专利名称：骨形态发生蛋白(bmp)、bmp受体和bmp结合蛋白及它们在诊断和治疗青光眼中的用途的制作方法
技术领域：
本发明公开了用于诊断和治疗青光眼及相关疾病的方法和试剂。
相关领域的描述“青光眼”是一组使人虚弱的眼�。鞘敲拦推渌⒋锕也豢赡媸鞯闹饕�。原发性开角型青光眼(“POAG”)是青光眼的最常见形式，其特征为小梁网变性，从而阻塞了房水的正常性能，使眼不能关闭虹膜和角膜之间的间隙(例如“角”)(Vaughan，D.等人，(1992))。在该疾病中此阻塞的特征是眼内压(“IOP”)升高，如果不进行合适且及时的治疗，会导致进行性视力丧失和失明。该疾病估计可影响所有40岁以上成年人中的0.4％到3.3％(Leske，M.C.等人(1986)；Bengtsson，B.(1989)；Strong，N.P(1992))。此外，该疾病会随年龄升高而多发，对75岁或75岁以上的人可达6％以上(Strong，N.P.，(1992)。
由于IOP升高是青光眼的一个容易测量的特征，对该疾病的诊断主要是通过测量眼内压(眼压测量法)进行筛选(Strong，N.P.(1992)；Greve，M.等人(1993))。不幸的是，由于青光眼的压力范围和正常压力范围发生重叠，如果不获得多次读数，这些方法的用途是有限的(Hitchings，R.A.，(1993)；Tuck，M.W.等人(1993)；Vaughan，D.等人，(1992)；Vernon，S.A.，(1993))。由于此原因，通常还采用其他方法如直接检查视神经乳头和测定患者视野丧失程度来提高诊断的准确性(Greve，M.等人，(1993))。
青光眼影响眼的三个单独的组织。与POAG相关的IOP升高是由于小梁网(TM)的形态学和生物化学的改变，其中小梁网组织位于虹膜和角膜间的角。大部分营养性房水通过TM存在于眼前角。TM细胞的进行性丧失和青光眼的TM中细胞外碎片的堆积导致房水流出的阻力增加(Lutjen-Drecoll和Rohen 1996；Rohen 1983；Rohen等人1993；Grierson和Calthorpe 1988)，因此使IOP升高。IOP升高以及其它因素例如局部缺血引起视神经乳头(ONH)的变性性改变，导致ONH的进行性“凹陷”(Varma和Minckler 1996；Hernandez和Gong 1996；Hernandez等人1990；Hernandez和Pena 1997；Morrison等人1990)和视网膜神经节细胞丧失(Quigley等人2000；Quigley 1999；Quigley等人1995；Kerrigan等人1997)和轴突的丧失。造成TM、ONH和视网膜神经节细胞的青光眼性损伤的详细分子机制未知。
现行青光眼的治疗是降低IOP，其中所述IOP是青光眼发展和进行的主要危险因素。这些治疗降低了IOP，但它们不直接针对致病机理，且疾病继续发展。至少半数青光眼患者没被诊断出，并且当患者诊断出患有青光眼时，他们已经丧失了约40％的视网膜神经节细胞。因此，需要青光眼的早期检测和诊断方法。
鉴于青光眼的严重性和现有诊断方法中至少部分的不足，希望有改进的、更准确的方法在早期阶段诊断青光眼。并且，希望有针对青光眼致病机理的新治疗剂。
发明概述本发明通过提供早期诊断青光眼、治疗青光眼和鉴定治疗青光眼有用的化合物的方法和试剂盒，克服了现有技术中的以上和其它不足。
在某些特定实施方案中，本发明提供了对获自细胞或体液的样本诊断青光眼的方法，该方法通过检测骨形态发生蛋白家族成员的基因表达改变而实施。该方法通常包括下列步骤a)从疑似患有青光眼的患者获得组织或体液样本；b)从上述样本提取DNA；c)获得多条PCR引物，其中每一所述引物包含的序列由来自SEQ IDNO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53的18至1547个连续核苷酸组成；d)用所述引物对经提取DNA的区域进行扩增，以获得PCR产物；e)分析PCR产物；并f)确定PCR产物序列与正常基因序列间的差异；其中扩增序列与正常基因序列间的差异可诊断青光眼。
一般，本发明的方法可包括从个体获得样本并从所述样本提取DNA。选择针对BMP基因家族特定成员的PCR引物，然后用于扩增所提取基因的相应区域以获得PCR产物。通过可有效确定所评估的特定BMP家族基因(所提取的DNA)的正�：屯槐湫问郊銬NA序列差异的技术对PCR产物进行分析。经确定的序列间差异为青光眼的征兆。
本发明方法中应用的组织或流体样本可为血液或口细胞。
一般，引物序列长度为约10、15或18个核苷酸至约20个或约30个核苷酸。在某些实施方案中更优选较长的序列如40、50、80、90、95、100个核苷酸甚至全长序列。本领域技术人员广泛接受至少约18至20个核苷酸长度的寡核苷酸，其足以允许充分特异的杂交，因此可用作分子探针，如Lathe(1985)所述，该文献特此引用作为参考。优选地，核苷酸序列由来自SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53的20至100个连续核苷酸组成。也认为引物序列可由来自BMP受体基因序列和BMP相关蛋白基因序列中的至少10、15或18个连续核苷酸序列组成，其中所述BMP受体基因序列和BMP相关蛋白基因序列已知。
有10、18、20、30、50、60、65或甚至高达并包括100个核苷酸左右的、与SEQIDNO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53中的任意一个序列互补的核酸分子可用做杂交探针。本领域技术人员认为具有约18个核苷酸长度的引物或探针可提供与靶序列的高特异性杂交。片段的总计大小以及互补序列的大小最终取决于应用特定核酸片段的预期用途。较短片段一般在杂交方案中应用，其中互补区长度可不同，例如在约10、18、20或30个核苷酸至约50、60、70、80、80或100个核苷酸之间，或甚至是希望检测的互补序列的全长。
在特定优选的实施方案中，引物由来自SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53中的连续序列组成。在优选的实施方案中，引物由来自BMP受体基因(公开于ten Dijke等人1993；Astrom等人1999；Nohno等人1995，所有文献在此引用作为参考)或来自BMP相关基因的连续序列组成，例如由来自chordin(NCBI NM_029130)、gremlin(Murphy等人1999；McMahon等人2000)、卵泡抑素(follistatin)(NCBINM_003892)或bambi(NCBI NM_005791)的连续序列组成。最优选地，引物由来自SEQ ID NO3的连续序列组成。在某些方面，至少一些引物可进一步包括可检测标记。
在其它实施方案中，本发明提供了用于治疗青光眼的方法，该方法为向需要治疗的患者施用包含这样序列的组合物，所述序列由至少一个选自BMP2激动剂、BMP4激动剂、BMP5激动剂、BMP7激动剂、Smad 1/5激动剂、chordin拮抗剂、gremlin拮抗剂和卵泡抑素拮抗剂的化合物组成。
在其它方面，本发明提供了用于鉴定治疗青光眼的治疗剂的方法。例如可通过下列步骤鉴定治疗剂a)获得第一组合物，其包含表达BMP-2A、BMP4、BMP-5或BMP7的一群重组细胞；b)获得候选物质；c)孵育所述组合物和所述候选物质；检测所述组合物启动BMP-诱导的Smad信号途径和/或受BMP-调节基因表达的能力；以及鉴定抑制或刺激BMP的这些下游效应的候选物质。
本发明的另一方面是包含本发明序列和适当试剂例如与蛋白质、肽或抗体本身相连的可检测标记的诊断试剂盒。备选地，可检测标记可连接至与本发明序列选择性杂交的第二个序列。
相关实施方案包括治疗试剂盒，该试剂盒包括于此公开的核酸序列或肽或蛋白质序列的可药用制剂。该试剂盒可用于检测临床样本中BMP基因和蛋白质的表达改变而诊断青光眼。
附图简述附图组成本说明书的一部分，本说明书包括附图以进一步阐述本发明的某些方面。通过参考这些附图中的一个或多个图并结合于此呈现的特定实施方案详述，可更好地理解本发明。
图1.BMP2A的核苷酸和氨基酸序列。
图2.BMP4的核苷酸和氨基酸序列。
图3.BMP5的核苷酸和氨基酸序列。
图4.BMP7的核苷酸和氨基酸序列。
图5.骨形态发生蛋白信号传导途径。骨形态发生蛋白(BMP)二聚体与包含BMP受体1和2的膜复合体结合，所述受体为丝氨酸/苏氨酸激酶。调节性Smads(Smad1/Smad5)发生磷酸化并与通用Smad(Smad4)结合。产生的Smad复合体进入核，在核内与转录因子(TF)结合并调节基因表达。BMP相关蛋白作为BMP拮抗剂通过与BMPs结合并阻止BMP与BMP受体的相互作用。
图6.人TM细胞和组织中BMP的表达。来自人TM细胞(1-5泳道)和组织(6-7泳道)中BMP表达的RT-PCR分析产生的cDNA样本BMPPCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图7.人TM细胞和组织中BMP受体的表达。来自人TM细胞(1-5泳道)和组织(6-7泳道)中BMP受体表达的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图8.人ONH星形胶质细胞、ONH组织和人脑星形胶质细胞中BMP的表达。来自人ONH星形胶质细胞(1-5泳道)、ONH组织(6泳道)和人脑星形胶质细胞(7泳道)中BMP表达的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图9.人筛板细胞系中BMP的表达。来自人筛板细胞(1-9泳道)的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图10.人ONH星形胶质细胞、ONH组织和人脑星形胶质细胞中BMP受体的表达。来自人视神经乳头星形胶质细胞(ONA)(1-5泳道)、ONH组织(6泳道)和人脑星形胶质细胞(7泳道)中BMP受体表达的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图11.人筛板细胞系中BMP受体的表达。来自人筛板细胞(1-9泳道)的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图12.培养的人TM细胞、视神经乳头星形胶质细胞(ONA)和筛板细胞中BMP和BMP受体表达的Western印迹。人小梁网细胞(1-2泳道)、ONH星形胶质细胞(3-4泳道)和筛板细胞(5-6泳道)中BMP蛋白和BMP受体的化学发光检测。蛋白质大小以kDa表示。
图13.人TM细胞中BMP相关蛋白mRNA的表达。来自人TM细胞(1-5泳道)的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图14.人筛板细胞和ONH星形胶质细胞中BMP相关蛋白mRNA的表达。来自筛板(LC)细胞(1-7泳道)和ONH星形胶质细胞(ONA)(8-11泳道)的RT-PCR分析产生的cDNA样本PCR产物的经溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶。L＝碱基对标准。C＝PCR阴性对照泳道。β-肌动蛋白用作阳性RT-PCR内部对照。
图15.青光眼性TM细胞中BMP拮抗剂gremlin(CKTSF1B1)表达增加图解。用Affymetrix基因阵列(Affymetrix基因芯片U133A)评估基因表达。
优选实施方案详述认为小梁网在房水的正常流动中起重要作用，并推断它是青光眼性眼中房水流出阻力的主要部位。人小梁网(HTM)细胞是排列于房水流出通道的特化细胞，房水通过该通道流出眼。该细胞改变的综合功能涉及到POAG、类固醇性青光眼和其它类型青光眼的发病机理。
尽管进行了多年的深入研究，参与眼的青光眼性损伤的确切分子机理还是未知的。最近的研究提出生长因子在维持青光眼相关的眼组织的正常内环境稳定中可起重要作用，生长因子/生长因子受体的改变可在青光眼的发病机理中起作用。生长因子是一个非常大的控制细胞生长和分化的多肽家族。这些分子对基因表达、细胞外基质组成和沉积、细胞骨架组织和细胞功能的调节具有很多细胞特异性效应。TM表达很多种生长因子、生长因子受体(Tripathi等人1993a；Tripathi等人1993b；Tripathi等人1994a；Tripathi等人1994b；Wordinger等人1998；Wordinger等人1999)和神经营养蛋白/神经营养蛋白因子及其受体(Liu等人2001；Wordinger等人2000)。ONH星形胶质细胞和筛板细胞为视神经乳头的两种细胞类型，它们表达生长因子、神经营养蛋白及其受体(Lambert等人2001；Pena等人1999)。房水也包含FGF2、EGF、TGFβ、HGF多种生长因子(Tripathi等人1996；Tripathi等人1991；Tripathi等人1992；Hu和Ritch 2001)和神经营养蛋白(Chundru等人2000)。有报道在PAOG患者中房水的TGFβ-2和HGF水平升高(Tripathi等人1994c；Inatani等人2001；Picht等人2001)。生长因子可通过改变TM和ONH的正常发育和/或其功能而参与到青光眼中。
本发明部分起源于对骨形态发生蛋白(BMPs)的认识，BMPs不仅仅诱导骨和软骨形成，也是对多种细胞类型具有广泛效应的多功能细胞因子(Hogan 1996；Reddi 1997)，人小梁网(HTM)和视神经乳头(ONH)细胞均表达BMPs(Wordinger等人2002)。BMPs是TGFβ超家族成员，人体大约有15-20种BMPs基因、3种BMP受体和许多起到BMP拮抗剂功能的BMP相关蛋白(Yamashita等人1996)。BMPs通过由BMPR-I和BMPR-II组成的受体复合体传导信号。有报道HTM和ONH细胞均表达超家族成员TGFβ和TGFβR(Agarwal等人1997；Lambert等人1997)以及GDNF和GDNFR(Wordinger等人1999；Liu等人1999)。
眼组织表达BMPs和BMP受体(Obata等人1999；You等人1999)，但以前的报道集中于眼的发育。由于小鼠中对编码BMPs的基因进行靶向性破坏导致视网膜和晶状体的严重发育缺陷，因此BMPs在眼发育中是重要的(Jena等人1997；Luo等人1995；Dudley等人1995)。BMP-2、BMP-4和BMP-7参与晶状体和视网膜的发育(Jena等人1997；Furuta和Hogan1998；Reddi 2000；Trousse等人2001)。BMP-6和BMP-7在保护神经元免受低血糖或局部缺血损伤中也显示出起作用(Nonner等人2001；Liu等人2001)，并且显示BMP2增强神经节细胞神经营养蛋白的表达(Zhang等人1998)。仅Bmp4缺乏的基因敲除杂合小鼠具有包括眼前节畸形、IOP升高和视神经不正常的眼表型(Chang等人2001)。关于BMPs在人出生后眼中作用的信息公开的非常少。
Mohan和同事(1998)报道成人角膜细胞表达BMP-2和BMP-4以及BMP受体并提出BMP的功能可包括角膜的角膜细胞增生和编程性细胞死亡。You和同事(1999)证实了该项研究并且也报道在离体和培养的角膜上皮及基质细胞中BMP-3、BMP-5和BMP-7的表达。他们报道BMP转录水平在基质中较高，而在培养的角膜上皮细胞中受体水平较高。
应用RT-PCR，本发明人在HTM、筛板(LC)和ONH星形胶质细胞系和组织中发现了BMPs、BMP受体BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II及BMP结合蛋白gremlin、chordin、卵泡抑素和bambi的mRNAs(Wordinger等人2002)。本发明人进一步发现HTM和ONH细胞表达BMP-2、BMP-4、BMP-5和BMP-7蛋白质。
通过以BMP信号家族成员基因的遗传变化为特征诊断青光眼。如于此应用的短语“骨形态发生蛋白家族成员基因”和“BMP信号家族”是指所有BMPs、BMP受体和相关蛋白。术语“遗传变化”是本领域技术人员众所周知的。有许多与特定基因遗传变化相关疾病的实例(例如参见Cummings 1997；Strachan等人1996；Jorde等人1999)。用本领域技术人员众所周知的多种技术，例如SSCP、DGGE、ASO、RFLP、异源双链分析、CCM、PTT和Rnase切割(参见Birren等人1998)能确定特定基因(例如BMP)的遗传变化。
青光眼可由眼中一个或多个BMP家族基因的表达改变引起，其导致IOP升高和/或青光眼性视神经病。“改变的BMP基因表达”是指该基因产物的表达与正常基因产物不同。该术语也指基因或蛋白质序列的改变。已经对正常BMP基因产物进行了描述(见上)，并且已经报道在多种组织包括TM和ONH中有BMP表达。BMP家族基因编码区的遗传变化可改变这些蛋白质的功能。编码区外的遗传变化也可导致青光眼。
本领域技术人员众所周知，特定基因编码区“之外的变化”在基因表达的调节中是重要的。例如，大部分基因编码区的上游区域(5′)已知是“启动”和调控该基因表达的启动子区。启动子区包含被多种转录因子和DNA结合蛋白识别的许多核苷酸序列，其中所述转录因子和DNA结合蛋白负责基因表达的激活或抑制。基因的下游区域(3′)能决定基因产物的聚腺苷酸化，因此调节基因产物的RNA加工和翻译。
为青光眼征兆的BMP基因改变的表达或基因序列中的突变可用本领域技术人员众所周知的技术进行检测。例如，认为可使用几乎任意长度的核酸片段，其总长度优选地受限于易于制备和在预定方法中的用途。于此公开的核酸序列也可在核酸杂交实施方案中用作探针或引物。同样，认为包含以下序列区的核酸片段尤其有用，其中所述序列区由与BMP-2A(SEQ ID NO1)、BMP-4(SEQ ID NO3)、BMP-5(SEQ ID NO5)、BMP-7(SEQ ID NO7)、BMP-RIA(SEQ ID NO37)、BMP-RIB(SEQ ID NO39)、BMP-RII(SEQ ID NO41)、chordin(SEQ ID NO43)、gremlin(SEQ ID NO45)、卵泡抑素(SEQ ID NO47)或bambi(SEQ ID NO53)中的14个核苷酸长的连续序列具有相同序列或与其互补的至少14个核苷酸长的连续序列组成。较长的连续相同序列或互补序列，例如约20、30、40、50、100、200、500、1000个核苷酸(包括所有中间长度)，甚至约1547个核苷酸(对于BMP-2A)、1946个核苷酸(对于BMP-4)、2153个核苷酸(对于BMP-5)和1878个核苷酸(对于BMP-7)、2932个核苷酸(对于BMP-RIA)、2032个核苷酸(对于BMP-RIB)、3611个核苷酸(对于BMP-RII)、3561个核苷酸(对于chordin)、4049个核苷酸(对于gremlin)、1386个核苷酸(对于卵泡抑素)和1523个核苷酸(对于bambi)的全长序列在某些实施方案中也有应用。
容易理解“中间长度”在本文中是指在引用范围间的任意长度，例如14、15、16、17、18、19、20等；21、22、23等；30、31、32等；50、51、52、53等；100、101、102、103等；150、151、152、153等；包括200-500；500-1,000；1,000-2,000范围间的所有整数，高达并包括2,001、2002、2050、2051等长度的序列。
与BMP编码序列特异杂交的此类核酸探针和引物的能力及引物特异扩增BMP序列的能力使它们在检测特定样本中存在互补序列中有用。然而，可预见到其它用途，包括用序列信息制备突变物种的引物，或用引物制备其它遗传构件。
特别是认为具有由10、20、30、50个或甚至100-200个核苷酸左右的连续核苷酸组成的序列区的核酸分子除了用于Southern和northern印迹外，还可用作杂交探针如用于SNP评估和固相杂交试验中，其中所述连续核苷酸与BMP-2A(SEQ ID NO1)、BMP4(SEQ ID NO3)、BMP-5(SEQ ID NO5)、BMP7(SEQ ID NO7)、BMP-RIA(SEQ ID NO37)、BMP-RIB(SEQ ID NO39)、BMP-RII(SEQ ID NO41)、chordin(SEQ ID NO43)、gremlin(SEQ ID NO45)、卵泡抑素(SEQ ID NO47)或bambi(SEQ ID NO53)相同或互补。这允许在组织和细胞中分析BMP结构基因或调节基因。片段的总计大小及互补片段的大小最终取决于特定核酸片段应用的预期用途。根据希望检测的互补序列的长度，较短片段一般在杂交实施方案中应用，其中连续互补区域的长度可改变，例如在约10个至约100个核苷酸之间，但可用长约1547个核苷酸(对于BMP-2A)、1946个核苷酸(对于BMP-4)、2153个核苷酸(对于BMP-5)和1878个核苷酸(对于BMP-7)、2932个核苷酸(对于BMP-RIA)、2032个核苷酸(对于BMP-RIB)、3611个核苷酸(对于BMP-RII)、3561个核苷酸(对于chordin)、4049个核苷酸(对于gremlin)、1386个核苷酸(对于卵泡抑素)和1523个核苷酸(对于bambi)的较长连续互补序列。
用长约10-14个核苷酸的杂交探针允许形成既稳定又有选择性的双链分子。一般优选具有长度大于10个碱基的连续互补序列的分子，但为了增加杂交体的稳定性和选择性并因此提高所获得的特异杂交体分子的质量和程度，一般更喜欢设计具有15至20个连续核苷酸或更长的基因互补序列的核酸分子。
杂交探针可从于此公开的任意序列的任一部分选择。所需要的是对SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53所示序列进行检查，并选择序列的任意连续部分，该序列的连续部分来自希望用作探针或引物的长约10个核苷酸至高达并包括全长序列。探针序列和引物序列的选择可由多种因素决定，例如以举例的方式来说明，可用来自总序列末端的引物，或来自功能性结构域编码序列末端的引物，以进一步扩增DNA。
选择和制备包括来自BMP-2A(SEQ ID NO1)、BMP4(SEQ IDNO3)、BMP-5(SEQ ID NO5)、BMP7(SEQ ID NO7)、BMP-RIA(SEQ ID NO37)、BMP-RIB(SEQ ID NO39)、BMP-RII(SEQ IDNO41)、chordin(SEQ ID NO43)、gremlin(SEQ ID NO45)、卵泡抑素(SEQ ID NO47)或bambi(SEQ ID NO53)中的连续序列的核酸片段的方法可另外描述为制备核酸片段。当然，也可通过其它技术获得片段，例如通过机械剪切或通过限制性酶消化。短核酸节段或短核酸片段易于制备，例如通过化学方法直接合成片段，这一般用自动寡核苷酸合成仪实行。同样，片段也可通过应用核酸增殖技术获得例如用美国专利4,683,202号和美国专利4,682,195号(此处引用作为参考)的PCRTM技术，和通过将选择的序列导入到重组载体中以进行重组生产获得，以及通过分子生物学领域技术人员一般已知的其它重组DNA技术获得。
因此，本发明的核酸序列可应用它们与BMP基因或其cDNAs的互补序列选择性形成双链分子的能力。根据预想的应用，可利用不同程度的杂交选择性获得针对靶序列的不同程度的探针选择性。对于需要高选择性的应用，一般利用相对严格条件形成杂交体，例如选择相对低盐和/或高温度条件，如NaCl为0.02M-0.15M，温度为50℃至70℃。此类选择条件几乎不容许在探针和模板或靶链间有(如果有的话)错配，因此特别适于检查BMP基因。
当然，对于某些应用，例如想用突变引物链与潜在的模板杂交制备或鉴定突变体或想从相关物种、功能等同物等中分离BMP编码序列，一般需要较不严格的杂交条件以允许异源双链的形成。在这些情况下，可采用如盐为0.15M-1.0M，温度20℃至55℃的条件。从阳性杂交信号和对照杂交信号的比较，因此能容易地确定交叉杂交物种。在任何情况下，一般认为通过降低NaCl浓度或通过加入越来越多量的甲酰胺能得到更严格的条件，甲酰胺与升高温度以同样的方式使杂种双链不稳定。因此杂交条件易于控制，并因此通常是依赖于预期结果的选择方法。
在某些实施方案中，利用本发明的核酸序列结合适当方法例如用于确定杂交的标记是有利的。本领域已知有多种合适的指示方法，包括能产生可检测信号的荧光配体、放射性配体、酶配体或其它配体，如亲和素/生物素。在优选的实施方案中，可能想利用荧光标记或酶标记物，如脲酶、碱性磷酸酶或过氧化物酶，以代替放射性或其他�：肪车氖约痢５蔽副昙俏锸保阎苡帽壬甘拘缘孜锾峁┤搜劭杉蚍止夤舛燃瓶刹饬康姆椒ǎ匀范ㄓ氚ゲ购怂岬难镜奶匾煸咏�。
一般，可以想象于此描述的杂交探针可用作溶液杂交中的试剂及用于使用固相的实施方案中。在涉及固相的实施方案中，待检测DNA(或RNA)吸附到或固定于选择的基质或表面。该固定的单链核酸然后与选择的探针在预定条件下进行特异杂交。选择的条件取决于具体情况，这些情况基于所需的具体指标(例如取决于G+C含量、靶核酸的类型、核酸来源、杂交探针大�。�)。洗涤杂交表面以去除非特异结合的探针分子后，检测特异杂交，或甚至通过标记进行定量。
也应理解本发明不限于BMP-2A(SEQ ID NO1)、BMP4(SEQ IDNO3)、BMP-5(SEQ ID NO5)、BMP7(SEQ ID NO7)、BMP-RIA(SEQ ID NO37)、BMP-RIB(SEQ ID NO39)、BMP-RII(SEQ IDNO41)、chordin(SEQ ID NO43)、gremlin(SEQ ID NO45)、卵泡抑素(SEQ ID NO47)或bambi(SEQ ID NO53)的特定核酸序列和氨基酸序列。重组载体和分离的DNA片段因此可不同地包括BMP编码区自身、基因的上游区域或下游区域、在基本编码区中具有选择改变或修饰的编码区、或它们可编码包括BMP编码区的较大多肽或可编码具有不同氨基酸序列的生物学功能等同的蛋白质或多肽。
本发明的DNA片段包含生物学功能等同的BMP蛋白或多肽。此类序列可作为已知天然存在于核酸序列和其编码蛋白质中的密码子冗余和功能等同的结果。另外，功能等同的蛋白质或多肽可通过应用重组DNA技术来产生，其中蛋白质结构可在考虑所交换的氨基酸性质的基础上进行人工设计。人们设计的变化可通过应用定点诱变技术导入，例如提高蛋白质的抗原性或检测BMP突变以在分子水平检查结合活性。
治疗青光眼的治疗剂可为肽或蛋白质、肽模拟物、寡核苷酸或衍生的寡核苷酸、或小的药物样分子，它们均影响眼BMP途径的一个或多个方面。优选的治疗剂为(1)BMP2、BMP4、BMP5或BMP7激动剂；(2)chordin、gremlin、卵泡抑素或bambi拮抗剂；和/或(3)Smad1、Smad5和/或Smad4激动剂。
用本领域技术人员众所周知的技术，治疗剂可直接递送至眼(例如局部滴眼液或药膏；结膜穹窿中的缓释装置或植入邻近巩膜或眼中的缓释装置；眼周、结膜、眼球囊下、眼房内或玻璃体内注射)或肠胃外(例如口服、静脉内注射、皮下或肌内注射；经皮递送；等)施用。以下为本发明具体化的可能制剂的实例。
(a)局部眼制剂重量百分数增加眼BMP-4表达的试剂0.01-2HPMC 0.5氯化钠 0.8BAC 0.01％EDTA 0.01NaOH/HCl 适量，调节至pH7.4纯水 适量，调节至100mL(b)局部眼制剂重量百分数Gremlin拮抗剂0.01-2HPMC 0.5氯化钠 0.8BAC 0.01EDTA 0.01NaOH/HCl 适量，调节至pH7.4纯水 适量，调节至100mL(c)局部眼制剂重量百分数Smad1/5拮抗剂0.01-2
HPMC0.5氯化钠 0.8BAC 0.01EDTA0.01NaOH/HCl适量，调节至pH7.2纯水适量，调节至100mL进一步认为本发明的化合物可制备在眼内插入装置中。
A.治疗剂的鉴定法本发明对发现参与BMP信号途径的新抗青光眼治疗剂也有用(见图5)。选择性的BMP配体结合BMPI型和II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体(BMP-RI和BMP-RII)并通过Smad蛋白质转导信号。BMP信号通过蛋白质-蛋白质和蛋白质-DNA相互作用由Smads传导(Attisano和TuenLee-Hoeflich 2001)。配体结合的BMP受体(通过磷酸化)激活调节性Smad1和Smad5(von Bubnoff和Cho 2001)。然后这些调节性Smads与Smad4相互作用形成异源多聚复合体，该复合体转移到核。根据所存在的核协同因子，该复合体能激活或抑制识别该转录复合体的选择基因的转录。
BMP/Smad信号途径通过几种机制进行负调节。某些BMP-结合蛋白(例如gremlin、BAMBI或卵泡抑素)与BMPs结合并抑制它们与BMP受体的相互作用。并且，存在结合并灭活BMP受体的抑制性Smad蛋白(例如Smad6和Smad7)(Kowabata等人1998；Itoh等人2000；Miyazono 2000)。本发明人发现人TM细胞、ONH星形胶质细胞和筛板细胞表达BMP受体复合体蛋白。因此，这些细胞能对内源BMP配体作出反应。
可用多种方法发现新的抗青光眼治疗剂，并且这些技术是本领域技术人员众所周知的。例如作为BMPs的激动剂或抑制剂的肽或肽模拟物能通过BMP/BMP受体结构的分子模建发现(Nickel等人2001)。BMP信号转导包括选择一系列Smad蛋白质(Kawabata等人1998；Itoh等人2000；Attiseno等人2000)。选择性BMP激动剂和Smad激动剂能用基于细胞的鉴定法发现。受检测细胞应表达适当的BMP受体并具有适当的BMP信号途径。由于BMP信号的主要效应之一是基因表达的改变，BMP激动剂和Smad激动剂能通过对BMP-诱导基因进行筛选发现。BMP调节基因的诱导也可通过用定量RT-PCR定量mRNA水平(Wang等人2001)、DNA微阵列或报道基因构建体进行分析。在BMP信号传导过程中存在天然抑制剂，为BMP结合蛋白(也称为BMP-相关蛋白)例如chordin、gremlin和卵泡抑素。所述BMP蛋白抑制剂的拮抗剂可通过配体结合试验发现。例如可将受检测试剂加入重组纯化的gremlin中，与gremlin结合的试剂用可本领域技术人员众所周知的多种技术进行鉴定。为确定这些试剂是否为gremlin拮抗剂，应用类似上述的基于细胞的试验进行确定。
认为任何已知的体外和体内模型可结合本发明用于确定针对BMP家族基因的新青光眼治疗剂。这些模型是本领域技术人员众所周知的并且它们的操作已成常规。小肽或肽模拟物可建立在BMP、BMPR和/或BMP结合蛋白基因产物的结构/功能知识的基础上进行设计。能用配体结合试验检测与BMPs、BMPRs或BMP结合蛋白结合的小分子。基于细胞的试验能检测多种试剂对BMP信号途径的效应。能产生包含BMP家族基因启动子与报道基因相连的基因敲入细胞系，用该基因敲入细胞系来寻找改变BMP家族成员基因表达的试剂。这些试验能用于鉴定激动剂和拮抗剂分子。离体试验，例如来自人眼的灌注培养的眼前节(Clark等人1995a；Pang等人2000)，能用于检测试剂对TM组织中IOP和BMP信号传导的效应。能用众所周知的技术产生稳定的BMP家族成员转基因、基因敲除或敲入的小鼠和大鼠品系，从而产生青光眼的啮齿类模型。这些啮齿类模型能用于筛选改变青光眼样表型(例如眼压测量法评估对IOP的影响，组织学评估对青光眼性视神经学的影响)的试剂。
B.试剂盒本发明为青光眼的早期检测提供了方法、组合物和试剂盒。试剂盒能包含编码BMP多肽或蛋白质的核酸片段。试剂盒进一步可包含检测样本与本发明的核酸或肽间相互作用的试剂。提供的试剂可为放射性-、荧光-或酶-标记的。试剂盒可包含能与本发明的核酸或肽或蛋白质结合或相互作用的已知放射性标记试剂。
试剂盒中的试剂可以液体溶液、结合于固相载体或以干粉提供。优选地，当试剂以液体溶液提供时，液体溶液为水溶液。优选地，当试剂以结合于固相载体提供时，固相载体可为层析介质、多孔检测板或载玻片。当试剂以干粉提供时，干粉能通过加入适当溶剂重新溶解，该溶剂是可提供的。
在更进一步的实施方案中，本发明涉及诊断青光眼的诊断方法和相关试剂盒。提出可利用本发明的BMP相关肽和核酸检测来自患者样本的BMP核酸中的多态性或突变。一般，该方法包括首先获得疑似包含此类多态性或突变的样本，在允许形成复合体的有效条件下，将样本与本发明的肽或核酸接触，然后检测复合体的存在。
一般，复合体形成的检测是本领域众所周知的并可通过应用多种方法实施。例如，本发明认为可应用ELISA、RIA、间接荧光技术等。一般，通过用标记如放射性标记或酶标记物(如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶或等)检测复合体形成。当然，通过应用二级结合配体可发现其它优点。
下列实施例是本发明人利用技术实现本发明各方面的代表。应当理解虽然这些技术是本发明实行中优选实施方案的范例，鉴于本公开，本领域技术人员了解在不背离本发明的精神和预期范围内可进行多种改变。
实施例1细胞培养如所述产生来自供体眼的人TM细胞和ONH细胞(Steely等人1992；Steely等人2000；Wilson等人1993；Clark等人1994；Clark等人1995b；Clark等人1995c；Clark等人1996；Clark等人2001a；Clark等人2001b；Dickerson等人1998；Wordinger等人1998；Wordinger等人1999；Wordinger等人2000；Wordinger等人2002；Lambert等人2001；Agarwal等人1999；Liu等人2001)。TM细胞在来自年龄为6天至90岁的供体的TM外植块上生长。人视神经乳头星形胶质细胞和筛板(LC)细胞通过小心解剖视神经乳头(供体年龄为2天至90岁)产生并根据以前报道鉴定(Lambert等人2001；Clark等人1995a)。细胞在下列培养基中生长成成片细胞对于TM细胞，为含有10％胎牛血清(HyClone，Logan，UT)和抗生素(Gibco BRL-Life Technologies，Grand Island，NY)的Ham′s F10培养基(JRH Biosciences，Lenexa，KS)；对于LC细胞，为含有10％FBS的Dulbecco′s改良Eagle′s培养基(DMEM，HyClone)；对于ONH星形胶质细胞，为含有5％FBS的星形胶质细胞生长培养基(AGM，Clonetics，San Diego，CA)。
RT-PCR也解剖来自供体眼的人TM和ONH组织(Wordinger等人1998；Wang等人2001)。用TRIzol提取液(Gibco BRL-LifeTechnologies)从TM和ONH细胞和组织中提取总RNA，并用标准方法(Wordinger等人1998；Wordinger等人1999；Wordinger等人2000；Wordinger等人2002)通过反转录制备cDNA。用Oligos 4.0软件程序设计PCR引物(见表1的引物对)。所有引物对这样设计以便潜在的杂质基因组DNA序列扩增产生的mRNA PCR产物比预计的明显地大得多，因为RNA加工期间切除的内含子序列包括在基因组DNA中。β-肌动蛋白PCR引物，AGGCCAACCGCGAGAAGATGACC(上游)和GAAGTCCAGGGCGACGTAGCAC(下游)，退火温度为55℃，产生的PCR产物为350bp。
用Taq启动抗体热启动，用下列循环条件94℃2分钟，92℃2分钟和在最佳退火温度下30秒，72℃延伸90秒和92℃变性45秒，进行40个循环，按所述(Wordinger等人1998；Wordinger等人1999；Wordinger等人2000；Lambert等人2001；Wordinger等人2002)进行PCR反应。扩增的PCR产物在1.5％琼脂糖凝胶中水平电泳进行检查。为保证RT-PCR产物的特异性，用Oligo 4.0设计的探针进行Southern印迹分析，该探针与扩增的PCR产物中的某个区域杂交。对PCR产物进行序列测定以证实PCR反应的特异性。表2列出了人TM和ONH中表达的BMP家族成员。
表1.PCR引物对、退火温度和BMPs扩增片段的大小
表2.人TM和ONH中表达的BMP家族成员
Western印迹用裂解缓冲液从培养细胞中提取蛋白质，并通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质后电泳转移到硝酸纤维素膜上(Lambert等人2001)。膜用5％牛乳(对于BMPs)或3％明胶(对于BMPRs))进行封闭并与下列一级抗体孵育BMP2、BMP4、BMP5、BMP7(它们均来自Santa Cruz，Santa Cruz，CA)，或BMP-RIA、BMP-RIB、BMP-RII(来自Jackson Immuno Research，West Grove，PA)。洗涤膜，与二级抗体(对于BMPs为山羊抗-小鼠IgG-辣根过氧化物酶，Santa Cruz；对于BMP受体为驴抗-山羊-辣根过氧化物酶，Jackson Immuno Research)孵育，并用WesternBreeze化学发光免疫检测系统(Invitrogen，Carlsbad，CA)显相。
人TM细胞和组织中BMPs、BMPRs mRNA的表达图6中显示了人TM细胞和组织中BMP-2、BMP-4、BMP-5和BMP-7引物对预期的扩增产物。用特异探针进行的Southern印迹证实其为预期的PCR产物。所有人TM细胞系和组织表达BMP-2、BMP-4和BMP-7。然而，在人TM组织样本中，BMP-5的表达低以至于检测不出来(图6，6和7泳道)。无cDNA的对照反应不出现扩增产物表明试剂和引物无DNA或RNA污染(图6，C泳道)。
图7显示了人TM细胞和组织中BMP-RIA、BMP-RIB和BMP-RII引物对预期大小的扩增产物。所有人TM细胞和组织表达BMP受体复合体。用特异探针进行的Southern印迹证实其为预期的PCR产物。在BMP-RII PCR反应中检测到另外的扩增产物(350bp)。所有人TM细胞和组织中存在该另外的扩增产物。该另外的带现在正在进行鉴定以确定其是否为受体的另一剪接形式。无cDNA的对照反应不出现扩增产物(图7，C泳道)表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
人ONH细胞和组织中BMP和BMP受体mRNA的表达图8中显示了人ONH星形胶质细胞和ONH组织中BMP-2、BMP-4、BMP-5和BMP-7引物对预期大小的扩增产物。所有ONH星形胶质细胞和ONH组织表达相应的BMP。人脑星形胶质细胞用作阳性对照细胞系。用特异探针进行的Southern印迹证实其为预期的PCR产物。除了BMP-2外，人脑星形胶质细胞表达所有其它BMP(图8，7泳道)。无cDNA的对照反应不出现扩增产物(图8，C泳道)表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
图9显示了培养的人LC细胞中BMP-2、BMP-4、BMP-5和BMP-7引物对预期大小的扩增产物。所有LC细胞系表达每种BMP。用特异探针进行的Southern印迹证实其为预期的PCR产物。无cDNA的对照反应不出现扩增产物(图9，C泳道)表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
图10显示的是人ONH星形胶质细胞和ONH组织中BMP-RIA、BMP-RIB和BMP-RII引物对预期大小的扩增产物。所有ONH星形胶质细胞系和ONH组织表达BMP-RIA和BMP-RIB。用特异探针进行的Southern印迹证实其为预期的PCR产物。除了ONH组织(图10，6泳道)外，所有ONH星形胶质细胞系表达BMP-RII。表达所有BMP受体(图10，7泳道)的人脑星形胶质细胞系用作阳性对照。显示出ONH组织和ONH细胞系中BMP-RII的表达有差异。ONH组织中降低的表达可反应低水平表达。无cDNA的对照反应不出现扩增产物(图5，C泳道)表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
图11显示了培养的人LC细胞中BMP-RIA、BMP-RIB和BMP-RII引物对预期大小的扩增产物。所有LC细胞系均表达BMP受体。用特异探针进行的Southern印迹证实其为预期的PCR产物。无cDNA的对照反应不出现扩增产物(图11，C泳道)表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
人TM细胞及ONH细胞和组织中BMP蛋白和BMP受体蛋白的表达图12表示化学发光免疫印迹检测人TM及ONH细胞和组织中BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-7、BMP-RIA、BMP-RIB和BMP-RII蛋白质。研究的所有细胞系表达相应的BMP蛋白。细胞系中检测的BMP蛋白具有下列分子量BMP-2为54-56kDa，BMP-4为25-27kDa，BMP-5为55-57kDa和BMP-7为77kDa。BMP-2和BMP-4检测到多条带，如在其它研究中看到的那样它们很可能表示这些BMPs的糖基化和部分糖基化形式。然而，我们没有进行糖基化研究因为它们超出了本研究的范围。细胞系中检测的BMP受体蛋白分子量为BMP-RIA为38kDa，BMP-RIB为64kDa，BMP-RII为57kDa。TM细胞中BMP-RIB和BMP-RII检测到多条带，如在其它研究中看到的那样它们很可能表示这些BMPs的糖基化和部分糖基化形式。显示TM细胞中BMP受体蛋白的表达水平比ONH细胞的表达水平低。例如在TM细胞中没有检测到BMP-RII并且BMP-RIB大大降低。
培养的人TM细胞和人ONH细胞中BMP相关蛋白mRNAs的表达图13显示的是BMP相关蛋白引物对预期大小的扩增产物。人TM细胞系表达DRM(gremlin)、chordin、卵泡抑素和NMA(BAMBI)的信息。用特异探针进行的Southern印迹证实它们为预期的PCR产物。细胞系间的表达没有明显差异。受检的所有人TM细胞没有BMP相关蛋白头蛋白和Cer-1 mRNA的表达。无cDNA的对照反应不出现扩增产物表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
图14显示的是ONH星形胶质细胞和LC细胞系中BMP相关蛋白引物对预期大小的扩增产物。所有ONH星形胶质细胞和LC细胞系表达DRM(gremlin)、卵泡抑素和NMA(BAMBI)的信息。用特异探针进行的Southern印迹证实它们为预期的PCR产物。大部分LC细胞和ONH星形胶质细胞表达chordin的信息。所有受检的人ONH星形胶质细胞和LC细胞没有BMP相关蛋白头蛋白和Cer-1 mRNA的表达。无cDNA的对照反应不出现扩增产物表明试剂和引物无DNA或RNA污染。
图15显示了青光眼性TM细胞中BMP拮抗剂gremlin(CKTSF1B1)增强的表达。用Affymetrix基因阵列(Affymetrix基因芯片U133A)评估了基因表达。
按照本公开于此公开和要求的所有组合物和/或方法不用过多地进行实验即可制备和实施。虽然本发明的组合物和方法以优选的实施方案进行了描述，但对本领域技术人员显然可在不背离本发明的概念、精神和范围的情况下，对此处描述的组合物和/或方法以及方法的步骤或步骤的顺序进行改变。更具体地说，显然在化学和结构上相关的某些试剂可代替于此描述的试剂以获得相同结果。如附加的权利要求中所定义，对本领域技术人员显而易见的所有此类替换和改变，认为是在本发明的精神、范围和概念内。
参考文献下列参考文献，及至它们提供的示例性方法或其它细节为本文的补充，特此引用作为参考。
书Birren，等人，基因组分析(GENOME ANALYSIS)，第2卷，(1998)。
Clark AF，Browder S，Steely HT，Wilson K，Cantu-Crouch D，McCartney MD，“人筛板的细胞生物学”，在Drance SM(编辑)的青光眼的视神经(OPTIC NERVE IN GLAUCOMA)，Kugler Publications，纽约一书中的第79-105页(1995b)。
Cummings，Michael R.，人类遗传学(HUMAN HEREDITY)，第四版，(1997)。
Grierson I，Calthorpe CM，″在眼房水流出体系中小梁网细胞的特性与年龄的变化它们与原发性开角型青光眼相关″，在Mills KB(编辑)的青光眼，北方眼研究所第4届国际研讨会会议录(GLAUCOMA.PROCEEDINGS OF THE FOURTH INTERNATIONAL SYMPOSIUMOF THE NORTHERN EYE INSTITUTE)，Manchester，UK，New York，Pergamon一书中的第12-31页(1988)。
Hernandez M，Gong H，“小梁网和视神经乳头的细胞外基质”，在Ritch R.，Shields，M.B.，Krupin，T.(编辑)的青光眼(THE GLAUCOMAS)第二版St LouisMosby-Year一书中的第213-249页(1996)。
Jorde等人，医学遗传学(MEDICAL GENETICS)，第2版(1999)。
Lutjen-Drecoll E.，Rohen J.W.，“正常眼和青光眼性眼中房水流出途径的形态学”，在Ritch R.，Shields，M.B.，Krupin，T.(编辑)的青光眼(THEGLAUCOMAS)，第2版，St LouisMosby-Year一书中的第89-123页(1996)。
Strachan等人，人类分子遗传学(HUMAN MOLECULARGENETICS)，(1996)。
Tripathi RC，Borisuth NS，Li，J，Tripathi BJ，“青光眼中房水生长因子的临床意义“，在Ritch R.，Shields，M.B.，Krupin，T.(编辑)的青光眼(THE GLAUCOMAS)，第2版，St LouisMosby-Year一书中的第71-87页(1996)。
Varma R，Minckler D，“视网膜和视神经的解剖学和病理生理学”，在Ritch R.，Shields，M.B.，Krupin，T.(编辑)的青光眼(THEGLAUCOMAS)，第二版，St LouisMosby-Year一书中的第139-175页(1996)。
Vaughan，D等人，在普通眼科学(GENERAL OPHTHALMOLOGY)，Appleton和Lange，Norwalk，Conn.中的第213-230页(1992)。
其它出版物Agarwal等人，IOVS 38(4)S563(1997)。
Agarwal R，Talati M，Lambert W，Clark AF，Wilson SE，Agarwal N，Wordinger RJ，“人小梁网细胞中FAS-激活的编程性细胞死亡和其它编程性细胞死亡介质，”，Exp.Eye Res.68583-590(1999)。
Astrom，A.K.，Jin，D.，Imamura，T.，Roijer，E.，Rosenzweig，B.，Miyazono，K.，ten Dijke，P.，Stenman，G.，哺乳动物基因组(Mamm.Genome)10(3)299-302(1999).
Attisano L，Tuen Lee-Hoeflich S，“Smads，”基因组生物学(GenomeBiol.)2REVIEWS3010(2001)。
Bengtsson，B.，不列颠眼科学杂志(Br.J.Ophthalmol.)73483-487(1989).
Chang B，Smith RS，Peters M，Savinova DV，Hawes NL，Zabalata A，Nusinowitz S，Martin JE，Davisson ML，Sepko CL，Hogan BML，JohnSWM，″仅Bmp4缺乏的眼表型包括伴眼压升高的眼前角畸形″，BMCGenetics 218(2001)。
Chundru RK，Agarwal R，Wordinger RJ，Whitson JT，“人房水中神经营养蛋白的检测，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.41S236(2000)。
Clark AF，Kawase K，English-Wright S，Lane D，Steely HT，Yamamoto T，Kitazawa Y，Kwon YH，Fingert JH，Swiderski RE，MullinsRF，Hageman GS，Alward WLM，Sheffield VC，Stone EM，“人视神经乳头中青光眼基因myocilin(MYOC)的表达，”FASEB J.151251-1253(2001)。
Clark AF，Lane D，Wilson K，Miggans ST，McCartney MD，“通过四氢皮质醇抑制培养的人小梁网细胞中地塞米松诱导的细胞骨架的变化，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.35805-813(1996)。
Clark AF，Miggans ST，Wilson K，Browder S，McCartneyMD，“培养的人青光眼小梁网细胞的细胞骨架变化，”J.Glaucoma 4183-188(1995c)。
Clark AF，Steely HT，Dickerson JE，English-Wright S，Stropki K，McCartney MD，Jacobson N，Shepard AR，Clark JI，Matsushima H，Peskind ER，Leverenz JB，Wilkinson CW，Swiderski RE，Fingert JH，Sheffield VC，Stone EM，“糖皮质激素诱导人和猴小梁网细胞和组织中青光眼基因MYOC，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.421769-1780(2001b)。
Clark AF，Wilson K，de Kater AW，Allingham RR，McCartney MD，“灌注培养的人眼中地塞米松诱导眼高压，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.36478-489(1995a)。
Clark AF，Wilson K，McCartney MD，Miggans ST，Kunkle M，Howe W，“培养的人小梁网细胞中糖皮质激素诱导交联肌动蛋白网的形成，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.35281-294(1994)。
Dickerson JE，Steely HT，English-Wright SL，ClarkAF，“培养的人小梁网细胞中地塞米松对整合蛋白和层粘连蛋白表达的影响，”Exp.EyeRes.66731-738(1998)。
Dudley AT，Lyons KM，Robertson EJ，“哺乳动物肾和眼发育期间需要骨形态发生蛋白-7，”Genes Dev.92795-2807(1995)。
Furuta Y，Hogan BL，“BMP4是小鼠胚胎中诱导晶状体必需的，”Genes Dev.123764-3775(1998)。
Greve，M.等人，Can.J.Ophthamol.28201-206(1993)。
Giguère等人，Cell 46645-652(1986)。
Hernandez MR，Andrzejewska WM，NeufeldAH，“原发性开角型青光眼中人视神经乳头的细胞外基质的变化，”Am.J.Ophthalmol.109180-188(1990)。
Hernandez MR，Pena JD，“青光眼性眼神经病中的视神经乳头，”Arch Ophthalmol.115389-395(1997)。
Hitchings，R.A.，Br.J.Ophthamol.77326(1993)。
Hogan BL，“骨形态发生蛋白脊椎动物发育的多功能调节物，”GenesDev.101580-1594(1996)。
Hu DN，Ritch R，“青光眼性眼的房水中肝细胞生长因子增加，”J.Glaucoma 10152-157(2001)。
Inatani M，Tanihara H，Katsuta H，Honjo M，Kido N，Honda Y“青光眼性眼房水中转化生长因子β2的水平，”Graefes Arch.Clin.Exp.Ophthalmol.239109-113(2001)。
Itoh等人，Eur.J.Biochem.2676954-6967(2000)。
Jena N，Martin-Seisdedos C，McCue P，Croce CM，“小鼠中BMP7的无效突变骨骼、肾和眼中的发育性缺陷，”Exp.Cell Res.23028-37(1997)。
Kawabata等人，细胞因子和生长因子综述(Cytokine & GrowthFactor Review)，949-61(1998)。
Kerrigan LA，Zack DJ，Quigley HA，Smith SD，Pease ME，“人原发性开角型青光眼中TUNEL-阳性神经节细胞，”Arch.Ophthalmol.1151031-1035(1997)。
Lambert等人，IOVS 38(4)S162(1997)。
Lambert W，Agarwal R，Howe W，Clark AF，Wordinger RJ，“人筛板细胞神经营养蛋白和神经营养蛋白受体的表达，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，422315-2323(2001)。
Leske，M.C.等人，Amer.J.Epidemiol.1131843-1846(1986)。
Liu等人，IOVS 40(4)S673(1999)。
Liu Y，Belayev L，Zhao W，Busto R，SaulI，AlonsoO，Ginsberg MD，“大鼠暂时局灶脑缺血中骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对功能恢复、局部脑葡萄糖利用和血流的影响，”Brain Res.90581-90(2001)。
Liu X，Lambert W，Agarwal R，Talati M，Cross W，Clark AF，Wordinger RJ，“人小梁网细胞表达睫状体神经营养因子(CNTF)三联受体复合物，”Exp.Eye Res.72711-717(2001)Luo G，Gofmann C，Bronckers AL，Sohocki M，Bradley A，KarsentyG，“BMP-7是肾发生的诱导物，并且也是眼发育和骨骼体形发育所需要的，”Genes Dev.92808-2820(1995)。
McMahon，R.，Murphy，M.，Clarkson，M.，Taal，M.，Mackenzie，H.S.，Godson，C.，Martin，F.，Brady，H.R.，J.Biol.Chem.275(14)9901-9904(2000)。
Miyazono，J.Cell Science，1131101-1109(2000)。
Mohan RR，Kim WJ，Mohan RR，Chen L，Wilson SE，“成人角膜中骨形态发生蛋白2和4及它们的受体，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.392626-2636(1998)。
Morrison JC，Dorman-Pease ME，Dunkelberger GR，Quigley HA，“原发性视神经萎缩和实验性青光眼中的视神经乳头细胞外基质，”Arch.Ophthalmol.1081020-1024(1990)。
Murphy，M.，Godson，C.，Cannon，S.，Kato，S.，Mackenzie，H.S.，Martin，F.，Brady，H.R.，J.Biol.Chem.274(9)5830-5834(1999)。
Nickel J，Dreyer MK，Kirsch T，Sebold W，“BMP-2BMPR-1A复合物的晶体结构和BMP-2拮抗剂的产生，”J.Bone & Joint Surgery 83-A(suppl1)S1-S7(2001)。
Nohno，T.，Ishikawa，T.，，Saito，T.，Hosokawa，K.，Noji，S.，Wolsing，D.H.，Rosenbaum，J.S.，J.Biol.Chem.270(38)22522-22526(1995)。
Nonner D，Barrett EF，Kaplan P，Barrett JN，“低血糖期间骨形态发生蛋白(BMP6和BMP7)增强神经营养蛋白对培养的中隔胆碱能神经元的保护效应，”J.Neurochem.77691-699(2001)。
Obata H，Kaji Y，Yamada H，Kato M，Tsuru T，Yamashita H，“大鼠眼中转化生长因子β超家族受体的表达，”Acta.Ophthalmol.Scand.77151-156(1999)。
Pang I-H，McCartneyMD，Steely HT，Clark AF，“人眼灌注器官培养用于青光眼研究的多用途离体模型，”J Glaucoma 9468-479(2000)。
Pena JD，Taylor AW，Ricard CS，VidalI，Hernandez MR，“人视神经乳头中转化生长因子β的同种型，”Br.J.Ophthalmol.83209-218(1999)。
Picht G，Welge-Luessen U，Grehn F，Lutjen-Drecoll E，“不同类型青光眼中转化生长因子β2的水平和与结膜滤过泡发育的关系，”GraefesArch.Clin.Exp.Ophthalmol.239199-207(2001)。
Quigley HA，McKinnon SJ，Zack DJ，Pease ME＜Kerrigan-BaumrindLA，Kerrigan DF，Mitchell RS，“大鼠急性IOP升高阻断视网膜神经节细胞中BDNF逆行性轴突运输，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.413460-3466(2000)。
Quigley HA，“青光眼的神经元死亡，”Prog.Retin.Eye Res.1839-57(1999)。
Quigley HA，Nickells RW，Kerrigan LA，Pease ME，Thibault DJ，ZackDJ，“实验性青光眼中和轴突横切术后通过程序性细胞死亡发生视网膜神经节细胞死亡，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.36774-786(1995)。
Reddi AH，“骨形态发生蛋白第一种哺乳动物形态发生素分离的非常规方法，”Cytokine Growth Factor Rev.811-20(1997)。
Reddi AH，“骨形态发生蛋白和骨骼发育肾-骨联系，”Pediatr.Nephrol.14598-601(2000)。
Rohen JW，“为什么慢性单纯性青光眼中眼内压升高？解剖学研究”Ophthalmology 90758-765(1983)。
Steely HT，Browder SL，Julian MB，Miggans ST，Wilson KL，ClarkAF，“培养的人小梁网细胞中地塞米松对纤连蛋白表达的影响”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.332242-2250(1992)。
Steely HT，English-Wright SL，Clark AF，“小梁网和筛板中蛋白质表达的相似性青光眼的本质，”Exp.Eye Res.7017-30(2000)。
Strong，N.P.，Ophthal.Physiol.Opt.123-7(1992)。
ten Dijke，P.P.，Ichijo，H.，Franzen，P.，Schulz，P.，Saras，J.，Toyoshima，H.，Heldin，C.H.，Miyazono，K.，Oncogene 8(10)2879-2887(1993)。
Tripathi RC，Borisuth NS，Kolli SP，Tripathi BJ，“小梁细胞表达与TGF-β1和TGF-β2结合的受体定性和定量特征”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.34260-263(1993b)。
Tripathi RC，Borisuth NS，Tripathi BJ，“人、猫、狗和猪的房水中基本的成纤维细胞生长因子的检测、定量和重要性，”Exp.Eye Res.54447-454(1992)。
Tripathi RC，Borisuth NS，Tripathi BJ，Fang VS，“人房水表皮生长因子的分析，”Exp.Eye Res.53407-409(1991)。
Tripathi RC，Chan WF，Li J，Tripathi BJ，“小梁细胞表达TFG-β2基因并分泌该细胞因子，”Exp.Eye Res.58523-528(1994a)。
Tripathi RC，Li J，Borisuth NS，Tripathi BJ，“眼的小梁细胞表达转化生长因子-β1的信使RNA并分泌该细胞因子，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.342562-2569(1993a)。
Tripathi RC，Li J，Chan WF，Tripathi BJ，“青光眼性眼的房水中包含升高水平的TFG-β2，”Exp.Eye Res.59723-727(1994c)。
Tripathi RC，Li J，Tripathi BJ，“小梁网中bFGF的免疫定位以及小梁细胞中其mRNA的检测，”Exp.Eye Res.58503-507(1994b)。
Trousse F，Esteve P，Bovolenta P，“发育的鸡眼中BMP4介导程序性细胞死亡，”J.Neurosci.211292-1301(2001)。
Tuck，M.W.等人，Ophthal.Physiol.Opt.13227-232(1993)。
Vernon，S.A.，Eye 7134-137(1993)。
Von Bubnoff A，Cho KW，“脊椎动物中细胞内BMP信号调节途径或网络？”Dev.Biol.2391-14(2001)。
Wang W-H，McNatt LG，Shepard AR，Jacobson N，Nishimura DY，Stone EM，Sheffield VC，Clark AF，“从人眼组织中提取RNA的最佳方法及用定量RT-PCR描述先天性青光眼基因FOXCI的表达特性，”Molecular Vision 789-94(2001)。
Wilson K，McCartney MD，Miggans ST，Clark AF，“培养的人小梁网细胞中地塞米松诱导的超微结构变化，”Current Eye Research 12783-793(1993)。
Wordinger等人，IOVS 40(4)S504(1999a)。
Wordinger RJ，Agarwal R，TalatiM，Fuller J，Lambert W，Calrk AF，“人小梁网和视神经乳头细胞和组织中骨形态发生蛋白(BMP)、BMP受体和BMP相关蛋白的表达，”Molec.Vision 8241-256(2002)。
Wordinger RJ，Clark AF，Agarwal R，Lambert W，McNatt L，WilsonSE，Qu E，Fung BK-K，“培养的人小梁网细胞表达功能性生长因子受体，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.391575-1589(1998)。
Wordinger RJ，Clark AF，Agarwal R，Lambert W，Wilson SE，“人小梁网中表达以其它方式剪接的生长因子受体同种型”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.40242-247(1999b)。
Wordinger RJ，Lambert W，Agarwal R，Talati M，Clark AF，“人小梁网细胞分泌神经营养蛋白并表达神经营养蛋白受体(Trk)，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.413833-3841(2000)。
Yamashita H，Ten Dijke P，Heldin CH，Miyazono K，“骨形态发生蛋白受体，”Bone 19569-574(1996)。
You L，Kruse FE，Pohl J，Volcker HE，“人角膜中骨形态发生蛋白及生长和分化因子，”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.40296-311(1999)。
Zhang D，Mehler MF，Song Q，Kessler JA，“神经系统中骨形态发生蛋白受体的发育及在调节trkC表达中的可能作用，”J.Neurosci.183314-3326(1998)。
序列表<110>爱尔康公司<120>骨形态发生蛋白(BMP)、BMP受体和BMP结合蛋白及它们在诊断和治疗青光眼中的用途<130>2312 US<160>54<170>PatentIn版本3.1<210>1<211>1547<212>DNA<213>人<400>SEQ ID NO1ggggacttct tgaacttgca gggagaataa cttgcgcacc ccactttgcg ccggtgcctt 60tgccccagcg gagcctgctt cgccatctcc gagccccacc gcccctccac tcctcggcct 120tgcccgacac tgagacgctg ttcccagcgt gaaaagagag actgcgcggc cggcacccgg 180gagaaggagg aggcaaagaa aaggaacgga cattcggtcc ttgcgccagg tcctttgacc 240agagtttttc catgtggacg ctctttcaat ggacgtgtcc ccgcgtgctt cttagacgga 300ctgcggtctc ctaaaggtcg accatggtgg ccgggacccg ctgtcttcta gcgttgctgc 360ttccccaggt cctcctgggc ggcgcggctg gcctcgttcc ggagctgggc cgcaggaagt 420tcgcggcggc gtcgtcgggc cgcccctcat cccagccctc tgacgaggtc ctgagcgagt 480tcgagttgcg gctgctcagc atgttcggcc tgaaacagag acccaccccc agcagggacg 540ccgtggtgcc cccctacatg ctagacctgt atcgcaggca ctcaggtcag ccgggctcac 600ccgccccaga ccaccggttg gagagggcag ccagccgagc caacactgtg cgcagcttcc 660accatgaaga atctttggaa gaactaccag aaacgagtgg gaaaacaacc cggagattct 720tctttaattt aagttctatc cccacggagg agtttatcac ctcagcagag cttcaggttt 780tccgagaaca gatgcaagat gctttaggaa acaatagcag tttccatcac cgaattaata 840tttatgaaat cataaaacct gcaacagcca actcgaaatt ccccgtgacc agacttttgg 900acaccaggtt ggtgaatcag aatgcaagca ggtgggaaag ttttgatgtc acccccgctg 960tgatgcggtg gactgcacag ggacacgcca accatggatt cgtggtggaa gtggcccact1020tggaggagaa acaaggtgtc tccaagagac atgttaggat aagcaggtct ttgcaccaag1080
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权利要求
1.通过检测骨形态发生家族成员基因的表达改变对获自细胞或体液的样本诊断青光眼的方法，所述方法包括下列步骤g)从疑似患有青光眼的患者获得组织或体液样本；h)从所述样本提取DNA；i)获得多条PCR引物，其中每一所述引物包含的序列由来自SEQ IDNO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53的18至1547个连续的核苷酸组成；j)用所述引物对经提取的DNA中的区域进行扩增，以获得PCR产物；k)分析PCR产物；并l)确定由经提取的DNA所扩增的序列与引物序列间的差异；其中扩增序列与引物序列间的差异可诊断青光眼。
2.权利要求1的方法，其中所述组织或体液样本为血液或口细胞。
3.权利要求1的方法，其中引物包含的序列由来自SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO37、SEQ IDNO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47或SEQ ID NO53的20至100个连续的核苷酸组成。
4.权利要求1的方法，其中引物包含的序列由SEQ ID NO3的20至50个连续的核苷酸组成。
5.权利要求1的方法，其中PCR产物通过SSCP、DGGE、ASO或RFLP进行分析。
6.治疗青光眼的方法，其包括向需要治疗的患者施用包含这样序列的组合物，所述序列由至少一个选自BMP2激动剂、BMP4激动剂、BMP5激动剂、BMP7激动剂、Smad 1/5激动剂、chordin拮抗剂、gremlin拮抗剂和卵泡抑素拮抗剂的化合物组成。
7.鉴定用于治疗青光眼的治疗剂的方法，所述方法包括d)获得第一组合物，其包含表达BMP-2A、BMP4、BMP-5或BMP7的一群重组细胞；e)获得候选物质；f)孵育所述组合物和所述候选物质；g)检测所述组合物启动BMP-诱导的Smad信号途径或受BMP-调节的基因表达的能力；以及h)鉴定抑制或刺激BMP-诱导的Smad信号途径或受BMP-调节的基因表达的候选物质。
全文摘要
本发明提供了诊断和治疗青光眼的方法和试剂盒。
文档编号G01N33/50GK1685055SQ02820917
公开日2005年10月19日 申请日期2002年10月31日 优先权日2001年10月31日
发明者A·F·克拉克, R·J·沃丁格 申请人:爱尔康公司, 北得克萨斯大学保健科学中心
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