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专利名称：一种调控白念珠菌毒性的因子及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域；更具体地，本发明涉及一种调控白念珠菌毒性的因子及其应用。
背景技术：
白念珠菌(Candida albicans)是一种临床上分离到的一种机会性人体致病真菌， 在免疫下调的病人中，如器官移植病人、艾滋病毒感染者等，可以引起广泛的浅部和深部系统感染，感染部位包括口腔、女性阴道等，引起鹅口疮、阴道炎等疾�。�也可以侵入表皮和内皮细胞进入血液到达内脏器官，如肾脏、脑部等，导致败血症，严重可以导致死亡(Odds， F. C. 1994. J Am Acad Dermatol. 31 :S2_S5)。白念珠菌在不同的生长条件下，呈现不同的生长形态，包括菌体(yeast form)，假菌丝(pseudohyphae)和菌丝(hyphae)。各种形态之间的相互转化能力直接影响白念珠菌的致病能力(Odds,F. C. 1985. Grit Rev Microbiol. 12 45-93 ；Brown, A. J. P. et al. 1999. Trends Microbiol. 7 :334-338)，而形态转换缺陷的菌株其系统感染能力下降或消失(Lo, H. J. et al，1997. Cell. 90 :939-949 ；Braun, B. R. et al. 2001. EMBO J. 20 :4753-61 ；Hwang, C. S. et al. 2003. Mol Microbiol. 47 :1029-43)。最近有些实验室利用减毒菌株作为疫苗来免疫小鼠，取得了比较好的效果， 并对其进行了深入的生物化学分析，为疫苗的研制提供了理论基础(Elena FA et al, Proteomics 2004,4,3007-3020 ；Elena FA et al，Proteomics2004，4，1204-1215)。许多培养条件可以引起白念珠菌的形态转换，包括血清、温度、PH值、氮源利用以及氧压等等。所有的细胞都必需具有检测细胞外环境改变和外界因子刺激的能力，从而对各种信号做出正确应答的能力。各种外界因子的刺激包括光、激素、神经递质、生长因子及气味因子等。真核细胞通过不同的信号传导途径改变蛋白质合成从而应对各种外界因子刺激。一般来说， 信号途径被认为是通过调控转录从而改变胞内蛋白质的表达水平。而最近的研究显示对翻译的调控也是信号转导的一个重要方面。两条重要的信号通路Ras和Akt主要介导了特定的mRNA和核糖体的结合。这种调控使核糖体对于正处于翻译状态的mRNAs的识别发生了变化，从而导致蛋白合成水平的快速改变。目前对于白念珠菌真正的致病因子和致病机理没有完全研究清楚，因此本领域还有必要研究白念珠菌的致病因子。

发明内容
本发明的目的在于提供白念珠菌减毒株(无毒株)。本发明的另一目的在于提供一种筛选抑制白念珠菌的毒性的潜在物质的方法。在本发明的第一方面，提供一种白念珠菌减毒株(无毒株)，所述的减毒株中 CaASCl基因基本上不表达。在一个优选例中，所述的减毒株(caascl/caascl)中CaASCl基因或基因片段缺失。
在另一优选例中，所述的减毒株通过同源重组的方法从野生型白念珠菌染色体中敲除CaASCl基因或基因片段获得。在另一优选例中，所述的CaASCl的基因(1)具有SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列；或(2)截短的SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列，且该基因不编码 CaAscl蛋白或编码降低活性(优选活性降低50%，更优选降低80%，更优选无活性)的 CaAscl蛋白或蛋白片段。在另一优选例中，相对于野生型白念珠菌，所述的减毒株的菌丝形成能力下降。在本发明的另一方面，提供所述的白念珠菌减毒株的用途，用于制备防治(特别是预防)白念珠菌过度生长相关疾病的组合物。在另一优选例中，所述的白念珠菌过度生长相关疾病选自(但不限于)鹅口疮、 阴道炎。在本发明的另一方面，提供一种组合物，所述的组合物含有有效量的所述的白念珠菌减毒株和药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的组合物是疫苗。在本发明的另一方面，提供一种抑制白念珠菌(抑制毒性或菌丝生长)的方法，所述方法包括抑制白念珠菌中CaAscl蛋白的表达或活性。在本发明的另一方面，提供一种筛选抑制白念珠菌(抑制毒性或菌丝生长)的潜在物质的方法，所述方法包括(a)在测试组中，向表达CaAscl蛋白的体系中添加待筛选的候选物，并检测 CaAscl蛋白的表达或活性；并且，在对照组中，在不添加所述候选物的、表达CaAscl蛋白的体系中，检测CaAscl蛋白的表达或活性；(b)将步骤(a)测试组中CaAscl蛋白的表达或活性与对照组中CaAscl蛋白的表达或活性进行比较，如果测试组中CaAscl蛋白的表达或活性在统计学上低于(优选显著低于，较佳的低20%或更低；更佳的低40%或更低；进一步更佳的低60%或更低)对照组，就表明该候选物是抑制白念珠菌的毒性的潜在物质。在另一优选例中，所述的体系选自细胞体系、溶液体系。在本发明的另一方面，提供一种CaASCl基因的用途，用于鉴定待测白念珠菌的毒性。在本发明的另一方面，提供一种鉴定待测白念珠菌毒性的方法，包括检测待测白念珠菌中CaASCl基因的表达或活性，若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaASCl基因表达或活性提高，则该白念珠菌具有一般毒性或高的毒性；若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaASCl基因表达或活性降低，则该白念珠菌具有低的毒性或无毒性。在本发明的另一方面，提供一种白念珠菌CaASCl基因或CaAscl蛋白的抑制剂的用途，用于制备抑制白念珠菌(抑制毒性或菌丝生长)的组合物。在一个优选例中，所述的CaAscl蛋白的抑制剂是特异性抗CaAscl蛋白的抗体。
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在另一优选例中，所述的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。在本发明的另一方面，提供一种抗体，所述的抗体特异性地抗CaAscl蛋白(与 CaAscl蛋白特异性结合)。在一个优选例中，所述的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。


图IA显示了在白念珠菌中敲除CaASCl基因的策略。图IB显示了在白念珠菌CaASCl基因的敲除过程中各个菌株的PCR鉴定图谱。图IC显示了在白念珠菌CaASCl基因的敲除过程中各个菌株的Southern杂交图
■；並图2显示了白念珠菌caascl/caascl缺失株在菌丝诱导条件下，在液体和固体血清和李氏(Lee’s)培养基中的形态(图2A)，在SCLD和SLAD液体培养基中的形态(图2B)。图3显示了在小鼠系统感染试验中，CaASCl基因的敲除使白念珠菌毒性降低。注射液浓度为5X IO7细胞/毫升(图3A)或5X106细胞/毫升(图，每只小鼠尾静脉注射100 μ 1菌液，共注射8只小鼠。
具体实施例方式本发明人经过广泛的研究，首次在白念珠菌中分离出一种白念珠菌毒性相关的基因，本发明人将之命名为CaASCl基因。利用同源重组原理，本发明人在白念珠菌中构建了 caascl/caascl缺失株，并证明CaASCl基因的表达与白念珠菌的菌丝发育和毒性表现密切相关。除非另外说明，所述的“白念珠菌ASCl基因”，“CaASCl基因”，“CaASCl ”，“ASC1 ”可互换使用，都是指白念珠菌的ASCl基因。“白念珠菌Ascl蛋白”，“CaAscl蛋白”，“CaAscl”， “Ascl”蛋白可互换使用，都是指白念珠菌的Ascl蛋白。除非另外说明，白念珠菌的减毒株(无毒株)用“caascl/caascl”表示，或用 "caascl/caascl缺失株”表示，或用“ascl/ascl”表示，或用“-/-”表示。白念珠菌的单拷贝缺失株用“ASCl/ascl ”表示，或用“CaASCl/caascl”表示，或用 “+/_”表示。白念珠菌的回复菌株用“caascl/caascl (CaASCl) ”表示，或用"caascl/ caascl+CaASCl”表示，或用-/_(+)表示。白念珠菌的野生型菌株用WT表示，或用+/+表
7J\ ο如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，所述的“含有”，“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由......构
成”、“基本上由......构成”、和“由.......构成”；“主要由......构成”、“基本上由......构成”和“由......构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。白念珠菌(Candida albicans)是一种人体机会性致病真菌，能引起广泛的深部和浅部感染，但是其真正的致病因子和致病机理以往没有完全研究清楚。根据白念珠菌基因组序列(http://WWW. candidagenome. org/)，利用生物信息学比较分析，本发明人在白念珠菌的基因组序列中找到一个功能未知的新基因，该基因命名为白念珠菌CaASCl基因 (orfl9. 6906)。利用同源重组原理，本发明人在白念珠菌中构建了 CaASCl基因双拷贝敲除株caascl/caascl。CaASCl基因的敲除阻断白念珠菌的菌丝生长。在小鼠系统感染试验中，caascl/caascl缺失株的毒性明显下降。这些结果表明CaAscl正向调控白念珠菌的菌丝发育同时也影响该致病菌的毒性表现。作为本发明的优选方式，所述的CaASCl的基因具有SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列；CaASCl基因编码区中有一个259bp的内含子(SEQ ID NO :3)，本发明人通过逆转录合成了其cDNA序列。利用所述的cDNA序列，本发明人构建了一个能表达不含内含子的CaASCl 的表达载体，用于CaASCl基因功能互补试验。所述的CaASCl基因编码CaAscl蛋白。CaAscl蛋白具有SEQ ID NO 4所示的氨
基酸序列。所述的CaASCl的基因也包括截短形式的CaASCl的基因(或称为CaASCl基因片段)，只要该基因片段在被敲除后可导致CaAscl蛋白不表达或表达异常，或其表达的 CaAscl蛋白片段活性降低或没有活性。根据本发明的揭示，本领域人员非常容易获得所述的CaASCl的基因片段。所述的CaASCl的基因可以作为一种白念珠菌毒性鉴定的标志物。例如可通过检测待测白念珠菌中CaASCl基因的表达情况来确定白念珠菌的毒性；若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaASCl基因正常表达或过表达(即相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌中CaASCl基因的表达高20%或更高，更佳的高50%或更高)，则该白念珠菌具有一般毒性或高的毒性；若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaASCl基因低表达(如低20% 或更低；更佳地低50%或更低)或不表达，则该白念珠菌具有低的毒性或无毒性。或例如可通过检测待测白念珠菌中CaAscl蛋白的活性来确定白念珠菌的毒性；若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaAscl蛋白活性正常或过于激活(即相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌中CaAscl蛋白的活性高20%或更高，更佳的高50%或更高)，则该白念珠菌具有一般毒性或高的毒性；若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaAscl蛋白的活性降低 (即相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌中CaAscl蛋白的活性低20%或更低，更佳的低 50%或更低)，则该白念珠菌具有低的毒性或无毒性。本发明还提供一种白念珠菌减毒株，该减毒株中CaASCl基因基本上不表达。所述的“基本上不表达”是指白念珠菌减毒株中CaASCl基因不表达或低表达。其中，CaASCl基因低表达是指该减毒株中CaASCl基因的表达量低于于野生型白念珠菌的20% ；较佳地低于野生型白念珠菌的10%;更佳地于野生型白念珠菌的5%或更低，最佳地低于野生型白念珠菌的2%或更低。CaASCl基因基本上不表达的菌株可以通过各种基因抑制、基因沉默、基因敲除等技术来构建。例如，可以通过基于同源重组的基因敲除技术来将CaASCl基因从染色体上敲除，从而使得CaASCl基因缺失；可以针对CaASCl基因设计干扰性RNA或反义核苷酸来使CaASCl基因表达抑制或沉默。
一种使得CaASCl基因缺失的方法是基因敲除技术，在本发明的优选实施方式中， 体外构建CaASCl基因敲除质粒，通过同源重组的方法，把白念珠菌染色体中CaASCl基因敲除掉。所述的白念珠菌减毒株可以用于研究CaASCl基因基本上不表达后对于白念珠菌中其它基因表达情况的影响，以及研究CaASCl基因基本上不表达后白念珠菌的菌丝生长情况以及毒性情况。所述的白念珠菌减毒株可以用于制备疫苗，来免疫动物，从而在不对动物造成�：Φ那榭鱿率沟枚�物对白念珠菌感染产生免疫力。本发明还提供了一种筛选抑制白念珠菌的毒性的潜在物质的方法，所述方法包括向表达CaAscl蛋白的体系中添加待筛选的候选物，并检测CaAscl蛋白的表达情况；如果CaAscl蛋白的表达情况在统计学上减弱，就表明该候选物是抑制白念珠菌的毒性的潜在物质。作为本发明的优选方式，所述的方法还包括对获得的潜在物质进行进一步的白念珠菌毒性抑制或菌丝生长抑制试验，以进一步选择和确定对于抑制白念珠菌毒性有用的物质。本发明还提供一种白念珠菌CaASCl基因或蛋白的抑制剂或拮抗剂的用途，用于抑制白念珠菌的毒性。所述的白念珠菌CaASCl的抑制剂或拮抗剂例如是针对于CaASCl基因的干扰性RNA或反义核苷酸，其能够特异性感染CaASCl的表达；或是特异性抗CaAscl蛋白的抗体；或是特异性结合CaAscl蛋白的配体等。本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化 CaAscl蛋白或其活性片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。单克隆抗体可利用杂交瘤技术制备获得(见Kohler等，Nature 256 ；495，1975 ； Kohler 等人，Eur. J. Immunol. 6 :511，1976 ；Kohler 等，Eur. J. Immunol. 6 -.292,1976 ； Hammerling 等，In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, Elsevier, N. Y., 1981)。在获得了杂交瘤细胞以后，可采用本技术领域人员熟知的单克隆抗体制备技术来大量生产本发明的单克隆抗体。作为本发明的一种实施方式，所述的单克隆抗体可以由下列制备方法所制备，所述方法包括步骤(1)提供佐剂预处理的小鼠；( 在小鼠腹腔内接种所述的杂交瘤细胞并分泌单克隆抗体；(3)抽取腹水，分离获得所述的单克隆抗体。作为本发明的一种方式，提供一种组合物，其含有有效量(如0. OOOl-IOwt% ；较佳的0. 001-5wt% )的所述的白念珠菌减毒株以及药学上可接受的载体。优选的，所述的组合物是疫苗，其可用于免疫动物，使动物体内产生抗体，从而抵御白念珠菌的感染。所述的组合物对于动物没有可见的毒性和副作用。所述“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。所述“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、缓冲液。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、PH缓冲物质等。所述的载体中还可以含有细胞转染试剂。对于疫苗，所述的药学上可接受的载体例如包括一种佐剂。所述组合物在用于给药时，通常1 X IO3-I X IO9个细胞/kg体重，较佳的1 X IO4-I X IO8个细胞/kg体重是适合的；优选的可进行多次给药，以产生良好的免疫效果，例如可间隔1-3周进行重复给药。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如 Sambrook 等人，分子克隆实验室指南(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 2002)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。I.材料和方法白念珠菌基因组DNA抽提白念珠菌培养过夜，用ddH20洗1次，悬浮在500 μ 1溶液A (1M山梨醇，IOOmM EDTA, ρΗ8· 0)中，加入5μ 1 20mg/ml的Zymolyase，37°C放置1小时后，高速离心去上清，细胞用 500 μ 1 的 TE 缓冲液(20mM Tris 'HCl pH7. 5，ImM EDTA)洗一次，悬浮在 350 μ 1 的 TE 缓冲液中，并加入 90μ 1 的溶液 BQ50mM EDTApH8. 0,400mM Tris · HCl pH8. 0,2% (v/v) SDS), 65°C放置30分钟，加入80 μ 1的5Μ KAc，冰上放置1小时，高速离心5分钟，吸取上清并加入Iml的无水乙醇，-20°C放置20分钟，高速离心5分钟，沉淀用70% (ν/ν)乙醇洗一次， 离心后烘干。Southern 杂交分析白念珠菌基因组DNA抽提后，基因组DNA用Bglll/EcoRV完全酶切，电泳完成后的琼脂糖胶分别用变性液和中和液浸泡45min，尼龙膜用双蒸水或10 X SSC浸透，搭好转膜平台，胶与膜间用Parafilm封闭，加一个500g砝码。以10 X SSC为转膜液转移过夜，第二天漂洗晾干交联。交联后的膜装入杂交管，加入IOml预杂交液(6XSSC，5Xdenhardt’ s Reagent, 0. 5% (v/v) SDS, 100 μ g/ml 鱼精 DNA 于 42°C预杂交 12h，探针在 100°C变性 5min， 加入150μ 1探针(约1/3所标记的探针)42°C杂交10-16h。0. 1XSSC,0. 1% (v/v) SDS洗两到三次，每次40min，取出膜，晾干，室温或-70°C压片。探针标记用hvitrogene的随机引物标记试剂盒，照其说明操作。将含25ng DNA的溶液于100°C加热变性5-lOmin，置于冰浴中，再依次力口入 Random Primers Buffer Mixture, 2 μ 1 dCTP,2y 1 dGTP,2y 1 dTTP, 3 μ 1 [ α -32P] -dATP (10 μ Ci/μ 1)，混勻后加入 1 μ IKlenow 酶，于 25°C保温 lh,以 Sephadex G-25柱以3000rpm离心％iin，收集离心液，即为纯化后的探针溶液。探针于100°C变性5min 冰上冷却后加入杂交体系中。白念珠菌的转化准备PEG/LiAc 溶液(pH 7. 5) IOml ；在 1. 5ml Eppendof 管中依次加入质粒 5 μ g, 10 μ 110mg/ml鱼精DNA，混勻；加入0. Iml感受态细胞和0. 6ml PEG/LiAc,震荡混勻； 300C 200rpm培养30min ；加入70 μ 1 DMSO,轻轻混勻；42°C热冲击15min，期间不时轻轻摇勻；冰浴aiiin 高速离心15s，吸掉上清，用0. 2mlTE重悬细胞；涂布于适当的营养筛选SD平板上。pBAl-ASCl表达质粒的构建以及回复菌株的制备
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构建pBAl-ASCl表达质粒用于制备回复菌株，抽提野生型菌株SC5314 (WT)(参 JAL Fonzi, W. A. and Μ. Y. Irwin, Isogenic strain construction and gene mapping in Candida albicans. Genetics, 1993. 134(3) :p. 717-28.)的 mRNA，反转录成 cDNA，然后利用引物 CaASClF (5，GCTATCGATATGGCTGATCAAGAAGTTTTAG)和 CaASClR (5，GTCGGTACCTTAAGCAG ATGGAGTCATAACT)PCR扩增不含内含子的CaASCl全长编码区DNA片段，插入到pBAl (参见 Cao,F. ,et al. ,The Flo8Transcription Factor Is Essential for Hyphal Development and Virulence in Candida albicans. Mol Biol Cell, 2006. 17(1) :p. 295—307.)的多克隆位点，得到pBAl-ASCl表达质粒。pBAl-ASCl用限制性内切酶线性化，转化caascl/caascl双拷贝缺失株，得到回复菌株。Northern 杂交分析各菌株在YPD，30°C中培养至对数生长期后期，转接至YPD起始OD = 0. 05，并在相应温度下培养指定时间，用热酚法抽提白念珠菌总RNA。20 μ 1上样量包括RNA样品 12μ 1(25μ g),4y 1 甲醛，2μ 1 10XM0PS,2y 1 上样缓冲液、65°C加热 10min，0°C冷却 2min，离心k，上样。电泳在含甲醛的变性胶上进行(lg琼脂糖，IOml 10XMOPS, 87ml DEPC 处理水，加热融化稍冷后加入2.7ml 37% (ν/ν)甲醛)。电泳条件为100mA，50-70V，5_7h 电泳完成后同样用毛细法转膜，转膜液用5XSSC。转膜过夜后，取出膜，不能使膜干透，用 Bio-Ra GS Gene Linker C3protocol 紫外交联，加入 IOml 预杂交液，65°C，2h后更换为 IOml 杂交液，加入探针65°C杂交过夜，用2XSSC，0. 1% &八)303，651洗膜两次，每次301^11。杂交好的膜不要晾干，用保鲜膜包好后-70°C压片。重杂交洗膜用0.5% (v/v) SDS, 90-100°C 加热5-10min，或按照Clontech推荐用0.5% (v/v) SDS, 90-100°C加热IOmin后让其自然冷却IOmin后取出备用，若不立即位用，用保鲜膜包好后置于-20°C保存。引物核苷酸序列本发明的方法所用的引物的核苷酸序列如表1。表 权利要求
1.一种白念珠菌减毒株，其特征在于，所述的减毒株中CaASCl基因基本上不表达。
2.如权利要求1所述的减毒株，其特征在于，所述的减毒株中CaASCl基因或基因片段缺失。
3.如权利要求1所述的减毒株，其特征在于，其通过同源重组的方法从野生型白念珠菌染色体中敲除CaASCl基因或基因片段获得。
4.如权利要求1所述的减毒株，其特征在于，所述的CaASCl的基因(1)具有SEQID NO :1或SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列；或(2)截短的SEQID NO 1或SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，且该基因不编码CaAscl 蛋白或编码降低活性的CaAscl蛋白或蛋白片段。
5.如权利要求1所述的减毒株，其特征在于，相对于野生型白念珠菌，所述的减毒株的菌丝形成能力下降。
6.权利要求1所述的白念珠菌减毒株的用途，用于制备防治白念珠菌过度生长相关疾病的组合物。
7.一种组合物，其特征在于，所述的组合物含有有效量的权利要求1-5任一所述的白念珠菌减毒株和药学上可接受的载体。
8.一种抑制白念珠菌的方法，所述方法包括抑制白念珠菌中CaAscl蛋白的表达或活性。
9.一种筛选抑制白念珠菌的潜在物质的方法，其特征在于，所述方法包括(a)在测试组中，向表达CaAscl蛋白的体系中添加待筛选的候选物，并检测CaAscl蛋白的表达或活性；并且，在对照组中，在不添加所述候选物的、表达CaAscl蛋白的体系中， 检测CaAscl蛋白的表达或活性；(b)将步骤(a)测试组中CaAscl蛋白的表达或活性与对照组中CaAscl蛋白的表达或活性进行比较，如果测试组中CaAscl蛋白的表达或活性在统计学上低于对照组，就表明该候选物是抑制白念珠菌的毒性的潜在物质。
10.一种CaASCl基因的用途，用于鉴定待测白念珠菌的毒性。
11.一种鉴定待测白念珠菌毒性的方法，包括检测待测白念珠菌中CaASCl基因的表达或活性，若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaASCl基因表达或活性提高，则该白念珠菌具有一般毒性或高的毒性；若相对于野生型白念珠菌，待测白念珠菌CaASCl基因表达或活性降低，则该白念珠菌具有低的毒性或无毒性。
12.一种白念珠菌CaASCl基因或CaAscl蛋白的抑制剂的用途，用于制备抑制白念珠菌的组合物。
13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述的CaAscl蛋白的抑制剂是特异性抗 CaAscl蛋白的抗体。
14.一种抗体，其特征在于，所述的抗体特异性地抗CaAscl蛋白。
全文摘要
本发明涉及一种调控白念珠菌毒性的因子及其应用。本发明首次揭示CaASC1基因在白念珠菌中是一个重要的毒性因子。本发明还公开了一种白念珠菌减毒株，所述的减毒株中CaASC1基因基本上不表达。
文档编号G01N33/68GK102337218SQ201010233160
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月22日 优先权日2010年7月22日
发明者丁宇烽, 刘晓艳, 聂鑫怡, 陈江野 申请人:中国科学院上海生命科学研究院