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专利名称：用液相色谱法分离测定萘普西诺及其光学异构体的方法
技术领域：
本发明属分析化学领域，具体涉及用液相色谱法分离测定萘普西诺及其光学异构体的方法。
背景技术：
萘普西诺是一种治疗骨关节炎的药物，由法国NicOx公司研发，分子式为C18H21N06，其化学名为(S)-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸4-硝基氧丁基酯。对于萘普西诺的光学异构体为杂质，在生产萘普西诺进程中需要进行质量控制。因此，实现对萘普西诺与其光学异构体的分离测定，在萘普西诺的质量控制方面具有现实意义。其化学结构式如下·H3CO经反复试验发现，用CHIRALPAK OD-H手性色谱柱(250X4. 6mm)为分离柱，以正己烷异丙醇(含0.3%乙酸)=97 3为流动相，可以将萘普西诺与其光学异构体进行有效分离，从而可以准确控制萘普西诺的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出萘普西诺及其光学异构体杂质。

发明内容
本发明的目的在于提供一种用手性色谱柱分离测定萘普西诺及其光学异构体杂质的高效液相方法，从而保证萘普西诺的光学纯度的准确测定，实现对萘普西诺原料药的质量控制。本方法所述的用高效液相色谱法分离测定萘普西诺及其光学异构体(杂质)的方法，是采用纤维素-三[3，5_ 二甲苯基氨基甲酸酯]为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液中包含有机酸。这里所说的液相色谱法包括高效液相色谱法或高效液相色谱法-质谱法联用。上述所说的手性色谱柱选自牌号为CHIRALCEL OD和CHIRALCEL OD-H色谱柱。本发明的低级醇选自以下化合物甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇，优选为乙醇或异丙醇。本发明的方法，其流动相正己烷-低级醇溶液的体积比为99 : I 70 : 30。上述所说的低级醇溶液中包含的有机酸选自甲酸、乙酸和三氟乙酸，有机酸的浓度(v/v)为 O. I O. 5%。本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现I)取萘普西诺样品适量，用乙醇或流动相溶解样品，配制成每ImL含萘普西诺
O.2 2. Omg的样品溶液。
2)设置流动相流速为O. 4 I. 5mL/min,流动相的流速优选为O. 8 I. OmL/min,检测波长为220 240nm，最佳检测波长为230nm，色谱柱柱箱温度为20 40°C，柱箱温度最佳为20°C。3)取I)的样品溶液10 50 μ L注入液相色谱仪，完成萘普西诺与其光学异构体的分离测定。其中高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津岛津LC-1OATvp, SPD-MlOAνρ色谱柱OD-H手性色谱柱(CHIRALCEL250 X 4. 6mm)流动相正己烷-异丙醇(含O. 3%乙酸)=97 : 3
流速0·8 I. OmL/min检测波长230nm柱温20°C进样体积20 μ L本发明采用CHIRALCEL OD-H手性色谱柱，能够有效的分离测定萘普西诺及其光学异构体。本发明解决了分离测定萘普西诺及其光学异构体的分离问题，从而确保了萘普西诺原料药的质量可控。


图I :实施例I空白溶剂的高效液相色谱图。图2 :实施例I萘普西诺消旋体的高效液相色谱图。图3 :实施例2萘普西诺的高效液相色谱图。图4 :实施例3空白溶剂的高效液相色谱图。图5 :实施例3萘普西诺消旋体的高效液相色谱图。图6 :实施例4萘普西诺的高效液相色谱图。
具体实施例方式以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。实施例I仪器与条件高效液相色谱仪岛津LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱0D-H(CHIRALCEL250X4.6mm)；流动相正己烷-异丙醇(含O. 3%乙酸)=97 3 ；流速1.OmL/min ；检测波长230nm；柱温20°C;进样体积20 μ L实验步骤取萘普西诺消旋体适量，用乙醇溶解样品，配制成含萘普西诺及其光学异构体约
I.Omg/mL的样品溶液，作为供试品溶液。
分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图I、图2。图2中I号峰为萘普西诺，2号峰为其光学异构体，可以看出在该条件下萘普西诺与其光学异构体可以完全分离，萘普西诺出峰时间20. 087min，其光学异构体的出峰时间为16. 713min,且峰形对称,可以满足中国药典的要求。实施例2实验步骤取萘普西诺适量，分别用乙醇溶解样品，配制成含萘普西诺约I. Omg/mL的样品溶 液，作为供试品溶液。取供试品溶液，照实施例I的仪器与条件，进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图3。萘普西诺出峰时间为20. 163min。图3证明，萘普西诺的光学纯度达到原料药的要求，本法可用于萘普西诺的质量监测。实施例3仪器与条件高效液相色谱仪岛津LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱OD-H(CHIRALCEL250 X 4. 6mm);流动相正己烷-乙醇(含O. 3%乙酸)=99 I ；流速0.8mL/min ；检测波长230nm；柱温20°C；进样体积20 μ L实验步骤取萘普西诺消旋体适量，用乙醇溶解样品，配制成含萘普西诺及其光学异构体约
I.Omg/mL的样品溶液，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图4、图5。图5中I号峰为萘普西诺，2号峰为其光学异构体，可以看出在该条件下萘普西诺与其光学异构体可以完全分离，萘普西诺出峰时间18. 574min，其光学异构体的出峰时间为15. 216min,且峰形对称,可以满足中国药典的要求。实施例4实验步骤取萘普西诺适量，分别用乙醇溶解样品，配制成含萘普西诺约I. Omg/mL的样品溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，照实施例3的仪器与条件，进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图6。萘普西诺出峰时间为18. 652min。图6证明，萘普西诺的光学纯度达到原料药的要求，本法可用于萘普西诺的质量监测。
权利要求
1.一种用液相色谱法分离测定萘普西诺和其光学异构体的方法，其特征在干以纤维素-三[3，5_ ニ甲苯基氨基甲酸酷]为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液中包含选自甲酸、こ酸和三氟こ酸中的一种有机酸，其浓度(V/V)为O.I 0.5%，正己烷-低级醇的体积比为99 : I 70 : 30。
2.根据权利I所述的分析測定方法，手性色谱柱选自品牌为CHIRALCELOD和CHIRALCEL 0D-H 色谱柱。
3.根据权利I所述的分析測定方法，所说的低级醇选自以下化合物中的ー种甲醇、こ醇、丙醇、异丙醇。
4.根据权利3所述的分析測定方法，所说的低级醇选自以下化合物中的ー种こ醇或异丙醇。
5.根据权利I所述的分析測定方法，正己烷-低级醇的体积比为97 3。
6.根据权利I所述的分析測定方法，其特征在于所说的方法包括以下步骤 1)取萘普西诺样品适量，用こ醇或流动相溶解样品，配制成每ImL含萘普西诺O.2 2mg的样品溶液； 2)设置流动相流速为O.4 I. 5mL/min，检测波长为220 240nm，色谱柱柱箱温度为20 40°C ； 3)取I)的样品溶液10 50μ L注入液相色谱仪，完成萘普西诺与其光学异构体的分离測定。
7.根据权利要求6所述的分析分离方法，步骤2)流动相流速优选为O.8 I. OmL/min。
8.根据权利要求6所述的分析分离方法，步骤2)所说的色谱柱柱箱温度为20°C。
9.根据权利要求6所述的分析分离方法，步骤2)所说的检测波长为230nm。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，涉及萘普西诺及其光学异构体(杂质)的分离测定。本发明用高效液相色谱法或高效液相色谱-质谱联用法，在一定的色谱条件下分离测定萘普西诺的光学异构体，通过该方法能快速准确地分离和测定萘普西诺的光学异构体杂质。
文档编号G01N30/02GK102854260SQ20121027041
公开日2013年1月2日 申请日期2012年8月1日 优先权日2012年8月1日
发明者陈东, 方丽, 郭夏, 宋雪梅 申请人:北京万全阳光医学技术有限公司