专利名称：治疗肝病的水飞蓟宾二偏琥珀酸酯异构体的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，涉及用于治疗肝病的水飞蓟宾二偏琥珀酸酯的活性异构体及其制备方法，还涉及一种包含该活性异构体的药物组合物。本发明的药物组合物具有期望的良好性质。
背景技术：
近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的变化，我国脂肪肝发病率己接近乙肝病毒携带率，并呈明显上升趋势。其中，30 40岁的男性是脂肪肝患者大军中的“主力”，基本占到全部脂肪肝患者的1/4。据估计，现在脂肪肝发病率较20世纪80年代以前增加了 30倍左右。据报道15%脂肪肝患者会发展成肝硬化，3%的脂肪肝患者会死于肝衰竭。因此脂肪肝及早预防和治疗具有非常重要的意义。肝炎是指由于不同病因的肝脏炎症，日常生活中病毒性肝炎最常见，它具有发病率高，病程长，病势反复性强，�：π源蟮奶氐悖舨唤屑笆敝瘟疲凶湮斡不案伟┑目赡堋Ｎ夜质歉窝赘叻⒌墓遥萃臣疲夜谐�1.2亿人感染乙肝病毒，慢性乙肝病人约3000万，3800万人携带丙肝病毒，仅从乙肝病毒携带者的数字来说，差不多占国民十分之一。目前，虽然肝病药物种类很多，但尚无一种药物能真正杀灭乙肝病毒。目前多采用抑制病毒复制、或改善症状、控制病情发展两种治疗思路。前者虽然能快速抑制病毒复制，但存在长期用药风险。如肝病一线药物拉米夫定虽可以将乙肝病毒抑制在较低水平(DNA〈103拷贝/ml) ，但需要长期用药(通常2_3年)，并不能随意停用，不仅费用高昂，而且长期用药直接导致部分患者乙肝病毒出现耐药变异株，病情更趋复杂。因此，研制一种能有效改善肝病症状、适合长期用药、且价格合理的药物，用于肝脏疾病的预防和治疗，符合当前的国情，满足临床需要。水飞蓟，菊科，是优良的护肝植物，其主要成分为水飞蓟宾(silybin)。药理实验证明，水飞蓟宾有保护肝细胞膜，改善肝功能的作用，预防多种肝脏毒物所致的肝损伤，促进肝细胞再生，主要用于治疗各种急慢性肝炎、初期肝硬化和肝中毒等症。水飞蓟宾非常难溶于水，限制了其口服吸收，成盐后水溶性明显增加。目前，主要研究集中在水飞蓟宾葡甲胺盐和水飞蓟宾磷脂复合物。西利宾安片的主要成分即是水飞蓟宾葡甲胺，但仍存生物利用度不高的缺点。水林佳的主要成分是水飞蓟宾卵磷脂复合物，虽然通过改善脂溶性在一定程度上提高了生物利用度，但是其水溶性仍较差。影响体内生物利用度的因素包括剂型因素和生理因素两个方面:剂型因素如药物的脂溶性、水溶性和PKa值，药物的剂型特性(如崩解时限、溶出速率)及一些工艺条件的差别；生理因素包括胃肠道内液体的作用，药物在胃肠道内的转运情况，吸收部位的表面积与局部血流，药物代谢的影响，肠道菌株及某些影响药物吸收的疾病等。由此，一个药物在体内的吸收情况不仅与药物本身的脂溶性有关，而且水溶性也是一关键参数。水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠盐是一种水飞蓟宾的衍生物，其在水溶性方面显著优于水飞蓟宾，据信其具有降低血清中游离脂肪酸和甘油三酯的含量、调节磷脂代谢的紊乱、清除氧自由基、抑制脂质过氧化、稳定肝细胞膜、减轻脂肪变性、对抗肝细胞坏死的功能，可用于鬼笔鹅膏引起的急性肝中毒的治疗，还可用于急性、慢性肝损伤的治疗，以及用于脂肪肝和酒精肝所造成的肝功能异常的恢复。CN101302212A公开了水飞蓟宾二偏琥珀酸酯及其盐类的制备方法和用途，这种据说有效的制备方法是使水飞蓟宾在适合的有机溶剂中与丁二酸酐反应合成得到水飞蓟宾丁二酯单甲酯，然后在特定的介质中与氢氧化钠反应生成氟苯尼考丁二酸酯钠盐而实现的。
CN101244041A公开了一种用于预防及治疗急性肝损伤的药物及其制备方法。该发明专利文献具体涉及一种成分为水飞蓟宾丁二酸钠冻干粉针的制备方法，包括以下步骤:(1)将水飞蓟宾丁二酸钠溶解于注射用水中，充分搅拌成溶液；(2)于上述溶液加入甘露醇或乳糖使溶解；(3)将上述溶解用活性炭加热脱色并用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节PH7 9，过滤；(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得。尽管人们在使用水飞蓟宾产品例如水飞蓟宾或其衍生物如水飞蓟宾二偏琥珀酸酯或其盐等方面，然而人们仍然期待有一种改进的方法来治疗或预防肝脏等与水飞蓟宾或其衍生物所治疗的相关疾�。乇鹗瞧诖幸恢指慕姆椒ㄊ褂盟杉槐龆晁狨セ蚱溲卫粗瘟朴敫卧嘞喙氐募膊 �
发明内容
本发明的目的在于提供一种改进的方法来治疗或预防肝脏等与水飞蓟宾或其衍生物所治疗的相关疾病，特别是期待有一种改进的方法使用水飞蓟宾二偏琥珀酸酯(亦可称为水飞蓟宾二琥珀酸半酯)或其盐来治疗与肝脏相关的疾病。本发明人出人意料的发现，使用水飞蓟宾二偏琥珀酸酯的活性异构体显示出积极的生物和/或物理和/或化学方面的效果。本发明基于此发现而得以完成。因此，本发明第一方面提供了一种化合物，其为两种或两种以上的以下式I化合物异构体的组合:
[001权利要求
1.一种化合物，其为两种或两种以上的以下式I化合物异构体的组合:
2.根据权利要求1的化合物，其中所述金属离子是碱金属离子或者碱土金属离子；或者，其中X各自独立地表示氢、钠离子、钾离子、锂离子、镁离子、或钙离子。
3.根据权利要求1至2的化合物，其中包含两种式I化合物的异构体，所述两种异构体占该化合物总重量的95%以上。
4.根据权利要求1至3的化合物，照高效液相色谱法测定，其在色谱图中按出峰先后顺序依次出现称之为第一色谱峰和第二色谱峰的两个主要色谱峰，所述第一色谱峰和第二色谱峰两者的峰面积之和占总峰面积的95%以上。
5.根据权利要求1至4的化合物，照高效液相色谱法测定，其在色谱图中按出峰先后顺序依次出现称之为第一色谱峰和第二色谱峰的两个主要色谱峰，其中所述第一色谱峰峰面积是所述第二色谱峰峰面积的0.5^1.5倍。
6.根据权利要求5的化合物，其中所述第一色谱峰和第二色谱峰在所述高效液相色谱法测定条件下二者的分离度大于0.8。
7.根据权利要求1至6的化合物，其中高效液相色谱法具有使所述第一色谱峰和第二色谱峰能够达到分离度大于0.8的高效液相色谱法测定条件。
8.根据权利要求1至7的化合物，其中所述高效液相色谱法测定是按包括如下“⑴色谱条件与系统适用性试验”方式进行的: (i)色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH值至4.0)—甲醇(50:50)为流动相，检测波长为288nm，柱温为30° C ;取参比品水飞蓟宾适量，加流动相溶解并稀释制成每Iml中含水飞蓟宾200 μ g的溶液，作为参比品贮备液；另取该参比品贮备液用流动相稀释成20 μ g/ml的溶液，作为系统适用性试验溶液，取该系统适用性试验溶液20 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图；该色谱图中按出峰先后顺序依次出现称之为A峰和B峰的两个主要色谱峰，调整A峰的保留时间在6-9min之间，并且A峰和B峰的分离度应大于1.0 (例如大于1.2，例如大于1.5,例如大于2)。
9.根据权利要求1至8的化合物，其中色谱纯度和峰面积比测定的一个典型实例是按包括如下“(ii)色谱纯度和峰面积比测定法”方式进行的: ( )色谱纯度和峰面积比测定法:取本发明化合物适量，加流动相溶解并制成浓度为.0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置IOOml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；采用本发明所述(i)色谱条件与系统适用性试验中的方法，取对照溶液20 μ I注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分H色谱峰的峰高约为满量程的20% ；精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至H色谱峰保留时间的2倍；供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液色谱图中H色谱峰面积0.05倍的色谱峰忽略不计；记录供试品溶液色谱图中主峰G峰和H峰的峰面积以及各杂质峰面积，G峰和H峰的峰面积之和除以全部峰面积之和的百分数，即为本发明化合物色谱纯度，另外以G峰峰面积除以H峰峰面积可以算得G峰和H峰的峰面积比。
10.根据权利要求1至9的化合物，照高效液相色谱法测定，以水飞蓟宾为参比品，并以水飞蓟宾的A峰作为计算相对保留时间的参比峰，本发明化合物的第一色谱峰的相对保留时间(RRt)为2.Γ3.2，本发明化合物的第二色谱峰的相对保留时间(RRt)为2.8 3.6。
11.根据权利要求1至10的化合物，照高效液相色谱法测定，以水飞蓟宾为参比品，并以水飞蓟宾的A峰作为计算相对保留时间的参比峰，本发明化合物的第一色谱峰的相对保留时间(RRt)为 2.4 3.2 (例如 2.45^3.15，例如 2.5^3.1，例如 2.55^3.05，例如 2.6^3.0)，本发明化合物的第二色谱峰的相对保留时间(RRt)为2.8 3.6 (例如2.85 3.55，例如2.9^3.5，例如2.95^3.45，例如3.(Γ3.4)，所述高效液相色谱法测定相对保留时间是按包括如下的方式进行的: (i)色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH值至4.0)—甲醇(50:50)为流动相，检测波长为288nm，柱温为30° C ;取参比品水飞蓟宾适量，加流动相溶解并稀释制成每Iml中含水飞蓟宾200 μ g的溶液，作为参比品贮备液；另取该参比品贮备液用流动相稀释成20 μ g/ml的溶液，作为系统适用性试验溶液，取该系统适用性试验溶液20 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图；该色谱图中按出峰先后顺序依次出现称之为A峰和B峰的两个主要色谱峰，调整A峰的保留时间在6-9min之间，并且A峰和B峰的分离度应大于1.0 (例如大于1.2，例如大于1.5,例如大于2)； (iii)相对保留时间(RRt)的测定:取本发明化合物适量，加流动相溶解并制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品贮备液；精密量取供试品贮备液1ml，置IOml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成包含本发明化合物浓度约为50 μ g/ml的溶液，作为供试品测试溶液I ;另精密量取供试品贮备液Iml和参比品贮备液2.5ml，置IOml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成包含本发明化合物和参比品水飞蓟宾浓度分别约为50μ g/ml的溶液，作为供试品测试溶液II ;精密量取20 μ I的供试品测试溶液II，注入液相色谱仪，记录色谱图至H色谱峰保留时间的2倍；记录色谱图中由水飞蓟宾产生的两个主要色谱峰A峰和B峰以及由本发明化合物产生的两个主要色谱峰G峰和H峰的保留时间，用G峰的保留时间除以A峰的保留时间即为G峰的相对保留时间，用H峰的保留时间除以A峰的保留时间即为H峰的相对保留时间。
12.根据权利要求1至11的化合物,其为以下 式I化合物中由12-位和13-位手性碳所形成的两种异构体的组合:
13.根据权利要求1至12的化合物，其为以下式I化合物中由12-位和13-位手性碳所形成的两种异构体的组合:
14.根据权利要求1至13的化合物，其为以下式I化合物中由12-位和13-位手性碳所形成的两种异构体的组合:
15.一种药物组合物，其中包含权利要求1-14任一项所述化合物以及任选的药用辅料。
16.根据权利要求15的药物组合物，其中包含作为活性成分的以下式I化合物中由12-位和13-位手性碳所形成的两种异构体以及任选的药用辅料:
17.根据权利要求15至16的药物组合物，其中包含作为活性成分的以下式I化合物中由12-位和13-位手性碳所形成的两种异构体以及任选的药用辅料:
18.根据权利要求15至17的药物组合物，其中包含作为活性成分的以下式I化合物中由12-位和13-位手性碳所形成的两种异构体以及任选的药用辅料:
19.根据权利要求15至18的药物组合物，，其照高效液相色谱法测定，不计辅料色谱峰，在色谱图中按出峰先后顺序依次出现称之为第一色谱峰(其在本发明中可简称为G峰或G)和第二色谱峰(其在本发明中可简称为H峰或H)的两个主要色谱峰，所述第一色谱峰和第二色谱峰两者的峰面积之和占总峰面积的95%以上。
20.制备权利要求1至14任一项所述化合物的方法，其包括以下步骤: (a)酯化步骤:使下式所示水飞蓟宾:
21.权利要求1至14任一项所述化合物在制备用于治疗、改善或预防肝脏疾病的药物中的用途。
22.根据权利要求21的用途，其中所述肝脏疾病选自:因鬼笔鹅膏引起的急性肝中毒，急慢性肝炎，初期肝硬化，中毒性肝损害，脂肪肝所致肝功能异常，酒精肝所致肝功能异常。
全文摘要
本发明涉及用于治疗肝病的水飞蓟宾二偏琥珀酸酯异构体。具体讲，本发明提供了一种化合物，其为两种或两种以上的以下式I化合物异构体的组合其中各个X各自独立地表示氢或金属离子。本发明还提供了制备所述化合物的方法以及所述化合物的制药用途。本发明化合物具有积极的生物和/或物理和/或化学方面的效果。
文档编号G01N30/02GK103193768SQ20131005712
公开日2013年7月10日 申请日期2013年2月22日 优先权日2013年2月22日
发明者曾韶辉, 王伟, 梅丹, 傅卫国, 甘剑征 申请人:西安安健药业有限公司
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