亚星游戏官网-www.yaxin868.com

专利名称：一种反相高效液相色谱快速检测苯乳酸异构体的方法
技术领域：
一种反相高效液相色谱快速检测苯乳酸异构体的方法，本发明涉及药物合成中间体和食品防腐剂光学纯的L-型和D-型苯乳酸的手性快速分析方法。属于高效液相色谱分析技术领域。 苯乳酸(即2-羟基-3-苯基丙酸)是乳酸菌产生的一种物质，具有广谱的抑菌性， 能够抑制多种食源性致病菌(如致病性大肠杆菌、单核细胞增李斯特菌和金黄色葡萄球菌) 和腐败菌(赭曲霉、疣孢青素和桔青霉)。因此，苯乳酸是一种继乳酸、醋酸、nisin之后，可用于食品体系的新型抑菌物质。除了在食品工业中的应用外，苯乳酸异构体在药物合成方面也占有举足轻重的作用。苯乳酸对映异构体是生物活性肽的主要成分，比如具有高效蛋白酶抑制作用的铜绿菌素、小菌素。临床实验中的高效抗鼻病毒化合物——Ruprintrivir 就是由P-氟代-3-苯乳酸合成的。D-(+)-3-苯乳酸是环状缩酚肽(YM-2M890)重要成分， 其特异的抑制Gq/11蛋白。L_( )-3-苯乳酸是合成抗病毒和抗肿瘤药物(mycalamides、
目前对苯乳酸分离的方法主要有薄层层析、毛细管电泳以及手性柱高效液相色谱法。 其中薄层色谱的方法只能定性检测和半定量检测苯乳酸。虽然毛细管电泳对其旋光异构体具有较好的分离，但与高效液相色谱相比，使用不如后者广泛且毛细管电泳只能用于分析， 不具有制备的条件。而已有的高效液相色谱检测方法是利用手性柱对其进行旋光异构体的拆分。与本发明相比，手性柱价格昂贵。本发明目的是提供一种经济、快速的分析苯乳酸旋光异构体的方法。可用于药物合成中间体苯乳酸对映异构体的纯度检测，及在生产苯乳酸时的定性定量检测。本发明的技术方案一种利用反相高效液相色谱分析DL-3-苯乳酸对映异构体的方法，步骤为
a)将环糊精溶解于缓冲溶液中，得到含有手性选择剂的环糊精缓冲液，作为流动相 流动相采用缓冲液-有机相体系，缓冲液有机相体积比为95:5 60:40;流动相中含环糊精手性选择剂，浓度范围为5mM 50mM ；
b)将DL-3-苯乳酸、D-(+)-3-苯乳酸和L-()-3-苯乳酸分别用蒸馏水或流动相溶液配制成浓度为1 50mg/mL的溶液；
c)将上述苯乳酸溶液分别进样，用液相色谱系统进行手性分析；所述的色谱柱是普遍
背景技术：
pederin、onnamides、theopederins)的手性中间物
发明内容
配备液相系统的反相C18色谱柱；采用步骤a)所述之流动相；柱温10 60°C;检测波长范围 MO 270nm ；
所述环糊精手性选择剂选用α-环糊精、β -环糊精或对α-环糊精、β -环糊精改性后的环糊精衍生物； 所述有机相为甲醇；
所述缓冲液选用以下缓冲体系之一种磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液。 本发明的有益效果首先，采用本发明的手性试剂拆分方法可制备得到光学纯的苯乳酸。其次，通过此方法制备得到的光学纯的苯乳酸可以作为药物合成中间体继续合成所需药物。再次，本发明亦可适用于苯乳酸生产和研究中的定性定量测定，及作为生物防腐剂在食品工业中的计量检测。最后，本发明中采用的分析方法操作简便，检测快速，定量准确，重现性好，是一种适于工业化快速分析的方法。


图1L_( )-3-苯乳酸标准样品的色谱图及紫外吸收光谱图。图2D-(+)-3-苯乳酸标准样品的色谱图及紫外吸收光谱图。图3DL-3-苯乳酸标准样品的色谱图及紫外吸收光谱图。图4L-( )-3-苯乳酸标准样品的圆二色谱图。图5D-(+)_3-苯乳酸标准样品的圆二色谱图。图6实施例3的检测条件保留时间为16. 908min色谱峰对应的圆:图7实施例3的检测条件保留时间为19. IOSmin色谱峰对应的圆:色谱图< 色谱图<
具体实施例方式实施例1 L_( )-3-苯乳酸标准样品的检测
用Sigma公司L- ( ) -3-苯乳酸用蒸馏水或流动相溶液配制成lmg/mL浓度的标准溶液，取一定体积的该溶液进行高效液相色谱检测分析。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为岛津LC-20AT ；色谱柱型号为inertsil ods-sp ；流动相pH3. 0、含IOmM α -CD的柠檬酸缓冲液-甲醇溶液，缓冲液甲醇体积比为90:10，流速为lmL/min，柱温为30°C，上样量20 μ L (浓度lmg/mL)，检测波长为254nm。图1是L_( )-3-苯乳酸标准样品的检测结果图。L_( )-3-苯乳酸在该层析条件下保留时间约为16. 825min，通过积分软件进行L-( )_3_苯乳酸的峰面积计算，并对样品中L-( )-3-苯乳酸的定量分析。实施例2 D-(+)-3-苯乳酸标准样品的检测
用Sigma公司D-(+)-3-苯乳酸用蒸馏水或流动相溶液配制成lmg/mL浓度的标准溶液，取一定体积的该溶液进行高效液相色谱检测分析。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为岛津LC-20AT ；色谱柱型号为inertsil ods-sp ；流动相为pH3. 0、含IOmM α -CD 的柠檬酸缓冲液-甲醇溶液，缓冲液甲醇体积比为90:10，流速为lmL/min，柱温为30°C， 上样量20 μ L (浓度lmg/mL)，检测波长为254nm。图2是D-(+)_3-苯乳酸标准样品的检测结果图。D-(+)_3-苯乳酸在该层析条件下保留时间约为19. 017min，通过积分软件进行D-(+)-3-苯乳酸的峰面积计算，并对样品中D-(+)-3-苯乳酸的定量分析。实施例3 DL-3-苯乳酸标准样品的检测
用Sigma公司DL-3-苯乳酸用蒸馏水或流动相溶液配制成lmg/mL浓度的标准溶液，取一定体积的该溶液进行高效液相色谱检测分析。高效液相色谱条件为高效液相色谱仪型号为岛津LC-20AT ；色谱柱型号为inertsil ods-sp ；流动相为ρΗ3· 0、含IOmM α -CD的柠檬酸缓冲液-甲醇溶液，缓冲液甲醇体积比为90:10，流速为lmL/min，柱温为30°C，上样量20 μ L (浓度lmg/mL)，检测波长为2Mnm。图3是DL-3-苯乳酸标准样品的检测结果图。L_( )_3_苯乳酸在该层析条件下保留时间约为16. 908min, D-(+)_3_苯乳酸在该层析条件下保留时间约为19. IOSmin, 通过积分软件进行L-( )-3-苯乳酸和D-(+)-3-苯乳酸的峰面积计算，并对样品中 L-( )-3-苯乳酸和D-(+)-3-苯乳酸的定量分析。
权利要求
1. 一种利用反相高效液相色谱分析DL-3-苯乳酸对映异构体的方法，其特征在于步骤为a)将环糊精溶解于缓冲溶液中，得到含有手性选择剂的环糊精缓冲液，作为流动相 流动相采用缓冲液-有机相体系，缓冲液有机相体积比为95:5 60:40 ；流动相中含环糊精手性选择剂，浓度范围为5mM 50mM ；b)将DL-3-苯乳酸、D-(+)-3-苯乳酸和L-()-3-苯乳酸分别用蒸馏水或流动相溶液配制成浓度为1 50mg/mL的溶液；c)将上述苯乳酸溶液分别进样，用液相色谱系统进行手性分析；所述的色谱柱是普遍配备液相系统的反相C18色谱柱；采用步骤a)所述之流动相；柱温10 60°C ；检测波长范围 240 270nm ；所述环糊精手性选择剂选用α-环糊精、β-环糊精或对α-环糊精、β-环糊精改性后的环糊精衍生物； 所述有机相为甲醇；所述缓冲液选用以下缓冲体系之一种磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液。
全文摘要
一种利用反相高效液相色谱分析DL-3-苯乳酸对映异构体的方法，属于高效液相色谱分析技术领域。首先将环糊精溶解于缓冲溶液中，得到含有手性选择剂的环糊精缓冲液。将样品溶于蒸馏水或环糊精缓冲液中，通过反相高效液相色谱实现D-(+)-3-苯乳酸和L-(-)-3-苯乳酸两种旋光异构体的分离。本发明选用环糊精作为手性剂，其背景吸收低，价廉易得，且采用在液相色谱中普遍使用的反相C18色谱柱，非昂贵的手性色谱柱。本发明方法与现有技术相比，检测成本低，分离效率高，检测灵敏度较高，试剂均无毒害、消耗少，对环境友好，操作简便，在反相条件下实现对映体的手性分离。采用本方法可对药物合成中间体DL-3-苯乳酸对映异构体的快速检测及生产苯乳酸的定性定量检测。
文档编号G01N30/02GK102288703SQ20111021576
公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月29日 优先权日2011年7月29日
发明者徐学明, 徐进, 杨哪, 赵文秀, 金征宇 申请人:江南大学