专利名称：薄层色谱法鉴别白术药材的方法
技术领域：
本发明涉及鉴别白术药材的方法，尤其是采用薄层色谱法鉴别白术药材的方法。 属于中药药材鉴别技术领域。
背景技术：
ΦΙ^ ^^^^Ι^δ^ (Rhizoma atractylodis macrocephala Koidz.)白勺〒 燥根茎，收载于《中国药典》2010年版，一部。是著名的传统多用途常用中药，为“浙八味” 之一。具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎之功效。国内多个省份有种植，浙江省是主产省 份之一，我省年产量近5000吨，国内外市场年需量约为8000吨，我省占全国总产量的近一
半。白术中分离得到苍术酮后，又已从白术中，分离出白术内酯类成分——白术内酯 I、白术内酯III (黄宝山，白术内酯的分离鉴定.植物学报，1992，34(8) :614)，药理学研究 表明，白术内酯类成分(白术内酯I、白术内酯III)为白术的抗炎、抗癌有效成分，苍术酮也 具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用(汤得芳，郝玉珩，刘佐雅等，平江白术根 茎挥发油的成分及其抑瘤作用研究，药学通报，1984，19(9) :43)。相关实验研究证明上述 成分是白术的药效活性成分，同时也是白术区别于其他药材的特征性成分。目前对上述三 种有效成分，中国药典2010年版一部白术鉴别项下规定了以白术对照药材为对照，进行白 术的鉴别，其指标成分一桃红色斑点即为苍术酮。有以白术内酯III为单一指标，进行白术薄 层色谱鉴别方法研究的报道(叶燕、程雪梅等，白术药材的薄层色谱鉴别研究，时珍国医国 药，2009，20 (7) :1702)。以单一成分为指标的薄层鉴别方法，存在不足之处，主要在于鉴别 依据不够充分，无法准确地区分白术及其易混淆品-苍术。鉴于目前未见以三种成分为指标的薄层鉴别方法，药典(2010年版，一部)中白术 鉴别项下无白术内酯鉴别指标。故发明一项既能够快速准确地进行白术药材的鉴别，尤其 是与易混淆品_苍术的鉴别。同时在某种程度上能够反映药材的品质。具有重要的学术研 究价值及实际应用的价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种薄层色谱法鉴别白术的方法，以白术内酯III、白术内酯 I及苍术酮为指标成分，通过溶剂展开与显色等程序，实现白术药材的鉴别，达到准确使用 药材，严格区分其他混淆品的目的。本发明的薄层色谱法鉴别白术药材的方法，包括以下步骤1)对照品溶液的制备称取苍术酮置于刻度试管中，加甲醇使苍术酮充分溶解，摇勻，配制质量浓度为 lmg/ml的苍术酮对照品溶液；称取白术内酯置于刻度试管中，加甲醇使白术内酯I充分溶解，摇勻，配制质量浓 度为lmg/ml的白术内酯I对照品溶液；
称取白术内酯III置于刻度试管中，加甲醇使白术内酯III充分溶解，摇勻，配制质量 浓度为lmg/ml的白术内酯III对照品溶液；2)药材供试品溶液制备称取干燥白术样品，置于锥形瓶中，加10倍样品重量的甲醇，超声提�。寐酥焦耍艘河谑椅伦匀换臃⒅涟资跻┎暮课猯g/ml，得白术药材供试品溶液；称取干燥苍术样品，于锥形瓶中，加10倍样品重量的甲醇，超声提�。寐酥焦� 滤，滤液于室温自然挥发至白术药材含量为lg/ml，得苍术药材供试品溶液。3)用微量点样器分别吸取上述制得的苍术酮对照品溶液、白术内酯I对照品溶 液、白术内酯III对照品溶液、白术药材供试品溶液及苍术药材供试品溶液各2 μ 1，依次手工 点样于同一硅胶G薄层板同一水平线的不同位置上。4)取乙酸乙酯和60_90°C的石油醚，按照体积比1 50混合均勻，得到展开剂一，
置干燥洁净双槽层析缸的第一个槽中；5)将步骤3)的硅胶G薄层板，置于步骤4)双槽层析缸无展开剂的第二个槽中，密 闭缸盖，预饱和10-15分钟后，将上述双槽层析缸第一个槽中的展开剂一转移到放有硅胶G 薄层板的第二个槽中，进行上行展开，展距8cm，结束展开，取出薄层板，晾干。6)取环己烷与乙酸乙酯，按照体积比3. 8 1混合均勻，得到展开剂二，置于步骤 5)双槽层析缸已清空的第一个槽中；7)取步骤5)晾干的硅胶G薄层板，置于步骤6)双槽层析缸无展开剂的第二个槽 中，密闭缸盖，预饱和10-15分钟后，将上述双层层析缸第一个槽中的展开剂二转移到放有 硅胶G薄层板的第二个槽中，进行上行展开，展距5cm，结束展开，取出薄层板，晾干。8)配制显色剂取无水乙醇，用移液管量取无水乙醇1/9体积量的浓硫酸，浓硫酸 质量浓度为98%，将移液管伸至无水乙醇液底部加入浓硫酸，混合均勻得显色剂，将显色剂 置于浸渍槽或电动喷雾器中备用。9)将步骤7)晾干的硅胶G薄层板，浸入步骤8)浸渍槽中，5S内取出薄层板，或者 以电动喷雾器将步骤8)显色剂均勻喷至步骤7)晾干的硅胶G薄层板上；用热风吹硅胶G 薄层板至斑点显色清楚，获得色谱图；10)于自然光及365nm波长光源下检视步骤9)硅胶G薄层板并拍照，按下述方法 比较色谱图中的斑点鉴别白术自然光下检视，色谱图中苍术酮对照品显示为红色的斑点；在与苍术酮对照品相 同的Rf值位置，白术药材供试品及苍术药材供试品都有相同的红色斑点；白术内酯I及白 术内酯III对照品在色谱图中无斑点；365nm紫外灯下检视，色谱图中白术内酯III及白术内酯I对照品分别显示为蓝色 荧光斑点，苍术酮对照品显示为黄色荧光斑点；在与苍术酮、白术内酯III及白术内酯I对照 品相同的Rf值位置，白术药材供试品显示相同颜色的荧光斑点，而苍术药材供试品，仅在 与苍术酮相同的Rf值位置有相同颜色的斑点，而在与白术内酯III及白术内酯I对照品相 同的Rf值位置，无相同颜色的荧光斑点。上述硅胶G薄层板可选用市售产品；双槽层析缸选用符合药典规定的双槽层析 缸。本发明的优点在于
1、本发明与中国药典2010年版二部中白术的色谱鉴别方法及文献方法相比，指 标成分更全面，试验结果提供的依据更充分，能有效鉴别白术药材，特别是能够明确地区分 白术与易混淆品-苍术。达到准确使用药材的目的。2、本发明方法先进，采用了二次展开，充分分离了指标成分，使3种指标(苍术酮、 白术内酯I及白术内酯III)达到很好的分离度，最大程度避免杂质干扰。3、本发明方法操作简单，所使用的仪器设备和材料普及性好，便于药材种植、加工 及销售企业推广应用。
图1薄层色谱鉴别方法色谱图(自然光)，图中1为白术药材(浙江磐安产)，2 为白术药材(贵州余庆产)，3为苍术酮对照品，4为白术内酯I对照品，5为白术内酯III对 照品，6为苍术药材(产地不详)；图2薄层色谱鉴别方法色谱图(365nm紫外灯光)，图中1为白术药材(浙江磐安 产)，2为白术药材(贵州余庆产)，3为苍术酮对照品，4为白术内酯I对照品，5为白术内 酯III对照品，6为苍术药材(产地不详)；
具体实施例方式实施例11)称取苍术酮2mg至刻度试管中，加甲醇至2ml，使苍术酮充分溶解，摇勻，即得苍 术酮对照品溶液；称取白术内酯I Img至刻度试管中，加甲醇至1ml，使白术内酯I充分溶 解，摇勻，即得白术内酯I对照品溶液；称取白术内酯III Img至刻度试管中，加甲醇至1ml， 使白术内酯III充分溶解，摇勻，即得白术内酯III对照品溶液。2)称取干燥白术(浙江磐安产)样品2g，置于锥形瓶中，加10倍白术重量的甲 醇，超声20min，放冷后，经普通滤纸过滤，滤液于室温自然挥发至2ml，得白术药材供试品 溶液。称取干燥苍术(产地不详，购于浙江省立同德医院中药房)样品2g，置于锥形瓶 中，加10倍苍术重量的甲醇，超声20min，放冷后，经普通滤纸过滤，滤液于室温自然挥发至 2ml，得白术药材供试品溶液。3)取市售硅胶G薄层板(IOcmX 20cm)，用微量点样器分别吸取上述制得的苍术酮 对照品溶液、白术内酯I对照品溶液、白术内酯III对照品溶液、白术药材供试品溶液及苍术 药材供试品溶液各2 μ 1，依次手工点样于同一硅胶G薄层板同一水平线的不同位置上。4)量取乙酸乙酯0. 2ml和60_90°C的石油醚10ml，混合均勻，得到展开剂一，置干 燥洁净双槽层析缸的第一个槽中；5)将步骤3)的硅胶G薄层板，置于步骤4)双槽层析缸无展开剂的第二个槽中，密 闭缸盖，预饱和10分钟后，将上述双槽层析缸第一个槽中的展开剂一转移到放有硅胶G薄 层板的第二个槽中，进行上行展开，展距8cm，结束展开，取出薄层板，晾干。6)量取环己烷7. 6ml与乙酸乙酯2ml，混合均勻，置于步骤5)双槽层析缸已清空 的第一个槽中；7)取步骤5)晾干的硅胶G薄层板，置于步骤6)双槽层析缸无展开剂的第二个槽中，密闭缸盖，预饱和10-15分钟后，将上述双层层析缸第一个槽中的展开剂二转移到放有 硅胶G薄层板的第二个槽中，进行上行展开，展距5cm，结束展开，取出薄层板，晾干。8)配制显色剂量取无水乙醇50ml，用移液管吸取质量浓度为98%的浓硫酸 5. 5ml，伸至无水乙醇液底部缓慢加入，混合均勻，放冷后，将显色剂置于浸渍槽备用。9)将步骤7)晾干的硅胶G薄层板，浸入步骤8)浸渍槽中，5S内取出薄层板，用100°C热风吹硅胶G薄层板至斑点显色清楚，获得色谱图；10)于自然光及365nm波长光源下检视步骤9)硅胶G薄层板并拍照，按下述方法 比较色谱图中的斑点鉴别白术自然光下检视，结果见图1，色谱图中苍术酮对照品显示为红色的斑点；在与苍术 酮对照品相同的Rf值位置(图中A)，白术药材供试品及苍术药材供试品都有相同的红色斑 点，白术内酯I及白术内酯III对照品在色谱图中无斑点；365nm紫外灯下检视，结果见图2，色谱图中白术内酯III及白术内酯I对照品分别 显示为蓝色荧光斑点(图中C、D)，苍术酮对照品显示为黄色荧光斑点(图中B)，在与苍术 酮、白术内酯III及白术内酯I对照品相同的Rf值位置，白术药材供试品显示相同颜色的荧 光斑点，而苍术药材供试品，仅在与苍术酮相同的Rf值位置有相同颜色的斑点，而在与白 术内酯III及白术内酯I对照品相同的Rf值位置，无相同颜色的荧光斑点。
权利要求
薄层色谱法鉴别白术药材的方法，包括以下步骤1)对照品溶液的制备称取苍术酮置于刻度试管中，加甲醇使苍术酮充分溶解，摇匀，配制质量浓度为1mg/ml的苍术酮对照品溶液；称取白术内酯置于刻度试管中，加甲醇使白术内酯Ⅰ充分溶解，摇匀，配制质量浓度为1mg/ml的白术内酯Ⅰ对照品溶液；称取白术内酯Ⅲ置于刻度试管中，加甲醇使白术内酯Ⅲ充分溶解，摇匀，配制质量浓度为1mg/ml的白术内酯Ⅲ对照品溶液；2)药材供试品溶液制备称取干燥白术样品，置于锥形瓶中，加10倍样品重量的甲醇，超声提�。寐酥焦耍艘河谑椅伦匀换臃⒅涟资跻┎暮课�1g/ml，得白术药材供试品溶液；称取干燥苍术样品，于锥形瓶中，加10倍样品重量的甲醇，超声提�。寐酥焦耍艘河谑椅伦匀换臃⒅涟资跻┎暮课�1g/ml，得苍术药材供试品溶液。3)用微量点样器分别吸取上述制得的苍术酮对照品溶液、白术内酯Ⅰ对照品溶液、白术内酯Ⅲ对照品溶液、白术药材供试品溶液及苍术药材供试品溶液各2μl，依次手工点样于同一硅胶G薄层板同一水平线的不同位置上。4)取乙酸乙酯和60-90℃的石油醚，按照体积比1∶50混合均匀，得到展开剂一，置干燥洁净双槽层析缸的第一个槽中；5)将步骤3)的硅胶G薄层板，置于步骤4)双槽层析缸无展开剂的第二个槽中，密闭缸盖，预饱和10-15分钟后，将上述双槽层析缸第一个槽中的展开剂一转移到放有硅胶G薄层板的第二个槽中，进行上行展开，展距8cm，结束展开，取出薄层板，晾干。6)取环己烷与乙酸乙酯，按照体积比3∶1～4∶1，混合均匀，或者取正己烷与乙酸乙酯，按照体积比4∶1，混合均匀，得到展开剂二，置于步骤5)双槽层析缸已清空的第一个槽中；7)取步骤5)晾干的硅胶G薄层板，置于步骤6)双槽层析缸无展开剂的第二个槽中，密闭缸盖，预饱和10-15分钟后，将上述双层层析缸第一个槽中的展开剂二转移到放有硅胶G薄层板的第二个槽中，进行上行展开，展距5cm，结束展开，取出薄层板，晾干。8)配制显色剂取无水乙醇，用移液管量取无水乙醇1/9体积量的浓硫酸，浓硫酸质量浓度为98％，将移液管伸至无水乙醇液底部加入浓硫酸，混合均匀得显色剂，将显色剂置于浸渍槽或电动喷雾器中备用。9)将步骤7)晾干的硅胶G薄层板，浸入步骤8)浸渍槽中，5S内取出薄层板，或者以电动喷雾器将步骤8)显色剂均匀喷至步骤7)晾干的硅胶G薄层板上；用热风吹硅胶G薄层板至斑点显色清楚，获得色谱图；10)于自然光及365nm波长光源下检视步骤9)硅胶G薄层板并拍照，按下述方法比较色谱图中的斑点鉴别白术自然光下检视，色谱图中苍术酮对照品显示为红色的斑点；在与苍术酮对照品相同的Rf值位置，白术药材供试品及苍术药材供试品都有相同的红色斑点；白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对照品在色谱图中无斑点；365nm紫外灯下检视，色谱图中白术内酯Ⅲ及白术内酯Ⅰ对照品分别显示为蓝色荧光斑点，苍术酮对照品显示为黄色荧光斑点；在与苍术酮、白术内酯Ⅲ及白术内酯Ⅰ对照品相同的Rf值位置，白术药材供试品显示相同颜色的荧光斑点，而苍术药材供试品，仅在与苍术酮相同的Rf值位置有相同颜色的斑点，而在与白术内酯Ⅲ及白术内酯Ⅰ对照品相同的Rf值位置，无相同颜色的荧光斑点。
全文摘要
本发明公开的薄层色谱法鉴别白术药材的方法，以苍术酮、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ三种指标化合物为对照品，用甲醇配制成对照品溶液，以甲醇超声提取白术药材制备供试品溶液；吸取对照品及供试品溶液，分别点样于同一硅胶G薄层板上，分别以60-90℃石油醚-乙酸乙酯以及环己烷-醋酸乙酯为展开剂，进行二次展开，取出、晾干，以硫酸乙醇溶液显色后，在自然光及波长365nm下检视进行鉴别，在与三种对照品相同Rf值位置，显相同颜色斑点的供试药材为白术药材。该鉴别方法专属性强、操作简便，能够准确鉴别白术药材，明确区分白术及其易混淆品-苍术。
文档编号G01N30/90GK101829176SQ20101017622
公开日2010年9月15日 申请日期2010年5月18日 优先权日2010年5月18日
发明者俞忠明, 寿旦, 李洪玉, 章建民 申请人:浙江省中医药研究院
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