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专利名称：一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，属于制药技术领域。
背景技术：
增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)是孔源性视网膜脱离复位手术失败的主要原因，其发病机制是视网膜表面和玻璃体后面广泛纤维增殖膜收縮、牵拉而引起视网膜脱离。其发生率为8%-10%，据临床调查，无晶状体眼PVR的发生率为11. 1%，再次手术后为19.5%，视网膜裂孔大，发生率较高，如裂孔大小在70° 90°范围时发生率为23%;90° 180°为50%;大于180°，为73%。目前中医治疗增生性玻璃体视网膜病变的药物较少，西医则主要以手术和药物治疗增生性玻璃体视网膜病变，且效果均不明显，手术术后恢复差，且容易复发，复发后再次手术，成功率更低，以往手术的次数越多手术效果会越差，西药治疗主要是依赖糖皮质激素类药物治疗，该类药物副作用较大。本发明所述ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂是由水蛭、三棱、山楂、昆布、海藻五味中药组方，经提取加工制成的复方中药制剂，其功能主治为活血化瘀、软坚散结、消积导滞，用于痰瘀互结所致的增生性玻璃体视网膜病变，症见视物昏朦，眼前黒影遮挡，甚或视物不见，神膏混浊，视衣僵硬，舌紫暗，苔白，脉弦涩的治疗，其功重在活血化瘀，软坚散结，对增生性玻璃体视网膜病变具有良好的治疗作用，2010年8月11日中国专公报公开了 “ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药，公开号为CN 101797348A的专利申请，该发明所述中成药的各味药物原料的重量配比为水蛭62. 5-187. 5g、三棱187. 5562. 5g、山楂250-750g、昆布250-750g、海藻250_750g，经检索，目前尚无该中成药的质量检测方法的报道和发明。

发明内容
本发明的目的是提供一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，该质量检测方法稳定可靠、操作简便，且准确度高。为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案I.本发明所述的ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法包括鉴别和含量測定方法鉴别(I)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径4 40 ym，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟；或者表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明显，布有暗棕色的色素颗粒，刚毛少见，常碎断散在，淡棕色或黄棕色，直径24 32 ii m，先端多钝圆，有的表面可见纵裂纹；淀粉粒甚多，单粒类圆形、类多角形或椭圆形，直径2 10 y m，较大粒隐约可见点状或裂缝状脐点，分泌细胞内含红棕色分泌物，纤维多成束，壁较厚，微木化或木化，有稀疏单斜纹孔，木化薄壁细胞呈类长方形、长椭圆形或不规则形，壁呈连珠状，微木化；(2)取相当于生药材I. 6 4. 8g的该中药制剂，研细，加水25 75ml，浸泡数小吋，滤过，滤液浓缩至约5 15ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解；(3)取相当于生药材3. 2 24g的该中药制 剂,研细,加こ醇20 60ml,超声处理20 35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材Ig,同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 15 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以环己烧-こ酸こ酯3 9 0. I 2为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点；(4)取相当于生药材3. 2 16g的该中药制剂,研细,加こ醇15 45ml,超声处理20 35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 8 y 1，分别点于同娃胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 15 : 2 4为展开剂,展开,取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；(5)取山楂对照药材lg，加水25 75ml，加热回流30分钟 2小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣趁热加こ醇10 30ml，超声处理20 35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各5 15 yl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇甲酸15 20 : I 4 : 0. I 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点；含量測定色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节PH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氢铵溶液2 10 80 97为流动相；流速为每分钟0. 5ml ;检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含0. 8
2.Omg的溶液，即得；供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材3.2 9. 6g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50 150ml，密塞，称定重量，超声处理10 35分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心5 15分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液25 75ml，通过阴离子交换树脂柱，用水25 75ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液60 180ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 15iU，注入液相色谱仪，測定，即得；相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计，不得少于3 30mg ；上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同；上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同； 上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。2.本发明所述的ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法包括鉴别和含量測定方法
鉴别(I)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 y m，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟；(2)取相当于生药材3. 2g的该中药制剂，研细，加水50ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约10ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解；(3)取相当于生药材16g的该中药制剂，研细，加こ醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 U 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯6 I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点；(4)取相当于生药材9. 6g的该中药制剂，研细，加こ醇30ml，超声处理30分钟，滤过,滤液蒸干,残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯10 3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点；(5)取山楂对照药材lg，加水50ml，加热回流I小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣趁热加こ醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各lOul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸18 2 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；含量測定色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节PH值至3.0的0.5%磷酸ニ氢铵溶液7 93为流动相；流速为每分钟0. 5ml ;检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含0. 8mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材6. 4g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心10分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液50ml，通过717型阴离子交换树脂柱，树脂柱内径为I. 8cm、柱高为6cm，用水50ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液120ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，測定，即得；相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计,不得少于5mg ；上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同； 上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同；上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。3.本发明所述的ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法包括鉴别和含量測定方法鉴别(I)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 y m，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟；(2)取相当于生药材I. 6g的该中药制剂，研细，加水25ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约5ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解；(3)取相当于生药材3. 2g的该中药制剂，研细，加こ醇20ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯3 0. I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点；(4)取相当于生药材3. 2g的该中药制剂，研细，加こ醇15ml，超声处理35分钟，滤过,滤液蒸干,残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点；(5)取山楂对照药材lg，加水25ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣趁热加こ醇IOml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸15 I 0. I为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；含量測定色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节PH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氢铵溶液2 80为流动相；流速为每分钟0. 5ml ;检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含0. 8mg的溶液，即得；供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材3. 2g的该中药制齐U，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，称定重量，超声处理35分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心5分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液25ml，通过717型阴离子交换树脂柱，树脂柱内径为I. 8cm、柱高为6cm，用水25ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液60ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5iU，注入液相色谱仪，測定，即得；相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计,不得少于3mg ；上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同；上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同；上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。4.本发明所述的ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法包括鉴别和含量測定方法鉴别(I)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 y m，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟；(2)取相当于生药材4. Sg的该中药制剂，研细，加水75ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约15ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解；(3)取相当于生药材24g的该中药制剂，研细，加こ醇60ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各15 U 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯9 2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点；(4)取相当于生药材16g的该中药制剂，研细，加こ醇45ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯15 4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点；(5)取山楂对照药材lg，加水75ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸至近干,残洛趁热加こ醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各15ul，分别点于同一娃胶GF254薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-甲酸20 : 4 : 0.5为展开剂,展开,取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光主斑点；含量測定色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节PH值至3.0的0.5%磷酸ニ氢铵溶液10 97为流动相；流速为每分钟0. 5ml ;检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含2mg的溶液，即得；供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材9. 6g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水150ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心15分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液75ml，通过717型阴离子交换树脂柱，树脂柱内径为I. 8cm、柱高为6cm，用水75ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液180ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15 yl，注入液相色谱仪，测定，即得；相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计,不得少于30mg ；上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同；上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同；上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。本发明提供了一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的制剂的质量检测方法，该制剂处方中水蛭性平，味咸、苦，归肝经。功在破血通经，逐瘀消癥，消积导滞。用于血瘀经闭，癥瘕痞块之治疗，为君药。三棱性平，味辛、苦，归肝、脾经。具有破血行气，消积止痛之功效；昆布、海藻均性寒，味咸，归肝、胃、肾经。具有消痰软坚散结，利水消肿之功效。“三棱能治一切凝结停滞有形之坚积也”，与昆布、海藻一道同为臣药，以助君活血化瘀，并重点加强软坚散结之力。山楂，味酸、甘，性微温，具消食健胃，行气散瘀，化浊降脂之功。《本草纲目》载“山楂化饮食,消肉积癥瘕,痰饮痞满,吞酸,滞血痛胀”,《随息居饮食谱》载“由楂醒脾气，消肉食，破瘀血，散结消胀，解救化痰，除疳积，止泻痢”。故为佐使药。诸药合用，具有破血行气、活血化瘀、软坚散结、消积导滞之功，从而消除瘀血、浊滞之邪。用于痰瘀互结所致的增生性玻璃体视网膜病变，症见视物昏朦，眼前黒影遮挡，甚或视物不见，神膏混浊，视衣僵硬等的治疗。针对本处方所提供的质量检测方法可以有效的检测出该制剂是否合格稳定，确保了人们用药的安全性和有效性。
具体实施例方式方法学考察实验(I)样品的制备取水蛭100g、三棱300g、山楂400g、昆布400g、海藻400g，将水蛭粉碎成极细粉，三棱150g粉碎成细粉，过筛，备用，剩余三棱与其余山楂等三味，加水煎煮三次，第一次加10倍量水，煎煮I. 5小时，第二、三次各加4倍量水，各煎煮I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至温度为80°C、相对密度为I. 10 I. 15的浸膏，喷雾干燥成细粉，与上述细粉、极细粉混匀，淀粉IOg制成浆，喷入上述混匀细粉中喷雾制粒，加入硬脂酸镁5g，混匀，压制成1000 片，包薄膜衣，即得化瘀散结片。(2)考察方法鉴别(I)取样品，研细，取约lg，加热水洗涤至水洗液近无色，弃去洗液，取药渣少许，置载玻片上，加水合氯醛于酒精灯上透化2 3次，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 y m,边缘多不平整，有的局部膨大，此为方中水蛭的显微鉴别特征。薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟。此为方中三棱的显微鉴别特征。另取除去水蛭和三棱的空白样品，取约lg，按上述方法制备，装片，置显微镜下观察均未检出上述显微鉴别特征。上述为方中水蛭、三棱的显微鉴别。该方法简便易行，各鉴别特征明显易辨，空白无干扰，专属性强，重复性好。(2)取样品2片，除去包衣，研细，加水50ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约10ml。取浓缩液ニ份各2ml，各加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，离心，弃去上清液，其中一份沉淀中加入氨试液数滴，振�。�沉淀极微溶解；另ー份加硝酸，振摇，沉淀不溶解。此为方中昆布、海藻的理化反应鉴别。其反应原理是，昆布、海藻中含有碘成分，碘在强酸性条件下转化为碘离子，碘离子与硝酸银试液中的银离子结合生成碘化银黄色沉淀，该沉淀在氨试液中极微溶解，在硝酸中不溶解。化学反应式为r+Ag+HN°3 ^ AgI I (黄色)。另取除去昆布和海藻的空白样
品约lg，按上述方法制备成空白供试液，依法鉴别，其不产生黄色乳状沉淀。上述为方中昆布、海藻的理化反应鉴别。该方法简便易行，反应灵敏，结果明显易辨，空白无干扰，专属性強，重复性好。(3)取样品10片，除去包衣，研细，加こ醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取水蛭对照药材lg，按供试品溶液制法制成对照药材溶液。再取除去水蛭的模拟处方，制成不含水蛭的空白样品，按供试品溶液制法制成空白对照液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯(6 I)为展开系统A，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置目光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的顔色主斑点和荧光主斑点。而空白对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显相同顔色的斑点或荧光斑点。再以三氯甲烷-甲醇(18 0.2)为展开系统B，展开，取出，晾干，紫外光灯(365nm)下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点。再喷以2%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的主斑点。而空白对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显相同顔色的荧光斑点或斑点。对两种展开剂系统进行比较，其中展开效果以A系统较好，故选之。此为方中水蛭药材的薄层色谱鉴别。该方法切实可行，分离效果好，斑点显色清晰易辨，空白无干扰，专属性強，重复性好。(4)取样品6片，除去包衣，研细，加こ醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取三棱对照药材2g，按供试品溶液制法制成对照药材溶液。再取除去三棱的模拟处方，制成不含三棱的空白样品，按供试品溶液制法制成空白对照液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_こ酸こ酯(10 3)为展开系统A，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点。而空白对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显相同顔色的荧光斑点。再以环己烷-こ酸こ酯(4 I)为展开系统B，其他条件同上。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，紫外光灯(365nm)下，显相同顔色的荧光主斑点。而空白对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显相同顔色的荧光斑点。对两种展开剂系统进行比较，其中展开效果以A系统较好，故选之。此为方中三棱药材的薄层色谱鉴别。该方法简便易行，分离效果好，斑点显色清晰易辨，空白无干扰，专属性強，重复性好。(5)取鉴别(4)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取山楂对照药材lg，加水50ml，加热回流I小吋，滤过，滤液蒸至近干，残渣趁热加こ醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。再取除去山楂的模拟处方，制成小含山楂的空白样品，按鉴别(4)项下的供试品溶液制法制成空白对照液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(18 : 2 : 0.2)为展开系统A，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的主斑点。而空白对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显相同顔色的主斑点。再以こ酸こ酷-水-甲酸(8 I 0.1)上层溶液为展开系统B，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(10 I 0. I)为展开系统C，分别进行展开，其他条件同上。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，紫外光灯(254nm)下，分别显相同顔色的主斑点。而空白对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，均不显相同顔色的主斑点。对三种展开剂系统进行比较，其中展开效果以A系统较好，故选之。此为方中山楂药材的薄层色谱鉴别。该方法简便易行，分离效果好，斑点显色清晰易辨，空白无干扰，专属性強，重复性好。
(6)取样品10片，研细，加水60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，作为供试品溶液。另取海藻糖对照品2mg，加水2ml使溶解成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。再取除去昆布、海藻的模拟处方，制成不含昆布、海藻的空白样品，按供试品溶液制法制成不含昆布、海藻的空白对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 yl，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇こ醇-水(2 : I : I)为展开剂，预饱和10分钟后展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，于105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，背景色较重，图谱斑点不明显。而空白对照液色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，背景色亦较重，图谱斑点不明显。取样量从10片增加到20片，仍出现相同的結果再取本品10片，研细，加こ醚40ml，浸溃2小时，时时振�。�滤过，药渣挥尽こ醚，加80%こ醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，作为供试品溶液。取上述海藻糖对照品溶液作为对照品溶液。再取上述不含昆布、海藻的空白样品5g，按供试品溶液制法制成不含昆布、海藻的空白对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 yl，分别点于同一含0. IM磷酸氢ニ钠的硅胶G薄层板上，以正丁醇异丙醇こ酸-水(3 20 3 2)为展开剂，预饱和10分钟后展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，于105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。而空白对照液色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，亦不显相同顔色的斑点。上述两种方法对昆布、海藻的海藻糖成分薄层色谱鉴别均未获得成功。也未找到符合规定的昆布、海藻对照药材，其薄层鉴别方面可參考的文献资料较少，昆布、海藻的鉴别留待日后作进ー步研究，故此项暂不列入质量检测方法中。含量測定水蛭为方中君药，主含蛋白质，小分子肽类，糖蛋白，氨基酸，次黄嘌呤，磷脂。另含肝素，抗血栓素以及ー种组胺样物质。还含有28种微量元素。《中国药典》水蛭药材以抗凝血酶活性作为药材质量控制指标。文献报道，水蛭主要含量測定指标成分为次黄嘌呤，其药材含量分布在0. 1% 0. 18%之间。经预实验研究结果表明，水蛭空白样品对抗凝血酶活性測定干扰较大，不宣作为成品的含量指标；次黄嘌呤的含量采用HPLC法进行測定，因受处方中其它药材干扰，专属性不强，故不宜选其作为本品的含测指标成分。三棱中的黄酮芒柄花素及皂苷类成分为其活血化瘀的主要成分，但因总黄酮含量太低(仅为0. 03% )，比色法測定效果差，误差大，因此，亦不宜选作本品的含测指标成分。昆布、海藻的定量測定指标成分主要为碘和多糖，在复方制剂中采用滴定法和比色法因受干扰严重而难以測定。因而我们对本品中山楂的水溶性有机酸成分进行定量測定的试验研究。山楂中水溶性的有机酸成分主要有枸櫞酸、苹果酸、山楂酸、琥珀酸、甲酸、草酸等，中国药典规定以枸櫞酸计总酸含量为由楂的定量指标成分，采用滴定法进行測定，但在本复方制剂中，受其他成分和制剂顔色的干扰和影响而无法測定。我们结合自己的摸索实践、探索研究，确定采用高效液相色谱(HPLC)法测定本品中枸櫞酸的含量。先进的HPLC測定法具有取样量少，測定结果准确，可靠，精密度高，重复性好，专属性强等特点。I.原理枸櫞酸为有机酸类，经紫外測定在210nm处具有强吸收，可用紫外检测器进行检測。而样品中枸櫞酸与其他组分因分子结构和特性的不同，经HPLC水相柱层析后，其各保留时间不同而被分离，通过检测峰面积积分值可进行定量測定。
2.主要仪器与试剂Agilent 1100型高效液相色谱仪，G1314A型紫外检测器，安捷伦科技公司出品；BP211D型电子分析天平，德国赛多利斯集团公司出品；KQ250B型超声波清洗器(功率250W，频率40kHz)，昆山市超声仪器有限公司出品；800型离心机，盐城市科学仪器厂出品；UV-1800型紫外可见分光光度计，日本岛津公司出品。甲醇为色谱纯,美国Honeywell出品；水为超纯水,其它试剂均为分析纯。3.供试样品化瘀散结片，批号200711001、200711002、200711003。规格每片重0.5g。由西安碑林药业股份有限公司中试生产提供。4.对照品来源及纯度检查枸櫞酸对照品(批号1000396-200301，供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所)。经HPLC归ー化法测定含量为98. 65%。
5.測定波长的选择取枸櫞酸对照品溶液，用紫外可见分光光度计，在190 400nm波长范围内进行扫描測定。扫描结果表明，枸櫞酸最大吸收波长在190nm处，为末端吸收，但在210nm波长下吸收亦较强，參照有关文献资料，确定210nm处为检测枸櫞酸的检测波长。6.色谱条件色谱柱Agilent ZORBAX SB-Aq, 250 X 4. 6mm, 5 u m ;流动相甲醇-0.5%磷酸ニ氢铵溶液(用磷酸调pH3.0) (7 93)，流速0.5ml/分；检测波长为21Onm ;柱温室温。在此条件下，枸櫞酸色谱峰与其它组分均能达到基线分离，理论板数按枸櫞酸峰计算不低于3000。7.色谱柱选择取同一份样品(批号200711001) 10片，研细，取细粉约2g，精密称定，按供试品溶液制法制成供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 u 1，按拟定的条件和方法，选用不同型号的色谱柱，分别注入液相色谱仪測定，计算，统计，结果请见表I。表I不同型号色谱柱枸櫞酸含量測定考察及结果
权利要求
1.一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于该质量检测方法包括鉴别和含量測定方法 鉴别 (1)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径4 .40 ym，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟； 或者表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明显，布有暗棕色的色素颗粒，刚毛少见，常碎断散在，淡棕色或黄棕色，直径24 32 ii m,先端多钝圆，有的表面可见纵裂纹；淀粉粒甚多，单粒类圆形、类多角形或椭圆形，直径2 IOy m，较大粒隐约可见点状或裂缝状脐点，分泌细胞内含红棕色分泌物，纤维多成束，壁较厚，微木化或木化，有稀疏单斜纹孔，木化薄壁细胞呈类长方形、长椭圆形或不规则形，壁呈连珠状，微木化； (2)取相当于生药材I.6 4. 8g的该中药制剂，研细，加水25 75ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约5 15ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解； (3)取相当于生药材3.2 24g的该中药制剂，研细，加こ醇20 60ml，超声处理20 .35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同.法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 15 y 1，分别点于同ー硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯3 9 0.1 2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点； (4)取相当于生药材3.2 16g的该中药制剂,研细,加こ醇15 45ml,超声处理20 35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液,另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 8 y 1，分别点于同硅胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 15 2 4为展开剂,展开,取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点； (5)取山楂对照药材lg，加水25 75ml，加热回流30分钟 2小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣趁热加こ醇10 30ml，超声处理20 35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各5 15 ii I,分别点于同一娃胶GF254薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-甲酸15 .20 : I 4 : 0. I 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点； 含量測定方法 色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节pH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氢铵溶液2 10 80 97为流动相；流速为每分钟0. 5ml ;检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含0. 8 2. Omg的溶液，即得； 供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材3. 2 9. 6g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50 150ml，密塞，称定重量，超声处理10 35分 钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心5 15 分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液25 75ml，通过阴离子交换树脂柱，用水25 75ml 洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液60 180ml，水浴浓缩至适量，转移至 25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 15 y 1，注入液相色谱仪，测 定，即得；相当于生药材1. 6g的该中药制剂含山楂以枸橼酸(C6H807)计，不得少于3 30mg ；上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的一种或几种溶剂性质与 之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同；上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开 剂替换，替换后展开作用相同；上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成， 采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。
2.如权利要求1所述的一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方 法，其特征在于该质量检测方法包括鉴别和含量测定方法鉴别(1)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 ym，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及 孔沟；(2)取相当于生药材3.2g的该中药制剂，研细，加水50ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩 至约10ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸1滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试 液中微溶解，在硝酸中不溶解；(3)取相当于生药材16g的该中药制剂，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤 液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同法制成对照药 材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 环己烷-乙酸乙酯6 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加 热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑 点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点；(4)取相当于生药材9.6g的该中药制剂，研细，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照 药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以60 90°C石油醚-乙酸乙酯10 3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检 视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；(5)取山楂对照药材lg,加水50ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸至近干，残洛趁热加 乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液， 照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各10 yl，分别点于同 一硅胶6F254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇甲酸18 2 0.2为展开剂，展开，取出，晾干， 置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点； 含量測定方法 色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节PH值至3. O的0. 5%磷酸ニ氢铵溶液7 93为流动相；流速为每分钟0. 5ml ；检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量， 精密称定，加水制成每Iml含0. 8mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材6. 4g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟 ，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心10分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液50ml，通过717型阴离子交换树脂柱，树脂柱内径为I. 8cm、柱高为6cm，用水50ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液120ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，測定，SP得; 相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计,不得少于5mg ； 上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同； 上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同； 上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。
3.如权利要求I所述的ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于该质量检测方法包括鉴别和含量測定方法 鉴别 (1)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 ym，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟； (2)取相当于生药材I.6g的该中药制剂，研细，加水25ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约5ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解； (3)取相当于生药材3.2g的该中药制剂，研细，加こ醇20ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以坏己烷-こ酸こ酯3 0. I为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点； (4)取相当于生药材3.2g的该中药制剂，研细，加こ醇15ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点； (5)取山楂对照药材Ig,加水25ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣趁热加こ醇10ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各5 u 1，分别点于同ー硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸15 I 0. I为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点； 含量測定方法 色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节PH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氢铵溶液2 80为流动相；流速为每分钟0. 5ml ;检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含0. 8mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材3. 2g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，称定重量，超声处理35分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心5分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液25ml，通过717型阴离子交换树脂柱，树脂柱内径为I. 8cm、柱高为6cm，用水25ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液60ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 yl，注入液相色谱仪，測定，即得; 相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计,不得少于3mg ； 上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同； 上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同； 上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。
4.如权利要求I所述的ー种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于该质量检测方法包括鉴别和含量測定方法 鉴别 (1)取该中药制剂，置显微镜下观察斜纹肌纤维多无色，散离或相互绞结，直径10 40 ym，边缘多不平整，有的局部膨大；薄壁细胞呈类圆形或多角形、非木化，有稀疏纹孔及孔沟； (2)取相当于生药材4.8g的该中药制剂，研细，加水75ml，浸泡数小时，滤过，滤液浓缩至约15ml，取浓缩液2 3ml，加硝酸I滴与硝酸银试液数滴，即生成黄色乳状沉淀，在氨试液中微溶解，在硝酸中不溶解；(3)取相当于生药材24g的该中药制剂，研细，加こ醇60ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取水蛭对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各15 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-こ酸こ酯9 2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色主斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙红色荧光主斑点； (4)取相当于生药材16g的该中药制剂，研细，加こ醇45ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取三棱对照药材2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60 90°C石油醚-こ酸こ酯15 4为展开剂,展开,取出，晾干,置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点； (5)取山楂对照药材Ig,加水75ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸至近干，残洛趁热加こ醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加こ醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及三棱鉴别项下的供试品溶液各15 yl，分别点于同ー硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸20 4 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光主斑点； 含量測定方法 色谱条件与系统适用性试验以烷基反相键合硅胶为填充剂的SB-Aq色谱柱；以甲醇用磷酸调节pH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氢铵溶液10 97为流动相；流速为每分钟0. 5ml ；检测波长为210nm ;理论板数按枸櫞酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取枸櫞酸对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含2mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备将该中药制剂研细，取约相当于生药材9. 6g的该中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水150ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心15分钟，每分钟4000转，精密吸取上清液75ml，通过717型阴离子交换树脂柱，树脂柱内径为I. 8cm、柱高为6cm，用水75ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀盐酸溶液洗脱，收集洗脱液180ml，水浴浓缩至适量，转移至25ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15 yl，注入液相色谱仪，測定，SP得; 相当于生药材I. 6g的该中药制剂含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)计,不得少于30mg ； 上述质量检测方法中所述的提取溶剂可以被药剂学上所述的ー种或几种溶剂性质与之相同的溶剂或混合溶剂替换，替换后提取作用相同； 上述质量检测方法中所述的展开剂可以被药剂学上所述的展开性质与之相同的展开剂替换，替换后展开作用相同； 上述质量检测方法中所述的中药制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主药组成，采用药剂学常规技术制成任何一种药剂学上所述的剂型。全文摘要
本发明涉及一种治疗增生性玻璃体视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，该制剂由水蛭、三棱、山楂、昆布、海藻五味中药组方，经提取加工制成复方中药制剂，该制剂具有活血化瘀、软坚散结、消积导滞的功能，用于痰瘀互结所致的增生性玻璃体视网膜病变，症见视物昏朦，眼前黑影遮挡，甚或视物不见，神膏混浊，视衣僵硬。本发明所提供的质量检测方法稳定可靠、操作简便，且准确度高，对水蛭、三棱、昆布、海藻和山楂进行了检测，保证了药品的安全性和有效性。
文档编号G01N30/02GK102645510SQ20121014673
公开日2012年8月22日 申请日期2012年5月11日 优先权日2012年5月11日
发明者付彬, 张 浩, 耿小秀, 黄小华 申请人:西安碑林药业股份有限公司