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专利名称：一种用于测定幽门螺杆菌抗体的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测试剂盒，特别涉及一种用于检测人体血清中幽门螺杆菌抗体的胶乳免疫试剂盒及其制备方法。本发明属于生物检测技术领域
背景技术：
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,简称HP)是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，呈革兰染色阴性，在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性胃溃殇以及胃动膜相关淋巴组织 (MALT)淋巴瘤的主要致病因素，并且与胃癌的发生密切相关.1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WH0/IARC)将幽门螺杆菌定为I类致癌原。慢性胃炎患者的胃粘膜活检标本中幽门螺杆菌检出率可达80% 90%.而消化性胃溃殇患者更高，可达95%以上，甚至接近100%。胃癌由于局部上皮细胞己发生异化，因此其检出率高低报道不一。幽门螺杆菌的感染己是个世界性问题，对其进行准确诊断有利于控制HP传播与流行及根除HP感染治疗的监测。目前，国内外已建立的HP检测方法从检测手段上分为侵入性和非侵入性两大类。一、侵入性检测方法这类方法的特点是使用内窥镜取得胃活检组织后进行检测，试验方法主要有快速尿酶试验法、病理学检测法及细菌培养法。I、快速尿酶检测法依据HP具有丰富的尿素酶可分解尿素产生氨气，由pH指示剂显色。该法简便、迅速、灵敏，但也有可能因含尿素酶的其他细菌存在而产生假阳性。此夕卜，近期使用过降低胃部细菌量或直接抑制尿素酶活性的药物的样品可产生假阴性。2、病理学检测法通过对胃粘膜组织进行切片染色检查，可直接显示HP菌体而证实，其中银染法检测率高，但不同病理学家观察的差异性对于胃萎缩样品的诊断具有一定的困难性。3、细菌培养法取胃粘膜活组织作HP培养，因培养细菌较少、操作过程较复杂、时间周期较氏、费用昂贵而不适宜普遍应用。二、非侵入性检测方法此类方法特点是不需要使用内窥镜采取胃活检组织，从而避免病人因反复做胃窥镜而带来的侵害痛苦或发生其它类型的感染。试验方法主要有尿素呼吸试验、PCR检测法和免疫血清学法。I、尿素呼吸试验由于HP富含尿素酶,用13C或14C标记的尿素由受试者服用后，根据气体核素质谱仪检测到分解产生的带同位素标记的二氧化碳标本来判断HP感染程度。该法灵敏度高，可定量，但有一定的放射性危险，并且受设备限制难于普遍推广。2、PCR检测法主要检测胃液、粘膜中HP尿素酶(UReA)基因和毒素相关蛋白A (CagA)基因，但操作复杂，易污染，对检验人员的专业知识及操作技术的要求较高，且大大增加患者的经济开支，因此在临床上的应用也较为有限。3、免疫血清学法目前已有方法包括酶联免疫法、免疫印迹法和胶体金法,为HP的流行病学调查提供了有利便捷手段，但检测速度慢，除酶联免疫法可使用全自动酶免分析仪(且需2 3小时、步骤多)外，其余都需手工操作，患者获得检测结果为定性分析，不适于治疗监控及疗效评估。目前，虽然检测幽门螺旋杆菌感染的方法繁多，但还没有一种合适的生化分析仪，能够简便、快速、大批量且定量的进行检测。如能建立该种方法，则能使检测过程大为简便化，操作人员只需设置好上机参数，将试剂和样本置于相应位置后，生化分析仪即可全自动 完成检测，并能够迅速得到结果，易于在各级医疗机构推广应用，对于幽门螺旋杆菌的防治具有重大的临床意义和普及价值。

发明内容
本发明的目的在于克服现有方法及技术的缺陷，提供一种测定幽门螺杆菌抗体的胶乳免疫试剂盒及其制备方法以及使用该试剂进行临床样本检测的方法。该试剂适用于各类型生化分析仪，具有样本无需稀释、操作简单、快速、定量准确、重复性好、稳定性好、敏感度高、特异性强的特点。为实现本发明的目的，采用了如下的技术方案本发明的一种用于测定幽门螺杆菌抗体的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于包括稀释液、幽门螺杆菌抗原的胶乳试剂及空白液；其中，所述的幽门螺杆菌抗原的胶乳试剂为已吸附幽门螺杆菌抗原的两种不同粒径的胶乳颗粒的混合物，所述的胶乳颗粒为聚苯乙烯微球。在本发明中，优选的，所述的稀释液为含有表面活性剂及反应增强剂的缓冲液，所述的缓冲液为Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HE PES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或HEPPS缓冲液中的任一种，优选为磷酸盐缓冲液；所述的反应增强剂为PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一种或几种，优选为PEG6000 ;更优选的所述的稀释液中还含有2mol/L的氯化钠。其中，无机盐氯化钠可以调节离子强度，反应增强剂可以加快抗原抗体的免疫反应速度，缩短检测时间，表面活性剂(Tween 20)可以去除非特异性的结合反应。在本发明中，优选的，所述的胶乳试剂为已吸附幽门螺杆菌抗原的粒径为60 -90nm和粒径为160 — 200nm的胶乳颗粒的混合物。优选的，所述的胶乳颗粒为聚苯乙烯纳米微球，这种组合既能够提高反应的灵敏度，而且也能够提高试剂的检测范围。在本发明中，优选的，所述的胶乳试剂可以按照以下方法制备得到( I)胶乳前处理取Iml未标记的胶乳颗粒加入IOml 0. 02M pH7. 4磷酸缓冲液中，离心机IOOOOrpm离心20min,去掉上清液、再用IOml 0. 02M pH7. 4磷酸缓冲液重悬颗粒,离心机IOOOOrpm离心20min，去掉上清并用5ml 0. 02M pH7. 4磷酸缓冲液重悬、4°C保存待用；(2)胶乳颗粒标记将步骤(I)处理后胶乳用0. 02M pH6. IMES缓冲液将胶乳颗粒稀释成10mg/ml浓度，然后加入Img EDC,混匀活化15分钟，离心8000rpm弃去上清，并用0. 02MPH7. 4磷酸缓冲液重悬，加入Img幽门螺杆菌抗原于10mg/ml 2ml胶乳液体中，室温混勻2 — 4小时,离心机SOOOrpm离心15分钟，将上清分离到另外的容器中备用，颗粒使用封闭液重悬，并室温混匀I小时，离心机SOOOrpm离心15min，沉淀复溶于分散液，将标记完成的胶乳颗粒分装成Iml/支，4°C保存；(3)使用上述步骤分别对粒径60 - 90nm和160 — 200nm的胶乳进行分别标记，标记结束后将所述60-90nm胶乳和所述160-200nm胶乳进行混合，按质量体积百分比计，使60 — 90nm 胶乳的浓度为 0. 673-0. 732%，使 160 — 200nm 胶乳的浓度为 0. 135-0. 323%,混合后进行保存，优选的使用上述流程分别对粒径70 - 90nm和160 — ISOnm的胶乳进 行分别标记，标记结束后将所述70 - 90nm胶乳和所述160 — ISOnm胶乳进行混合，按质量体积百分比计，使70 - 90nm胶乳浓度为0. 708-0. 732%，使160 — 180nm胶乳浓度为0. 135-0. 235%，混合后进行保存；所述的封闭液为含有5g/L BSA的0. 02M PH7. 4的磷酸缓冲液；所述的分散液由BSA，吐温-20、PVP-K30以及生物防腐剂通过0. 02M PH7. 4的磷酸缓冲液配制而成，其中BSA浓度为lg/L，吐温-20浓度为0. 05% (v/v), PVP-K30浓度为2g/L，生物防腐剂浓度为0. 05% (v/v)。在本发明中，优选的，所述抗原包括幽门螺杆菌全菌体蛋白、幽门螺杆菌尿素酶、幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A(Cytotoxin associated gene A, Cag A)或幽门螺杆菌细胞空泡毒素A (Vacuolating cytotoxinA, VacA)中的一种或多种。幽门螺杆菌可以产生大量的尿素酶，该尿素酶对细菌在体内的定植及致病发挥着重要作用。尿素酶主要由A(UreA)和B(UreB)两个亚单位组成，分子量分别约为30kD和63kD，业已证实尿素酶B亚单位(ureB)是幽门螺杆菌的一个重要保护性抗原。现有研究进一步表明，大约占50-60%的幽门螺杆菌能在体外产生细胞毒素活性，其中细胞毒素的表达与暴露在幽门螺杆菌表面的细胞毒素相关基因A密切相关，该基因表达的蛋白仅存在于产细胞毒素的幽门螺杆菌中，并具有良好的免疫原性，现在认为，该蛋白作为抗原能为临床胃部疾患的诊断提供依据。细胞空泡毒素A (VacA)也是幽门螺杆菌的特异性表达蛋白，对于临床幽门螺杆菌的检测具有重要的参考价值。本发明所述幽门螺杆菌抗原的制备步骤包括步骤I细菌培养，包括固态培养、液态小量培养和液态大量培养；步骤2:细菌鉴定、破碎、离心、提取上清、纯化及蛋白浓度测定。 在本发明具体实施例中，作为参考公开了一种制备幽门螺杆菌全菌体抗原的方 法。在本发明所述的试剂盒中，优选的，还含有标准稀释液、校准品和质控品。优选的，所述的标准稀释液为Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HE PES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、M0PS0缓冲液、DIPSO缓冲液或HEPPS缓冲液中的任一种，优选为磷酸盐缓冲液。
在本发明中，所述校准品、质控品是一种用来与样本比较，进行结果计算和质量控制的幽门螺杆菌抗体溶液，优选的，所述的校准品、质控品是一种幽门螺杆菌抗体溶液，其中包括PBS缓冲液、稳定剂、防腐剂以及幽门螺杆菌特异性抗体；所述稳定剂选自蛋白质、氨基酸、无机盐、表面活性剂中的一种或多种，优选为含0. 05%BSA的磷酸盐缓冲液，
所述防腐剂选自0. 1%的叠氮钠、Procl in_300、庆大霉素中的一种或多种。校准品的浓度可以是高浓度单点参考校准品，在使用时用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成多个不同浓度的参考校准品，还可以是固定浓度的单点参考校准品，与生理盐水共同绘制校准曲线。本发明优选固定浓度的单点参考校准品，校准品、质控品的浓度分别为50AU/mL、31AU/mL。在具体实施例中，公开了一种制备校准品、质控品的方法。本发明还公开了所述的试剂盒在制备测定幽门螺杆菌抗体试剂中的应用。进一步的，本发明还提供了一种用于诊断胃病或胃癌的三联检试剂盒，其特征在于包括本发明所述的用于测定幽门螺杆菌抗体的胶乳增强免疫比浊试剂盒，还包括胃蛋白酶原I检测试剂盒及胃蛋白酶原II检测试剂盒。作为参考，在本发明的具体实施例部分给出了胃蛋白酶原I检测试剂盒及胃蛋白酶原II检测试剂盒的制备方法。本发明测定样本的原理是胶乳增强免疫比浊法，所选样本为人体血清，样本与试剂Rl预孵育3-5分钟后(使样本中的抗体结合位点充分暴露)，加入试剂R2(幽门螺杆菌抗原胶乳试剂)，继续孵育3-5分钟，人体血清中的幽门螺杆菌特异性抗体与试剂R2中的幽门螺杆菌抗原结合，形成不溶性的抗原一抗体复合物，产生一定的浊度，其泊、度高低与检测样本中的特异性抗体浓度成正比。在规定波长下测定该不溶性抗原抗体复合物的吸光度值，与己知浓度的幽门螺杆菌特异性抗体校准品进行比较，则可计算出样本中幽门螺杆菌抗体的浓度。本发明提供的试剂为液体双试剂，适用于各类型全自动生化分析仪和半自动生化分析仪，与现有技术相比，具有以下特点 I、定量检测，灵敏度高，可达到2. OAU/mL，线性范围广，可达到245AU/mL;2、检测准确度和精密度好；3、特异性强，且不易受干扰4、稳定性好，2_8°C可避光贮存至少12个月，各试剂开瓶后至少可以保存14天5、样本不用预稀释、操作简单、快速，从检测到出结果仅需10分钟，特别适用于大批量筛查，检测速度可随生化分析仪检测速度的提高而提高。


图I为本发明所述试剂盒线性范围相关性示意图；图2为使用本发明的试剂盒进行检测的流程示意图。图3为胃蛋白酶原I与胃部胃底和胃体的胃粘膜状况关系图；图4为胃蛋白酶原II与胃部胃窦和胃角部位的胃粘膜状况关系图。
具体实施例方式本发明公开了一种测定幽门螺杆菌抗体的胶乳免疫试剂及其制备与应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，通过适当改进工艺参数而实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明所要求保护的技术方案之内。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。本发明实施例所涉及主要材料及试剂的购买来源Q-2阴离子交换层析柱、DEAE-Sephadex A52 (DEAE-52)层析柱购买自美国GE公司；弗氏完全佐剂，生物防腐剂Proclin-300、2_(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)购买自SIGMA ； 10% (w/w)聚苯乙烯纳米微球溶液购买自美国Bangs ;胃蛋白酶原I抗体PGI-8003和PGI-8015购买自Medix批号0021636，胃蛋白酶原II抗体PGII-8103和PGII-8101购买自Medix批号0023880PVP-K30 (Polyvinylpyrrolidone)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾PFG-6000、EDC (1_ (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、吐温_20等购自国药集团；牛血清白蛋白(BSA)购自元亨金马；HP菌种购自上海天呈科技有限公司，编号43504 ；幽门螺杆菌抗体购自上海领潮生物公司，编号L1H01202 ；实施例I幽门螺杆菌抗原的制备(以全菌体蛋白抗原为例)(I)细菌培养(a)固态培养将HP菌种接种于巧克力培养基中，37°C培养3-4天，即产生扁平带点透明而似胶状菌落，此即为幽门螺旋杆菌，以接种环挑起数个菌落，将细菌于巧克力培养基上用三区划线法划开后，37°C培养3-4天，每隔四天传代一次以保持菌的活性。(b)小量液态培养将回态培养出的幽门螺旋杆菌菌落，以接种环挂下数个菌落，并抖落于125ml锥形瓶中，瓶内盛有BHI培养液50ml，其中含Iml新生小牛血清和0. Iml幽门螺旋杆菌筛选液，将锥形瓶瓶口以棉塞覆盖紧，37°C培养3 4天。(c)大量液态培养吸取0. 5ml小量培养菌液，进行初步尿素鉴定以及外观观察，确认没有受到其他杂菌污染。吸取15ml菌液加入500ml锥形瓶中，瓶内盛有BHI培养液250ml，其中含5ml新生小牛血清和0. 5ml幽门螺旋杆菌筛选液，将锥形瓶瓶口以棉塞覆盖紧，置于37°C培养3 4天。(2)细菌鉴定、破碎、离心和提取上清(a)细菌鉴定外观型态观察观察菌落在巧克力培养基上的生长型态，为扁平带点透明而似胶状菌落。尿素检验法幽门螺杆菌的尿素酶极为丰富，约含菌体蛋白的15%尿素酶催化尿素水解可产生氨气。取0. 5ml尿素测试溶液置于试管中，加入0. 5ml菌液，于37°C反应约半小时。若含有幽门螺旋杆菌，则测试溶液会由黄色转变为粉红色。
(b)细菌破碎、离心和提取上清取250mL幽门螺旋杆菌菌液，于8000rpm离心20分钟，弃上请，沉淀加入IOmlO. 05M甘氨酸缓冲液(pH=7. 0)清洗,于8000rpm离心20分钟，弃上清，沉淀加入IOml 0. 05M甘氨酸缓冲液(pH=7. 0)混合均匀，超声破菌，于18. OOOrpm离心20分钟，取出上清液并将其放置80°C备用。(c)抗原蛋白浓度测定以Bio-Rad蛋白测定试剂盒定量幽门螺杆菌抗原蛋白浓度，首先将胎牛血清蛋白(BSA)溶于PBS中制备下列各浓度的标准品0mg/mL、0. lmg/ml、0. 2mg/ml、0. 3mg/ml、0. 4mg/ml、0. 5mg/ml时,然后以二次水5倍稀释分析缓冲液(含考马斯亮兰R-250).接着在96微孔盘中加入100 ill稀释后的分析缓冲液，最后分别加入IOiU各浓度标准品及(2)中所获幽门螺杆菌抗原蛋白质溶液，于室温反应5分钟，以可见分光光度计或酶标仪在595nm波长下读取OD值，绘制标准曲线，并计算幽门螺杆菌抗原蛋白质浓度。
实施例2本发明试剂盒的组装I缓冲液配置I. I稀释液(试剂Rl)的配制将下表I中试剂称量好放入洁净容器中，加纯化水混匀，测定pH值为7. 4，定容IOOOml0表I稀释液(试剂Rl)的配制
~m\每升液体用量
磷酸氢二纳 2. 88g
磷酸二氢纳
氯化纳116.88g
PEG-60002g
PVP — k3020g
BSA10.Og
吐温 -200. 5ml
Proclin-300 0. 5mI 加纯化水至1000mlI. 2标准稀释液的配制将下表2中试剂称量好放入洁净容器中，加纯化水溶解混匀，测定pH值为7. 4，定容至 1000ml。表2标准稀释液的配制
权利要求
1.一种用于测定幽门螺杆菌抗体的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于包括稀释液、幽门螺杆菌抗原的胶乳试剂及空白液； 所述的幽门螺杆菌抗原的胶乳试剂为已吸附幽门螺杆菌抗原的两种不同粒径的胶乳颗粒的混合物，所述的胶乳颗粒为聚苯乙烯微球。
2.按照权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的稀释液为含有反应增强剂的缓冲液，所述的缓冲液为Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HE PES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或HEPPS缓冲液中的任一种，优选为磷酸盐缓冲液；所述的反应增强剂为PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一种或几种，优选为PEG6000 ;更优选的所述的稀释液中还含有2mol/L的氯化钠。
3.按照权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的胶乳试剂为已吸附幽门螺杆菌抗原的粒径为60 - 90nm和粒径为160 — 200nm的胶乳颗粒的混合物。
4.按照权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的胶乳试剂按照以下方法制备得到 (1)胶乳前处理 取Iml未标记的胶乳颗粒加入IOml O. 02M pH7. 4磷酸缓冲液中，离心机IOOOOrpm离心20min,去掉上清液、再用IOml O. 02M pH7. 4磷酸缓冲液重悬颗粒,离心机IOOOOrpm离心20min，去掉上清并用5ml O. 02M pH7. 4磷酸缓冲液重悬、4°C保存待用； (2)胶乳颗粒标记 将步骤(I)处理后胶乳用O. 02M pH6. IMES缓冲液将胶乳颗粒稀释成10mg/ml浓度，然后加入Img EDC,混匀活化15分钟，离心8000rpm弃去上清，并用O. 02MPH7. 4磷酸缓冲液重悬，加入Img幽门螺杆菌抗原于10mg/ml 2ml胶乳液体中，室温混勻2 — 4小时,离心机SOOOrpm离心15分钟，将上清分离到另外的容器中备用，颗粒使用封闭液重悬，并室温混匀I小时，离心机SOOOrpm离心15min，沉淀复溶于分散液，将标记完成的胶乳颗粒分装成Iml/支，4°C保存； (3)使用上述步骤分别对粒径60- 90nm和160 — 200nm的胶乳进行分别标记，标记结束后将所述60 - 90nm胶乳和所述160 — 200nm胶乳进行混合，按质量体积百分比计，使60 — 90nm 胶乳的浓度为 O. 673-0. 732%，使 160 — 200nm 胶乳的浓度为 O. 135-0. 323%,混合后进行保存，优选的使用上述流程分别对粒径70 - 90nm和160 — ISOnm的胶乳进行分别标记，标记结束后将所述70 - 90nm胶乳和所述160 — ISOnm胶乳进行混合，按质量体积百分比计，使70 - 90nm胶乳浓度为O. 708-0. 732%，使160 — 180nm胶乳浓度为O.135-0. 235%，混合后进行保存； 所述的封闭液为含有5g/L BSA的O. 02M PH7. 4的磷酸缓冲液； 所述的分散液由BSA，吐温-20、PVP-K30以及生物防腐剂通过O. 02M PH7. 4的磷酸缓冲液配制而成，其中BSA浓度为lg/L，吐温-20浓度为O. 05% (v/v), PVP-K30浓度为2g/L，生物防腐剂浓度为O. 05% (v/v)。
5.按照权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述抗原包括幽门螺杆菌全菌体蛋白抗原、幽门螺杆菌尿素酶抗原、幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗原或幽门螺杆菌细胞空泡毒素A抗原中的一种或多种。
6.按照权利要求I所述的试剂盒，其特征在于还含有标准稀释液、校准品和质控品。
7.按照权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述的标准稀释液为Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HE PES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或HEPPS缓冲液中的任一种，优选为磷酸盐缓冲液。
8.按照权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述的校准品、质控品是一种幽门螺杆菌抗体溶液，其中包括PBS缓冲液、稳定剂、防腐剂以及幽门螺杆菌特异性抗体； 所述稳定剂选自蛋白质、氨基酸、无机盐、表面活性剂中的一种或多种 所述防腐剂选自O. 1%的叠氮钠、Proclin-300、庆大霉素中的一种或多种。
9.权利要求1-9任一项所述的试剂盒在制备测定幽门螺杆菌抗体试剂中的应用。
10.一种用于诊断胃病或胃癌的三联检试剂盒，其特征在于包括权利要求1-8任一项所述的试剂盒，还包括胃蛋白酶原I检测试剂盒及胃蛋白酶原II检测试剂盒。
全文摘要
本发明公开了一种测定幽门螺杆菌抗体的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用。该试剂盒的组成包括稀释液、幽门螺杆菌抗原的胶乳试剂和空白液，还可包括校准品和质控品。所述的幽门螺杆菌抗原为幽门螺杆菌抗原，可为幽门螺杆菌全菌体蛋白抗原、幽门螺杆菌尿素酶抗原、幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗原或幽门螺杆菌细胞空泡毒素A抗原中的一种或多种，所述胶乳试剂为已吸附幽门螺杆菌抗原的两种不同粒径胶乳颗粒的混合物，制备所述校准品、质控品所需的幽门螺杆菌抗体源自感染幽门螺杆菌患者血清中IgM和/或IgG。本发明适用于各类型全自动生化分析仪和半自动生化分析仪，具有检测快速、敏感度高、特异性强和准确性好等优点。
文档编号G01N33/574GK102662059SQ20121014741
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月11日 优先权日2012年5月11日
发明者金鑫 申请人:北京美康生物技术研究中心