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用于检测细胞活化抗原的试剂盒的制作方法
【专利摘要】一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，包括盒体、盒盖和设置在盒体内的衬垫，所述衬垫上设有小孔，装有荧光标记各种单克隆抗体的试剂管被设置在所述小孔内。该试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。使用该试剂盒检测细胞活化抗原时，不涉及细胞培养，程序简单，降低了检测工作的强度；对实验室条件要求不高，只要有流式细胞仪的实验室即可开展检测，便于技术广泛推广，检测操作时间短、检测精度高，上机操作和数据分析方法简单，可以在第一时间得到临床所需资料。
【专利说明】用于检测细胞活化抗原的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于免疫学【技术领域】，涉及一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒。
【背景技术】
[0002]细胞免疫广义指经特异性细胞(如细胞毒T淋巴细胞)和非特异性细胞(如巨噬细胞、自然杀伤细胞)活性增强的免疫反应；狭义指T细胞介导的免疫。细胞免疫(cellularimmunity)是T细胞受到抗原刺激后，增殖、分化、转化为致敏T细胞(也叫效应T细胞)，当相同抗原再次进入机体的细胞中时，致敏T细胞(效应T细胞)对抗原的直接杀伤作用及致敏T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用，统称为细胞免疫。免疫细胞的活化是免疫应答产生的一种标志。静止细胞经过抗原刺激活化后，表现出一系列的特征，如细胞膜表面活化分子的表达等。
[0003]目前可利用流式细胞术通过检测免疫细胞活化后的特性，来分析抗原特异性免疫应答及其应答规律，并且可以追踪特定细胞在免疫应答过程中的作用。现有的流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少；若采用多参数荧光标记，则由于串联荧光染料易降解，会影响对结果的判定。
实用新型内容
[0004]为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，可以快速、准确地检测细胞活化抗原。
[0005]为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是:一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有荧光标记CDla单克隆抗体的试剂管(4)、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管
(5)、装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管(6)、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管
(7)、装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管(8)、装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管
(9)、装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管(10)、装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管(11)、装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管(12)、装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管(13)、装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管(14)、装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管(15)、装有荧光标记IgGl单克隆抗体的试剂管(16)、装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管(17)装有红细胞裂解液的试剂管(18)和装有PBS缓冲液的试剂管(19)被设置在所述小孔内。
[0006]其中，⑶Ia单克隆抗体、⑶86单克隆抗体、⑶166单克隆抗体和IgG2a单克隆抗体使用PE标记KD3单克隆抗体使用PerCP标记<D4单克隆抗体使用PE-CY7标记KD8单克隆抗体使用APC-CY7标记；CD14单克隆抗体、CD56单克隆抗体使用APC标记；CD30单克隆抗体、CD69单克隆抗体、CD80单克隆抗体和IgGl单克隆抗体使用FITC标记；CD19单克隆抗体使用BV421标记。[0007]其中，所述红细胞裂解液和PBS缓冲液为本领域常规试剂。
[0008]其中，所述衬垫(3)上设有16个小孔，所述小孔在所述衬垫(3)上分成四排平行排列。
[0009]通过以上技术方案，本实用新型的有益效果如下:
[0010](I)本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。
[0011](2)本实用新型的试剂盒在检测细胞活化抗原时，不涉及细胞培养，程序简单，降低了检测工作的强度；对实验室条件要求不高，只要有流式细胞仪的实验室即可开展检测，便于技术广泛推广，检测操作时间短、检测精度高，上机操作和数据分析方法简单，可以在第一时间得到临床所需资料。
【专利附图】

【附图说明】
[0012]图1为本实用新型的结构示意图；
[0013]图2-图5为使用本实用新型的试剂盒检测细胞活化抗原时所得的散点图。
[0014]图中，1-盒体，2-盒盖，3-衬垫，4-装有荧光标记⑶Ia单克隆抗体的试剂管，5_装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管，6-装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管，7-装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管，8-装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管，9-装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管，10-装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管，11-装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管，12-装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管，13-装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管，14-装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管，15-装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管，16-装有荧光标记IgGl单克隆抗体的试剂管，17-装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管，18-装有红细胞裂解液的试剂管，19-装有PBS缓冲液的试剂管。
【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例对本实用新型的【具体实施方式】作进一步描述，本实用新型的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本实用新型的范围构成任何限制。
[0016]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0017]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0018]下述实施例中使用的流式细胞仪为美国BD-CantoII (三激光8色)。
[0019]如图1所示，本实用新型提供了一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，包括盒体
1、盒盖2和设置在盒体I内的衬垫3，所述衬垫3上设有16个小孔，所述小孔在所述衬垫3上分成四排平行排列，装有荧光标记CDla单克隆抗体的试剂管4、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管5、装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管6、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管7、装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管8、装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管9、装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管10、装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管11、装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管12、装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管13、装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管14、装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管15、装有荧光标记IgGl单克隆抗体的试剂管16、装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管17装有红细胞裂解液的试剂管18和装有PBS缓冲液的试剂管19被设置在所述小孔内。
[0020]其中，⑶Ia单克隆抗体、⑶86单克隆抗体、⑶166单克隆抗体和IgG2a单克隆抗体使用PE标记KD3单克隆抗体使用PerCP标记<D4单克隆抗体使用PE-CY7标记KD8单克隆抗体使用APC-CY7标记；CD14单克隆抗体、CD56单克隆抗体使用APC标记；CD30单克隆抗体、CD69单克隆抗体、CD80单克隆抗体和IgGl单克隆抗体使用FITC标记；CD19单克隆抗体使用BV421标记。
[0021]其中，所述红细胞裂解液购自美国BD公司，所述PBS缓冲液购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
[0022]检测步骤如下:
[0023]I)取四支流式管，分别编号为I号管、2号管、3号管和4号管，第一管分别加入 IgGl-FITC20 μ 1、IgG2a-PE20 μ I 的同型对照；第 二管分别加入 CD30-FITC20 μ 1、CDla-PE20 μ 1、CD3-PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD56-APC5 μ 1、CD19-BV4215 μ I ;第三管分别加入 CD80-FITC20 μ 1、CD86-PE20 μ 1、CD3_PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD14-APC5 μ 1、CD19-BV4215 μ I ;第四管分别加入CD69-FITC20y 1、CD166_PE20y 1、CD3_PerCP20 μ 1、CD4-PE-CY75 μ 1、CD8-APC-CY75 μ 1、CD14-APC5y 1、CD19-BV4215μ I ；
[0024]2)对待检测的外周血采集物或骨髓标本进行白细胞计数，将细胞浓度调至3XlOVml,向每个管内分别加入待检测的外周血采集物或骨髓标本70μ 1，低速涡旋混匀，2 °C至8 °C避光孵育20分钟；
[0025]3)向每个管内分别加入红细胞裂解液1ml，低速涡旋混匀，在2°C至8°C避光裂解红细胞10分钟；
[0026]4)裂解结束后立即以1500转/分钟离心5分钟，离心结束后弃上清，然后向各管内加入Iml PBS，低速涡旋混匀，以1500转/分钟离心5分钟；离心结束后弃上清，向各管内加入0.5ml PBS重悬，低速涡旋混匀，24h内使用流式细胞仪上机检测；
[0027]5)在检测时，调节好个通道电压，收集PI门内细胞10万，应用BDFACSDive软件分析数据。
[0028]检测结果如下:
[0029]数据以散点图形式显示，如图2-图5，分别用CD3+CD4+、CD3+CD8+、SSC-CD14+、SSC-CD19+、SSC-CD56+射门圈定相应的细胞群，再分别看 CD la、CD30、CD80、CD86、CD69、⑶166在以上各群细胞上的表达情况，阳性表达以阴性对照作为参考。
[0030]上面已经举例说明了本实用新型的实施例，本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本实用新型的精神和范围下可以对本实用新型技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本实用新型的保护范围内。
【权利要求】
1.一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有荧光标记⑶Ia单克隆抗体的试剂管(4)、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管(5)、装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管(6)、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管(7)、装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管(8)、装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管(9)、装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管(10)、装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管(11)、装有荧光标记CD 166单克隆抗体的试剂管(12)、装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管(13)、装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管(14)、装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管(15)、装有荧光标记IgGl单克隆抗体的试剂管(16)、装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管(17)装有红细胞裂解液的试剂管(18)和装有PBS缓冲液的试剂管(19)被设置在所述小孔内。
2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于=CDla单克隆抗体、CD86单克隆抗体、CD 166单克隆抗体和IgG2a单克隆抗体使用PE标记；CD3单克隆抗体使用PerCP标记；CD4单克隆抗体使用PE-CY7标记KD8单克隆抗体使用APC-CY7标记<D14单克隆抗体、⑶56单克隆抗体使用APC标记；CD30单克隆抗体、CD69单克隆抗体、CD80单克隆抗体和IgGl单克隆抗体使用FITC标记KD19单克隆抗体使用BV421标记。
3.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述衬垫(3)上设有16个小孔，所述小孔在所述衬垫(3)上分成四排平行排列。
【文档编号】G01N33/577GK203616316SQ201320688939
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】秦晓明, 王显凤, 刘丽媛, 王绪华, 梁超, 方国伟, 黄士昂, 陈忠 申请人:北京海思特临床检验所有限公司