专利名称：软肝消水巴布剂的质量检测方法
技术领域：
本发明属于中药制剂领域，具体涉及软肝消水巴布剂的质量检测方法。
背景技术：
软肝消水巴布剂是由解放军302医院研制的经皮给药制剂，主要由三七、甘遂和 肉桂组成，具有逐水消痰、活血补益之功效，用于治疗肝硬化腹水，同时还具有较好的降酶 保肝、利胆退黄、抗肝纤维化的作用，能克服利尿剂治疗或手术治疗的副作用，实现逐水软 肝标本兼治的效果。中国专利申请CN 101269118A和CN 101269119A公开了软肝消水巴布剂的各组分
重量配比以及制备方法，但没有反映药物质量标准的定性和定量检测方法，因此无法保证 产品的质量，进而不能确保药效。
发明内容
本发明的目的是提供软肝消水巴布剂的质量检测方法，所述方法包括采用薄层色 谱法对三七和肉桂进行定性鉴别，采用HPLC法对三七中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和 三七皂苷R1进行含量测定。称取三七5g、甘遂10g、肉桂20g，按照中国专利申请CN101269118A中实施例1_1 及实施例2-1的方法制备软肝消水巴布剂，每IOOcm2的含膏量为11. 18士0. IOgo本发明以上述方法制得的软肝消水巴布剂为例，提供其质量检测方法。所述三七的定性鉴别包括如下步骤1)取本品1贴，剪碎，加以水饱和的正丁醇50_60mL，密封，放置12_24h，超声处理 30-40min,取正丁醇液，加等倍量的氨试液洗涤，弃去氨液，再用水洗涤3次，每次30mL，取 正丁醇层蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，作为供 试品溶液；2)取人参皂苷Rb1、人参皂苷及三七皂苷R1对照品各lmg，混合，加甲醇lmL， 作为对照品溶液；3)照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水=15 40 22 10的10°C以下放置的上层溶液为展开 剂，预饱和lOmin，上行展开，展距8cm，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，于105°C加热 至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述肉桂的定性鉴别包括如下步骤1)取本品1贴，剪碎，加乙醇50-60mL，密封，放置12_Mh，超声处理30-40min，滤 过，滤液作为供试品溶液；2)取桂皮醛对照品，加乙醇制成浓度为2μ g/mL的溶液，作为对照品溶液；3)照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以环己烷-乙酸乙酯=9 1为展开剂，预饱和lOmin，上行展开，展距8cm，取出，晾干，喷以
3二硝基苯胼乙醇 试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述三七中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量测定包括如下步 骤照高效液相色谱法测定1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，在0 12min，用乙腈-水19 36为流动相，在12 60min，用乙腈-水19 — 36 81 — 64为流 动相，流速为1. OmL · mirT1，检测波长为203歷，柱温25°C ；2)对照品溶液的制备分别精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和 三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每Iml含人参皂苷Rg1 (XS^gAASS-Rb1 0. 38mg、 三七皂苷R1 0. IOmg的混合溶液，作为对照品溶液；3)供试品溶液的制备取本品1贴，剪成宽约Icm的小条，除去盖衬，置IOOmL 烧瓶中，加入60°C温水20mL，浸泡l_2h，使其充分溶胀，溶胀后分别加入甲醇回流提取 30-60min，提取液冷却后，加甲醇定容，即得；4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测 定，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者之和0. 380g/贴为标示量，本品含量应 在标示量的士 10%内，即0. 342 0. 418g/贴。本发明对软肝消水巴布剂进行了定性鉴别和定量分析，并制定了有效成分人参皂 苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的定量标准，可有效评价软肝消水巴布剂的质量，有利于 对其质量进行控制，确保产品的药效，从而达到全面反映巴布剂质量的目的。
图1为三七的薄层色谱图，其中1为三七皂苷R1对照品溶液，2为人参皂苷Rg1对 照品溶液，3为人参皂苷Rb1对照品溶液，4、5、6为样品溶液，7为阴性样品溶液；图2为肉桂的薄层色谱图，其中1为桂皮醛对照品溶液，2、3、4为样品溶液，5为阴 性样品溶液；图3为人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1对照品的HPLC色谱图；图4为软肝消水巴布剂样品的HPLC色谱图；图5为阴性样品的HPLC色谱图。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。软肝消水巴布剂的制备称取三七5g、甘遂10g、肉桂20g，按照中国专利申请CN 101269118A中实施例1_1及实施例2_1的方法制备软肝消水巴布剂。实施例1三七的薄层鉴别1)供试品溶液的制备取本品1贴，剪碎，加以水饱和的正丁醇50mL，密封，放置24h，超声处理30min，取 正丁醇液，加氨试液50mL洗涤，弃去氨液，再用水洗涤3次，每次30mL，取正丁醇层蒸干，残 渣加甲醇ImL使溶解，转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，作为供试品溶液；2)对照品溶液的制备
取人参皂苷Rb1、人参皂苷及三七皂苷R1对照品各lmg，混合，加甲醇lmL，作为 对照品溶液；3)阴性样品溶液的制备取缺三七的阴性样品1贴，按供试品溶液的制备方法制备。4)照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水=15 40 22 10的10°C以下放置的上层溶液为展开 剂，预饱和lOmin，上行展开，展距8cm，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，于105°C加热 至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性 样品色谱的相应位置上不显示斑点，见图1。实施例2肉桂的薄层鉴别1)供试品溶液的制备取本品1贴，剪碎，加乙醇50mL，密封，放置12h，超声处理30min，滤过，滤液作为供 试品溶液；2)对照品溶液的制备取桂皮醛对照品，加乙醇制成浓度为2 μ g/mL的溶液，作为对照品溶液；3)阴性样品溶液的制备取缺肉桂的阴性样品1贴，按供试品溶液的制备方法制备；4)照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以环己烷-乙酸乙酯=9 1为展开剂，预饱和lOmin，上行展开，展距8cm，取出，晾干，喷以 二硝基苯胼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点， 阴性样品色谱的相应位置上不显示斑点，见图2。实施例3含量测定1.仪器与试剂AgilentllOO高效液相色谱仪，G1311A四元泵，G1322A脱气机，G1315B DAD检测 器，HP chemstation化学色谱工作站；AL204Mettler Toledo分析天平(瑞士 ) ；RCIB型 药物溶出仪(天津大学无线电厂)。乙腈(色谱纯Fisher Chemical)，其他试剂均为分析纯，双蒸水；微孔滤膜 (0. 45 μ m)；软肝消水巴布剂(自制)；人参皂苷I^1对照品、人参皂苷RbJi照品和三七皂 苷R1对照品(中国药品生物制品检定所)。2.色谱条件色谱柱=KromasilODS (250 X 4. 6mm, 5 μ m)；流动相乙腈(A)和水(B)，按表 1 的 比例进行梯度洗脱，流速为1. OmL · mirT1，检测波长为203nm，柱温25°C，进样量10 μ L。表1流动相梯度洗脱表
权利要求
1.一种软肝消水巴布剂的质量检测方法，其特征在于，采用薄层色谱法对三七和肉桂 进行定性鉴别，采用HPLC法对三七中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1进行含量 测定。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述三七的定性鉴别包括如下步骤1)取本品1贴，剪碎，加50-60ml以水饱和的正丁醇，密封，放置12_24h，超声处理 30-40min,取正丁醇液，加等倍量的氨试液洗涤，弃去氨液，再用水洗涤2_3次，取正丁醇层 蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，作为供试品溶 液；2)取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品各lmg，混合，加甲醇lmL，作为 对照品溶液；3)照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯 仿-醋酸乙酯-甲醇-水=15 40 22 10的10°C以下放置的上层溶液为展开剂，预 饱和10-20min，上行展开，展距8cm，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，于105°C加热至 斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肉桂的定性鉴别包括如下步骤1)取本品1贴，剪碎，加50-60ml乙醇，密封，放置12_24h，超声处理30-40min，滤过，滤 液作为供试品溶液；2)取桂皮醛对照品，加乙醇制成浓度为2μ g/mL的溶液，作为对照品溶液；3)照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环 已烷-乙酸乙酯=9 1为展开剂，预饱和10-20min，上行展开，展距8cm，取出，晾干，喷以 二硝基苯胼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述三七中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 和三七皂苷R1的含量测定包括如下步骤照高效液相色谱法测定1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，在0 12min，用 乙腈水=19 36为流动相，在12 60min，用乙腈水=19 — 36 81 — 64为流动相 梯度洗脱，流速为1. OmL · mirT1，检测波长为203nm，柱温25°C ；2)对照品溶液的制备分别精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七 皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每Iml含人参皂苷Rg1O. 54mg、人参皂苷Rb1O. 38mg、三七皂 苷R1O. IOmg的混合溶液，作为对照品溶液；3)供试品溶液的制备取本品1贴，剪成宽约Icm的小条，除去盖衬，置IOOmL烧瓶中， 加入60°C温水，浸泡l_2h，使其充分溶胀，溶胀后分别加入甲醇回流提取30-60min，提取液 冷却后，加甲醇定容，即得；4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ L，注入液相色谱仪，测定， 以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者之和0. 380g/贴为标示量，本品含量应在 标示量的士 10%内，即0. 342 0. 418g/贴。
全文摘要
本发明涉及软肝消水巴布剂的质量检测方法，所述方法包括对三七药材和肉桂药材的定性鉴别，以及对三七药材中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量测定。通过本发明的方法，可有效评价软肝消水巴布剂的质量，有利于对其质量进行控制，从而确保产品的药效。
文档编号G01N30/36GK102138971SQ20101010333
公开日2011年8月3日 申请日期2010年1月28日 优先权日2010年1月28日
发明者付强, 任永申, 张萍, 肖小河, 鄢丹 申请人:中国人民解放军第三〇二医院
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