专利名称：一种干化学反应装置的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种千化学反应装置，特别涉及一种可同时测定 人体尿液中尿乳酸、肌酸和P-羟丁酸的千化学反应装置。
背景技术：
肥胖，在世界范围内已越来越多的引起医学界的关注。研究显示， 肥胖可诱发糖尿�。叩ü檀家约吧龉δ芩ソ叩戎疃嗉膊�。在我国， 改革开放以来，随着人民生活水平的提高和营养状态的改善，肥胖和 超重者日益增多，肥胖已经成为我国社会一个不容忽视的健康问题。
由于肥胖人群的增多，减肥、痩身在我国也随之成为一种时尚。 在减肥的过程中，人们往往只追求体重的减轻和身材的苗条，而忽视
者，通过服用大量减肥药或超出身体承受能力的高强度运动来达到减
肥的目的，更是会造成体内代谢紊乱甚至引起相关疾�。坏荒艽�
到减肥的目的，反而对身体健康造成极大损害。
在减肥过程中，人们一般只是通过称量体重来评价减肥的效果，
但是一个有意义的减肥效果不能仅仅通过简单的称量体重来判断，因 为人体内体液的平衡和其它一些因素对人体的体重有着很大的影响。
一个有意义的，健康的减肥过程，应该是体内脂肪，糖类被代谢为更 小分子物质的过程，同时应该综合考虑减肥对人体代谢的影响。
目前国内尚无针对减肥效果评价的相关发明或商品试剂盒，国外
有类似用途的试纸条(专利号US 2004/ 0043376 Al),但只检测人 尿液中P—羟丁酸一种指标，不能全面反映减肥对人体代谢的影响。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供一种能同时检测人体尿液中尿乳酸、肌酸和P-羟丁酸的干化学反应装置。
乳酸是糖原酵解的终产物，而糖原酵解是人类肌肉活动能量的主 要来源之一，它是在体内供氧不能满足有氧氧化的情况下发生的；因 此，体内乳酸浓度的含量可以反应人体运动的负荷程度，国际上也常 把乳酸含量作为衡量运动员运动强度的指标之一。在运动减肥的过程
中可以作为运动强度的指标以及反映糖类的代谢状况；肌酸是一种主
要存在于骨骼肌中的天然无机化合物，是磷酸肌酸的前体物质。在骨
骼肌能量的代谢中，磷酸肌酸是能量的来源，当ATP水平下降时， 磷酸肌酸可以促进三磷酸腺嘌呤核苷酸(ATP)合成；因此肌酸是一 种重要的能量供应和储存物质，它可以反应减肥过程中肌肉营养状态 和代谢状况；(3—羟丁酸是酮体的主要成分，在肝脏内合成，占酮体 的70%以上，可以代表酮体的含量；而酮体是脂肪分解的终产物，是 衡量脂肪代谢的标志物，可以通过监测减肥过程中P—羟丁酸的含 量来反映脂肪代谢的状况。本实用新型通过提供一种能够同时快速检 测人体尿液中乳酸、肌酸和P—羟丁酸浓度的干化学反应装置，从而 可以综合全面的对人的减肥效果进行评价。
本实用新型千化学反应装置，包括反应板，在所述反应板上具有 至少三个干化学反应盲孔，这三个反应盲孔分别为用来检测人体尿液 乳酸浓度的乳酸测定孔、用来检测人体尿液肌酸浓度的肌酸测定孔和 用来检测人体尿液P —羟丁酸浓度的P —羟丁酸测定孔；
所述乳酸测定孔内从孔底部起依次放有显色剂垫、过氧化物酶垫 和乳酸氧化酶垫；
所述肌酸测定孔内从孔底部起依次放有显色剂垫、过氧化物酶 垫、肌氨酸氧化酶垫和肌酸酶垫；
所述P—羟丁酸测定孔内从孔底部起依次放有氯化硝基四氮唑 兰(NBT)垫、烟酰胺腺嘌呤二核苦酸(NAD)垫、黄递酶垫和P —
羟丁酸脱氢酶垫。所述乳酸氧化酶垫是将垫载体在含有100~300U/ml乳酸氧化酶 ph=7.0 ~ 7.2的PIPES缓冲液中浸泡后干燥处理获得。
所述过氧化物酶垫是将垫载体在含有500~ 1000U/ml过氧化物 酶pt^7.0 7.2的PIPES缓冲液中浸泡后干燥处理获得。
所述显色剂垫是将垫载体在含有l~5.2g/L 4-氨基氨替吡琳和 0.2~2 g/L 3， 5-二氯二羟基苯璜酸的生理盐水中浸泡后干燥处理获 得。
所述肌酸酶垫是将垫载体在含有3000 ~ 5000U/ml肌酸酶和 5-10g/100ml第一酶稳定剂pH=7.5 ~ 8.3的Tris-HCl缓冲液中浸泡后
干燥处理获得；所述第一酶稳定剂为海藻糖、葡聚糖或乙二胺四乙酸 二钠盐。
所述肌氨酸氧化酶垫是将垫载体在含750 ~ 1000 U/ml肌氨酸氧 化酶和5-15g/100ml第二酶稳定剂pH=7.5 ~ 8.3的Tris-HCl缓冲液中 浸泡后干燥处理获得；所述第二酶稳定剂为海藻糖、葡聚糖、乙二胺 四乙酸二钠盐或黄素二核苷酸。
所述(3 -羟丁酸脱氢酶垫是将垫载体在含100 ~ 400U/ml P -羟丁 酸脱氢酶和3-10g/100ml第三酶稳定剂pH=8.0 ~ 9.0的Tris-HCl缓冲 液中浸泡后干燥处理获得；所述第三酶稳定剂为牛血清白蛋白或乙二 胺四乙酸二钠盐。
所述黄递酶垫是将载体在含250 ~ 680U/ml黄递酶和4-12g/100ml 第四酶稳定剂的pH=8.0~9.0的Tris-HCl缓冲液中浸泡后干燥处理获 得；所述第四酶稳定剂为牛血清白蛋白、氯化钠或氯化钾。
所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸垫是将载体在含烟酰胺腺嘌呤二核 苷酸、2-吗啉乙磺酸缓冲液和第五稳定剂的pH-4.0-6.0辅酶I溶液 中浸泡，之后进行干燥处理获得；在所述辅酶I溶液中，所述烟酰胺 腺嘌呤二核苷酸浓度为0.125 -0.32 g/L;所述2-吗琳乙磺酸缓冲液 浓度为50 mmol/L;所述第五稳定剂在溶液中质量百分浓度为1.2-62g/100ml;所述第五稳定剂为海藻糖或乙二胺四乙酸钠盐。
所述氯化硝基四氮唑兰垫是将载体在含1.2-2.1g/100ml氯化硝基 四氮唑兰和体积百分比86.5%二甲亚砜的第二显色剂溶液中浸泡后 干燥处理获得。
上述涉及到的各种垫载体可以是滤纸，玻璃纤维或层析纸；各种 垫载体的直径宜与相应的测定孔直径相同。 本实用新型干化学反应装置具有如下优点
1. 可同时测定尿液中尿乳酸、肌酸和P-羟丁酸浓度，简单，迅速， 不需任何仪器和专业训练人员即可检测。
2. 通过对不同反应试剂的独立分层印渍，提高了产品的稳定性和 准确性。
3. 首次将尿中乳酸，肌酸和p-羟丁酸作为三个相关指标进行减肥 效果的评价，更全面，科学地反映了人在减肥过程中的身体代谢状况。
4. 本使用新型也可用于单独测定人尿液中乳酸，肌酸和(3-羟丁 酸，用于相关疾病的辅助筛查和诊断。
图l为干化学反应装置的结构示意图，Al为乳酸测定孔，A2为
肌酸测定孔；A3为p —羟丁酸测定孔；
图2为图1的A-A向剖视图，其中l为底板，2显色剂垫，3过 氧化物酶垫，4乳酸氧化酶垫，5显色剂垫，6过氧化物酶垫，7肌氨 酸氧化酶垫，8肌酸酶垫，9氯化硝基四氮唑兰(NBT)垫，IO烟酰胺 腺嘌呤二核苷酸(NAD)垫，ll黄递酶垫，12(3—羟丁酸脱氢酶垫。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本实用新型的内容，但不应理解为对本实 用新型的的限制。
本实用新型中涉及到的百分号"％"，若未特别说明，是指质量 百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指溶液100ml中含有溶质若干克；液体之间的百分比，是指在20'C时容量的比例。
实施例l干化学反应装置
如图l所示，本例中干化学反应装置包括反应板l，其具有三个 干化学反应盲孔，所述三个干化学反应盲孔从上至下分别为用来检测
人体尿液乳酸浓度的乳酸测定孔Al、用来检测人体尿液肌酸浓度的 肌酸测定孔A2和用来检测人体尿液(3 —羟丁酸浓度的P —羟丁酸测 定孔A3;
所述乳酸测定孔A1内从孔底部起依次放有显色剂垫2、过氧化 物酶垫3和乳酸氧化酶垫4;
所述肌酸测定孔A2内从孔底部起依次放有显色剂垫5、过氧化 物酶垫6、肌氨酸氧化酶垫7和肌酸酶垫8;
所述P—羟丁酸测定孔A3内从孔底部起依次放有氯化硝基四氮 唑兰(NBT)垫9、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)垫10、黄递酶垫 11和P—羟丁酸脱氢酶垫12。所述反应板为长方形，反应盲孔呈一字排开。
所述各种垫载体为坡璃纤维制成，各种垫载体与相应的检测孔直 径相同。
各种反应垫可通过如下方法制备
制备乳酸氧化酶垫
釆用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由100U/ml乳酸氧化酶和pH=7.0, 100mmol/L哌嗪-N， N-双(2-乙磺酸)(PIPES)缓冲液中浸泡2小 时，2(TC条件下干燥4小时。
制备过氧化物酶垫
采用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由500U/ml过氧化物酶，pH=7.0, 100mmol/L哌嗪-N， N-双(2-乙磺酸)(PIPES)缓冲液中浸泡2小时， 2(TC条件下干燥4小时。
制备显色剂垫
采用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由lg/L的4-氨基安替吡琳，0.2g/L 的3, 5-二氯二羟基苯璜酸和生理盐水组成的显色剂液中浸泡2小时， 2(TC条件下干燥4小时。
制备肌酸酶垫
釆用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由3000U/ml的肌酸酶，50mmol/L ， pH=7.5的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液，5g/100ml海藻糖， 10g/100ml葡聚糖和50mmol/L乙二胺四乙酸二钠盐组成的酶液中浸 泡2小时，2(TC条件下干燥4小时。
制备肌氨酸氧化酶垫
釆用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由800U/ml的肌氨酸氧化酶， 50mmol/L ， pH:7.5的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液，6g/100ml 海藻糖，12g/100ml葡聚糖和5g/100ml乙二胺四乙酸二钠盐， 6g/100ml黄素二核苷酸组成的酶液中浸泡2小时，20'C条件下干燥4 小时。
制备P-羟丁酸脱氢酶垫
釆用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由100U/ml (3 -羟丁酸脱氢酶,pH=8.0， 50mmol/L的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液，3g/100ml牛血清白 蛋白，5g/100ml乙二胺四乙酸二钠盐组成的酶液中浸泡2小时，20 。C条件下干燥4小时。制备黄递酶垫
采用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由250U/miP-羟丁酸脱氢酶，pH-8.0, 50mmol/L的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液，4g/100ml氯化钠， 4 g/100ml氯化钾，6 g/100ml牛血清白蛋白组成的酶液中浸泡2小时， 2(TC条件下干燥4小时。
制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸垫
釆用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由0.125g/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸， 50mmol/L, pH=4.0的2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液和5g/ 100ml乙二胺 四乙酸二钠盐，10g/100ml组成的辅酶I液中浸泡2小时，2(TC条件 下干燥4小时。
氯化硝基四氮哇兰(NBT)垫制备
采用Whatman的3MM级色谱层析纸做载体，切成直径3.98mm 的圆片，并将所述层析纸载体在由1.2g/ml的氯化硝基四氮唑兰和体 积百分比86.5%的二甲亚砜组成第二显色剂液中浸泡2小时，20°C条 件下干燥4小时。
在检测时，将尿液经纯化后，滴入反应盲孔中(每孔2滴)，在 室温下静置25分钟，观察反应孔内反应垫颜色；将反应孔内反应垫 颜色与标准比色板上颜色进行对比，可以定性和半定量的得到被测物 浓度。
所述标准比色板包含
表示浓度0.1 mmol/L乳酸色标，浓度0.3 mmol/L乳酸色标和浓 度1.0mmol/L乳酸色标的标准乳酸比色板；
表示浓度0.1 mmol/L肌酸色标，浓度0.3 mmol/L肌酸色标和浓 度1.0mmol/L肌酸色标的标准肌酸比色板；和
表示浓度0.1 mmol/L P -羟丁酸色标，浓度0.3 mmol/L P -羟丁酸色标和浓度1.0 mmol/L P -羟丁酸色标的标准P -羟丁酸比色板；
测定时，可将标准比色板上颜色与反应结果比较，用以对被测物 进行定性和半定量判读和测定。
权利要求1、一种干化学反应装置，包括反应板(1)，其特征在于，在所述反应板上具有至少三个检测盲孔，其中一个为乳酸检测盲孔，从孔底部起依次放有显色剂垫(2)、过氧化物酶垫(3)和乳酸氧化酶垫(4)；其中一个为肌酸检测盲孔，从孔底部起依次放有显色剂垫(5)、过氧化物酶垫(6)、肌氨酸氧化酶垫(7)和肌酸酶垫(8)；另一个为β-羟丁酸检测盲孔，从孔底部起依次放有氯化硝基四氮唑兰垫(9)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸垫(10)、黄递酶垫(11)和β-羟丁酸脱氢酶垫(12)。
2、 如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述反应板(1 )上 还覆盖有一层玻璃膜。
3、 如权利要求l或2所述的装置，其特征在于，所述反应板(l) 为长方形。
4、 如权利要求3所述的装置，其特征在于，所述盲孔排成一排。
5、 如权利要求l或2所述的装置，其特征在于，所述显色剂垫、 过氧化物酶垫、乳酸氧化酶垫、肌氨酸氧化酶垫、肌酸酶垫、氯化硝 基四氮唑兰垫、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸垫、黄递酶垫和(3—羟丁酸脱 氢酶垫的垫载体为滤纸、玻璃纤维或层析纸。
6、 如权利要求5所述的装置，其特征在于，所述垫载体的直径 与相应检测盲孔的直径相同。
专利摘要本实用新型提供了一种干化学反应装置，包括反应板，其特征在于，在所述反应盒上具有至少三个检测盲孔，其中一个为乳酸检测盲孔，从孔底部起依次放有显色剂垫、过氧化物酶垫和乳酸氧化酶垫；其中一个为肌酸检测盲孔，从孔底部起依次放有显色剂垫、过氧化物酶垫、肌氨酸氧化酶垫和肌酸酶垫；另一个为β-羟丁酸检测盲孔，从孔底部起依次放有氯化硝基四氮唑兰垫、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸垫、黄递酶垫和β-羟丁酸脱氢酶垫。所述干化学反应装置能够同时检测人体尿液中尿乳酸、肌酸和β-羟丁酸，可用于用以减肥效果及运动强度的评价。
文档编号G01N33/52GK201382938SQ200920106569
公开日2010年1月13日 申请日期2009年3月19日 优先权日2009年3月19日
发明者王加义, 幂 许 申请人:北京中生金域诊断技术有限公司
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
