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专利名称：测定发生alte和/或sids潜在易感性的方法
技术领域：
本发明涉及确定威胁生命的急性发作(ALTE)和/或婴儿猝死综合症(SIDS)易感性的方法，尤其是通过测定对象的总IgA和/或IgA1来评估发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法。
背景技术：
已作了很多努力通过非特异性方法来最大程度减少涉及婴儿护理发生SIDS的危险性。然而，至今未能开发出采用涉及病因机制的特异性试验进行预防的方法。通过常规意识并且如果与非特异性护理联合使用，期望能对病因机制进行鉴定将对SIDS的后果产生重要影响。开发能鉴定有SIDS危险的婴儿的新方法可能有非常显著的作用。
由于在研究250名正常婴儿过程中偶尔有机会观察到“预计会”患SIDS的病例，引起了人们对预防SIDS方法的兴趣[1]。在婴儿出生后测定其唾液中的免疫状态参数。在死于SIDS的一名儿童中关键性的发现是，受轻度呼吸道感染后出现IgM水平的异常升高，几周后该儿童猝死。所测定SIDS患者的所有参数(即白蛋白、IgG和IgA)都超过90％水平，IgM的相对水平最高，比90％水平高三倍以上(相对而言白蛋白、IgG和IgA比90％水平高大约1.5倍)。在一个病例中的这种观察与死后的研究相一致，即在死于SIDS患者的气管和肠内发现有大量含IgM的浆细胞[2-5]。IgM的水平比相匹配感染对照研究中所见到的小量增长要超过许多[6]。这些观察提出了这样的可能性，即测定上呼吸道感染婴儿的唾液IgM可能是对发生SIDS危险的一种非常有用的指标，其反映了构成该危险性基础的粘膜免疫调节的失衡。
SIDS的许多流行病学研究已鉴定到发生SIDS的许多危险因素，但未能发现其病因[7]。有人提出感染及免疫力失调是发生SIDS的一个可能的机制[8]。SIDS婴儿尸体解剖的共同发现与感染或炎症是导致死亡的原因相一致[9]。已报道SIDS通常发生于轻度上呼吸道感染(URTI)之后[9-12]，但没有证据表明是受到任何毒性病原体的感染。导致过度刺激免疫系统的低剂量病原体可能是以呼吸停止告终的一连串事件中的一个重要环节。
患儿的死后研究[2-5，13-14]和预期病例的研究获得了SIDS的粘膜免疫力总体失调与先前呼吸疾病或炎症有关的证据。这些研究提示感染因子导致了所见的免疫参数失调，因此为检测婴儿是否有患病危险提供了临床“触发剂”。
出现窒息发作但复原的婴儿被称为威胁生命的急性发作(ALTE)，当未鉴定出潜在的医学病症时将其分类为“死里逃生的”SIDS。因此，可预计ALTE儿童有着与SIDS儿童相类似的粘膜免疫力失调。
然而至今，尚没有一种以特异性免疫试验为基础的方法可以预报发生ALTE和/或SIDS的潜在易感性。
本发明的目的是克服或至少改善现有技术的一个缺陷或提供有用的替代方法。
发明概述如上所述，已有技术[1]指出在URT1感染后，IgM水平可作为ALTE/SIDS研究中的一项可能有用的参数。然而，出人意料地发现在ALTE或“死里逃生的”SIDS病例中IgA的水平明显地一贯较高。因此IgA可用于预报发生ALTE和/或SIDS的易感性。
第一方面，本发明提供了一种评估对象发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法，包括a)测定对象样品中的免疫球蛋白A(IgA)水平；和b)将所述的IgA水平与预定标准相比较来预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
第二方面，本发明提供了评估对象发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法，包括a)测定对象样品中的免疫球蛋白A1(IgA1)水平；和b)将所述的IgA1水平与预定标准相比较，预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
较佳地，该对象是人的婴儿。
较佳地，在上呼吸道感染(URTI)或症状时或约2周内的任何时间采集婴儿样品。
较佳地，免疫球蛋白是分泌性免疫球蛋白。较佳地，分泌性免疫球蛋白是唾液免疫球蛋白。较佳地，样品是完全未受刺激的唾液。然而，本领域技术人员明白其他已知含有IgA和/或IgA1的机体分泌物也可用作本发明方法的检测样品。
较佳地，当采集样品时对象没有挨饿。
较佳地，用ELISA测定免疫球蛋白水平。但，可以理解也可用技术人员已知的放射免疫方法和/或类似方法测定免疫球蛋白的水平。此法特别适合以快速病床边的试验分析免疫球蛋白的水平。可以提供是或不是的测定结果以便立即采取治疗行动。
在一实施例中，通过使机体分泌物与安置在支持物上的试验装置或系统接触，来测定免疫球蛋白的水平。不一定需要从对象取得样品而是在原地进行检测。例如，可将试验装置或系统与对象的唾液原地接触来分析免疫球蛋白的水平。
预定的标准可以是任何适当的标准，如正常人群的标准或个人本身的标准。本领域技术人员懂得用于本发明标准的类型。
第三方面，本发明提供了评估对象发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法，包括a)测定婴儿完全未受刺激的唾液样品中的免疫球蛋白A(IgA)和/或免疫球蛋白A1(IgA1)的水平；和b)将所述的IgA和/或所述的IgA1水平与预定标准相比较来预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
本领域技术人员懂得，可以与其他指标(如其他免疫球蛋白IgM或IgG)、急性期反应物或细胞成分联合，将IgA或IgA1水平的测定用于预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
第四方面，本发明提供了可用于本发明第一至第三方面任一的试剂盒。
在本发明中，术语“标准”包括(但不限制于)免疫球蛋白的正常人群水平，即年龄匹配的正常人的平均IgA或IgA1值。也可是个人的本身标准，即同一个人患病前所采集的样品的IgA或IgA1水平。
附图简述

图1ALTE(■)、“轻度”(○)和健康“▲”婴儿-初始样品的IgA浓度水平(mg/l)。
图2ALTE(■)、“轻度”(○)和健康“▲”婴儿-初始样品的IgM浓度水平(mg/l)。
图3ALTE(■)、“轻度”(○)和健康“▲”婴儿-初始样品的IgG浓度水平(mg/l)。
图4ALTE(■)、“轻度”(○)和健康“▲”婴儿-14天样品的IgA浓度水平(mg/l)。感染后12天评估对象的RO3。
图5ALTE(■)、“轻度”(○)和健康“▲”婴儿-14天样品的IgM浓度水平(mg/l)。受三联抗原和流感嗜血菌B免疫接种后14天评估对象的RO9。
图6ALTE(■)、“轻度”(○)和健康“▲”婴儿-14天样品的IgG浓度水平(mg/l)。
图7A ALTE、“轻度”和健康婴儿的IgA1浓度水平(mg/L)。
图7B 显示图7A数据的95％置信区间。
图8图7A和7B所示的ALTE、“轻度”和健康婴儿的总IgA浓度水平(mg/L)中的IgA1浓度水平(mg/L)。
发明详述仅以举例反式说明本发明的优选实施例。
实施例1ALTE婴儿唾液的总IgA、IgG和IgM水平唾液的收集轻轻吸吮从口腔的颊部收集完全的混合唾液[15]。这方法可成功地用于儿童(1天龄以上的)和成年人[1，16]。
调查表采用标准调查表收集SIDS相关的人口统计数据。由主治儿科医生根据临床观察将其分类为“死里逃生的”SIDS组(ALTE)。
唾液测试用ELISA测定唾液免疫球蛋白，并用速率浊度测定法测定白蛋白(Beckman.ARRAY)[16]。
统计学分析用方差分析(ANOVA)或适当的非参数统计，确定了ALTE婴儿和两个对照组(轻度URTI和健康婴儿)之间的粘膜免疫参数的差异。
对象征集了37名年龄为1-10个月的婴儿(20名男性，17名女性)，分为3组●住在John Hunter医院的威胁生命的急性发作(ALTE)(n＝5)婴儿●全科医生诊断患轻度呼吸道疾病(轻度)(n＝11)婴儿●免疫接种的临床健康对照组(健康)(n＝21)婴儿。
调查数据●在ALTE组中男性(n＝4)比女性(n＝1)多。
●组与组之间在年龄、出生史、家族人口数、人种背景或SIDS家族史之间没有明显差异。
●与轻度(36％，n＝4)和健康(10％，n＝2)对照组相比，ALTE组中接触被动吸烟的儿童百分比较高(60％，n＝3)(p＝0.03)。
●与其他对照组相比，ALTE组中处于平均社会经济条件分类以下的家庭百分比较高。
●组与组之间哺育史、免疫接种状况及睡眠位置之间没有差异。
●怀疑5名ALTE对象中有4名是由上呼吸道疾病(URTI)而导致ALTE的(表1)。
唾液免疫球蛋白从各对象收集两份样品。收集入院24小时以内ALTE组的和由全科医诊断48小时内患有轻度呼吸道疾病轻度组的第一份样品。征集门诊免疫接种的健康婴儿，收集与ALTE和轻度组对象年龄相近的对象的唾液。14天后收集各婴儿的第二份样品。
附录C的图中列出了与年龄相关的5％-95％的参考百分比范围，显示一岁中唾液各类免疫球蛋白的范围。
●对样品1和2，ALTE组的唾液IgA、IgG和IgM浓度明显高于轻度(表2A和2B)和健康(表3A和3B)组(图1和2)。
●轻度和健康组的样品1和2(表2C和3C)之间没有明显差异。
●轻度组中有两名对象第14天收集的唾液的免疫球蛋白浓度有所提高(参见附录C)。
●感染后12天RO3的IgA升高。
●RO9的IgM升高最可能是由于在收集唾液前14天的用三联抗原和流感嗜血菌B免疫接种而致。
结论●5名ALTE对象中有4名的唾液IgA浓度总体提高，而这在轻度和健康对照组中没有观察到。因此唾液IgA可作为患轻度呼吸疾病对象发生ALTE(和SIDS)的一种指标。这是出人意料的结果，因为现有技术[1]提示IgM可能是预测ALTE/SIDS易感性的最有用的参数。
●5名ALTE中有4名的唾液IgA和IgM浓度升高，支持了感染或炎症导致ALTE(和SIDS)的观点。
●在5名ALTE对象中有3名RSV阳性细支气管炎是明显的。
实施例2ALTE婴儿唾液中的总IgA和IgA1亚类研究分组在婴儿因难以解释的威胁生命的急性发作(ALTE)入院的当天，收集唾液样品。如果排除了引起窒息的先天性或阻塞性原因，将这些婴儿包括在本研究中。此组对象分类为“死里逃生的SIDS”婴儿。
收集两组年龄相匹配的对象的唾液。征集儿童免疫接种门诊部(ChildImmunisation Clinics)的正常健康婴儿，分类为健康婴儿。第二组是从全科医生征集到的，称为患有轻度上呼吸道感染的婴儿，将这些婴儿分类为轻度感染对照组。在轻度感染就诊的当天收集唾液。
实验室分析用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析唾液样品测定总IgA和IgA1亚类抗体。该试验使用了WHO/IUIS批准的IgA1亚类单克隆抗体作为捕捉抗体，并与酶标记的多克隆抗体检测系统联用。
结果结果表明患ALTE婴儿唾液的IgA1亚类浓度显著高于正常健康婴儿对照组和患有轻度上呼吸道感染的婴儿组(p＝0.009)(表4和图7A和7B)。
那些轻度呼吸道疾病婴儿与正常健康婴儿唾液IgA1浓度相比没有明显差异。
三个研究组ALTE婴儿、轻度感染的婴儿和健康婴儿各测试了5份样品。与其他两组相比，ALTE婴儿样品中IgA1的水平通常高得多(p＝0.009)。轻度呼吸道感染和健康婴儿组的水平相类似。
统计学分析用非参数Kruskal-Wallis检验来比较了三组的IgA1值的分布。三组样品具有相同IgA1分布的机率p＝0.009。由于样品的数量少，所预计的组中值95％置信区间相当于数据的范围(即最小值、最大值)。
表1
参加本研究的相同婴儿的总IgA水平也升高(图8)。
结论患难以解释的ALTE(5名婴儿中有4名)婴儿的IgA1浓度明显升高。发现同样这5名患ALTE的婴儿中有3名总IgA水平也升高。因此，虽然显而易见IgA和IgA1在预测ALTE中都是有用的参数，但IgA1水平是更有用的参数。由于LATE被分类为“死里逃生的”SIDS(当没有鉴定到其他病症时)，因而IgA和IgA1都是预测SIDS的有用参数。
虽然参考了具体实施例对本发明进行了描述，但本领域技术人员明白也可运用许多其他形式来实施本发明。
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权利要求
1.一种评估对象发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法，其特征在于，所述的方法包括a)测定对象样品中的免疫球蛋白A(IgA)的水平；和b)将所述的IgA水平与预定标准相比较，预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
2.一种评估对象发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法，其特征在于，所述的方法包括a)测定对象样品中的免疫球蛋白A1(IgA1)水平；和b)将所述的IgA1水平与预定标准相比较，预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的对象是人的婴儿。
4.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述的样品是出现上呼吸道感染(URTI)或症状时或约2周内的任何时间采集的婴儿样品。
5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的免疫球蛋白是分泌性免疫球蛋白。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的分泌性免疫球蛋白是唾液免疫球蛋白。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的样品是完全未受刺激的唾液。
8.如权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述的对象在采集样品时没有挨饿。
9.如权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，用ELISA确定所述的免疫球蛋白水平。
10.如权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，用放射免疫扩散测定免疫球蛋白的水平。
11.如权利要求1-9任一所述的方法，其特征在于，采用快速临床边的试验测定免疫球蛋白的水平。
12.如权利要求1-11任一所述的方法，其特征在于，通过将机体分泌物与安置在支持物上的分析装置和系统接触，以测定所述免疫球蛋白的水平。
13.如权利要求1-12任一所述的方法，其特征在于，通过使试验装置或系统与对象的唾液原地接触，以分析免疫球蛋白的水平。
14.如权利要求1-13任一所述的方法，其特征在于，所述的标准是正常人群标准。
15.如权利要求1-13任一所述的方法，其特征在于，所述的标准是个人内部标准。
16.如权利要求1-15任一所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括将免疫球蛋白水平的比例与其他指数相比较。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述的其他指数选自IgM、IgG、急性期反应物或细胞内成分。
18.一种评估婴儿发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法，其特征在于，所述的方法包括a)测定婴儿完全未受刺激的唾液样品中的免疫球蛋白A(IgA)和/或免疫球蛋白A1(IgA1)的水平；和b)将所述的IgA和/或所述的IgA1水平与预定标准相比较来预测发生ALTE和/或SIDS的易感性。
19.一种用于权利要求1-18任一所述方法中的试剂盒。
全文摘要
本发明涉及确定表现为威胁生命事件(ALTE)(也称为“威胁生命的急性发作”)和/或婴儿猝死综合症(SIDS)易感性的方法,尤其是通过测定对象的总IgA和/或IgAl水平来评估发生ALTE和/或SIDS潜在易感性的方法。
文档编号G01N33/53GK1353814SQ00808537
公开日2002年6月12日 申请日期2000年6月7日 优先权日1999年6月7日
发明者R·克兰西, M·格利森 申请人:纽卡塞尔大学研究合伙有限公司