没有影响，而妊娠早期的原发感染虽然对孕妇自身影响不大，但却可以垂直感染胎儿，或在分娩时感染新生儿，给胎儿或新生儿带来�：�。TORCH感染在围产医学中称之为“TORCH综合症”， 已经受到全世界医学界尤其是妇产科和儿科医生的高度重视。欧美发达国家早在七十年代就将风疹、弓形体、巨细胞病毒等检测列为孕期筛查项目。TORCH开始检测的时间在孕前或是孕早期，对于易感孕妇，持续的监测也有必要。我国为人口大国，实行一对夫妇生一个孩子，优生优育工作非常重要。根据《中国妇女发展纲要》(2001-2010)和《中国儿童发展纲要Q001-2010)》要求，国家卫生部于2002 年7月出台了《中国提高出生人口素质、减少出生缺陷和残疾行动计划(2002-2010)》，国家人口和计划生育委员会于2006年12月颁布了《全国“十一五”人口和计划生育事业发展规划》，其中都从法律角度明确提出了加强产前筛选及诊断。我国农村人口基数庞大，达7. 37亿，近年来，农村人口出生缺陷发生率呈现持续上升趋势。孕妇感染TORCH导致新生儿缺陷是出生缺陷率上升的一个重要原因，传统的酶联免疫法需要专业技术人员和在实验室里操作才能进行，农村医疗基础设施差，缺乏专业技术人员，不利于孕妇感染TORCH的筛查(事实上每一位孕妇在怀孕准备期到分娩期，都应当接受1-3次孕妇感染TORCH的筛查，怀孕初的三个月胚胎处于器官形成期，此时受病毒感染，可破坏细胞或抑制细胞的分裂和增值。器官形成期以后感染病毒，可破坏组织和器官结构，并可形成持续感染，出生后继续排毒，能引起相应的病变)，导致出生缺陷的发生，不仅给农村家庭和社会带来沉重负担，而且影响到未来劳动力的素质，已经成为制约社会主义新农村建设、全面建设小康社会的重要因素。城镇地区虽有实验室和专业技术人员，但目前临床上检测TORCH-IgM抗体常用的是ELISA法，其操作程序比较复杂，检测时间较长，不适应孕妇感染的快速诊断和怀孕人群的筛查，不能满足临床快速检测的需求，市场上已出现了胶体金快速检测TORCH-IgM抗体， 但只能检测一个结果，不利于孕妇早期感染TORCH的快速筛查。人们也发展了能同时进行多种疾病的检测的胶体金免疫层析技术，如在层析膜上同时包被固定两种以上检测项目抗原，包被线长度相同，并间隔一定距离平行向后排列，固化的层析膜装配成试纸条。但当用此试纸条检测含有两种以上病原体抗体血清标本时，胶体金标记抗体结合物与第一条检测线形成复合物后，剩余的胶体金标记抗体结合物再与下一个检测线反应时，由于浓度下降检测灵敏度会降低，当它流到第三条检测线反应时，由于浓度更低，反应检测灵敏度会更低，标本就会出现假阴性情况。
发明内容
本发明的目的是针对以上所述现有技术存在的不足，提供一种操作简便，简易快速，观察结果直观，无需仪器设备，并能够做到一次加样即可检测是否有五种病原微生物急性感染的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸。本发明的另一目的是提供所述一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法。为了实现本发明目的，本发明采用的技术方案如下一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸，包括底板、吸收垫、层析膜、用于抗体标记的金标垫和样品垫；所述层析膜一端连接金标垫的一端、金标垫的另一端与样品垫连接，所述层析膜的另一端连接吸收垫，所述吸收垫、层析膜、金标垫和样品垫设置在所述底板上，所述金标垫上吸附羊抗人 IgM(羊抗人免疫球蛋白M)标记的胶体金结合物颗粒；所述层析膜上包被TORCH五种抗原的检测线和兔抗羊IgG(兔抗羊免疫球蛋白)抗体的对照线，所述层析膜设有检测线区和对照线区，所述检测线区和对照线区分别独立的设有五个条状带；所述吸收垫上有与所述层析膜上的检测线相对应的标识区。优选的，所述层析膜两端分别与金标垫和吸收垫连接，所述金标垫和吸收垫分别安装在所述层析膜两侧边缘的上部，所述金标垫另一侧边缘上部设置有样品垫；所述层析膜、金标垫、吸收垫以及样品垫安装在底板上；所述层析膜中对照线和检测线的部分被切割为各独立的条带，每一条带分别包括一个包被抗原的检测线T和包被抗体的对照线C。所述层析膜为硝酸纤维素膜，层析膜上设有检测线和对照线，检测线包被弓形体、 风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型抗原五种抗原，对照线包被兔抗羊IgG抗体。所述层析膜的包被方法是用划膜仪将工作浓度的抗原和抗体以一定的喷液量和喷液速度包被在硝酸纤维素膜上，室温晾干。所述金标垫可以玻璃纤维膜，所述玻璃纤维膜上用胶体金标记羊抗人IgM抗体。
一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法，包括如下步骤(1)获得TORCH抗原、羊抗人IgM抗体及兔抗羊IgG抗体；(2)胶体金溶液及胶体金-抗体结合物的制备；(3)样品垫与金标垫的处理；(4)层析膜对照线C、检测线T的喷划；(5)五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的成品组装；本发明所涉及的TORCH抗原(弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型、 单纯疱疹病毒II型抗原)可通过商业化途径购买弓形体抗原(货号A5202)可由上海西唐生物科技有限公司供货；风疹病毒(货号RV021)、巨细胞病毒抗原(货号A5202)可由北京万域美澜科技有限公司供货；单纯疱疹病毒I型(货号N0503944)、单纯疱疹病毒II 型抗原(货号N0503942)可由上海希美生物科技有限公司供货。抗体(羊抗人IgM抗体及兔抗羊IgG抗体)可以通过实验室自制，也可通过商业化途径购买。抗体(羊抗人IgM抗体及兔抗羊IgG抗体)的制备方法是用生理盐水稀释免疫原(人IgM和羊IgG)，与弗氏佐剂进行1 1混合，形成乳剂，将乳剂免疫注射动物， 共进行四次免疫；然后收集、分离得到含有羊抗人IgM抗体和兔抗羊IgG抗体的血清；将抗体血清加入到亲和层析柱中，放置于4°C孵育过夜后，洗脱抗体，即得到纯化的抗体。羊抗人IgM抗体(货号P2589g-h)可从上海麦莎生物科技有限公司购买，兔抗羊IgG抗体(货号A20)可从北京法特捷生物技术发展中心购买。所述底板为塑料材质底板，可以购于东莞市纳林塑胶化工有限公司。作为层析膜材质的硝酸纤维素膜可以购于北京赛驰生物科技有限公司。所述金标垫是用玻璃纤维膜制成的，所述玻璃纤维膜可以购于上海金标生物科技有限公司。所述样品垫可以购于上海金标生物科技有限公司。所述吸收垫可以购于上海金标生物科技有限公司。所述步骤( 胶体金溶液及胶体金-抗体结合物的制备步骤如下(1)胶体金溶液的制备方法采用柠檬酸三钠还原法取硅化过的三角瓶，加入 4000mL去离子及40mL 1 %质量百分比浓度的氯金酸，微波炉加热沸腾；迅速加入47mL的
质量百分比浓度的柠檬酸三钠，此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液很快变成灰色， 续而转成黑色，最后变成稳定的酒红色后，继续煮沸15min，冷却后用去离子水补足体积至 4000mLo(2)羊抗人IgM标记胶体金颗粒的胶体金-抗体结合物制备方法每4000ml胶体金溶液，按照25 μ g/ml的比例需要提供羊抗人IgM IOOmg (即每IOOOml需要羊抗人IgM的重量为25mg)，将胶体金溶液和羊抗人IgM溶液分别以0. lmol/L K2CO3调pH至9. 0，电磁搅拌羊抗人IgM溶液，在羊抗人IgM溶液加入胶体金溶液，继续搅拌lOmin，加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。(3)采用超速离心法纯化根据胶体金颗粒的大�。昙堑鞍椎闹掷嗉拔榷恋牟煌∮貌煌睦胄乃俣群屠胄氖奔洹Ｓ肂SA(牛血清白蛋白)做稳定剂的胶体金-羊抗人IgM结合颗�？上�4000g，4°C离心5分钟去除沉淀(20nm 40nm胶体金颗粒)；余下上清再以HOOOg离心力，4°C离心Ih (沉淀为20nm 40nm胶体金标抗体结合物)，弃上清，复溶缓冲液将沉淀重悬为原体积的1/10，4°C保存。如在结合物内加50%甘油可贮存于-20°C
保存一年以上。所述步骤( 中样品垫与金标垫分别用各自的处理缓冲液进行浸泡处理。将样品垫浸入含质量百分比浓度BSA和0. 05%质量百分比浓度Tween20的PBS溶液中浸泡15 分钟，取出真空冻干。将金标垫浸入含10%蔗糖、0. 05质量百分比浓度％Tween20和0.01% 质量百分比浓度叠氮钠的PBS溶液中浸泡15分钟，取出室温晾干。所述步骤(4)层析膜中对照线C和检测线T喷划方法是将弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型五种包被抗原(检测线)、兔抗羊多克隆抗体(对照线)分别稀释至 1. 5mg/ml、l. Omg/ml, 1. 5mg/ml, lmg/ml, lmg/ml 及 2mg/ml。分别加入划膜仪(型号:HM3030)的1、2、3、4、5和6号杯；调试划膜仪，喷液量设定为1. 4μ 1/ cm，其中1、2、3、4、5号杯在同一水平线上放置，6号杯在距上述杯上方5mm处放置，6号杯的导轨速度是其它杯的5倍。包被后的硝酸纤维素膜过夜晾干。按每IOOOml封闭液浸泡5 张(折20板)膜计，将包被好的膜浸入封闭2小时；将膜取出浙干，过夜晾干，即制得硝酸纤维反应膜。羊抗人IgM抗体与胶体金结合的pH值为8. 2，浓度为为25 μ g/mL。与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的检测原理如下在层析膜上均有对照线C(Control)和检测线T(Test)，对照线C包被有兔抗羊IgG抗体，检测线T上包被弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型五种抗原；试纸的层析膜两端分别与样品垫、金标垫和吸收垫连接，层析膜中间部分包括对照线和检测线的部分被切割为5各独立的条带，每一条带分别包括一个包被抗原的检测线和对照线。测定血清TORCH-IgM抗体时先将受试者血清滴在样品垫上，通过虹吸现象血清就会向吸水垫一端渗透，当血清经过玻璃纤维膜时其中的 TORCH-IgM抗体就会与羊抗人IgM标记的胶体金结合物颗粒反应，形成抗原抗体复合物，使得受试者的抗体间接地标上了胶体金颗粒，并进一步向吸水垫一端流动，经过检测区时，抗原抗体复合物就会被包被其上的TORCH抗原捕捉而形成一条红色线(阳性线)，血清继续向前流动，未与TORCH抗原反应的胶体金结合物颗粒则会与控制区该胶体金标记抗抗体(羊抗人IgM)的二抗(兔抗羊IgG抗体)反应也形成一条红色线(对照线)，结果可报告阳性。如受试者抗体阴性，当血清进过玻璃纤维膜时虽然血清中其它IgM抗体会与羊抗人IgM 标记的胶体金结合物颗粒形成抗原抗体复合物，但经过检测区时，不会被包被其上的TORCH 抗原捕捉，就不会出现红色线(阳性线)，血清继续向前流动，形成的胶体金复合物颗粒会与控制区该胶体金标记抗抗体(羊抗人IgM)的二抗(兔抗羊IgG抗体)反应也形成一条红色线(对照线)，因此阴性血清仅有一条对照线。本发明所述的试纸中间部分共有5个条带，条带之间彼此独立，不会受到相互干扰。受试者血清中有某一种或几种TORCH-IgM抗体，相应的包被此TORCH抗原的那个条带的检测线就会形成红色线，可以通过一次血清加样即可检测孕妇是否有TORCH五种病原的急性感染；检测时不需其它任何仪器设备，用肉眼即可观察结果，用户容易接受，特别适合基层卫生所，尤其是农村卫生所开展孕妇TORCH-IgM筛查工作，具有很好的应用价值；可以有效的预防孕妇TORCH感染会引起先天性或围产期新生儿感染，从而导致流产、畸胎、死胎、 早产或发育不全等的发生。
图1为本发明一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的结构示意图；图2为羊抗人IgM抗体与胶体金结合的最佳pH值确定曲线图；图3为羊抗人IgM抗体与胶体金结合的最佳浓度确定曲线图；图4为单项胶体金免疫层析试纸条结果判断的模拟图
具体实施例方式以下具体结合实施例对本发明进行详细的说明。一板五联TORCH-I gM抗体胶体金快速检测试纸，如图1所示，包括底板5、吸收垫 4、层析膜3、用于抗体标记的金标垫2和样品垫1 ；金标垫2为玻璃纤维膜上吸附羊抗人IgM 标记的胶体金结合物颗粒；层析膜3上包被TORCH五种抗原检测线T和兔抗羊IgG抗体对照线C，所述层析膜3的一端连接金标垫2的一端、金标垫2的另一端连接样品垫1，所述层析膜3的另一端连接吸收垫4。所述吸收垫4、层析膜3、金标垫2和样品垫1设置在所述底板5上，所述层析膜3中设有检测线区和对照线区，所述检测线区和对照线区分别设有独立分开的五个条状带，所述吸收垫4上设有与层析膜3上的具体检测线相对应的标识区。所述底板5为塑料板。所述层析膜3为硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上设有检测线T和对照线C，所述检测线T包被弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型抗原五种抗原，对照线C包被兔抗羊IgG抗体。所述金标垫为上吸附羊抗人IgM(羊抗人免疫球蛋白M)标记的胶体金结合物颗粒；所述层析膜3上的TORCH-IgM及兔抗羊IgG 抗体的包被方法是用划膜仪将工作浓度的抗原和抗体以一定的喷液量和喷液速度包被在硝酸纤维素膜上，室温晾干。所述样品垫1可以为无纺布、玻璃纤维膜；所述吸收垫4可以为吸水纸。优选的结构如下层析膜3两端分别与金标垫2和吸收垫4连接，所述金标垫2和吸收垫4分别安装在所述层析膜2两侧边缘的上部，所述金标垫2另一侧边缘上部设置有样品垫1。所述层析膜3、金标垫2、吸收垫4以及样品垫1安装在底板5上。所述层析膜3 中间部分包括对照线和检测线的部分被切割为5个独立的条带，每一个条带分别包括一个包被抗原的检测线T和对照线C。测定血清TORCH-IgM抗体时先将受试者血清滴在样品垫1上，通过虹吸现象血清就会向吸水垫一端渗透，当血清经过金标垫2的玻璃纤维膜时其中的TORCH-IgM抗体就会与羊抗人IgM标记的胶体金结合物颗粒反应，形成抗原抗体复合物，使得受试者的抗体间接地标上了胶体金颗粒，并进一步向吸水垫的层析膜3 —端流动，经过检测区时，抗原抗体复合物就会被包被其上的TORCH抗原捕捉而形成一条红色线(阳性线)，血清继续向前流动，未与TORCH抗原反应的胶体金结合物颗粒则会与控制区该胶体金标记抗抗体(羊抗人 IgM)的二抗(兔抗羊IgG抗体)反应也形成一条红色线(对照线)，结果可报告阳性。如受试者抗体阴性，当血清进过玻璃纤维膜时虽然血清中其它I gM抗体会与羊抗人IgM标记的胶体金结合物颗粒形成抗原抗体复合物，但经过检测区时，不会被包被其上的TORCH抗原捕捉，就不会出现红色线(阳性线)，血清继续向前流动，形成的胶体金复合物颗粒会与控制区该胶体金标记抗抗体(羊抗人IgM)的二抗(兔抗羊IgG抗体)反应也形成一条红色线(对照线)，因此阴性血清仅有一条对照线。层析膜3中的5个条带之间彼此独立，不会受到相互干扰。受试者血清中有某一种或几种TORCH-IgM抗体，相应的包被此TORCH抗原的那个条带的检测线就会形成红色线，可以通过一次血清加样即可检测孕妇是否有TORCH 五种病原的急性感染。实施例1胶体金标记抗体制备1.羊抗人IgM抗体与胶体金结合的最适pH值确定标记体系的pH值、离子浓度以及胶体金与蛋白的比例均影响胶体金对蛋白质的吸附。一般认为胶体金粒子表面为一层AuCl2，因此，粒子表面带有负电荷，这种负电荷粒子之间相互排斥，形成稳定悬浮的胶体金溶液。金颗粒表面可以包被一层生物大分子(如蛋白)来稳定和保护这些粒子，以免受外来电解质的影响而相互凝聚在一起。胶体金粒子对蛋白的吸附作用取决于PH值，这是因蛋白的净电荷取决于溶液的pH值，在pH = pi时为中性。由于在pH = pI时蛋白溶解度最�。虼苏馐彼潭茸钚。钊菀孜降绞杷慕鹆Ｗ颖砻�。但在实际的胶体金探针制备中，一般胶体金调整为PH = ΡΙ+0. 5，这样蛋白带正电，有利于结合更稳定。本实验用0. lmol/L K2CO3将胶体金溶液的pH值分别调至6. 0、6. 5、7. 0、7. 5、8. 0、 8. 5、9. 0和9. 5，依次加入羊抗人IgM和10% NaCl溶液参见下表(羊抗人IgM抗体与胶体金结合的最低PH值确定)，结果显示pH值为8. 0的一管仍保持红色，确定最低pH值为8. 0。 重新再将胶体金溶液的PH值分别调至7. 4,7. 6,7. 8,8. 0,8. 2,8. 4和8. 6，分别加入抗体与 NaCl溶液，通过观察颜色变化确定最适结合pH值为8. 2。根据胶体金颗粒的大�。�500 560nm之间测定OD值。以pH值为横坐标，以OD值为纵坐标绘制曲线，曲线最先与横轴相接近点处的PH值为8. 2，即最适结合pH值为8. 2，见下表及图3所示。羊抗人IgM抗体与胶体金结合的最低pH值确定
权利要求
1.一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸，其特征在于，包括底板、吸收垫、层析膜、用于抗体标记的金标垫和样品垫；所述层析膜一端连接金标垫的一端、金标垫的另一端与样品垫连接，所述层析膜的另一端连接吸收垫，所述吸收垫、层析膜、金标垫和样品垫设置在所述底板上，所述金标垫上吸附羊抗人IgM标记的胶体金结合物颗粒；所述层析膜上包被TORCH五种抗原的检测线和兔抗羊IgG抗体的对照线，所述层析膜设有检测线区和对照线区，所述检测线区和对照线区分别独立的设有五个条状带；所述吸收垫上有与所述层析膜上的检测线相对应的标识区。2.如权利要求1所述的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸，其特征在于，所述层析膜两端分别与金标垫和吸收垫连接，所述金标垫和吸收垫分别安装在所述层析膜两侧边缘的上部，所述金标垫另一侧边缘上部设置有样品垫；所述层析膜、金标垫、吸收垫以及样品垫安装在底板上；所述层析膜中对照线和检测线的部分被切割为各独立的条带，每一条带分别包括一个包被抗原的检测线T和包被抗体的对照线C。
2.如权利要求1或者2所述的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸，其特征在于，所述层析膜为硝酸纤维素膜，层析膜上设有检测线和对照线，检测线包被弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型抗原五种抗原，对照线包被兔抗羊IgG抗体。
3.—板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1)获得TORCH抗原、羊抗人IgM抗体及兔抗羊IgG抗体；(2)胶体金溶液及胶体金-抗体结合物的制备；(3)样品垫与金标垫的处理；(4)层析膜对照线C、检测线T的喷划；(5)五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的成品组装。
4.如权利要求3所述的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)胶体金溶液及胶体金-抗体结合物的制备步骤如下(1)胶体金溶液的制备方法采用柠檬酸三钠还原法取硅化过的三角瓶，加入4000mL 去离子及40mL 质量百分比浓度氯金酸，微波炉加热沸腾；加入47mL的质量百分比浓度柠檬酸三钠，此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液很快变成灰色，续而转成黑色，最后变成稳定的酒红色后，继续煮沸15min，冷却后用去离子水补足体积至4000mL ；(2)羊抗人IgM标记胶体金颗粒的胶体金-抗体结合物制备方法每4000ml胶体金溶液，按照25 μ g/ml的比例需要提供羊抗人IgM IOOmg,将胶体金溶液和羊抗人IgM溶液分别以0. lmol/L K2CO3调pH至9. 0，电磁搅拌羊抗人IgM溶液，在羊抗人IgM溶液加入胶体金溶液，继续搅拌IOmin ；(3)采用超速离心法纯化用BSA做稳定剂的胶体金-羊抗人IgM结合颗粒先4000g， 4°C离心5分钟去除沉淀；余下上清再以14000g的离心力，4°C离心lh，弃上清，复溶缓冲液将沉淀重悬为原体积的1/10，4°C保存。
5.如权利要求3所述的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤O)中样品垫与金标垫分别用各自的处理缓冲液进行浸泡处理，将样品垫浸入含质量百分比浓度BSA和0. 05% Tween20的PBS溶液中浸泡15分钟，取出真空冻干；将金标垫垫浸入含10%蔗糖、0. 05% Tween20和0. 01 %质量百分比浓度叠氮钠的 PBS溶液中浸泡15分钟，取出室温晾干。
6.如权利要求3所述的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)层析膜中对照线C和检测线T喷划方法是将弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型五种包被抗原、兔抗羊I gG抗体分别稀释至 1. 5mg/ml、l. Omg/ml, 1. 5mg/ml，lmg/ml，lmg/ml 及 2mg/ml ；分别加入划膜仪的 1、2、3、 4、5和6号杯；调试划膜仪，喷液量设定为1.4μ 1/cm，其中1、2、3、4、5号杯在同一水平线上放置，6号杯在距上述杯上方5mm处放置，6号杯的导轨速度是其它杯的5倍；包被后的硝酸纤维素膜过夜晾干。
7.如权利要求4所述的一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法，其特征在于，羊抗人IgM抗体与胶体金结合的pH值为8. 2，浓度为25 μ g/mL。
全文摘要
本发明公开一种一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸，层析膜一端连接金标垫、金标垫的另一端与样品垫连接，所述层析膜的另一端连接吸收垫，所述吸收垫、层析膜、金标垫和样品垫设置在所述底板上，所述金标垫为上吸附羊抗人IgM标记的胶体金结合物颗粒；所述层析膜上包被TORCH五种抗原的检测线和兔抗羊IgG抗体的对照线，所述吸收垫上有与所述层析膜上的检测线相对应的标识区。本发明另外公开了一种一板五联TORCH-IgM抗体胶体金快速检测试纸的制备方法。本发明可以通过一次血清加样即可检测孕妇是否有TORCH五种病原的急性感染；用肉眼即可观察结果，用户容易接受，特别适合基层卫生所，可以有效的预防孕妇TORCH感染会引起先天性或围产期新生儿感染，从而导致流产、畸胎、死胎、早产或发育不全等的发生。
文档编号G01N33/531GK102323410SQ20111022054
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月3日 优先权日2011年8月3日
发明者胡勇 申请人:广州精达医学科技有限公司
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