专利名称：一种肺炎衣原体抗原,制备该抗原的方法,利用该抗原检测抗肺炎衣原体抗体的快速检测 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于诊断肺炎衣原体感染的肺炎衣原体抗原，制备该抗原的方法，用该抗原测定抗肺炎衣原体抗体的方法及试剂。本发明在由肺炎衣原体引起的非典型肺炎的诊断中有重要意义。
背景技术：
衣原体是一种革兰阴性、专性寄生于细胞内的寄生物。可在人肺泡巨噬细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、中性粒细胞中繁殖。它的生长具有独特的周期，位于细胞外的衣原体原生小体(EB)别摄取到细胞内形成包涵体，然后转化成网状小体(RB) ,RB具有繁殖 能力，但不具备感染能力。在细胞内繁殖的RB很快转化为EB，穿破包涵体和细胞壁到达细胞外。EB没有繁殖能力，但具有感染能力。目前，已证实有四种衣原体，即沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、猫心衣原体和肺炎衣原体，其中肺炎衣原体可以通过空气传播感染人类。肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)是人类呼吸道疾病的重要病原体,主要引起人的非典型性肺炎、支气管炎、鼻窦炎等呼吸道疾病。另外，流行病学和病原学研究认为，肺炎衣原体感染与心血管疾病相关。Cpn经飞沫或呼吸道分泌物传播，可在家庭和集体场所相互感染。肺炎衣原体由于其独特的寄生和抗原特性，常对人体造成直接或间接的�：Γ珻pn以被列为对中国人卫生健康有重大影响的病原微生物之一。肺炎衣原体感染所致的临床症状较轻，常被人们忽视，往往需要特异性的实验室检测才能被发现。另外临床依据患者的症状和体征，很难鉴别细菌性、病毒性、肺炎支原体或肺炎衣原体的感染，以致在临床用药上存在困难，实验室检测有助于其鉴别诊断。微生物感染症的实验室检测主要包括对感染部位等处的病原菌的检测和对患者血清、体液中病原菌的抗体检测两种方法。病原菌的检测包括病原菌分离培养、病原菌特异抗原检测和基因检测等方法。虽然培养法是肺炎衣原体实验室诊断的“金标准”，但肺炎衣原体是严格的细胞内寄生，培养条件要求苛刻，检测灵敏度低，临床适用性不强。以聚合酶链式反应(PCR)为代表的基因检测技术虽然具有较高的特异性和敏感性，但其准确性易受实验条件和操作人员技术水平的影响。抗体检测是肺炎衣原体感染较理想的实验室检测方法之一。Wang和Graystong早在1971年建立了的间接微量荧光实验(微量IF)，微量IF实验需要纯化的衣原体EB，而且要求EB的形态或结构完整，不能使用形态或结构改变或破坏的EB。由于EB具有感染力和毒性，使用完整的的EB作抗原有潜在的传染性，再加IF实验步骤复杂，微量IF实验在临床检验中很少使用。随后建立的肺炎衣原体抗体酶联免疫吸附法(ELISA)具有检测过程简单、高通量检测等特点，大多数试剂都使用完整的衣原体EB作抗原，但衣原体EB抗原可引起非特异性反应。衣原体的代表性属特异性抗原为脂多糖(LPS)，它与某些肠道菌Re突变体LPS有共同抗原，是肺炎衣原体的致病物质，是一种细胞壁成分——内毒素，其毒性作用可被特异性抗体中和。衣原体种特异性的抗原是其主要外膜蛋白(MOMP)，约占衣原体外膜蛋白的60%，分子量约为39. 5kDa，与肺炎衣原体外膜结构的稳定性、生长代谢调节、抗原性和毒力性密切相关，是人类特异性体液免疫反应的主要靶位。除MOMP外衣原体其他主要外膜抗原以属特异性为主，但也存在一些种特异性，如分子量为40kDa D外膜抗原是属特异性，分子量为43k Da、46kDa和53kDa的蛋白质是种特异性抗原，还有一种分子量为98kDa的大分子蛋白可能是种特异性抗原。如上所述，衣原体的抗原性很复杂，同属的衣原体在不同种间其抗原性也存在着明显的差异。感染有肺炎衣原体的个体所产生的肺炎衣原体抗体同样表现出与其抗原复杂性相一致的多样性。因次，应用衣原体EB菌体作检测抗原或纯度不高EB来源的纯化抗原均可产生非特异性反应。另外，虽然已建立了肺炎衣原体抗体检测方法，但它们无法达到肺炎衣原体快速检测的临床需求。因此，制备一种特异性强、检测敏感度高的肺炎衣原体抗原及一种简单、高效生产肺炎衣原体抗原的方法，有利于建立更高效的肺炎衣原体诊断方法、提高肺炎衣原体诊断水平。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种肺炎衣原体种特异性抗原，该抗原具有高度的种特异性和免疫反应性。本发明的第二目的是提供一种制备肺炎衣原体抗原的方法，该方法制备的肺炎衣原体抗原具有种特异性和免疫反应性。本发明的第三目的是提供一种测定抗肺炎衣原体抗体的方法，该方法为快速“一步检测法”，具有灵敏度高、特异性强，检测速度快、操作简便，无需专门设备，适用于临床检测、流行病学调查和场地检疫等多种场合。本发明的第四目的是提供一种肺炎衣原体抗体快速检测试剂，它是一种特异性强、灵敏度高、快速、简便的“一步法”肺炎衣原体抗体检测试剂。本发明的主要内容(I)肺炎衣原体抗原，它是一种采用基因工程技术人工合成抗原。(2)上面(I)中肺炎衣原体抗原，它与沙眼衣原体抗体和鹦鹉热衣原体抗体不发生非特异性交叉反应。(3) 一种制备肺炎衣原体抗原的方法，包括PCR克隆扩增肺炎衣原体MOMP抗原基因序列，构建原核表达载体，大肠杆菌表达肺炎衣原体MOMP抗原蛋白，采用透析法、梯度稀释法和凝胶层析法复性包涵体，获得具有三维结构和免疫活性的重组肺炎衣原体MOMP抗原。(4) 一种肺炎衣原体抗体快速检测方法，包括应用上面(1)-(2)种的肺炎衣原体抗原。(5)上面(4)中肺炎衣原体抗体快速检测方法，包括(1)-(2)种的肺炎衣原体抗原固定到一种硝酸纤维素膜，一种标记抗体(二抗)固定到固相载体上，待测样品与标记抗体(二抗)接触，若待测样品中存在肺炎衣原体抗体，则肺炎衣原体抗体与标记二抗反应形成抗体一标记二抗复合物，“复合物”在硝酸纤维素膜水平移动，遇到固定到膜上的肺炎衣原体抗原产生反应，带有标记物的“复合物”就被特异地固定到抗原上，固定抗原的位置就会有显色反应若待测样品不含肺炎衣原体抗体，则“复合物”不能固定到抗原的位置上，此处就没有显色反应，可依据硝酸纤维素膜上固定抗原位置是否有显色反应，来判断检测结果，即待测样品中是否有肺炎衣原体抗体。(6)上面(5)检测肺炎衣原体抗体检测方法，其中待测样品是人的血清、血浆或全血。(7)上面(5)或￠)中测定肺炎衣原体抗体检测的方法，其中的标记抗体(二抗)是标记的抗人IgG抗体或抗人IgM抗体。
(8)上述(5)-(7)中标记抗体是胶体金或彩色胶乳标记的抗体。(9) 一种快速检测肺炎衣原体抗体的试剂，它所用抗原为上述(1)-(2)中的肺炎衣原体抗原。(10)上述(9)中用于快速检测肺炎衣原体抗体的试剂，其中的标记抗体是胶体金标记抗体或彩色胶乳标记抗体。下面对本发明进行详细阐述。本发明的肺炎衣原体抗原是一种通过基因工程技术获得的重组肺炎衣原体主要外膜蛋白(MOMP)。本发明肺炎衣原体抗原，主要通过将肺炎衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因构建到原核表达载体PET，MOMP基因-PET表达载体转化大肠杆菌，筛选阳性重组菌，IPTG诱导重组菌表达肺炎衣原体MOMP蛋白，经细菌裂解、包涵体溶解和重组蛋白结构复性与纯化等步骤获得。 下面将详述本发明中制备肺炎衣原体抗原的方法。从基因BANK获取肺炎衣原体MOMP基因序列，根据已知的肺炎衣原体MOMP抗原基因设计引物，PCR克隆扩增或人工合成肺炎衣原体MOMP抗原基因序列。目的基因经双酶切后与经同样双酶切过的原核表达载体连接，转化感受态细胞(大肠杆菌)、筛选阳性重组菌。阳性克隆菌提取质粒、双酶切鉴定和测序鉴定，证明插入基因目的基因正确。重组菌经IPTG诱导表达、离心得诱导表达重组菌，菌体重悬于上样缓冲液后超声裂解，离心获得包涵体形式的蛋白沉淀，经洗涤后溶于尿素溶液的变性表达蛋白。变性蛋白需要经过结构复性与纯化才能获得天然蛋白的免疫反应原性和达到肺炎衣原体抗体检测的应用标准。对于肺炎衣原体MOMP重组蛋白包涵体复性方法，可应用透析法、梯度稀释法、凝胶层析法等，优选透析法和梯度稀释法相结合的方法，因为它们易于控制，蛋白复率高。对于包涵体复性后肺炎衣原体MOMP蛋白纯化方法，可应用凝胶层析、亲和层析等，优选凝胶层析法，因为它最易于控制，收率高。通过基因重组获得的肺炎衣原体MOMP抗原具有较高的种特异性和敏感性。对于快速测定抗体的方法，这里列举的是优选的方法，如应用各种标记抗体的免疫层析测定，应用各种标记抗体的免疫渗滤法等。下面详述免疫层析测定方法。抗肺炎衣原体抗体免疫层析测定方法包括下述步骤肺炎衣原体抗原固定到固相载体I上，标记抗体(二抗)固定到固相2上，待测样品与标记抗体(二抗)接触，若待测样品中存在肺炎衣原体抗体，则肺炎衣原体抗体与标记二抗反应形成抗体-标记二抗复
合物，“复合物”在固相载体I水平移动，遇到固定到载体I上的肺炎衣原体抗原产生反应，带有标记物的“复合物”就被特异地固定到抗原上，固相载体上固定抗原的位置就会有显色反应；若待测样品不含肺炎衣原体抗体，则“复合物”不能固定到抗原的位置上，此处就没有显色反应，可依据固相载体上固定抗原位置是否有显色反应，来判断检测结果，即待测样品中是否有肺炎衣原体抗体。对于固定相载体1，可应用例如硝酸纤维素膜(NC膜)、PVDF膜等。优选硝酸纤维素膜。对于固相载体2，可应用例如玻纤纤维素膜，无纺布等任何一种形式。优选玻璃纤维素作结合物释放垫，因为它最易于控制。对于标记的抗体，这里指的是用不同标记物标记的抗抗体，这里指的是抗入IgG·抗体和抗入IgM抗体,或是其部分分解产物,如F(ab' )2,Fab等,可依据被检测抗体的种类适当应用。已知肺炎衣原体感染后，I 2周后出现IgM，IgG抗体出现较晚，但可保持较长时间。因此，在标记的抗体与上述样品中的抗体接触的步骤中，优选由标记不同种类的抗体而得到的标记的抗体在测定中单独进行反应，对于标记不同种类抗体得到的标记的抗体，这里指的是标记的抗IgM抗体，标记的抗IgG抗体等。标记抗体可适用的标记物可以应用胶体金、银、硒和彩色胶乳等。对于本发明试剂，优选分别以胶体金标记抗IgM抗体和抗IgG抗体的免疫层析检测试剂。本发明试剂可需要联合其它组分并按照免疫层析检测试剂的特点进行组合。例如，在PVC衬板上设有加样端吸水层、检测层和吸水端吸水层，在检测层和加样端吸水层之间设有金标抗体层；在检测层上包被有抗原形成的检测线和由抗鼠IgG抗体形成的控制线。
图I显示了发明试剂一检测板的外观结构示意图I-检测板2-加样孔3-检视窗图2显示了发明试剂-检测条的外部结构示意图4-加样端吸水层 5-金标抗体层 6-控制线 7-检测线8-检测层9-吸水端吸水层 10-衬板
具体实施例方式I)重组肺炎衣原体MOMP抗原重组表达、结构复性与纯化肺炎支原体MOMP基因参考GenBank序列M64064进行全基因合成，合成时去除了信号肽序列并且进行了大肠杆菌稀有密码子优化，引入酶切位点BamHI/XhoI。合成目的基因共 IlOlbp (366aa)。基因合成序列>CpnMOMPSequence
GGCGGATCCTTGCCTGTAGGTAACCCTTCTGATCCAAGCTTATTAATTGATGGTACAATCTGGGAGGGTGCTGCAGGTGATCCTTGCGATCCTTGCGCTACTTGGTGCGACGCTATTAGCTTACGTGCTGGTTTTTACGGTGACTATGTTTTCGACCGTATCTTAAAAGTAGATGCACCTAAAACATTTTCTATGGGTGCCAAGCCTACTGGTTCCGCTGCTGCAAACTATACTACTGCCGTAGATCGTCCTAACCCGGCCTACAATAAGCATTTACACGATGCAGAGTGGTTCACTAATGCAGGCTTCATTGCCTTAAACATTTGGGATCGCTTTGATGTTTTCTGTACTTTAGGTGCTTCTAATGGTTACATTCGTGGTAACTCTACAGCGTTCAATCTCGTTGGTTTATTCGGTGTTAAAGGTACTACTGTAAATGCAAATGAACTCCCAAACGTTTCTTTAAGTAACGGTGTTGTTGAACTTTACACAGACACCTCTTTCTCTTGGAGCGTAGGCGCTCGTGGTGCCTTATGGGAATGCGGTTGTGCAACTTTGGGTGCTGAATTCCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAGTTGAAGAACTTAATGTGATCTGTAACGTATCGCAATTCTCTGTAAACAAACCTAAGGGCTATAAAGGCGTTGCTTTCCCTTTGCCAACAGACGCTGGCGTAGCAACAGCTACTGGTACAAAGTCTGCGACCATCAATTATCATGAATGGCAAGTAGGTGCCTCTCTCTCTTACCGTCTCAACTCTTTAGTGCCATACATTGGTGTACAATGGTCTCGCGCAACTTTTGATGCTGATAACATCCGCATTGCTCAGCCAAAACTCCCTACAGCTGTTTTAAACTTAACTGCATGGAACCCTTCTTTACTCGGTAATGCCACAGCATTGTCTACTACTGATTCGTTCTCAGACTTCATGCAAATTGTTTCCTGTCAGATCAACAAGTTTAAATCTCGTAAAGCTTGTGGTGTTACTGTAGGTGCTACTTTAGTTGATGCTGATAAATGGTCACTTACTGCAGAATTTAATTAACGAGC GTGCTGCTCACGTATCTGGTCAGTTCCGTTTCTAACTCGAGGGC重组表达质粒的构建与鉴定。分别用BamHI和XhoI对肺炎衣原体MOMP目的基因片段及pET30a质粒进行双酶切，酶切产物纯化回收后，16°C连接过夜，再转入E. coli DH5a感受态细胞，挑取转化菌落提取质粒进行PCR、酶切及测序鉴定。经PCR及双酶切鉴定，均证实有大小约I. IKb的基因片段插入载体，与预期的结果一致。测序结果表明插入目的基因片段为llOlbp，核酸序列与GenBank数据库中发表的肺炎衣原体MOMP基因序列完全相同，构建的表达载体开放阅读框正确，可以表达重组蛋白。重组蛋白的诱导表达取50 μ lpET30a-cpnM0MP/BL21 (DE3)菌液加入到5ml含ΙΟΟμ g/ml卡那霉素的LB液体培养基中，37°C，200rpm摇菌过夜，次日按I : 50增菌于含卡那霉素的LB培养基中，培养至吸光A600为O. 6左右时，加入IPTG至浓度为lmmol/L，进行诱导表达4小时，5000rpm离心30分钟，收集菌体，用TE缓冲液悬�。浞只煸龋琠80°C，反复冻融3次，在功率370W，按超声5分钟，间隙5分钟的频率冰浴超声180次，4°C，10000 X g离心15分钟，收集沉淀，用2M的尿素(含50mmol/L Tris-HCl, pH 3. 0)洗涤2次，沉淀溶于8M尿素溶液(含50mmol/L Tris-HCl,pH 8. 0)，4°C保存。沉淀用SDS-PAGE分析蛋白表达量。电泳条件，浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度为12%。蛋白染色为考马斯亮蓝染色法，考马斯亮蓝R-250染色液染色3h，乙酸-乙醇脱色液脱色至背景无色为止。经氨基酸分析重组蛋白含414个氨基酸，分子量为44. 6kDa，等点点为6. 43。重组蛋白的结构复性与纯化室温条件下10mol/L，PH 7. 2PBS缓冲液对肺炎衣原体MOMP重组表达蛋白8mol/L尿素的溶解液进行梯度透析稀释，按溶液中尿素浓度分别为6m0l/L、4m0l/L、3m0l/L控制稀释梯度，每个梯度稀释的时间分别为3 4h。将完成稀释复性的含3mol/L尿素的溶解液4°C放置24h。稀释复性的溶解液10000r/min离心出去沉淀物质，上清液通过以S-300为介质的凝胶层析分离法进行纯化，从而获得重组肺炎衣原体MOMP抗原。所得组肺炎衣原体MOMP抗原组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，以确定蛋白质的分子量及蛋白纯度。电泳条件，浓缩胶浓度复5%，分离胶浓度为12%。蛋白染色为考马斯亮蓝染色法，考马斯亮蓝R-250染色液染色3h，乙酸-乙醇脱色液脱色至背景无色为止。主蛋白条带出现在44. 6kDa处，蛋白纯度达95%以上。2)肺炎衣原体抗体金标快速检测试剂的制备上述所得到基因重组肺炎衣原体MOMP蛋白作检测抗原，在硝酸纤维素膜包被检测线，参照图2，制备肺炎衣原体抗体金标快速检测试剂，其组成成分包括在衬板10上设有加样端吸水层4、检测层8和吸水层9，在检测层和加样端吸水层4之间设有金标抗肺炎衣原体抗体抗体层5，在检测层8上包被有检测线7和控制线6。其中加样端吸水层4和吸水端吸水层9由多层滤纸制成；检测层8为硝酸纤维素膜；金标抗体层为玻璃纤维或无纺布浸取胶体金标记抗体。检测试剂制备程序包括制备金标抗体层5和检测层8的控制线6、检测线7的包被，然后再在衬板10上组合金标测试条和检测卡I。在塑料垫板10的两端分别粘贴加样 端吸水纸层4与吸水端吸水层9 ;在其中段粘贴包被检测线和控制线的纤维素膜层8，在加样端吸水纸层4与纤维素膜层8的交接部位，夹贴含金标抗体层5的玻璃纤维，玻璃纤维的4/5部分在加样端吸水纸层4中间，1/5部分在纤维素膜层8上。然后按4毫米宽、8厘米长规格切条。再参照图5，将检测条组装于塑料盒内形成检测卡I。盒盖上加样孔2正对测试条的加样端吸水纸层4，观察孔3正对纤维素膜的检测层8。上述的金标抗体层的制备方法包括下述步骤i胶体金的制备，取IOOmg氯金酸溶于IOOOml三蒸水中，加入15ml、在浓度为1%的柠檬酸三钠，煮沸15分钟，可得到15 50纳米的胶体金溶液；ii胶体金标记抗人IgG单克隆抗体，取IOOm/胶体金溶液,用O. 2m碳酸钾溶液调pH8. 4, A 6mg抗人IgG单克隆抗体,搅拌20分钟,再加入240mg牛血清白蛋白(BSA)，继续搅拌5分钟，4°C静置2 4小时；iii将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10 15分钟，去沉淀物，得上清液；iv将上清液经10000转/分钟离心60分钟离心得沉淀物；v将沉淀物溶于4ml O. 02M PH7. 4Tris-Hcl缓冲液得胶体金溶液，该缓冲液中含O. 25%BSA和O. 02%叠氮钠；vi将胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，37°C干燥2小时形成金标抗体层5。所述的检测层8是在硝酸纤维素膜上设有重组肺炎衣原体MOMP抗原构成的检测线7和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的质控线6。其制备方法是取上述I)所制备的重组肺炎衣原体MOMP抗原，调浓度为I. 5mg/ml，加入2%的甲醇，用喷膜机在纤维素膜中段喷检测线7 ;再取羊或兔抗鼠IgG调浓度为I. 5mg/ml，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线O. 5cm处，喷控制线6，按20 μ l/10cm设置喷膜量，喷膜后置于37°C干燥2小时，再片O. 01mlpH7. O含10%小牛血清的PBS，在37°C下封闭30分钟，O. 01mlpH7. O的PBS漂洗，37°C干燥。3)肺炎衣原体抗体的测定取样品血清10 μ I滴于检测板I的样品孔2内，再滴加100 μ I样品稀释液于样品孔2内，在观察窗3观察检测结果，观察结果20分钟内有效。若样品血清中含有抗肺炎衣原体抗体，则在观察窗内看检测线和控制线两条红色线，检测结果判定为阳性；若血清中不含含有抗肺炎衣原体抗体，则在观察窗内控制线位置看一条条红色线，检测结果判定为阴性；若观察窗内一条红色都看不到，则检测无效。上述样品稀释液可以选用O. Olml pH7. OPBS和O. 9 % NaCl，优选O. OlmlpH7. OPBS,因为它显色结果稳定。4)对人血清的敏感性和特异
用本发明抗原及检测方法制备肺炎衣原体抗体(IgG)金标检测试剂，检测36份肺炎衣原体抗体阳性(IgG)患者血清和84份肺炎衣原体抗体阴性(IgG)血清样品来进行特异性和敏感性试验。同时，为了验证本发明的效果，对用本发明的肺炎衣原体抗原进行的金标检测试剂与欧蒙公司(EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG)产的肺炎衣原体抗体(IgG)ELISA试剂盒进行相关性分析，结果见表I、表2。表I :本发明抗原的特异性及敏感性检测结果
权利要求
1.一种肺炎衣原体抗原，它是一种采用基因工程技术人工合成抗原。
2.权利要求I的肺炎衣原体抗原，它与沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体抗体不发生非特异性交叉反应。
3.一种制备肺炎衣原体抗原的方法，包括PCR克隆扩增肺炎衣原体MOMP抗原基因序列，构建原核表达载体，大肠杆菌表达肺炎衣原体MOMP抗原蛋白，采用透析法、梯度稀释法、和凝胶层析法复性包涵体，获得具有三维结构和免疫活性的重组肺炎衣原体MOMP抗原。
4.一种肺炎衣原体抗体快速检测方法，包括应用权利要求1-3中任一权项的肺炎衣原体抗原。
5.权利要求4中肺炎衣原体抗体快速检测方法，包括权利要求1-3中的肺炎衣原体抗原固定到一种硝酸纤维素膜，一种标记抗体(二抗)固定到固相载体上，待测样品与标记抗体(二抗)接触，若待测样品中存在肺炎衣原体抗体，则肺炎衣原体抗体与标记二抗反应形成抗体一标记二抗复合物，“复合物”在硝酸纤维素膜水平移动，遇到固定到膜上的肺炎衣原体抗原产生反应，带有标记物的“复合物”就被特异地固定到抗原上，固定抗原的位置就会有显色反应，若待测样品不含肺炎衣原体抗体，则“复合物”不能固定到抗原的位置上，此处就没有显色反应，可依据硝酸纤维素膜上固定抗原位置是否有显色反应，来判断检测结果，即待测样品中是否有肺炎衣原体抗体。
6.权利要求5检测肺炎衣原体抗体检测方法，其中待测样品是人的血清、血浆或全血。
7.上面权利要求5或6中测定肺炎衣原体抗体检测的方法，其中的标记抗体(二抗)是标记的抗人IgG抗体或抗人IgM抗体。
8.权利要求5-7中标记抗体是胶体金或彩色胶乳标记的抗体。
9.一种快速检测肺炎衣原体抗体的试剂，它所用抗原为权利要求1-3中的肺炎衣原体抗原。
10.上述权利要求9中用于快速检测肺炎衣原体抗体的试剂，其中的标记抗体是胶体金标记抗体或彩色胶乳标记抗体。
全文摘要
本发明涉及一种肺炎衣原体基因工程表达人工抗原；制备该抗原的方法，该方法包括包括PCR克隆扩增肺炎衣原体MOMP抗原基因序列，构建原核表达载体，大肠杆菌表达肺炎衣原体MOMP抗原蛋白，采用透析法、梯度稀释法、和凝胶层析法复性包涵体，获得具有三维结构和免疫活性的重组肺炎衣原体MOMP抗原；一种检测肺炎衣原体抗体快速检测方法，该方法包括应用肺炎衣原体抗原；一种用于肺炎衣原体抗体检测的快速检测试剂，该试剂包含肺炎衣原体抗原。根据本发明，提供了一种肺炎衣原体抗原，该抗原具有高度的特异性。本发明提供了制备该抗原的方法，快速测定肺炎衣原体抗体的方法，以及用于快速测定肺炎衣原体抗体的试剂。
文档编号G01N33/68GK102887944SQ20121032632
公开日2013年1月23日 申请日期2012年9月6日 优先权日2012年9月6日
发明者李克生, 杜慧芬, 周海飞 申请人:李克生
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